2020版高考生物一轮复习第1讲无菌操作技术实践学案苏教版

第1讲无菌操作技术实践

1.微生物的分离和培养

2．某种微生物数量的测定

3

．微生物的应用

4．实验：微生物的分离和培养

1.分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法的异同；选择培养

基和鉴别培养基的区别。（科学思维）

2.设计实验探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。（科学探究）

3.关注有害微生物的控制及宣传健康生活方式等。（社会责任）

微生物的分离和培养

1．相关技能、技术和方法

(1)无菌操作的技能——灭菌

①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。

②作用：微生物分离和培养的基础。

③关键：防止外来杂菌的入侵。

(2)配制培养基

①培养基概念：

为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。

②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。

(3)接种微生物

①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。

②接种方法和常用工具(连线)

接种方法常用工具

Ⅰ.涂布平板接种a．接种针

Ⅱ.穿刺接种 b．接种环

Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器

Ⅳ.平板划线接种

[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b

2．大肠杆菌的接种与分离培养

(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基

其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。

(2)斜面接种和培养大肠杆菌

①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。

②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在

37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。

(3)平板划线分离和培养大肠杆菌

①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。

②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。

1．选择无菌技术的原则

(1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。

(2)考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。

2．微生物的培养基

(1)培养基的成分

营养要素来源功能

碳源

无机

碳源

CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物

a.构成细胞物质和一些代谢产物

b.既是碳源又是能源(有机碳源)

有机

碳源

糖类、脂质、蛋白质、有机酸、

石油、花生粉饼等

氮源

无机

氮源

无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2

等合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产

物

有机

氮源

牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、

氨基酸

生长因子维生素、氨基酸、碱基

a.酶和核酸的组成成分

b.参与代谢过程中的酶促反应

水培养基、大气、代谢产物不仅是良好的溶剂，还是结构物质无机盐培养基、大气细胞内的组成成分，生理调节物

质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂

种类特点应用

物理

性质

液体培养基不加凝固剂工业生产

固体培养基加凝固剂

微生物的分离、鉴定、活

菌计数、保藏

化学

成分

天然培养基

含化学成分不明的天然

物质

工业生产

合成培养基

培养基成分明确或用一

定化学物质配制

分类、鉴定

类型实例

选择

培养

基

培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌

以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌

不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物

石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的

培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物

鉴别

培养

基

伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈黑色)

1．大肠杆菌纯化方法的比较

主要方法平板划线法稀释涂布平板法

纯化原理

通过接种环在琼脂固体培养

基的表面连续划线操作，将

聚集的菌种逐步稀释分散到

培养基表面

将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释

度足够高时，聚集在一起的微生物将

分散成单个细胞

主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作

接种工具接种环涂布器

2．某同学在利用稀释涂布平板法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。

[提示]最可能的原因是菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)。不可以，因为抗生素不但能杀灭杂菌，而且也可以杀灭大肠杆菌，因此在培养基上不可以加入抗生素。

考查无菌技术和培养基成分及分类

1．在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：

(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________。

(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_________________，在照射前，适量喷洒__________，可强化消毒效果。

(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。

(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_____________。

[解析](1)在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。

(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果。

(4)自来水通常采用氯气消毒。

(5)采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。

[答案](1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽

2．(2019·江西赣中南五校第一次联考)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的