免疫细胞功能检测技术17316
免疫细胞功能检测技术通用课件
CHAPTER
感染性疾病的诊断与监测
感染性疾病的诊断 感染性疾病的监测
肿瘤的免疫诊断与治疗
肿瘤的免疫诊断
肿瘤的免疫治疗
自身免疫性疾病的诊断与治疗
自身免疫性疾病的诊断
通过检测免疫细胞的功能，有助于诊断 自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮等。
VS
自身免疫性疾病的治疗
免疫细胞功能检测在疾病诊断、治疗 监测和药物研发等方面具有重要意义， 有助于深入了解免疫系统在健康和疾 病状态下的反应和功能。
检测技术的发展历程
早期阶段
进展阶段
现代阶段
检测技术的应用领域
01
02
医学研究
临床诊断
03 药物研发
02
免疫细胞功能检测技术 的基本原理
CHAPTER
免疫细胞的分类与功能
T细胞
巨噬细胞
B细胞 树突状细胞
检测技术的生物学基础
抗原-抗体反应 补体激活
检测技术的分子机制
信号转导
基因表达分析
03
免疫细胞功能检测技术 的方法与操作
CHAPTER
流式细胞术
总结词
一种快速、准确、多参数的细胞分析技术
详细描述
流式细胞术是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速、准确、多参数分析的技术。通过将待测细胞与荧光染料结合， 在流式细胞仪中经过激光照射和光电倍增管检测，可以对细胞表面的抗原、细胞内的活性物质等进行定量和定性 分析，从而评估免疫细胞的功能状态。
利用人工智能和机器学习技术对免疫 细胞功能检测数据进行深度分析和预 测。
光学技术
利用光学技术提高免疫细胞功能检测 的灵敏度和分辨率。
未来发展方向及前景
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术传统的免疫细胞功能检测方法主要包括流式细胞术、细胞增殖试验和细胞毒性试验等。
其中，流式细胞术是一种常用的细胞表面标记物检测方法，可以通过检测细胞表面标记物的表达情况来评估免疫细胞的活性和状态。
细胞增殖试验可以评估免疫细胞的增殖能力，常用的方法包括MTT法和BrdU法等。
细胞毒性试验可以评估免疫细胞对靶细胞的杀伤能力，常用的方法包括细胞色素释放试验和细胞活性检测试剂盒等。
然而，传统的免疫细胞功能检测方法存在一些局限性。
首先，这些方法往往需要大量的细胞数目，且操作繁琐，不适用于临床应用。
其次，这些方法只能评估其中一方面的免疫功能，无法全面评估免疫细胞的整体功能状态。
此外，传统方法对于一些免疫细胞功能的检测灵敏度较低，无法满足一些特殊研究和临床需求。
近年来，随着生物技术的发展，一些新的免疫细胞功能检测技术逐渐崭露头角。
其中，高通量测序技术的应用为免疫细胞功能检测带来了革命性的突破。
高通量测序可以同时检测上千个基因的表达水平，可以用来评估免疫细胞的基因表达谱，并通过生物信息学方法分析不同样本的差异。
通过这种方法，可以全面了解免疫细胞的活性和功能状态。
另外，单细胞技术也是一种新兴的免疫细胞功能检测技术。
传统的免疫细胞功能检测方法通常是对大量细胞进行分析，无法检测到细胞群体中不同细胞的异质性。
而单细胞技术可以对单个细胞进行检测和分析，可以检测到不同细胞的功能差异，并研究细胞在群体中的相互作用。
单细胞技术可以通过扩增检测目标区域的方法，同时检测多个指标，可以全面评估免疫细胞的功能状态。
除了高通量测序和单细胞技术，还有一些新兴的免疫细胞功能检测技术值得关注。
例如，质谱技术可以定量检测细胞因子的分泌水平，可以评估免疫细胞的功能状态。
另外，光学显微镜技术可以直接观察免疫细胞的活动过程，可以评估细胞的运动能力和活跃度。
总而言之，免疫细胞功能检测技术的发展为了解免疫细胞的功能状态提供了新的手段。
高通量测序、单细胞技术、质谱技术和光学显微镜技术等新兴技术可以全面、准确地评估免疫细胞的功能状态，有望在临床和科研领域发挥重要作用。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在我们的身体中，免疫细胞就像是一支训练有素的“军队”，时刻守护着我们的健康，抵御着外界病原体的入侵。
为了更好地了解这支“军队”的战斗力，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术是一类用于评估免疫细胞在免疫反应中的活性、数量、表型以及功能状态的方法。
这些技术对于诊断免疫相关疾病、监测治疗效果、评估个体的免疫状态以及研究免疫系统的机制都具有重要意义。
其中，流式细胞术是一种常见且强大的免疫细胞检测技术。
它通过让单个细胞依次通过激光束，根据细胞所发出的荧光信号来分析细胞的表面标志物、细胞内的蛋白质以及细胞的大小和粒度等特征。
比如说，我们可以利用特定的荧光标记抗体来识别 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等不同类型的免疫细胞，并进一步了解它们的活化状态。
通过流式细胞术，医生能够快速准确地判断患者的免疫细胞是否存在异常，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
酶联免疫斑点法（ELISPOT）也是一项常用的技术。
它主要用于检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
想象一下，细胞因子就像是免疫细胞之间传递信息的“信使”，通过检测这些“信使”的分泌情况，我们就能了解免疫细胞的功能状态。
比如，在检测T 细胞对特定抗原的反应时，ELISPOT 可以准确地显示出分泌特定细胞因子（如干扰素γ）的 T 细胞的数量，从而反映出 T 细胞的免疫活性。
细胞增殖实验则能够评估免疫细胞的增殖能力。
当免疫细胞受到刺激时，它们会进行分裂和增殖以增强免疫反应。
通过使用特定的标记物或者检测细胞的代谢活性，我们可以确定免疫细胞是否能够有效地增殖。
这对于研究免疫细胞的活化和免疫应答的强度非常有帮助。
细胞毒性实验则用于检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力。
比如，NK细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）能够识别并杀伤被感染或恶变的细胞。
在实验中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过检测靶细胞的存活情况来评估免疫细胞的杀伤功能。
除了上述这些技术，还有一些其他的方法也在免疫细胞功能检测中发挥着重要作用。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
免疫细胞功能检测技术
2021/11/14
27
Hale Waihona Puke 三、NK细胞活性测定➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
染色计数
靶 离心取上清
细 测LDH或AKP
胞 溶 解
离心取沉淀 测活细胞荧光
测CPM值
测发光强度
常用靶细胞: K562细胞株
2021/11/14
28
二 吞噬细胞功能检测技术
按其形态大小分为两类： 大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统 小吞噬细胞—中性粒细胞
40
(五) 巨噬细胞促凝血活性测定
激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的 凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为 此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2 混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试 管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。
2021/11/14
41
Thanks！
2021/11/14
42
2021/11/14
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
混合培养4-6小时
18
(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
2021/11/14
19
二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
2021/11/14
20
NBT还原试验
原理：
N-N-
C
+ H+
N=N-R-
四氮唑基（淡黄色）
2021/11/14
N-NH2 C N=NH
甲臜（紫黑色）
35
中性粒细胞 NBT 甲臜颗粒沉积于胞质中
2021/11/14
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术嘿，咱今儿就来说说这免疫细胞功能检测技术。
你知道吗，咱身体里的免疫细胞那可真是一群了不起的“小战士”呀！它们时刻准备着和各种病菌、有害物质作战，保卫着咱们的身体。
那这免疫细胞功能检测技术呢，就像是给这些“小战士”来个大体检。
就好比咱去医院体检，能知道自己身体哪儿好哪儿不好，这检测技术也能让咱清楚免疫细胞的状态咋样。
你想想看，要是咱能清楚地知道这些“小战士”的战斗力强不强，是不是就能更好地了解自己的身体状况啦？要是检测出来它们有点弱，那咱就得想办法给它们加加油、鼓鼓劲呀！不然，敌人来了可咋办呢？这检测技术有很多种方法呢。
比如说，有一种可以检测免疫细胞的增殖能力。
你就理解成看看这些“小战士”能不能快速地增加数量，人多力量大嘛！要是它们增殖得快，那说明它们很有活力呀，咱就放心不少。
还有检测它们杀伤能力的。
这就好比看这些“小战士”能不能一下子就把敌人给消灭掉，要是它们的杀伤能力强，那咱身体里的那些坏家伙就不敢随便捣乱啦。
再比如说，检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
细胞因子就像是“小战士”们的秘密武器，能帮助它们更好地作战。
要是分泌得多，那它们打起仗来肯定更厉害呀！那这检测技术重要不？那可太重要啦！就好像你要去打仗，总得先知道自己手里的武器好不好使，自己的士兵厉不厉害吧？这检测技术就是帮咱了解免疫细胞这个“军队”的情况呀。
要是没有这个技术，咱就像蒙着眼睛走路一样，都不知道自己身体的免疫防线到底咋样。
万一有点啥问题，咱都不知道该怎么应对呢。
你说，这免疫细胞功能检测技术是不是很神奇？它就像是给咱身体里的免疫系统开了一扇窗，让咱能看到里面的情况。
而且，随着科技的不断进步，这检测技术肯定也会越来越先进，能检测的东西也会越来越多。
咱可得好好重视这个技术呀，毕竟身体是自己的，咱得对自己负责呀！别觉得这事儿离你很远，说不定哪天你就需要它来帮你了解自己的身体呢。
免疫细胞功能检测技术，真的是咱身体健康的好帮手呀！你说是不是呢？。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。
免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。
本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估免疫系统的健康状况。
其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常用于检测免疫细胞的表型和活性。
通过标记细胞表面的特定抗原和荧光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液中特定抗原或抗体的浓度。
通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，如干扰素、白细胞介素等。
细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。
以下是该技术在不同领域的应用举例：1. 免疫系统疾病诊断免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等。
通过评估免疫细胞的数量、活性和功能状态，可以辅助医生制定治疗方案和判断治疗效果。
2. 肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗是一种利用机体免疫系统增强对肿瘤细胞的攻击能力的治疗方法。
免疫细胞功能检测技术可以评估患者体内免疫细胞的活力和功能状态，为肿瘤免疫治疗方案的制定和疗效监测提供依据。
3. 个体化医疗免疫细胞功能检测技术还可以用于个体化医疗，根据不同个体的免疫细胞功能状况，制定相应的健康管理方案。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，免疫细胞功能检测技术正发挥着日益重要的作用。
免疫细胞如同人体的“卫士”，它们时刻监控并抵御着外界病原体的入侵，维持着身体的健康平衡。
而了解这些“卫士”的功能状态，对于疾病的诊断、治疗以及预防都具有关键意义。
免疫细胞主要包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞）、单核细胞、巨噬细胞等。
不同类型的免疫细胞在免疫反应中承担着不同的角色，因此检测它们的功能也就需要采用多样化的技术手段。
其中，流式细胞术是一种应用广泛的免疫细胞功能检测技术。
它通过让细胞单个地通过激光束，同时结合荧光标记的抗体，能够快速、准确地检测免疫细胞表面标志物的表达情况。
例如，通过特定的抗体标记，可以区分出不同亚型的 T 细胞，如辅助性 T 细胞（CD4+ T 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CD8+ T 细胞），进而了解它们的比例和功能状态。
此外，还能检测免疫细胞表面活化分子的表达，如 CD69、CD25 等，以此来反映免疫细胞的活化程度。
细胞增殖实验也是常见的检测方法之一。
免疫细胞在受到刺激后会发生增殖，通过检测细胞的增殖情况，可以间接评估免疫细胞的功能。
常用的方法有 3H胸腺嘧啶掺入法和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法。
3H胸腺嘧啶掺入法是将放射性标记的胸腺嘧啶掺入到正在分裂的细胞中，通过检测放射性强度来反映细胞的增殖情况。
CFSE 染色法则是利用一种可穿透细胞膜的荧光染料对细胞进行标记，随着细胞的分裂，荧光强度会逐渐减半，从而可以通过流式细胞术检测细胞的分裂代数来评估增殖能力。
细胞毒性检测对于评估免疫细胞的杀伤功能至关重要。
比如，自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CTL 细胞）能够直接杀伤肿瘤细胞或被病毒感染的细胞。
检测细胞毒性的方法包括铬释放法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法。
铬释放法是将靶细胞用放射性铬标记，当免疫细胞杀伤靶细胞后，铬会释放到上清液中，通过检测上清液中的放射性强度来判断细胞毒性。
免疫细胞功能检测技术(最新)
免疫细胞功能检测技术一、前言免疫细胞功能检测技术是指通过检测免疫系统中不同类型的细胞及其功能状态来评估患者免疫系统的状态，以帮助医生诊断和治疗各种免疫性疾病。
随着免疫学研究的深入和免疫细胞功能检测技术的不断更新，现在已经出现了多种免疫细胞功能检测技术，包括流式细胞术、蛋白芯片技术、基于DNA分子杂交的检测方法等。
本文将介绍流式细胞术作为一种常用的免疫细胞功能检测技术，并详细讨论其原理、方法和应用。
二、原理流式细胞术是一种基于细胞单元分析的技术，其核心是流式细胞仪。
细胞单元分析是指将细胞单元通过高速液流分散后，在一个单元一个单元地、连续稀释、分离、悬浮状态下进行检测，获得各单元的信息。
每个单元被封装在流动液滴中，以便实现快速、准确和高通量的细胞计数和分析。
流式细胞仪通过衍射光、荧光信号及其它物理或化学性质将细胞单元分析并定量化。
流式细胞术技术可以用于对细胞表面标记、胞质内染色质、分泌物等各种指标的分析，因此适用于多种免疫细胞功能检测。
三、方法样本准备：样本的来源包括血液、脑脊液、淋巴结、脾等组织。
样本应避免受到污染和过多的处理，避免对细胞造成影响。
例如，在采血时，采用无菌针头和管道，减少离心时间，保持细胞完整。
细胞分离和染色：首先，需要将细胞从样本中分离出来，可采用离心、红细胞裂解等方法。
然后，在合适的荧光标记物和染色剂的作用下，标记或染色目标细胞。
流式细胞仪检测：样本标记后由流式细胞仪自动进样，并通过荧光激发和检测模块进行检测。
最终，获得含有多个参数的细胞单元分析结果。
四、应用免疫学研究：流式细胞术可以用于评估免疫系统中不同类型细胞及其数量、表面标记、功能状态等。
免疫性疾病诊断：如艾滋病、类风湿关节炎、自身免疫性疾病等免疫性疾病，流式细胞术可协助医生快速、准确地诊断和监测疾病的处理效果。
肿瘤治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤患者血液中的免疫细胞浸润情况，判断肿瘤对免疫系统的影响，从而指导肿瘤治疗。
五、总结流式细胞术作为一种常见的免疫细胞功能检测技术，具有高通量、多参数、准确度高等优点，在免疫学研究和临床应用中发挥着重要作用。
免疫细胞功能检测技术课件.ppt
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域中，免疫细胞功能检测技术扮演着至关重要的角色。
这些技术不仅有助于我们深入了解免疫系统的运作机制，还能为疾病的诊断、治疗和预防提供关键的依据。
免疫系统就像是我们身体的“保卫部队”，而免疫细胞则是其中的“士兵”。
它们时刻警惕着外来病原体的入侵，并迅速做出反应来保护我们的身体。
然而，要想知道这些“士兵”的战斗力如何，就需要依靠免疫细胞功能检测技术。
其中一种常见的检测技术是淋巴细胞增殖试验。
淋巴细胞在受到特定刺激后会发生增殖反应。
通过在体外培养淋巴细胞，并加入刺激物，如植物血凝素、刀豆蛋白 A 等，然后观察细胞的增殖情况，就可以了解淋巴细胞的功能状态。
这种方法简单直观，但也存在一定的局限性，比如无法准确区分不同亚型淋巴细胞的反应。
细胞毒性 T 细胞杀伤试验也是重要的检测手段之一。
细胞毒性 T 细胞能够特异性地识别并杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞。
在检测中，通常会用放射性同位素标记靶细胞，然后与细胞毒性 T 细胞共同培养，通过检测放射性物质的释放来判断杀伤效果。
这一技术对于评估机体的细胞免疫功能具有重要意义，但操作较为复杂，对实验条件要求较高。
免疫细胞分泌细胞因子的检测也是必不可少的。
细胞因子是免疫细胞之间相互交流的“语言”，通过检测它们的分泌水平，可以了解免疫细胞的活化状态。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术。
ELISA 具有操作简便、成本较低的优点，但灵敏度相对较低。
流式细胞术则能够同时检测多种细胞因子，并对细胞进行分类分析，但设备昂贵，技术要求高。
此外，还有免疫细胞表面标志物的检测。
通过使用特异性抗体来识别免疫细胞表面的标志物，如 CD3、CD4、CD8 等，可以对不同类型的免疫细胞进行定量和定性分析。
这有助于了解免疫细胞的亚群分布和功能状态。
在实际应用中，免疫细胞功能检测技术为疾病的诊断和治疗提供了有力的支持。
例如，在免疫缺陷病患者中，通过检测免疫细胞的数量和功能，可以明确病因，制定个性化的治疗方案。
免疫细胞功能的测定
免疫细胞功能的测定
第26页
ELISPOT法
B细胞产生抗体能力测定
技术方法
1. 抗原包被: 37C°2h，或4C°过夜。固相载 体可用聚苯乙烯平皿、亚硝酸纤维膜、96 孔板。
2. 抗体生成细胞培育: 加入适量抗体生成细胞， 37C°，5％CO2，3～4h，或过夜。洗涤， 去除为与固相结合细胞。
3. 测定斑点产生细胞: 加二抗， 37C°，5％ CO2，2～3h。加辣根过氧化物酶或碱性磷 酸酶和底物显色。
免疫细胞功能的测定
免疫细胞功能的测定
第1页
免疫细胞功效测定
T细胞增殖功效测定
基础理论
本技术用于评定T细胞对各种刺激增殖能力。T 细胞增殖能力是反应T细胞功效一个主要指标。
免疫细胞功能的测定
第2页
T细胞功效测定
刺激T细胞增殖原因及意义 1. 特异性抗原: 引发寡克隆活化增殖。 克用于判断抗原免疫效果（疫苗接种）和回 想反应能力，也能反应T细胞总体功效。 2. 丝裂原: 多克隆。 3. 刺激信号转导分子: 多克隆。
免疫细胞功能的测定
第29页
B细胞产生抗体能力测定
ELISA测定各类免疫球蛋白
方法
1. 包板: 96孔板用浓度为10µg/ml特异性单抗 包被。盖上盖板，37C°，5％CO2，2h， 或4C°过夜。常规洗板，封闭。
2. 上样: 每孔内加入1:10或1:20 稀释细胞培养 上清液100µl。阳性对照为标准品，阴性对 照为培养液。每试验设2复本。室温培育2h， 或4C°过夜。
2. 培养液中添加血清: 有些血清可能激活或抑 制细胞增殖。如欲测定人体细胞增殖能力， 可采取灭活AB血清。
3. 细胞培养板类型: 依据细胞数量采取不一样 形状底部培养板。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是指通过对免疫细胞（如淋巴细胞、单核细胞等）进行活力和功能评估，以了解免疫系统的状态和功能水平，为临床治疗和预防提供有价值的参考和支持。
目前，常用的免疫细胞功能检测技术主要包括以下几种：1. T细胞亚群分析T细胞是人体免疫系统中重要的细胞类型之一，可被分为CD4+ T 细胞和CD8+ T细胞两类。
通过分析不同亚群T细胞数量和比例的变化，可以判断免疫系统是否受到某些疾病或感染的影响。
T细胞亚群分析的方法主要包括流式细胞术、荧光素标记实时定量PCR、酶联免疫吸附法等。
其中，流式细胞术是最常用的方法之一，其优点在于可以同时对多种细胞亚群进行快速定量分析。
2. 细胞因子测定细胞因子是一类分泌性蛋白质，可在免疫细胞之间传递信号和调节免疫反应。
通过测定细胞因子的水平和类型，可以判断免疫系统是否处于某种状态，如感染、炎症、肿瘤等。
常用的细胞因子测定方法包括酶联免疫吸附法、流式细胞术、ELISPOT技术、荧光素标记实时定量PCR等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
3. 免疫活性物质检测免疫活性物质是指免疫细胞释放的能够杀死或抑制病原微生物的物质，如抗体、溶菌酶、淋巴因子等。
通过测定免疫活性物质的水平和类型，可以评估免疫系统对不同病原微生物的防御能力和效果。
常用的免疫活性物质检测方法包括酶联免疫吸附法、荧光素标记实时定量PCR、免疫印迹等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
4. 免疫细胞功能测定免疫细胞功能测定是通过对免疫细胞的活力和功能进行评估，了解其对不同刺激物的反应能力和效果。
常用的免疫细胞功能测定方法包括：细胞增殖和细胞毒性检测、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞功能检测、NK细胞活性检测等。
其中，淋巴细胞转化试验是一种常用的方法，其原理是通过刺激免疫细胞，如蛋白质抗原、细菌和病毒等，来评估其对不同刺激物的响应能力。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是当今医学研究和临床应用中一个至关重要的领域。
随着对免疫系统理解的深入，科学家们不断探索如何更有效地评估免疫细胞的功能状态，以便更好地应对各种疾病，尤其是癌症和自身免疫病。
一、免疫细胞的基本功能1.1 免疫细胞的种类和功能免疫系统中有多种类型的细胞，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和巨噬细胞等。
每种细胞都有其独特的功能。
T细胞主要负责识别和消灭感染细胞，而B细胞则通过产生抗体来中和病原体。
NK细胞则在抗肿瘤和抗病毒反应中发挥重要作用。
1.2 功能检测的意义通过检测这些细胞的功能，我们可以了解个体的免疫状态，帮助医生制定个性化的治疗方案。
比如，对于癌症患者，评估T细胞的活性可以判断肿瘤免疫治疗的效果，从而调整治疗策略。
二、常用的免疫细胞功能检测技术2.1 细胞因子测定细胞因子是免疫细胞之间交流的重要信号。
我们可以通过酶联免疫吸附测定（ELISA）等技术，定量分析血液或细胞培养液中的细胞因子水平。
这不仅能评估免疫细胞的活性，还能反映出机体的炎症状态。
2.2 细胞增殖测定细胞增殖是评估免疫细胞功能的另一种方法。
常见的技术有流式细胞术和MTS法。
这些方法能够检测细胞在特定刺激下的增殖能力，提供细胞对抗原或刺激物的反应能力的信息。
2.3 细胞毒性检测对于抗肿瘤免疫反应的评估，细胞毒性检测尤为重要。
通过检测NK细胞或细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤能力，我们能直观地了解免疫系统在抵御肿瘤时的表现。
常用的检测方法包括Cr51释放实验和LDH释放实验。
三、技术的局限与展望3.1 技术的局限性尽管目前的检测技术已经相当成熟，但仍存在一些局限性。
例如，细胞因子的测定可能受样本处理和保存条件的影响，从而导致结果的不稳定性。
此外，单一指标的检测往往难以全面反映免疫状态。
3.2 未来的发展方向未来的研究应朝着更加综合和精准的方向发展。
结合多种检测技术，可能会提升对免疫细胞功能的全面理解。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术在现代医学中扮演着越来越重要的角色。
这项技术像一把钥匙，打开了理解免疫系统的复杂机制的大门。
我们每个人的身体都有一支“军队”，这些免疫细胞就像是我们的卫士，时刻保护着我们，抵御外来入侵者。
了解这些细胞的功能，能够帮助医生制定更有效的治疗方案。
首先，免疫细胞的种类繁多。
想象一下，一个五彩斑斓的世界，T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）等，每一种都有其独特的职责。
T细胞就像特种部队，专门负责攻击被感染的细胞；B细胞则是制造抗体的工厂，像是在给敌人画上记号，方便其他细胞识别。
而NK细胞则是那种冲动的小子，发现敌人就直接出击，毫不留情。
1.1 功能检测的必要性在医疗领域，检测免疫细胞的功能至关重要。
就像是一场足球赛，球队的表现需要教练的观察与分析。
医生通过功能检测，能够了解免疫细胞是否在正常运转。
如果这些细胞的“战斗力”下降，可能就会导致一系列健康问题，比如感染、肿瘤等。
这样一来，及时的检测就像是把握住了比赛的节奏，帮助医生在关键时刻做出正确的判断。
1.2 检测方法的多样性说到检测方法，那可真是五花八门。
有流式细胞术、ELISA、功能细胞实验等等。
流式细胞术就像是一条高速公路，可以快速分析成千上万的细胞。
而ELISA则像是一个精密的实验室工具，可以检测出细胞分泌的细微变化。
这些方法各有千秋，结合使用时，效果更佳。
医生可以从多个角度观察免疫细胞的状态，确保获得全面的信息。
接着，咱们再聊聊免疫细胞的异常情况。
就像人在运动中受了伤，免疫细胞也会因为各种原因而功能失常。
这种情况下，检测的意义就显得更加凸显。
早期发现免疫功能障碍，可以及时干预。
2.1 自身免疫疾病自身免疫疾病就像是一场没有硝烟的战争。
免疫细胞本该保护你，却误把自己当成敌人，开始攻击身体的健康细胞。
常见的如红斑狼疮、类风湿关节炎等。
这些疾病的病因复杂，免疫细胞的功能检测可以帮助医生找到病因，指导治疗方案，甚至监测疗效。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、中性粒细胞功能的检测
➢ 细胞趋化功能的检测 ➢ 吞噬和杀菌功能的检测
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
吞噬率 (%)
吞噬细菌的白细胞数 100
计数的白细胞数
杀菌率 (%)胞内含着染菌体数 的细 10胞 0 计数的白细胞数
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞 噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、 酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收 集人巨噬细胞或从腹腔渗出液
一 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴 细胞分泌产物的测定
淋巴细胞
➢T细胞（负责细胞免疫功能） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK细胞（非特异性免疫作用）
特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 母细胞化 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入
收集细胞
检测β射线
测定细胞内的3H－TdR
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数 10% 0
转化和未转化的胞淋数巴细
方法学评价：
(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法
2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法
(四) 细胞毒作用测定
用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对 125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤 P815的杀伤活性。
(五) 巨噬细胞促凝血活性测定
激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的 凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为 此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2 混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试 管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。
一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成 母细胞
分化
细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12～20
混合培养4-6小时
(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
B细胞增殖
形态学
3H－TdR掺入 法
(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
三、NK细胞活性测定
➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
染色计数
靶 离心取上清
细 测LDH或AKP
胞 溶 解
离心取沉淀 测活细胞荧光
测CPM值
测发光强度
常用靶细胞: K562细胞株
二 吞噬细胞功能检测技术
按其形态大小分为两类： 大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统 小吞噬细胞—中性粒细胞
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
2. 方法学：
➢ 经典溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法ELISPOT
1.原理：
2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检 测抗体分泌量。 ➢优点：
2. 溶菌法
杀菌 (% （ 1 率 )作 3、 用 6 0或 0 9m 0菌 in 落 ） 10 数 0 0m菌 in 落数
3．NBT还原试 验
NBT还原试验
原理：
N-N-
C
+ H+
N=N-R-
四氮唑基（淡黄色）
N-NH2 C N=NH
甲臜（紫黑色）
中性粒细胞 NBT 甲臜颗粒沉积于胞质中
二、巨噬细胞功能检测
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
观察杀伤活力
2.方法
➢形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残 留肿瘤细胞
意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
图15-2 T细胞细胞毒试验示意图
51Cr释放法
靶细胞 51Cr
洗 涤
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
570nm
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观 性强，重复性好。 ➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在 放射性核素污染问题。
(3) MTT 比色法
培养 液
PHA
3H-MTTdTR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
过滤 测 量测 放吸 射性光度
(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激 后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生 物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、 生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功 能。
谢谢观赏
➢优点：形态学方法简便易行，普通光 学显微镜便能观察结果，适于基层实验 室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化， 判断结果易受主观因素影响，重复性和 准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法
培养 液 PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
过滤 测 量 放 射 性
试验孔A均值 SI对照孔 570An均 m值