人类性染色质检查与观察
人类X-染色质的观察
实验材料与药品
材料：女性口腔颊部粘膜细胞（ 材料：女性口腔颊部粘膜细胞（用牙 签刮取） 签刮取） 试剂：,1NHcl,2％硫堇 试剂： ％
实验步骤
取材
牙签刮取口腔粘膜 细胞， 细胞，涂于洁净 的载玻片， 的载玻片，凉干 或烘干（ ℃ 或烘干（40℃）
解离
加入1NHCl水解 加入 水解 10min(37-40℃) ℃
漂洗
流水淋洗、 流水淋洗、凉干
漂洗
染色
2％硫堇染色 ％ 15min（室温） （室温）
观察
流水淋洗、 流水淋洗、烘干 或自然干燥
作业
• 绘制粘膜细胞、指出X-小体 绘制粘膜细胞、指出 小体
人类X-染色质的观察 人类 染色质的观察
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
初步掌握观察和鉴别X-染色质的简 初步掌握观察和鉴别 染色质的简 易方法，识别其形态特征和所在部位。 易方法，识别其形态特征和所在部位。
•
实验原理
• 人类正常染色体组成： 人类正常染色体组成：男性为 22AA+XY;女性为 女性为22AA+XX性染色体。女 性染色体。 女性为 性染色体 性的两条X染色体，在间期有一条呈异固缩 性的两条 染色体， 染色体 形式，保持高度浓缩状态， 形式，保持高度浓缩状态，因此易于用适 当的染料加以显示， 当的染料加以显示，成为便于观察的性染 色质（ 小体 小体， 氏小体）。 色质（X-小体，Barr氏小体）。 氏小体
人的X染色质的观察
作业：
绘出所观察到的Barr氏小体
Lyon假说
2、失活是随机的。 3、失活发生在胚胎发育的早期。例如：人类在胚胎发育
的16天X染色体一条发生失活。某一细胞的一条X染色
体一旦失活，这个细胞的所有后代细胞中的该X染色 体均处于失活。
4、杂和体雌性在伴性基因的作用上是嵌和体（mosaic）
----某些细胞中来自父方的X染色体上的基因表达，某 些细胞中来自母方的X染色体上的基因表达。
2．发根细胞的Barr氏小体显示方法。
用拔取女性带毛囊细胞的头发，将毛囊置于载 玻片上，加一滴95％乙醇:浓盐酸解离5分钟，吸 掉多余的解离液，用镊子将软化的毛囊剥下，加一 滴卡宝品红染色10分钟，而后盖上盖片，用拇指 压片，即可镜检。
X染色质的辨认：
低倍镜下检出典型的可数细胞，其标 准是①核质呈网状或细颗粒状分布；②核 膜清晰、核无缺损；③染色适度；④周围 无杂菌。选定后的细胞在高倍镜或油镜下 进一步检查，X染色质的形态一般表现为 一个结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大 小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠近内 侧，其形态有微凸形，三角形、卵形、短 棒形及双球形等。
实验八 人类X染色质的观察
和果蝇唾腺染色体观察
人类X染色质的制备与观察 果蝇唾腺染色体观察
X染色质的发现
早在1949年Barr等人发现在雌性猫的神经细胞 间期核中有一个染色很深的染色质小体，而雄 性猫中没有。 由于这种染色质小体与性别及其X染色体数目 有关，所以也称为性染色质小体（sex chromatin body）,又名巴氏小体（Barr body） 是失活的异固缩状态的X染色质，并发现它属 延迟复制的染色体。X小体的数目在正常女性 中是性染色体数目减去一。经观察，X小体一 般1-1.5微米，呈三角形或卵圆形，出现频率 是13-39％（男性的频率为1-2％）。
人类性染色质标本的制备和观察
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
1、几对基本概念 染色质——染色体 常染色质——异染色质 常染色体——性染色体
实验一
内容步骤
实验一
（一）性染色质的定义及形成机制
1、几对基本概念
性染色质（sex chromatin）：
在间期细胞核中性染色体的异染色质部分显示出 来的一种特殊结构，包括X染色质和Y染色质 。
内容步骤
（一）性染色质的定义及形成机制
隐性
紧貼脸颊 不能
无 拇指第一节向指背弯曲
较无名指短 无(单眼皮)
无 左手拇指在上
实验一
课后作业
1、绘制人类口腔黏膜上皮细胞（示X染色质） 2、自学理论书P114-115遗传平衡定律及遗传
平衡群体的判断，判定是否为平衡群体。
实验一
预习
实验二：人类染色体核型分析 （实验指导：P59；P62） 准备：非显带核型的照片染色体剪下
实验一
基因
tt Tt TT
实验一
（三）PTC尝味实验：
1、原理 人类味觉对苯硫脲（又称苯基硫代碳酰二胺，
PTC）的敏感性由一对等位基因（T、t）控制，属不 完全显性遗传。基因型不同的个体尝出含PTC溶液的 浓度有明显的差异。
6 7 10 11
①②③ ④
tt
人类性染色质标本的制备和观察
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
2、观察（高倍镜）
实验一
1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
（2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形
实验一
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
人类性染色质标本的制备、 分析和PTC尝味实验
实验一
目的与要求
1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。（重点，难点）
2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗传 性状的遗传规律。
内容步骤
人类X染色质（巴氏小体）制备与观察
⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。
性染色质：人体X-染色质观察
四、实验用具药品
1.仪器用具：显微镜、载玱片、盖玱片、剪刀、镊子、 酒精灯、牙签 2.药品试剂：改良品红、醋酸洋红、50%醋酸、蒸
馏水
8/20
性染色质：人体X-染色质观察
五、实验步骤：
1.口腔颊部粘膜细胞的观察 用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细胞，在 原位刮取2-3次，分别涂抹在干净载片上，待稍干后， 滴加1-2滴1%醋酸洋红染液，常温下染色2-5分钟，勿 使干燥，压片后镜检。 要点：先漱口
五、实验步骤：X－染色质的辨认
低倍镜下检出典型的可数细胞： 标准：A、核质呈网状或细颗粒状分布；B、核膜清晰， 核无缺损；C、染色适度；D、周围无杂菌； 高倍镜下观察：1、核膜内侧边缘；2、核仁附近；3、 染色质中间游离部位。（正常女性口腔粘膜细胞中约 30-50%有一个Barr小体。在丌同实验室中计数的差 别较大，而在男性中则仅只偶尔可见丌典型者——这 是环境引起代谢的暂时现象，约2%以下）
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性染色质：人体X-染色质观察
二、实验原理：
Ｘ染色体失活假说：在正常的雌性哺乳动物的体细胞 中，一条Ｘ染色体在遗传上有活性，而另一条处于失 活状态。这种失活发生在胚胎发育的早期，失活是随 机的。
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性染色质：人体X-染色质观察
三、实验材料 ：
上皮粘膜细胞、带有毛根的头发
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人类性染色质小体的制备和观察
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
人体X-性染色质的观察一
6、Barr小体大小、形态、位置：
X-染色质的形态表现为一结构致 密的浓染小体，轮廓清楚。
大小约1μ m左右。 常附着于核膜边缘或靠近内侧。
形状有微凸形（馒头形）、 三角形、卵形、短棒形（长方形）、 圆球形等。
7、鼓槌状突出物
在血液的多形核白细胞分裂形成过 程中，裂出形成有一细缝连结的鼓槌 状突出物（ Barr小体）。
8、性别异常
正常女性口腔粘膜细胞中约有3050%的Barr小体。
男性中偶尔可见不典型者。大于3% 即性别异常。
Y小体：
用 荧 光 染 料 如 盐 酸 阿 的 平 、 QH 染色后，可在间期核中看到一个直 径约0.3微米的强荧光小体，即 Y小 体
或在中期核中看到Y染色体的长 臂发出强荧光。
三、实验步骤
一实验目的1通过实验初步掌握观察与鉴别x染色质的简易方法识别其形态特征及所在部位
实验四、人体X-性染色质的观察
一、实验目的 1、通过实验初步掌握观察与鉴别X-染
色质的简易方法，识别其形态特征及所在 部位。
2、为进一步研究人的染色体畸变与疾 病（性别异常）、鉴别胎儿性别（羊水细 胞涂片）提供参考条件。
1、核质呈网状细颗粒状分布； 2、核膜清晰，核膜无破损； 3、染色适度； 4、周围无杂菌。
四、作业
绘制口腔粘膜细胞图，示X-染色 质的形状和部位。
Hale Waihona Puke 二、实验原理1、性染色体：和性别决定有明显的
直接关系的染色体。
2、性染色质发现： 1949年Barr等发现，在雌猫的神经 细胞核内有一个凝缩的深染小体， 在雄性的细胞中没有。
3、X-性染色质形成：
进一步了解到，雌体细胞中的两 条X-染色体在间期时有一条处于凝集 而不活跃的状态（异固缩状态），形 成明显的染色中心，染色中心这就叫 X-性染色质、 又叫Barr小体。
人类性染色质体观察
姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组一、研究背景1949年，美国人Barr发现，雌猫神经元细胞核中在间期有一个深染的小体，而雄猫没有。
以后在其他哺乳动物中发现同样现象。
称为Barr’s body，巴氏小体。
研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-11961年Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。
巴氏小体也被称为性染色质体或 X染色质体。
Lyon假说的要点：1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细胞中都是同样一条X染色体失活。
修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）：①呈莱昂化（失活）的基因如G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血Ⅷ因子）；这些基因表现了完全的失活，即XGXG≈XGY②非莱昂化基因：如Xg血型基因、MIC2抗原基因等，这些基因无论在有活性还是在无活性的X染色体上都能够表达。
即 XGXG≈XGY的2倍③不完全的剂量补偿效应：如 XSXS 的产物是 XSY 产物的1.3倍，而没有达到2倍。
二、研究目的1、确定巴氏小体的位置，观察巴氏小体的形态；2、尝试通过观察巴氏小体的有无进一步验证性别三、实验原理巴氏小体形态：在间期也表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。
大小约1～1.5微米。
女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。
但是：1.生殖细胞中不发生X染色体失活。
2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。
因此，哺乳动物的雌性就X染色体上基因的作用来说是嵌合体。
四、实验器材1、女生的口腔上皮细胞2、载玻片姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组五、实验试剂95%乙醇水溶液、1 mol/L 的HCl、改良酚红液六、实验步骤1. 涂片(1) 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌.(2) 然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片,从女性口腔两颊刮取上皮黏膜细胞, 涂抹在干净载玻片上,每次可涂1～3 片,涂抹范围大约1～2 张盖玻片大小.2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。
实验十一 人类X染色质的观察
五、作业 作业
(1)观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性可数细胞为对照，分别计算显示X-染色质 细胞所占的百分比。 (2)观察中选绘4～5个典型细胞，示明X-染色基部截取 2 cm左右置载玻片上， （2）在毛根部加1滴2％乳酸醋酸地衣红染液， 片刻后再加1滴50％醋酸(或只加50％醋酸)， 低倍镜下观察。
（3）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加1滴 染液，覆以盖玻片， （4）在酒精灯上轻微加热后静置5 min，隔 一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。
一、实验目的 初步掌握观察与鉴别X染色质的简易方法 识别其形态特征及所在部位。
二、实验原理
剂量补偿效应
人类正常男性体细胞中只有1条X染色体，不失活， 故见不到X染色质； 女性的2条X染色体中，在间期时有一条不表现活 性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以 显示，成为便于观察的性染色质体(或称X-小体、 Barr小体)。
1材料正常女性口腔颊部黏膜毛发根部细胞2实验器具显微镜洁净的载玻片和盖玻片刮片吸水纸3实验药品和试剂95酒精50醋酸2乳酸醋酸地衣红1口腔颊部黏膜细胞的观察1用清洁灭菌的刮片从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞在原位刮取23次2分别涂抹在干净载玻片上每次可涂13片涂抹范围为12张盖玻片大小
人类X染色质的观察 实验十一 人类 染色质的观察
三、实验材料
1、材料
正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞
2、实验器具 实验器具
显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸
3、实验药品和试剂 实验药品和试剂
95％酒精、50％醋酸、2％乳酸醋酸地衣红
四、实验步骤
1、口腔颊部黏膜细胞的观察
（1）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部 刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取2～3次 （2）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂1～3 片，涂抹范围为1～2张盖玻片大小。
人体X-染色质的观察
观察与区别X染色质：通过实验 初步掌握简易方法，识别其形态及所 在部位，为进一步研究人体染色质的 畸变与疾病提供参考条件。
二.实验原理
1949年Barr等发现，在雌猫的神经细 胞核间期有一个凝缩的深染小体，而在雄 性的细胞中没有。
后来了解，在雌体中的两条X染色体在 间期时有一条(或这条的大部分)处于凝集而 不活动状态，从而形成了这种X-染色质(或 称性染色质、Barr小体)。
1932年美国遗传学家首先在果蝇中发 现了剂量补偿效应，并把它看作是维持雌 雄两性生物基因表达的一致所特有的一种 遗传效应。
剂量补偿效应：在XY型性别决定机制 的生物中，使性连锁基因在两种性别中有 相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
进一步研究发现，所有哺乳类雌体细胞中都 有一条这种表现的X染色体；
五.实验方法和步骤
1.口腔颊部黏膜细胞的观察：
a.刮取口腔黏膜细胞: 漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜 细胞，原位刮2-3次，分别涂抹在干净载片上，每 次可涂1-2片，涂抹范围约盖片大小(男性做对照)。 b.染色: 待稍干后，滴加1-2滴改良苯酚品红，染色10-15分 钟。
c.压片: 加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。
★ X-染色质的形态：
1.结构致密的浓染小体，轮廓清楚； 2.大小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠
近内侧； 3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒
形及双球形；
FEMALE
MALE
三.实验材料
1.女性口腔颊部黏膜细胞 2.毛发根部细胞
四.实验仪盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红
六.实验结果
1.观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性者为对照，分别计算显示X-染色质细胞 所占的百分比。
人类性染色质检查与观察
仪器、材料
显微镜、染色缸、载玻片 试剂
实验步骤
X染色质制片与观察 1女性口腔粘膜细胞制片：清水漱口，用牙签的 钝头刮口腔颊部黏膜，将刮起的细胞均匀涂布在 干净的载玻片中间，不等晾干，立即将涂片放入 甲醇：冰醋酸=3：1的固定液中固定15分钟，晾 干，染色。 2染色：在涂片处加上数滴硫堇染液，染色5-10 分钟，用水冲洗，晾干，镜检。 3观察：用低倍镜观察紫蓝色的细胞核，看清楚 间期核的形态特征，找到X染色质。X染色质一般 紧贴在细胞核核膜内缘，大约1-1.5µm，染色深， 常呈三角形、馒头形、梭形或其他形态。
试验报告 性染色质标本 预习试验报告 实验考试
实验考试题
染色体标本制备时，低渗与固定有何意义？ 试述核型分析时应注意哪些问题？ 某男性口腔粘膜细胞检查X染色质和Y染色 质均为阳性，试分析其核型。
人类性染色质检查与观察实验目的了解人类间期细胞核中x染色质和y染色质的检查方法及意义实验原理人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发现一个浓染小体而正常男性则无
人类性染色质检查与观察
实验目的
了解人类间期细胞核中X染色质和Y染色质 的检查方法及意义
实验原理
人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发 现一个浓染小体，而正常男性则无。这一 浓染小体是一条X染色体失活异固缩形成 的，现在通称为X染色质或X小体。男性间 期细胞核中经特殊染色方法染色后在荧光 显微镜下可见一个0.3µm的强荧光小体， 为Y染色体长臂末端被荧光染料着色而成， 称为Y染色质。X染色质和Y染色质的检查 可作为性别测定的依据和性染色体数目异 常的一种辅助诊断方法。
注意事项
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
实验七 人体性染色质体的观察
X-染色质的辨认：
低倍镜下检出典型的可数细胞的标准：
①核质是网状或细颗粒状分布； ②核膜清晰、核无缺损； ③染色适度； ④周围无杂菌。 在高倍镜或油镜下进一步观察。
注意：在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大 小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观 察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央部位）。
氏小体，男性则低于1～2%。）
观察中选绘4～5个典型细胞，示明X染色质体的形成
和部位。 正常男人的染色体组成是44+XY，而正 常女人的染 色体组成是44+XX，请按要求填写下列表格：
Barr小体 数目
性别表现
性染色体的 组成情况
体细胞中 染色体总数
0 0 1 1 2 2 3 3
正常男人 有缺陷的女人 有缺陷的男人 正常女人 有缺陷的男人 有缺陷的女人 有缺陷的男人 有缺陷的女人
七、思考题
1、什么是剂量补偿效应？ 2、为什么巴氏小体一般出现在核膜边缘？ 3、巴氏小体在人类遗传学工作中有什么用途？
固体废弃物丢到水槽旁的废物桶中！
每组同学：请在实验后用擦镜纸把镜头擦净；如使用高
倍镜，则立即用擦镜纸蘸二甲苯将镜头和载玻片擦
净，以免污染镜头。登记显微镜使用记录本，到助教 处登记实验记录。把桌面整理好，最后经助教检查桌 面后方可离开! 通常将香柏油和二甲苯装在双层瓶中，香柏油装在 上层狭长小瓶中，其中有一小玻璃棒，用于蘸取香柏 油；二甲苯装于下层瓶中，用装香柏油的小瓶底部蘸 取。使用时不要把两者搞混，注意不要打翻瓶子！ 值日的同学：把废物桶中垃圾集中倒入门口的大垃圾框 中，并清扫实验室。
五、注意事项
刮口腔上皮细胞前要漱口； 涂片略干再加改良苯酚口红； 染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色 质体不易区分； 毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针 敲片，使细胞解离。
人类X染色质的观察
人类X染色质的观察摘要：本实验学习掌握掌握X染色质标本的制备、观察与分析方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
前言：1949年，加拿大学者Barr等人在雌猫的神经元细胞核中首次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种结构。
进一步研究发现，除猫外，其他雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种显示性别差异的结构。
而且不仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以见到这一结构。
称之为巴氏小体，也称为X染色质。
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致。
Morishima 等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质(heterochromatin)一样，在DNA 复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现Barr 小体的比例约为1%，正常女性的细胞只可能出现一个Barr 小体，比例为17～39%。
对于具有性染色体畸变的个体来说，Barr 小体出现的数目等于细胞内X 染色体的数目减1。
如下表rr小体)；间期细胞核中，Barr小体大小约1μ，呈三角形或椭圆形，紧贴核膜内缘，染色较深。
X染色质的数目是X染色体数目减一。
正常女性间期细胞中，X染色质阳性检出率为20%~70%，男性细胞中则平均低于1%（0~10%）。
但在Kliefelter综合征（47，XXY）患者细胞核中可见到X染色质。
因此，通过X染色质数目的检查，可以鉴定性别和性别畸形。
本实验取口腔粘膜细胞进行染色观察，正常女性口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，不超过30～35%，仅含1个X染色质。
实验九 人体X-染色质的观察
4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）
（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X≠46，XX；47XXY≠46，XY， 这两个不等式是否成立的疑问。
（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但 45，X与47，XXY实际是两种综合症。
（3）修正：1974年，失活的X染色体上并非 全部基因都呈莱昂化失活。
2. 发根毛囊细胞的X染色质（Barr小体）显示方法
⑴取材：拔取女性带毛囊细胞的头发，置于载玻片上； ⑵固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐酸）
固定5min，吸掉多余的醋酸； ⑶染色：用镊子将软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红
染色2~3min； ⑷制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸镜检：低倍→高倍。
六、作业
1. 观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小 体细胞所占的百分比。
2. 绘制3个典型的显示X染色质的细胞。
药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、 石炭酸品红。
四、实验方法
1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法
⑴ 取材：漱口3~4次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取 口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮 2~3下，涂在载玻片上； ⑵ 固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余 醋酸； ⑶ 染色：加一滴石炭酸品红染色2min； ⑷ 制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸ 镜检：低倍→高倍。
1961年 M.F.Lyon提出：
① 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的；
② 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的；
③ 失活现象发生在胚胎发育的早期。
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注意事项
用清水漱口，用牙签钝头刮口腔颊部黏膜 甲醇冰醋酸固定液要现用现配。 染色缸中固定液体积为2/3，用手拿出时 注意不要碰到液体。 注意固定和染色时间 注意在标本面做好标记 染液不要滴在实验台上
作业
两人一组作一张x染色质标本 绘两个间期核中X染色质图
最后一次试验课要交如下材料
人类性染色质检查与观察
实验目的
了解人类间期细胞核中X染色质和Y染色质 的检查方法及意义
实验原理
人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发 现一个浓染小体，而正常男性则无。这一 浓染小体是一条X染色体失活异固缩形成 的，现在通称为X染色质或X小体。男性间 期细胞核中经特殊染色方法染色后在荧光 显微镜下可见一个0.3µm的强荧光小体， 为Y染色体长臂末端被荧光染料着色而成， 称为Y染色质。X染色质和Y染色质的检查 可作为性别测定的依据和性染色体数目异 常的一种辅助诊断方法。
仪器、材料
显微镜、染色缸、载玻片 试剂
实验步骤
X染色质制片与观察 1女性口腔粘膜细胞制片：清水漱口，用牙签的 钝头刮口腔颊部黏膜，将刮起的细胞均匀涂布在 干净的载玻片中间，不等晾干，立即将涂片放入 甲醇：冰醋酸=3：1的固定液中固定15分钟，晾 干，染色。 2染色：在涂片处加上数滴硫堇染液，染色5-10 分钟，用水冲洗，晾干，镜检。 3观察：用低倍镜观察紫蓝色的细胞核，看清楚 间期核的形态特征，找到X染色质。X染色质一般 紧贴在细胞核核膜内缘，大约1-1.5µm，染色深， 常呈三角形、馒头形、梭形或其他形态。
试验报告 性染色质标本 预习试验报告 实验考试
实验考试题
染色体标本制备时，低渗与固定有何意义？ 试述核型分析时应注意哪些问题？ 某男性口腔粘膜细胞检查X染色质和Y染色 质均为阳性，试分析其核型。