酶联免疫吸附测定法(elisa法)
酶联免疫吸附测定法(elisa法)
加酶标抗体生成 抗体—待测抗原—酶标记抗体 的复合物 彻底洗涤 未结合的 酶标抗体
加底物进行 酶催化反应
根据颜色反应的 程度进行该抗原 的定性或定量测定
（二）间接法 间接法是检 测抗体最常用的方 法，其原理为利用 酶标记的抗抗体以 检测已与固相结合 的受检抗体，故称 为间接法。
包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体
特点二：特异性
其特异性来自抗体或抗原的选择性。 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的 抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。 由于两者在化学结构和空间构型上呈互 补关系，所以抗原抗体反应具有高度的 特异性。
例如乙肝病毒中的 表面抗原（HBsAg）、e 抗原（HBeAg）和核心抗 体（HBcAg），虽来源于 同一病毒，但仅与其相 应的抗体结合，而不与 另外两种抗体反应。抗 原抗体反应的这种特异 性使免疫测定能在一非 常复杂的蛋白质化合物 （例如血清）中测定某 一特定的物质，而不需 先分离待检物。
酶
辣根过氧化物酶
底 物
邻苯二胺 四甲替联苯胺 氨基水杨酸 邻联苯甲胺 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 4-硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰 甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)
显色 反应
橘红色 黄色 棕色 兰色 蓝绿色
测定波长
492 460 449 425 642 400 500 405 420 360,450 420
碱性磷酸酯酶 葡萄糖氧化酶 β-Ｄ－半乳糖 苷酶
黄色 红色 黄色 深蓝色 荧光 黄色
ELISA的种类和变化
（一）双抗体夹心法 （二）间接法 （三）竞争法 （四）双位点一步法 （五）捕获法测IgM抗体 （六）应用亲和素和生物素的ELISA
酶联免疫吸附法步骤
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酶联免疫吸附法步骤（大纲）一、酶联免疫吸附法（ELISA）概述1.1ELISA的定义及原理1.2ELISA的分类及应用二、实验准备2.1试剂与材料准备2.1.1主要试剂2.1.2主要材料2.2仪器设备准备2.2.1温度与湿度控制设备2.2.2混合与振荡设备2.2.3其他仪器设备三、实验步骤3.1微孔板的包被3.1.1包被抗原/抗体3.1.2包被后处理3.2封闭3.2.1封闭液的选择3.2.2封闭处理3.3样本及标准品的加入3.3.1样本稀释3.3.2加入标准品与样本3.4抗原/抗体结合3.4.1结合时间与条件3.4.2洗涤3.5酶标二抗的加入3.5.1酶标二抗的稀释3.5.2酶标二抗的结合3.6洗涤3.6.1洗涤次数与条件3.6.2洗涤液的选择3.7显色反应3.7.1底物的选择3.7.2显色条件3.8终止反应3.8.1终止液的选择3.8.2终止反应操作四、结果与分析4.1光密度值（OD值）测定4.2标准曲线的制作4.3结果计算与判断五、实验注意事项及质量控制5.1实验操作注意事项5.2质量控制措施5.2.1试剂质量控制5.2.2设备与操作规范5.2.3数据处理与分析六、实验结果的临床应用与意义6.1ELISA在临床检测中的应用6.2ELISA结果的临床意义及局限性6.3检测结果与临床诊断的关联分析一、酶联免疫吸附法（ELISA）概述酶联免疫吸附法（ELISA），是一种常用于检测和分析生物样本中蛋白质、多肽、抗体等生物大分子的分析技术。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药等领域。
该技术通过酶标记的抗体与特定抗原结合，再通过酶底物的反应产生可定量测定的色素或荧光信号，从而实现对抗原或抗体的检测和定量分析。
酶联免疫吸附法的原理主要包括固相酶联免疫吸附法和溶液相酶联免疫吸附法两种类型。
固相酶联免疫吸附法是最常见的类型，其原理是将抗原或抗体固定在微孔板上，再加入酶标记的抗体或抗原进行反应，最后通过底物的反应来测定结果。
而溶液相酶联免疫吸附法则是将酶标记的抗体或抗原与待测物体系中的抗原或抗体反应，再通过固相进行分离和检测。
酶联免疫吸附法的操作步骤一般包括以下几个关键步骤，包被、孵育、洗涤、检测和计量。
首先是将待检测的抗原或抗体包被在固相载体上，形成固相复合物。
然后加入酶标记的抗体或抗原，让其与待检测物发生特异性结合，形成夹心复合物。
接着进行洗涤步骤，以去除非特异性结合物质。
随后加入底物，使酶与底物发生反应，产生可测定的信号。
最后通过光度计或荧光计等设备对信号进行测定和计量，从而得出待检测物的含量或浓度。
酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性、操作简便、快速、经济等优点，因此被广泛应用于临床医学、生物学研究和生物制药等领域。
在临床医学中，ELISA技术常用于检测各种疾病的标志物，如肿瘤标志物、感染病原体抗体、药物残留等。
在生物学研究中，ELISA技术常用于蛋白质的定量分析、细胞因子的检测等。
在生物制药领域，ELISA技术常用于药物的质量控制和稳定性研究。
总之，酶联免疫吸附法作为一种重要的实验技术，在科研和临床领域发挥着重要作用。
随着生物技术的发展和进步，相信酶联免疫吸附法将会在更多领域展现出其巨大的应用潜力。
酶联免疫法;酶联免疫吸附试验法
酶联免疫法;酶联免疫吸附试验法
酶联免疫法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）
是一种常用的免疫学实验技术，用于检测样本中特定蛋白质或其他
分子的存在。
酶联免疫法通过利用特异性抗体与特定抗原结合的原
理来进行检测。
这种方法的原理是将待检测的抗原或抗体与特定的
酶标记的抗体或抗原结合，然后通过酶的底物来检测酶的活性，从
而确定待检测物质的存在或浓度。
酶联免疫法主要分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间
接竞争ELISA等几种类型。
直接ELISA直接将被检测的抗原或抗体
吸附在固相载体上，然后加入与其特异性结合的酶标记的抗体或抗原，通过酶的底物来检测酶活性。
间接ELISA则是在固相载体上吸
附抗原后，再加入特异性抗体和酶标记的抗体，以增强检测的灵敏度。
竞争ELISA则是将待检测的抗原与酶标记的抗原竞争结合，通
过竞争程度来检测待检测物质的浓度。
间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的特点，可以用于检测抗体的浓度。
酶联免疫吸附试验法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种高度敏感和特异性的实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药工业等领域。
它的优点包括操作简便、成本
低廉、高通量性和可定量性等，因此被广泛用于检测疾病标志物、药物残留、植物病原体和基因工程产品等。
同时，酶联免疫法也有一些局限性，比如可能受到干扰物质的影响、需要一定的实验条件和设备等。
因此，在使用酶联免疫法时需要综合考虑其优缺点，并结合具体的实验要求来选择合适的方法和条件。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物制药等领域。
它通过酶与抗原或抗体的特异性结合来检测样品中特定的蛋白质分子，具有高灵敏度、高特异性和简便易行的特点。
下面将详细介绍酶联免疫吸附法的原理。
首先，酶联免疫吸附法的基本原理是利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合，再通过酶底物的作用来间接或直接检测样品中的特定蛋白质。
整个实验过程可以分为固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步骤。
固相吸附是酶联免疫吸附法的第一步，通常将待检测的抗原或抗体通过物理吸附或共价结合的方式固定在固相载体（如微孔板）上。
这样做的目的是为了使待检测的抗原或抗体能够与酶标记的抗体或抗原发生特异性结合。
特异性结合是酶联免疫吸附法的关键步骤，它是指将酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合。
在这一步骤中，酶标记的抗体或抗原将与待检测的抗原或抗体形成免疫复合物，而非特异性结合则会被洗涤去除。
非特异性结合是指除了特异性结合外，固相载体上还可能存在一些非特异性结合的情况。
为了减少非特异性结合的干扰，需要通过洗涤的方式将非特异性结合的物质去除，以保证后续的酶底物反应的准确性和特异性。
最后，酶底物反应是酶联免疫吸附法的最后一步，当酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合后，加入酶底物后，酶将催化底物的变化，产生可测量的信号。
通过测定信号的强度或颜色的变化，可以间接或直接检测样品中特定蛋白质的含量或存在情况。
总的来说，酶联免疫吸附法是一种基于酶与抗原或抗体的特异性结合来检测特定蛋白质的技术。
它通过固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步骤，实现对样品中特定蛋白质的高灵敏度、高特异性的检测。
在实际应用中，酶联免疫吸附法已经成为生物医学研究和临床诊断中不可或缺的重要技术手段。
酶联免疫吸附法elisa
酶联免疫吸附法elisa
酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测生物样本中特定分子（例如蛋白质、抗原、抗体等）的存在和浓度。
ELISA技术基于免疫学原理，结合酶与底物的相互作用，通过测量酶的活性来间接或直接检测目标分子。
ELISA通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA 等不同类型。
直接ELISA是将待测样本直接加入包含特异性抗体的微孔板孔中，使目标分子与固相抗体形成复合物，然后添加特异性酶标记的二抗，使其与复合物结合。
最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。
间接ELISA首先将待测样本加入包含特异性抗原的微孔板孔中，使目标分子与固相抗原形成复合物，然后添加特异性酶标记的二抗，使其与复合物结合。
最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。
竞争ELISA是将已知浓度的抗原与待测样本中的抗原竞争结合到固相抗体上，然后添加酶标记的二抗，通过测量酶活性来判断待测样本中的抗原浓度。
夹心ELISA先将特异性抗体固定在微孔板孔上，待测样本中的抗原结合到固相抗体上，然后再加入酶标记的二抗，使其与抗原形成复合物，最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。
ELISA技术广泛应用于医学、生物学、疫苗研发、食品安全等领
域，可以快速、准确地检测目标分子的存在和浓度，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
酶联免疫吸附测定法ELISA在抗生素残留检测中的应用
加强国际合作与交流
加强与其他国家和地区的合作与交流，共同推进ELISA技术在抗生素 残留检测领域的发展和应用。
07 参考文献
参考文献
1 2
参考文献1
介绍了ELISA的基本原理和在抗生素残留检测中 的应用，强调了其高灵敏度和特异性。
抗生素残留的来源
畜牧业和农业中广泛使用抗生素，导致动物产品如肉类、蛋类和奶制品中存在 抗生素残留。
ELISA技术简介
01
酶联免疫吸附测定法（ELISA）
是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记技术将免疫反应与
化学信号放大相结合，实现对目标物质的灵敏检测。
02
ELISA技术的优点
高灵敏度、特异性、操作简便、适合批量检测等。
03 ELISA在抗生素残留检测 中的应用
抗生素残留检测的重要性
保障食品安全
抗生素残留超标可能对人体健康造成危害， 如产生过敏反应、耐药性等，因此对抗生素 残留进行检测是保障食品安全的重要环节。
国际贸易标准
随着国际贸易的发展，各国对抗生素残留 的检测标准日益严格，符合国际标准的检 测方法对于出口农产品的企业至关重要。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）在 抗生素残留检测中的应用
目录
• 引言 • ELISA技术原理 • ELISA在抗生素残留检测中的应用 • ELISA技术的实验流程 • 实验结果和数据分析 • 结论 • 参考文献
01 引言
抗生素残留问题
抗生素残留对人类健康的潜在威胁
长期摄入含有抗生素残留的食物可能增加人体内耐药菌株的形成，降低抗生素 在治疗疾病时的有效性。
03
ELISA技术的基本原理
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附试验ELISA一种酶联免疫技术。
用于检测包被于固相板孔中的待测抗原（或抗体）。
即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。
酶联免疫吸附试验（以下简称ELISA）:是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。
因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。
目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。
1•辣根过氧化物酶（HRP）过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最咼，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%）,分子量约40000,约由300个氨基酸组成，等电点为pH3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH5左右。
此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。
酶联免疫吸附试验(双抗夹心法)原理
酶联免疫吸附试验（ELISA），又称酶联免疫吸附测定法，是目前广泛用于生物化学和免疫学领域的一种重要实验方法。
该技术结合了免疫学和生物化学的原理，能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，对临床诊断、生物医学研究以及生物制药等领域有着广泛的应用。
在本文中，我们将深入探讨酶联免疫吸附试验的原理、方法和应用。
一、酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验的原理主要是利用酶标记抗体、抗原和底物的相互作用来检测特定物质的存在。
在双抗夹心法中，试验基本步骤如下：1. 用待测抗原溶液在固相酶标记抗体包被的微孔板上，充分接触和结合。
2. 经洗涤后，底物溶液被加入，并与酶标记抗体包被的复合物结合。
3. 底物受酶催化分解后，生成有色产物，通过比色法测定其光密度，间接测定抗原的含量。
在实验过程中，我们不能忽视的是标本处理、试剂选用、仪器操作等一系列实验细节，这些都对实验结果的准确性和重复性有着重要的影响。
二、酶联免疫吸附试验的方法不同类型的酶联免疫吸附试验方法包括间接法、夹心法、竞争法和直接法等。
在这次我们重点讨论的是双抗夹心法。
该方法通过将待测抗原与固相酶标记抗体和液相抗体结合，从而提高了对待测抗原的灵敏度和特异性。
这种方法在免疫学研究、传染病诊断和药物检测等方面具有重要的应用价值。
除了双抗夹心法，间接法通过检测待测抗体也是常用的酶联免疫吸附试验方法。
在实验设计中，根据不同的研究目的和样本特性，我们可以选择不同的方法来进行实验设计和操作。
三、酶联免疫吸附试验的应用酶联免疫吸附试验在临床诊断、疫苗研制、传染病监测、生物药品开发等领域有着广泛的应用。
它能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，为疾病诊断和药物研发提供了重要的技术支持。
在临床诊断中，酶联免疫吸附试验被广泛应用于传染病的早期诊断和鉴定。
HIV抗体检测、甲型肝炎抗原检测等都是通过酶联免疫吸附试验来完成的。
酶联免疫吸附试验还被应用于药物和疫苗的开发和监控过程中，能够全面地评价新药和疫苗的免疫原性和保护效果。
ELISA的原理及分类
ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种常用的生物化学分析技术，用于检测和 定量分析特定物质在样本中的存在量。本演示将介绍ELISA的原理、分类、优 缺点、优化方法、实际应用以及未来趋势。
什么是ELISA
ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种生物化学分析技术，用于检测和定量 分析特定物质在样本中的存在量。
ELISA根据检测过程中所利用的 原理，如直接ELISA、间接ELISA、 夹心ELISA等进行分类，每种方 法都有其适用的场景。
ELISA的优缺点
优点
- 灵敏度高：能够准确检测低浓度的目标物质。 - 专一性强：可以准确检测特定物质，减少误差 和干扰。 - 可大量检测：适用于高通量的样本处理和分析。
药物的筛选
ELISA可以用于快速筛选药物的有 效性和毒副作用，加速药物研发 过程。
食品安全的检测
ELISA可以检测食品中的有害物质 或过敏原，保障食品的安全和质 量。
ELISA未来的发展趋势
1 新的反应体系的发展
研究人员不断探索新的反应体系，如荧光ELISA和电化学ELISA，以提高检测的敏感度和速 度。
2 高通量ELISA技术的发展
高通量ELISA技术的发展将允许同时检测多个目标物质，提高检测的效率和准确性。
3 自动化的发展
随着自动化技术的进步，ELISA的操作将更方便、快捷，并减少操作者的误差。
结束语
ELISA是一种重要的生物化学分析技术，已在许多领域得到广泛应用。随着技术的不断发展，ELISA将继续在医 学、生物科学和食品安全等领域发挥重要作用。 期待ELISA技术在未来的突破和创新，为科学研究和社会发展做出更大的贡献。
ELISA的原理
1
ELISA的步骤
酶联免疫法
酶联免疫吸附实验ELISA一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一种测定有机物，
如抗原、抗体及其相互作用的实验方法，这种方法具有快速、简便以及具有可靠性和重复
性的特点，经过不断的发展和完善，成为迅速灵敏的一种实验方法，广泛应用于临床诊断
和血清学、分子遗传学、免疫学等生物学领域。
ELISA是一种通过生物反应检测抗原还是抗体的技术。
它利用抗原和抗体相互作用，
具有特异性地传导信号，进而加以测定。
从实验步骤上来看：将待检样品经过酶处理及离
心等步骤放入酶联免疫反应杯内，先把杯内的物质表面包覆一层特异性抗体，留存为有特
定特征的抗原受体网；然后将样品加入杯中进行反应，引起免疫反应；最后检测反应结果，依据结果来判断抗原是否存在于样品中。
传统的ELISA号称半定量技术，利用快速、简便、可靠重复性等一系列优点，在临床
医学及航空航天、环境监测等尤其受到重视，且其可以检测到比免疫印迹(immunoblotting)、放射免疫分析(RIA)轻量级微量抗原能量及比色试验更低等浓度的抗原。
ELISA也可以在针对一种抗原和多种抗体检测时使用，因为反应杯上可以印刷多种抗体，形成多个反应区域，检测样品中的抗原分布情况，该方法常称为靶向ELISA。
一般情况，本试验不会受样品的干扰而影响检测结果，因此适合检测各种样品。
ELISA的缺点在于相对RIA，其测定结果范围较窄，量程较短，因此其在被检样品浓
度范围较大时，检出限不能够满足检测要求。
酶联免疫吸附试验
加样
孵育
洗板
结果分 析
比色
显色
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 例：饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶结 合物）
孵育， 洗板
加入底 物溶液A、
B
粉碎 称量 提取（振荡、离心） 样品稀释，待测
黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒：冰箱取出，平衡至室温
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终 止液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD）
测量
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终止 液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ ELISA的比色测定主要由酶标仪进行。此处强调以下几点：
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD） 测量
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终 止液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD） 测量
▲ （1）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜在15－30℃，使用前先 预热仪器15－30分钟，测读结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应 详细阅读说明书。
▲ （2）比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入 比色架中，以免锈蚀酶标仪比色架。
生物化学实验技术酶联免疫吸附剂测定法
酶联免疫吸附剂测定法
检测步骤：
ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，
然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳
性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在 质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半 个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。 由数值来判断结果的阴性或阳性。
形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。 复合物的形成量与待测抗原的含量成正 比。测定复合物中的酶作用于加入的底 物后生成的有色物质量(OD值)，即可确 定待测抗原含量。
双抗体夹心法
双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决 定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标 本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化
微量滴定板，量滴定板为8×12的96孔式。ELISA板的特 点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计 上迅速读出结果。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性增加。
酶联免疫吸附剂测定法
酶联免疫吸附剂测定法
酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。具 有酶促反应，显示出生物放大作用。在
ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶
基本原理：
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免 疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶 标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使 固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量 与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进 行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测 定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体 ②酶标记的抗原或抗体 ③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各 种不同类型的检测方法。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
前两种方法主要用于测定抗体和大分 子抗原，适用于临床诊断上，而竞争法事 测定小分子抗原的方法，因而尤其适用于 食品分析。
ELIZA 方法图示
间接法
“Indirect” ELISA
The steps of "indirect" ELISA follows the mechanism below: 1. A buffered solution of the protein antigen to be tested for is added to each well of a microtiter plate, where it is given time to adhere to the plastic through charge interactions. 2. A solution of non-reacting protein, such as bovine serum albumin, or casein is added to block any plastic surface in the well that remains uncoated by the protein antigen. 3. Then the serum is added, which contains a mixture of the serum donor's antibodies, of unknown concentration, some of which may bind specifically to the test antigen that is coating the well. 4. Afterwards, a secondary antibody is added, which will bind any antibody produced by a member of the donor's species (for example, an antibody produced in a mouse that will bind any rabbit antibody). This secondary antibody often has an enzyme attached to it, which has no effect on the binding properties of the antibody. 5. A substrate for this enzyme is then added. Often, this substrate changes color upon reaction with the enzyme. The color change shows that secondary antibody has bound to primary antibody, which strongly implies that the donor has had an immune reaction to the test antigen. This can be helpful in a clinical setting, and in R&D. 6. The higher the concentration of the primary antibody that was present in the serum, the stronger the color change. Often a spectrometer is used to give quantitative values for color strength
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。
(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。
2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。
2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab的解离程度与K值有关。
酶联免疫吸附测定法elisa
酶联免疫吸附测定法elisa酶联免疫吸附测定法（ELISA）的原理酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种广泛用于生物医学研究和诊断的免疫分析技术。
ELISA 的原理基于抗原抗体特异性结合的原理，通过标记酶的抗体来检测目标抗原或抗体。
ELISA 的种类根据检测方法的不同，ELISA 可分为以下几种类型：直接 ELISA：将待测样品直接加入固定在微孔板上的抗原或抗体上，然后用标记酶的抗体检测。
夹心 ELISA：微孔板固定一层捕获抗体，待测样品通过捕获抗体与检测抗体结合，然后用标记酶的抗体检测。
竞争性 ELISA：待测样品与标记抗原竞争结合固定在微孔板上的抗体，标记抗原和待测样品结合量成反比。
ELISA 的步骤ELISA 的主要步骤包括：抗原或抗体固定：将待测抗原或抗体固定在微孔板上。
样品孵育：将待测样品加入微孔板，进行孵育。
洗涤：去除未结合的样品。
添加标记抗体：加入标记酶的抗体，再次孵育。
洗涤：去除未结合的标记抗体。
底物反应：加入底物，酶促反应产生有色产物。
终止反应：加入终止液，停止酶促反应。
测量吸光度：测量有色产物的吸光度，吸光度与样品中抗原或抗体浓度成正比。
应用ELISA 具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点，广泛应用于以下领域：诊断：检测传染性疾病（如艾滋病毒、乙肝）、自身免疫疾病（如类风湿性关节炎）、癌症标志物等。
研究：研究抗原抗体相互作用、免疫应答、药物开发等。
食品安全：检测食品中的残留农药、抗生素等。
环境检测：检测水体或土壤中的污染物。
注意事项进行 ELISA 时需要注意以下事项：抗体的特异性和亲和力：使用的抗体必须具有高特异性和亲和力，以确保准确的检测结果。
样品准备：样品应经过适当的处理，去除干扰物质，以获得准确的结果。
优化条件：ELISA 反应条件（如孵育时间、温度）应经过优化，以获得最佳检测灵敏度和特异性。
背景信号：应使用阴性对照进行检测，以去除背景信号的影响。
质量控制：应使用已知浓度的标准品进行质量控制，以确保检测结果的准确性和可重复性。
elisa常用方法及其原理
elisa常用方法及其原理Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验方法，广泛应用于生物学和医学研究中。
本文将介绍Elisa的常用方法及其原理。
一、Elisa的基本原理Elisa是一种通过检测抗原-抗体反应来测定物质浓度的方法。
其基本原理是将待测物质（抗原或抗体）固定在固相载体上，然后加入特异性的酶标记二抗，通过酶标记物的催化作用，将待测物质与酶底物反应产生可测定的信号。
Elisa可以根据待测物质的特异性与酶标记物的催化作用来测定物质的浓度。
二、Elisa的常用方法1.直接Elisa法：将待测抗原直接固定在固相载体上，然后加入酶标记的第一抗体，通过酶标记物的催化作用来测定抗原的浓度。
这种方法简单快速，适用于抗原浓度较高的情况。
2.间接Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的第一抗体，再加入酶标记的第二抗体，通过酶标记物的催化作用来测定抗原的浓度。
这种方法灵敏度较高，适用于抗原浓度较低的情况。
3.竞争Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的酶标记抗体和待测样品，通过抗原与酶标记抗体的竞争来测定抗原的浓度。
这种方法可以测定抗原和抗体的亲和力，适用于测定抗原或抗体的亲和力常数。
4.间接竞争Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的第一抗体，再加入酶标记的第二抗体和待测样品，通过第一抗体与第二抗体的竞争来测定抗原的浓度。
这种方法可以测定抗原和抗体的亲和力，适用于测定抗原或抗体的亲和力常数。
三、Elisa的操作步骤1.涂覆：将待测物质（抗原或抗体）溶液加入固相载体上，使其吸附固定在载体表面。
2.阻断：加入适当的阻断剂，防止非特异性结合。
3.第一抗体反应：加入特异性的第一抗体，使其与待测物质发生特异性结合。
4.洗涤：用洗涤缓冲液洗去未结合的抗体。
5.酶标记抗体反应：加入酶标记的第二抗体，使其与第一抗体结合。
6.洗涤：用洗涤缓冲液洗去未结合的酶标记抗体。
酶联免疫吸附实验ELISA
酶联免疫吸附实验ELISA
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再加入酶标识抗原或抗体, 也经过反应而结合在固 相载体上。此时固相上酶量与标本中受检
物质量呈一定百分比。加入酶反应底物后, 底物被 酶催化成为有色产物, 产物量与标本中受检物质量 直接相关, 故可依据呈色深浅进行定性或定量分析 。因为酶催化效率很高, 间接地放大了免疫反应结 果, 使测定方法到达很高敏感度。
酶联免疫吸附实验ELISA
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2.1.2 包被方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。
换言之, 包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面 过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸 附结合, 靠是蛋白质分子结构上疏水基团与固相载 体表面疏水基团间作用于。这种物理吸附是非特 异性, 受蛋白质分子量、等电点、浓度等影响。
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惯用检验方法为: 以一定浓度人IgG（普通为 10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每 孔内加入适当稀释度酶标抗人IgG抗体，保温后 洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分 别测每孔溶液吸光度。控制反应条件，使各孔读 数在吸光度0.8左右。计算全部读数 平均值。全部单个读数与全部读数均数之差，应 小于10%。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫吸附实验ELISA
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1. ELISA原理 ELISA基础是抗原或抗体固相化及抗原或抗
体酶标识。结合在固相载体表面抗原或抗体仍保
持其免疫学活性, 酶标识抗原或抗体既保留其免疫 学活性, 又保留酶活性。
酶联免疫吸附实验ELISA
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在测定时, 受检标本（测定其中抗体或抗原）与固相 载体表面抗原或抗体起反应。用洗涤方法使固相 载体上形成抗原抗体复合物与液体中其它物质分 开。
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ELISA法检测幽门螺杆菌抗体 ELISA法检测幽门螺杆菌抗体
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酶联免疫井
几种酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪 DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪 DNM-9602A酶标分析仪
DNMDNM-9602 标配酶标分析仪
其所生成的颜色深浅与 欲测的抗原（抗体） 欲测的抗原（抗体）含量成 正比。 正比。 这种有色产物可用肉眼、 这种有色产物可用肉眼、 光学显微镜、 光学显微镜、电子显微镜观 察，也可以用分光光度计 酶标仪）加以测定。 （酶标仪）加以测定。 其方法简单，方便讯速， 其方法简单，方便讯速， 特异性强。 特异性强。
生物体系中的化学测量
酶联免疫吸附测定法
裴丹青03081152
复杂生物体系中生命物质的化学测量是揭示 生命奥秘的重要手段，在食品检验、 生命奥秘的重要手段，在食品检验、疾病诊断和 预防的过程中也日益凸现其重要作用。 预防的过程中也日益凸现其重要作用。 经典的化学分析方法（滴定分析、重量分析、 经典的化学分析方法（滴定分析、重量分析、 简单的吸光光度法） 简单的吸光光度法）是以简单离子或分子为检测 对象的常量或微量分析， 对象的常量或微量分析，面对生物体系成分复杂 且待测物浓度较低的测试条件则往往无能为力。 且待测物浓度较低的测试条件则往往无能为力。
例如乙肝病毒中的 表面抗原（HBsAg）、 ）、e 表面抗原（HBsAg）、e 抗原（HBeAg） 抗原（HBeAg）和核心抗 体（HBcAg），虽来源于 HBcAg），虽来源于 ）， 同一病毒， 同一病毒，但仅与其相 应的抗体结合， 应的抗体结合，而不与 另外两种抗体反应。 另外两种抗体反应。抗 原抗体反应的这种特异 性使免疫测定能在一非 常复杂的蛋白质化合物 例如血清） （例如血清）中测定某 一特定的物质， 一特定的物质，而不需 先分离待检物。 先分离待检物。
ELISA在疾病诊断中的作用 ELISA在疾病诊断中的作用
ELISA检测 非典型肺炎” ELISA检测 “非典型肺炎”冠状病毒 ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用 ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用 检测抗异质性胞核核糖蛋白A2（hnRNPA2 检测抗异质性胞核核糖蛋白A2（ A2 类风湿性关节炎（PtA）33抗体 ）/类风湿性关节炎（PtA）33抗体
于是， 于是，一系列针对生物体系中化学成分的测 量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员， 量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员，它 将免疫学知识与化学分析手段有机结合， 将免疫学知识与化学分析手段有机结合，为生命体 系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。 系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。
ELISA应用实例 ELISA应用实例
ELISA在饲料安全检测中的应用 在饲料安全检测中的应用 饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 简曲霉毒素 ） 饲料中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏 菌 ） ELISA用于农药残留的检测 用于农药残留的检测 甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析
黄色 红色 黄色 深蓝色 荧光 黄色
400 500 405 420 360,450 420
葡萄糖氧化酶
β-Ｄ－半乳糖 Ｄ－半乳糖 苷酶
ELISA的种类和变化 ELISA的种类和变化
（一）双抗体夹心法 （二）间接法 （三）竞争法 （四）双位点一步法 捕获法测IgM IgM抗体 （五）捕获法测IgM抗体 应用亲和素和生物素的ELISA （六）应用亲和素和生物素的ELISA
加酶标抗体生成 抗体—待测抗原 待测抗原—酶标记抗体 抗体 待测抗原 酶标记抗体 的复合物
洗涤除去其他 未结合的物质
彻底洗涤 未结合的 酶标抗体
加底物进行 酶催化反应
根据颜色反应的 程度进行该抗原 的定性或定量测定
（二）间接法
间接法是检 测抗体最常用的方 法，其原理为利用 酶标记的抗抗体以 检测已与固相结合 的受检抗体， 的受检抗体，故称 为间接法。 为间接法。
什么是 酶联免疫分析技术 ELISA的基本原理和方法 ELISA的基本原理和方法 ELISA的种类和变化 ELISA的种类和变化 ELISA的特 ELISA的特 点 ELISA的应用实例 ELISA的应用实例
1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷 年瑞典学者Engvail 兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免 兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免 疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免 疫测定方法， 疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme(enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA现在已成为目前分析化学领 ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领 域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分 析方法， 析方法，是在免疫酶技术 ( immunoenzymatic techniques ) 的基础 上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。
（一）双抗体夹心法
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原
获得待分析物的未标定抗体
将特异性抗体与固相 载体连接形成固相抗体
加入封闭蛋白溶液以封闭载体 表面残留的蛋白结合位点
洗涤除去未结合的 抗体及杂质
洗涤并除去未结合的封闭蛋白
加受检标本（抗原） 加受检标本（抗原）形成 固相抗体－ 固相抗体－抗原复合物
参考文献： 参考文献： 生物体系中的化学测量》 《生物体系中的化学测量》 E.EBEL著 Kent k.Stewart Richard E.EBEL著 生命经纬
/sky/nyxkc/techology.html
普通免疫学课程
特点二： 特点二：特异性 其特异性来自抗体或抗原的选择性。 其特异性来自抗体或抗原的选择性。 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的 抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。 抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。 由于两者在化学结构和空间构型上呈互 补关系， 补关系，所以抗原抗体反应具有高度的 特异性。 特异性。
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原） 但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原） 与酶结合成的偶联物（标记物）， ），此偶联物仍保 与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保 留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体 留其原免疫活性与酶活性， 上的抗原（抗体）反应结合后， 上的抗原（抗体）反应结合后， 再加上酶 的相应底 物，即起 催化水解 或氧化还 原反应而 呈颜色。 呈颜色。
包被固相载体: 包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体
加待检标本: 加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合 洗涤， 洗涤，除去无关的物质
加底物 显色
加酶标抗抗体: 加酶标抗抗体: 与固相载体上抗原抗体 复合物结合；洗涤， 复合物结合；洗涤，除去 未结合的酶标抗抗体
根据颜色反应的程度进行 该抗原的定性或定量测定
农药的检测： 主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（ 例如杀暝松（ FN ）、 甲氟磷酸异已酶（ 甲氟磷酸异已酶（ SOMAN ）、 草不绿（ 草不绿（ Alachor ）、 西维因（ 西维因（ Carbaryl ）、 多菌灵及克菌丹（ 多菌灵及克菌丹（ Captan ）等。
植物毒素如罌粟硷、吗啡、 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素 河豚毒素 苯并芘
对照管由于只加酶标抗原， 对照管由于只加酶标抗原，与固 相抗体充分结合，故分解底物显色深； 相抗体充分结合，故分解底物显色深； 测定管的显色程度则随待测抗原和酶 标抗原与固相抗体竞争结合的结果而 如待测抗原量多， 异。如待测抗原量多，竞争性地抑制 酶标抗原与固相抗体结合， 酶标抗原与固相抗体结合，使固相上 结合的酶标抗原量减少。因此， 结合的酶标抗原量减少。因此，加入 底物后显色反应较弱。 底物后显色反应较弱。
二、酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原, 酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原 在交联剂作用下联结的产物。 ELISA成败 在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败 的关键试剂， 的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的 免疫反应，还具有酶促反应， 免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物 放大作用， 放大作用，但不同的酶选用不同的底物 ， 将得到不同的颜色反应. 将得到不同的颜色反应.
显色
酶
辣根过氧化物酶
底 物
反应
邻苯二胺 四甲替联苯胺 氨基水杨酸 邻联苯甲胺 2,2‘-连胺基-2(3-乙基2,2 -连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 唑啉磺酸-6)铵盐 橘红色 黄色 棕色 兰色 蓝绿色
测定波长
492 460 449 425 642
碱性磷酸酯酶
4-硝基酚磷酸盐(PNP) 硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐 磷酸盐+ 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 ABTS+HRP+葡萄糖 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+ 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰 甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)
特点一： 特点一：灵敏性 该测定法的灵敏度来自作为报告集团的 众所周知, 酶是一种有机催化剂， 酶。众所周知, 酶是一种有机催化剂，很少 量的酶即可诱导大量的催化反应 ，产生可 供观察的显色反应现象。 供观察的显色反应现象。因此该体系常被称 为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细 为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细 胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位， 胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在 微克、甚至纳克水平上对其进行定量。 微克、甚至纳克水平上对其进行定量。 例如，在测定血清中某一物质的含量时， 例如，在测定血清中某一物质的含量时， 化学比色法的敏感度为mg/ml水平， mg/ml水平 化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应 测定法的敏感度约为5~10μg/ml 测定法的敏感度约为5~10μg/ml 。