2020版高考生物一轮复习第1讲无菌操作技术实践学案苏教版
高考生物一轮复习配套学案：《无菌操作技术实践》
1．涵盖范围本单元包括选修1全部内容——无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物技术实践。
2．考查内容及形式(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。
(2)酶的应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。
(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。
(4)发酵技术实践应用多以简答题形式考查。
(5)酶的应用、生物化学与分子生物学技术多以选择题形式考查。
3．复习指导(1)复习线索①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索，系统复习微生物的分离与培养、酶的应用技术实践。
②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质等有关知识。
(2)复习方法①列表比较法——DNA、蛋白质的分离。
②实践联系——发酵技术、植物有效成分提取技术。
③实验联系——植物组织培养、微生物培养实验过程。
第40讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择利用。
4.植物的组织培养。
考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术[重要程度：★★☆☆☆]1．培养基的定义及分类(1)概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)营养成分：碳源、氮源、水、无机盐等。
(3)分类：按所含化学成分，培养基可分为天然培养基和固体培养基。
2．无菌操作与接种技术(1)灭菌和消毒①灭菌是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。
②消毒：用较为温和的物理学方法或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法。
(2)灭菌的方法：干热灭菌或湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌等)。
(3)无菌操作——微生物接种技术的关键①培养基、试管、培养皿、接种器械在接种前都需要灭菌。
②操作人员及操作环境要求消毒。
(4)3．培养基的配制(1)配制原则：为所培养微生物的生长和繁殖或积累代谢产物提供所需的营养基质。
高考生物一轮复习 第1讲 无菌操作技术实践课时训练 苏
第1讲无菌操作技术实践1.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( )A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D.都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。
平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。
答案 D2. 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是( )A．经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．此实验中需设置对照组解析经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。
答案 A3.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 hD.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。
答案 D4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。
在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。
利用上述方法能从混杂的微生物群体中分离出(多选)( )A.固氮细菌B．霉菌C.大肠杆菌D．放线菌解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，霉菌能生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌，放线菌能生长。
2020版新一线高考生物苏教版一轮复习教学案：选修1第1讲无菌操作技术含答案
第1讲无菌操作技术[考纲展示] 1.微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用考点一| 微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种a．接种针Ⅱ.穿刺接种b．接种环Ⅲ.斜面接种c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种答案：Ⅰ－cⅡ－aⅢ－bⅣ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[思考回答]1．微生物接种的核心是什么？提示：防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
2．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。
(1)获得图A和图B效果的接种方法分别是什么？提示：图A效果是稀释涂布平板法，图B效果是平板划线法。
(2)某同学在用A方法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。
2019-2020学年高中生物 第1章 无菌操作技术实践学案苏教版选修1【共4套31页】
本套资源目录2019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第1节微生物的分离和培养学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第2节分离特定的微生物并测定其数量学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第3节植物组织培养技术学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践素能提升课学案苏教版选修1第一节微生物的分离和培养[学习目标] 1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
(重点) 2.掌握制备细菌培养基的方法。
(重点) 3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
(难点)知识点一| 培养基及接种操作一、高压蒸汽灭菌锅1．实验室常采用的灭菌方法实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
2．高压蒸汽灭菌锅的使用使用步骤包括：加水―→装锅―→加热排气―→保温保压―→出锅等。
二、配制培养基1．培养基的概念为人工培养微生物而制备的，适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
2．培养基的类型3．培养基的成分各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。
三、接种微生物1．接种的概念指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
2．不同接种工具的使用(1)穿刺接种要用接种针。
(2)斜面划线接种或平板划线接种要用到接种环。
(3)涂布平板接种要用到玻璃涂布器。
[合作探讨]探讨1：高压蒸汽灭菌锅是依赖高压灭菌吗？提示：不是，是通过高压来提高湿热的温度灭菌的。
探讨2：在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？提示：不能。
微生物不能分解琼脂。
探讨3：为什么要对培养基、接种环、实验空间、一些液体等进行消毒或灭菌处理？提示：培养某种微生物的目的是获得数量较多的、单一的该种微生物，如果不进行消毒或灭菌，则会出现其他一些杂菌，影响微生物的纯度。
[思维升华]1．消毒与灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法(如100 ℃下5～6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灭菌强烈的物理学或化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白品现黑色，并带有金属光泽)1．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可分别用于杀灭哪些部位的杂菌( )A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅C [培养基通常用高压蒸汽灭菌，常用酒精擦拭对手进行消毒，接种环、接种针等用火焰灼烧的方法进行灭菌。
【苏教版】高考生物一轮复习金榜课件(知识概览+主干回顾+核心归纳)：选修1 第一章 无菌操作技术实践
苗→移栽
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1.在配制培养基时，一般微生物除满足营养需求外，还应该考 虑pH、氧气及特殊营养物质的要求。( √ ) 【分析】一般微生物需要一定的营养、氧气、pH及特殊物质 (如添加维生素)，但培养厌氧微生物时，培养基就不能与氧气 接触。 2.(2012全国卷T5B)常用液体培养基分离获得细菌单菌落。
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含义及作用
主要来源
生长 ①含义：生长不可缺少的微量有机物 维生素、氨基
因子 ②作用：酶和核酸的成分
酸、碱基等
①含义：为微生物提供除C、H、O以
外的各种重要元素，包括大量元素和
无 机
微量元素
盐 ②作用：细胞内的组成成分，生理调
节物质;某些化能自养菌的能源、酶
的激活剂
培养基及大气
作用：优良的溶剂，维持生物大分子 培养基、大气18、
效果图。则获得图A效果的接种方法是
，图B效果的
接种方法是
。
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【解析】(1)该菌是异养型细菌，则X需提供碳源、氮源和能源 物质，从作用来看，该培养基属于选择培养基。 (2)如图可知，A种接种方法是涂抹平板法，B接种方法是平板 划线法。 答案：(1)碳源 氮源 选择培养基 (2)涂抹平板法 平板划线法
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【典例1】配制的培养基成分是纤维素粉、NaNO3、Na2HPO4、 KH2PO4、MgSO4、KCl、酵母膏、水解酪素，该培养基能使下面 哪种微生物大量繁殖( )
A.酵母菌
B.自生固氮菌
C.各种细菌
D.纤维素分解菌
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【解析】选D。该培养基中加入的纤维素粉为唯一的碳源，而 只有纤维素分解菌能利用纤维素粉。因此，只有纤维素分解菌 能在该培养基上生长。自生固氮菌能够利用自然界中的无机氮， 但是却不能利用纤维素，因此不能在该培养基上生长。
2019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第3节植物组织培养技术学案苏教版选修1
第三节植物组织培养技术[学习目标] 1.简述植物组织培养的原理和过程。
(重难点) 2.了解MS基本培养基贮备液的配制方法。
(重点) 3.举例说出使用的激素及其对脱分化、再分化的作用。
(难点)知识点一| 植物组织培养及过程1．植物组织培养(1)概念：在无菌和人工控制的条件下，诱导离体的植物器官、组织等在适宜的培养条件下发育成完整植株的技术。
(2)原理：植物细胞的全能性，是指植物体的每个体细胞都携带来自受精卵的完整基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。
2．植物组织培养的过程(1)脱分化：由已经分化的植物细胞或组织产生愈伤组织的过程。
(2)再分化：在一定条件下继续培养脱分化的愈伤组织可以重新诱导根、芽等器官的分化。
[合作探讨]探讨1：同一株植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因组成一定相同吗？提示：不一定相同，如取的是花粉，是通过减数分裂形成的，获得的愈伤组织染色体数是体细胞的一半，所以与体细胞形成的愈伤组织基因组成不同。
探讨2：同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？提示：微生物培养基以有机营养为主。
而MS培养基则需提供大量无机营养，主要包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类。
探讨3：马铃薯长期种植，产量会降低而且易感染病毒，要想提高马铃薯的产量，应该怎样培育无病毒的马铃薯？提示：长期进行无性繁殖的植物，只有根尖和茎尖中几乎无病毒，因此可利用马铃薯的茎尖或根尖进行植物组织培养获得无病毒的马铃薯植株。
[思维升华]1．植物组织培养的过程离体的植物组织、器官或细胞(外植体)――→脱分化愈伤组织――→再分化根、芽或胚状体―→新个体。
(1)愈伤组织与根尖分生组织的异同(1)使用顺序的比较(2)使用比例的比较1．某同学在进行组织培养过程中，发现只分裂而不分化出芽和根，可能原因是( )A ．细胞分裂素和生长素配比不对B．培养基营养过多C．培养时间不到D．光照不足A [植物组织培养过程中，植物激素的使用顺序及比例都会影响根和芽的分化。
高中生物第一章无菌操作技术实践章末整合提升同步备课教学案苏教版选修
第一章无菌操作技术实践章末整合提升知识系统构建【必背要语】1. 细菌培养基的配制过程：配制培养基T 调节 pH R 分装T 包扎T 灭菌T 搁置斜面。
2. 消毒和灭菌的实质不同：前者只杀死绝大多数微生物，后者则杀死所有的微生物。
3. 微生物的接种方法有穿刺接种、斜面接种、涂布平板接种和平板划线接种。
4. 用涂布平板法形成的细菌菌落通常仅在平板表面生长，而混合平板法形成的细菌菌落出现 在平板表面及内部。
5. 微生物分离的原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法是使用选择懸71斜面培养基。
6. 统计菌落数目的方法可分为活菌计数法和显微镜直接计数法。
前者的原理是涂布平板法接种，一个菌落代表一个单细胞；后者的原理是利用血球计数板，在显微镜下计数。
脱分化再分化分化7. 植物组织培养的基本过程：外植体脱分化愈伤组织再―化胚状体―分化^式管苗。
8. 生长素、细胞分裂素是启动生长、细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。
进行组织培养时要配备二种培养基，分别是愈伤组织形成培养基、诱导生根培养基和诱导生芽培养基。
9. 天竺葵的组织培养过程：准备(器具准备、试剂准备)T配制培养基T灭菌T取材与接种T 观察与记录f转接培养。
规律方法整合整合一微生物的纯培养技术与无菌操作技术1. 微生物的纯培养技术(1) 自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物的基本原理：首先采用一定方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
(2) 微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体即纯培养物。
①平板划线法：将合适的无菌培养基倒入无菌培养皿中，冷却后制备成平板。
平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的单个细胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。
2019_2020学年高中生物第一章无菌操作技术实践本章整合课件苏教版选修1
一
二
一、实验设计
实验设计是本章的重点也是后面几章的重点,本题型的解答总结如下: 1.遵循的原则:对照原则和单一变量原则 (1)常用的对照方式 ①空白对照:空白对照是不给对照组任何处理因素。例如:用小白鼠进 行抗癌药物的实验,给甲组小白鼠注射溶于棉籽油的抗癌药物,乙组小白鼠 只注射等量的棉籽油,在相同条件下饲养并观察。在这个实验中,甲组为实 验组,乙组为对照组或控制组,这种对照方式叫空白对照。 ②标准对照:不设对照组,而是用标准值或正常值做对照的方式。 ③阳性对照:是给予对照组已经证明是一种有效因素的处理因素。例 如:研究者正在研究一种新的抗衰老药物,实验组使用这种抗衰老药物,设置 的对照组就用已经被证明有抗衰老作用的维生素 E 去处理以作对照。 ④自身对照:对照和实验均在同一对象上进行,叫自身对照。这种向一 组研究对象施加一个或数个实验因子,然后测量前后变化的实验方法又叫 单组实验法。
3.对实验结果的分析、评价:针对实验材料的特点,对环境条件的要求 作出评价;结合所学知识对结果进行分析,得到预期结果;分析材料、实验步 骤对结果可能造成的影响等。
一
二
⑤相互对照:不设对照组,而是几个实验组相互对照,这种实验方法又称 轮组实验法。
(2)整个过程中只有一个量是可变的,其他的条件完全相同,这样才能单 独地观察变量对实验的影响。
2.实验步骤保证无菌操作:微生物实验中,无菌操作是成功的关键所在。 微生物的培养基、组织培养的培养基都要求无菌,微生物的分离、培养和 组织培养都要求无菌操作。无菌操作保证实验成功的同时还保护操作者 不受感染。
高中生物第一章无菌操作技术实践第1课时微生物的分离和培养同步备课教学案苏教版选修
第1微生物的分离和培养[学习导航]1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
2.掌握制备细菌培养基的方法。
3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
[重难点击]1.培养基的配制方法及常见种类。
2.大肠杆菌的接种与分离培养。
一、微生物分离和培养的基本理论1.无菌操作技术实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃温度下加热1～2 h 以达到灭菌的目的。
(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。
高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
2.配制培养基(1)培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)培养基类型①天然培养基：采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培养基。
优点：取材便利、营养丰富、配制简便；缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。
②合成培养基：由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成，如葡萄糖铵盐培养基。
优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；缺点：配制繁琐、成本较高。
(3)培养基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。
(4)培养基的配制原则：在配制培养基时，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的pH使之满足微生物生长的需要。
3.接种微生物(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
(2)常用的接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。
(3)接种方法①用接种针进行穿刺接种。
②用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种。
③用玻璃涂布器进行涂布平板接种等。
1.“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。
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第1讲无菌操作技术实践1.微生物的分离和培养2．某种微生物数量的测定3．微生物的应用4．实验：微生物的分离和培养1.分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法的异同；选择培养基和鉴别培养基的区别。
（科学思维）2.设计实验探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。
（科学探究）3.关注有害微生物的控制及宣传健康生活方式等。
（社会责任）微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
1．选择无菌技术的原则(1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。
(2)考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。
2．微生物的培养基(1)培养基的成分营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物a.构成细胞物质和一些代谢产物b.既是碳源又是能源(有机碳源)有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸生长因子维生素、氨基酸、碱基a.酶和核酸的组成成分b.参与代谢过程中的酶促反应水培养基、大气、代谢产物不仅是良好的溶剂，还是结构物质无机盐培养基、大气细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂种类特点应用物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基加凝固剂微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏化学成分天然培养基含化学成分不明的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确或用一定化学物质配制分类、鉴定类型实例选择培养基培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物鉴别培养基伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈黑色)1．大肠杆菌纯化方法的比较主要方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器2．某同学在利用稀释涂布平板法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。
[提示]最可能的原因是菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)。
不可以，因为抗生素不但能杀灭杂菌，而且也可以杀灭大肠杆菌，因此在培养基上不可以加入抗生素。
考查无菌技术和培养基成分及分类1．在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_________________，在照射前，适量喷洒__________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_____________。
[解析](1)在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。
在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果。
(4)自来水通常采用氯气消毒。
(5)采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。
[答案](1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽2．(2019·江西赣中南五校第一次联考)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。
成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示剂琼脂含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL(2)若根据用途划分，该培养基属于__________(填“选择”或“鉴别”)培养基。
若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？________________，并用__________作为指示剂。
(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行__________；操作者的双手需要进行清洗和__________。
(4)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：______________和______________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的__________。
图1 图2[解析](1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于分解者。
(2)该培养基中含有指示剂，属于鉴别培养基。
尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可将培养基中的蛋白胨改为尿素用于筛选土壤中的尿素分解菌，并用酚红作为指示剂，尿素分解菌分解尿素产生了NH3可使酚红变红。
(3)培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操作者双手需要进行消毒。
(4)图1采用的是稀释涂布平板法，图2采用的是平板划线法。
单个微生物细胞繁殖所形成的细胞群叫菌落。
[答案](1)分解者(2)鉴别将蛋白胨改成尿素酚红(3)灭菌消毒(4)稀释涂布平板法平板划线法菌落消毒和灭菌项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具孢和孢子高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌考查微生物的纯化技术3．(2019·四川省资阳市高三诊断)土壤有“微生物的天然培养基”之称。
如图是某同学分离和培养土壤中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。
回答下列问题：(1)利用固体培养基培养土壤中的微生物时，除考虑各种营养条件外，还需要控制的培养条件有____________________(至少写两点)等。
接种前应该先检测固体培养基是否被污染，检测的具体方法是_____________________________________________________。
(2)图示中用平板划线法接种的操作顺序是A→B→__________；以上操作步骤中存在明显错误的是________(用字母表示)，该操作的正确方法是________________________。
(3)实验室利用平板划线法来分离样品中的目的菌时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌，目的是_______________。
在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是____________________________。
[解析](1)若用该培养基培养土壤中的微生物，除考虑各种营养条件外，还要考虑温度、pH、氧气、无菌和渗透压等条件。
检测固体培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。
(2)图示是平板划线法接种操作示意图，由以上分析可知，其操作顺序是A→B→E→D→C→F；为了防止杂菌污染，接种应该在酒精灯的火焰旁进行，因此以上操作中存在错误的步骤是C。
(3)平板划线法操作时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌，目的是杀灭上次划线接种环上残留的菌种。
在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，能够使菌种的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能够得到单菌落。
[答案](1)温度、pH、氧气、无菌将未接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(2)E→D→C→F C 在酒精灯的火焰旁划线(3)杀灭上次划线接种环上残留的菌种使菌种的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能够得到单菌落4．(2019·宜宾市高三月考)土壤中的苯酚(C6H5OH)对环境有极大的污染，实验室希望能从土壤中分离出能专一性降解苯酚的微生物，如图是部分实验过程。
回答下列问题：(1)为了分离纯化目的菌种，①～④步骤的培养基中都加入了一定浓度的苯酚，该物质能为微生物提供________，除此而外，培养基中一般还需要水、______________________等营养物质。
(2)制备步骤④所需要的固体培养基的操作顺序：计算→称量→________→________→倒平板。
为了在步骤⑤的平板上形成单个的菌落，涂布平板前，需要对培养液进行多次稀释，原因是_________________。