0405 细胞系和细胞株的建立
细胞系与细胞株
细胞系与细胞株
人的乳腺癌细胞
细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从
系中获得具有特殊性质或标志物的培养物。
细胞株图示
细胞系指可连续传代的细胞。
原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的细胞系成为连续细胞系，不能连续培养下去的细胞系成为有限细胞系。
通过一定的选择和纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。
可以连续多次传代的细胞株称为连续细胞株，传代次数有限的细胞株称为有限细胞株。
所以，细胞系泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。
适合于工业化生产的细胞株必须满足一下条件：
1、分散性好，适合大规模悬浮培养。
2、均已型号，细胞大小，生理状态一致。
3、生长速度快，培养周期短，不易染菌。
4、目标产物产量高，容易分离提取。
5、细胞遗传稳定。
细胞株筛选
（一）一般步骤
愈伤组织诱导与培养单细胞分离细胞无性系的分离细胞株筛选性能评价细胞株获得
（二）定向富集驯化
激素滋养型细胞株的筛选驯化耐受高剂量有毒物质的细胞株驯化（三）人工诱变筛选
悬浮培养系统愈伤组织系统原生质体系统
细胞株的保存
（一）继代培养保存法
（二）低温保存法
（三）冰冻保存
（四）。
细胞系谱系的建立与应用
细胞系谱系的建立与应用细胞系谱系，也叫“细胞系譜”，是指从一个原始细胞分裂而来的一系列细胞株。
这些细胞株具有相同的基因型和表型，可以被用来研究细胞生物学、癌症疾病、药物毒性及毒理学等领域。
建立细胞系谱系的过程需要经过多个步骤。
首先，需要从组织样本或器官切片中分离出单个细胞。
这些单个细胞可以通过多种技术进行培养，如原代细胞培养和细胞株化等。
培养好的细胞株需要被检测，以确保它们是纯的、同质性强的。
这些细胞株还需要被保存和命名，以方便日后的使用。
细胞系谱系的应用范围极为广泛。
首先，在基础生物学研究中，细胞系谱系可以被用来探索细胞的分化、增殖、分子信号通路和细胞生物学模型等。
比如，使用特定的细胞株可以研究癌症细胞如何分化，以及癌细胞增殖时调控细胞周期的分子机制。
此外，也可以使用细胞系谱系进行细胞药物毒理学研究，预测潜在的药物毒性并减少药物临床上的不良反应。
另外，在医学研究中，细胞系谱系也具有重要的应用价值。
比如，一些癌症治疗方法可以利用细胞毒性化学剂杀死癌细胞。
但是，化学剂毒性的程度是难以预测的。
利用特定的细胞株，可以在实验室中根据化学剂的各种浓度测试癌细胞敏感性，并预测患者对药物的反应。
这样，可以优化治疗方案，达到更好的治疗效果。
除了生物学和医学研究，细胞系谱系还可以应用于毒理学领域。
在化学试剂和产品的研发过程中，我们需要对它们进行毒性测试，以保证生产的安全。
使用细胞系谱系可以模拟细胞与药物的相互作用，提前预测潜在的毒性反应。
总之，细胞系谱系的建立与应用具有非常大的实际意义，不仅可以在基础生物学和医学研究中发挥作用，也可以对人们的健康和安全提供保障。
什么是细胞株什么是细胞系两者有什么区别
什么是细胞株什么是细胞系两者有什么区别什么是细胞株什么是细胞系两者有什么区别细胞株与细胞系是细胞生物学中两个重要的概念，它们在细胞培养、遗传学研究以及药物开发等领域扮演着关键角色。
尽管两者在名称上相似，但它们各自具有独特的定义、形成方式及特性。
细胞株的定义与特性细胞株（Cell Strain）是指通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志物的培养细胞。
这些特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在，包括特定的生化特性、温度敏感突变株、染色体组型、特殊的染色体标志以及特定的同工酶谱等。
细胞株的形成通常涉及单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
这些细胞株的特殊性质使得它们在科学研究中具有独特的价值，例如，某些细胞株已被商用，广泛用于各种细胞实验中。
细胞株的传代次数一般可培养到40-50代，但在这个过程中，细胞株的特殊性质或标志必须保持稳定。
这意味着，尽管细胞在传代过程中可能会经历一些变化，但它们的核心特性必须得以保留。
细胞株在生物医学研究中具有重要应用。
例如，温度敏感突变株可以用于研究基因功能，因为在不同温度下，这些细胞可能表现出不同的生物学特性。
此外，细胞株在药物筛选中也扮演着重要角色，因为它们的稳定性和可重复性使得实验结果更具可靠性。
细胞系的定义与特性细胞系（cell line）则是指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体，也指可长期连续传代的培养细胞。
简单来说，细胞系是通过将原始细胞进行一系列培养和传代培养过程，使其能够持续增殖并具有某些特定的性质或表达某些特定的基因。
细胞系的传代次数通常较高，能够长期保持增殖能力。
随着传代次数的增加，细胞系内的细胞可能会发生基因突变或表型变化，导致细胞系具有一定的变异和异质性。
这种变异可能源于传代过程中的遗传不稳定性或环境因素的影响。
细胞系在生物技术和医学研究中具有广泛应用。
例如，HeLa细胞系是最著名的无限细胞系之一，广泛用于癌症研究、病毒学研究以及药物开发。
肿瘤细胞系的建立原理
肿瘤细胞系的建立原理肿瘤细胞系的建立是为了研究肿瘤生物学和治疗方法的开发，通过从患者的原发肿瘤或转移瘤中分离和培养细胞，形成可持续增殖的细胞系。
肿瘤细胞系的建立在肿瘤研究中扮演着重要的角色，它们可以用来研究肿瘤的生长机制、细胞信号转导通路、基因表达调控以及药物敏感性等。
肿瘤细胞系的建立主要分为以下几个步骤：1. 原发肿瘤样本的获取：原发肿瘤是指肿瘤起源的部位，通过手术、活检等方式获得肿瘤组织样本。
获取的样本要在临床医生的指导下进行，并尽量保持组织的完整性和洁净度。
2. 细胞分离和培养：将原发肿瘤组织进行体外分离，将组织切碎或通过酶消化等方法将肿瘤细胞从正常细胞中分离出来。
然后将分离的细胞转移到培养皿中，加入适当的培养基和生长因子，提供细胞生长所需的养分和环境条件。
3. 细胞增殖和扩增：在培养皿中，肿瘤细胞开始进行增殖。
通过适当的细胞密度、培养基成分的调整，可以促进肿瘤细胞的增殖和扩增。
为了获得可持续生长的肿瘤细胞系，需要反复传代和定期培养。
4. 细胞株的鉴定：通过形态学观察和免疫组化染色等方式，对细胞株进行鉴定，确认细胞的来源和纯度。
同时，用多种方法对细胞进行病毒感染和生物学特性的测试，以确保肿瘤细胞的稳定性和代表性。
5. 细胞的冻存和保存：为了长期保存肿瘤细胞系，通常将肿瘤细胞进行冻存。
冻存可以减缓细胞的生长活动，使其长期保存，并在需要时重新启动。
肿瘤细胞系的建立原理主要是通过分离和培养患者原发肿瘤组织中的肿瘤细胞，使其在体外条件下继续增殖，从而形成可持续生长的细胞株。
在细胞培养的过程中，肿瘤细胞可能会发生一定的改变，例如基因变异、表达水平的改变等，因此需要经常进行鉴定和验证。
肿瘤细胞系的建立对于肿瘤研究和治疗具有重要的意义。
一方面，肿瘤细胞系可以用来研究肿瘤生长的分子机制，通过研究其增殖、迁移、侵袭和转移等特性，可以揭示肿瘤的形成和发展机制。
另一方面，肿瘤细胞系也可以用来评估药物的敏感性和抗药性，帮助选择和优化治疗方案。
细胞系或细胞株的建立
、概念、概念1、细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。
2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitecell strain）；如果可以连续传代，称为连续细胞株（continuous cell strain）。
对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。
二、建立细胞系（或株）的要求什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞，视具体情况而定，无统一规定。
对于用作原代培养的细胞只要供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定即可，如用做长期培养，特别是反复传代的细胞，常需做如下说明：1、组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。
如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病历号等。
2、细胞生物学检测：了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。
如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
三、若干细胞建株的要点及基本过程（一）肿瘤细胞培养技术要点1、取材：材料主要来源于外科手术或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。
取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。
其培养方法及冻存方法同前述正常组织。
2、成纤维细胞排除：在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞，培养时能与瘤细胞同时生长，并常压过癌细胞，导致癌细胞生长受阻以至消失，应仔细排除。
细胞株和细胞系
细胞株和细胞系摘要“细胞株”和“细胞系”是动物细胞工程中常用的两个名词，但由于概念不清，使用混乱，为中学生物教学带来不必要的困惑。
本文拟就这两个名词的历史渊源和现实应用进行讨论。
关键词细胞株细胞系1 名词的由来细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela 系称为“株”。
1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长期混用。
即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦十分严重。
2 名词使用的现实情况2．1 中学教材定义在人教版高中生物（选修）全一册第70页中，细胞株被定义为经原代培养的组织细胞，培养到第10代左右，度过第一次死亡危机后的细胞群，这种细胞的遗传物质没有发生改变；细胞系则被定义为可以度过第二次死亡危机，传代培养到40~50代的细胞，这部分细胞的遗传物质发生了部分改变并且细胞带有癌变的特点，这种细胞在适宜条件下无限传代。
2．2 文献定义由新鲜组织制成的细胞培养物称原代细胞，这种细胞经首次传代成功后的细胞称做细胞系，可泛指一般可能传代的细胞，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成，这种细胞世系含有多种细胞类型。
若用胰蛋白酶等将原代细胞消解分散后，再培养一代，称次代培养。
如果不能继续传代或传代有限，可称为“有限细胞系（finite cell line）”或“已建立的细胞系（established line）”。
能够连续传代的细胞叫做“连续细胞系或无限细胞系（infinite cell line）”。
利用培育技术进行动物细胞株的建立与保存
利用培育技术进行动物细胞株的建立与保存当我们在生物学研究中时，建立稳定的动物细胞株是非常重要的一步。
通过培育技术，我们可以将动物细胞成功地永久保存下来，为以后的研究提供便利。
本文将探讨如何利用培育技术建立和保存动物细胞株。
动物细胞株的建立通常通过体外培养的方式进行。
首先，我们需要获得需要建立细胞株的原始细胞，通常是从动物体内获得。
这些细胞可以来自正常组织或肿瘤组织。
然后，我们需要将这些细胞在含有适当营养物质的培养基中进行培养。
细胞培养的基本条件是一个合适的培养基和适宜的生长环境。
培养基通常包括有机营养物、无机盐、维生素和生长因子等。
此外，还需要提供适当的温度、湿度和气体环境。
这使得培养细胞能够在体外条件下存活和增殖。
为了获得特定类型的细胞株，我们需要对细胞进行筛选和分离。
一种常用的方法是单细胞克隆化。
在这个过程中，我们将细胞稀释到一种适当的浓度，使得每个细胞在培养皿中保持一定的距离。
然后，我们观察细胞的增殖情况，找到生长最好的单个细胞，并将其分离到新的培养皿中。
这个过程需要耐心和细心，但是能够确保我们获得纯种的细胞株。
建立好细胞株后，我们需要采取一些措施来确保其稳定性和长期保存。
首先，我们可以将细胞株分成小批量进行保存。
这样一来，即使一个批次的细胞株遭受了不良条件或者感染，其他批次的细胞依然能够保存下来。
此外，在保存过程中，添加一些防腐剂和保护剂也是有必要的。
例如，加入20%甘油可以防止细胞冻结时发生冰晶形成的损伤。
除了传统的保存方式外，我们还可以利用技术手段进行细胞株的保存。
一种方法是冷冻保存，即将细胞冷冻在极低的温度下。
这使得细胞活性暂停，直到需要时再重新培养。
另一种方法是液氮冷冻，将细胞保存在液氮中，使其完全冷冻。
这种方法可以长期保存细胞株，并且能够保持良好的细胞质完整性。
利用培育技术进行动物细胞株的建立和保存对于生物学研究具有重要意义。
通过正确的培育方法，我们可以成功地建立稳定的细胞株，并且将其长期保存下来。
细胞工程--C4.4 细胞系和细胞株的建立
• ②细胞染色检查：用Giemsa染色培养的细 胞玻片，在光镜下观察细胞形态。
• （2）透射电镜检查 透射电镜检查细胞超 微结构
• 包括以下过程：分离细胞、固定、包埋、 切片观察等。
• 透射电镜可观察到亚细胞结构。
2.细胞染色体分析
• 细胞遗传学方法是确定细胞种来源和鉴 定正常或恶性细胞的简便有效的方法。
• 用染色体方法可检测长期体外培养的细胞 是否有恶性转化，可以检查细胞有无交叉 污染等。
第四章 细胞培养
细胞培养
4.1 培养细胞的生物学特征 4.2 细胞培养液 4.3 细胞的基本培养技术 4.4 细胞系和细胞株的建立 4.5 细胞的冻存、复苏和运输
• 4.4 细胞系和细胞株的建立
• 细胞系（Cell line）是指原代培养物经首次 传代成功后即成细胞系。它由原先已存在 于原代培养中的细胞的许多谱系 （lineages）组成。
3.同工酶检查
• 同工酶是具有相同功能，但结构不同的酶。 在不同种系的细胞和同一种系不同组织之 间同工酶表达多型性，正常和恶性细胞之 间也有不同。因此，检测同工酶对鉴定细 胞系有很好的价值。
• 组织细胞中同工酶可通过凝胶电泳分离， 在凝胶上分离的带可通过染色显示出来。
4细胞的冻存和复苏 • 细胞在体外长期培养时丢失，对细胞要 及时冻存，低代细胞由于避免了长期体外传代引 起的基因不稳定和细胞表型变化，可保持原细胞 的特征，因此，及时冻存低代培养物是很必要的。
第九章细胞系(株)的建立
2.细胞系的稳定性
细胞连续培养过程中主要指标有无明显变 异。使用稳定的细胞系能保证实验结果的准 确性、重复性。
3.细胞学特征
观察细胞系的形态和表达特征的数据及
其与来源细胞的差异。
4.微生物污染检查
有无病毒、细菌、真菌、支原体等污染。
大影响。
美 国 典 型 培 养 物 保 藏 中 心 （ Amercian
Type Culture Collection,ATCC ） 是 现 今 最
大的细胞库。
ATCC网址：/
ATCC接纳细胞必须检测的项目如下：
1.培养简历
2.培养液 3.冻存液 4.细胞活力 5.细胞形态类型
6.核型
7.无污染检验
8.物种检测
9.免疫检测 同时提供细胞系(株)建立者和检测者的 姓名。
中国国家专利局委托武汉大学建立的中 国典型培养物保藏中心（ China Center Type Culture Collection,CCTCC ） 保 藏 了 十 几 个
国家的专利培养物 1000 多株，非专利培养物
对
说明所使用的培养基血清，使用浓度、 并说明细胞生存的适宜温度、 CO2 浓度、 PH 值
等条件。有些细胞生长还需添加的一定附加
成分。
三、细胞系的鉴定
拟建立的细胞系或细胞株、除说明培养细 胞的来源外，还要对其进行一系列的鉴定。
1.检定细胞系的纯度
第九章 细胞系(株)的 建立与鉴定
一、基本概念
细胞系 细胞株
二、建立细胞系（株）的档案
建立细胞系或细胞株应对如下几方面加以说明：
1.培养细胞的来源 对拟建立的细胞系（株）应交代细胞供体所属物 种及供体的年龄、性别、取材的器官或组织。如是肿 瘤组织、应说明临床诊断结果、组织来源和病例号等。
细胞库建立标准
细胞库成立概略一、对细胞库细胞基质总的要求( 一 ) 细胞系／株历史资料1．细胞系／株根源资料应拥有细胞系／株根源的有关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株根源的种属、年纪、性别和健康状况的资料。
这些资料最好从细胞根源实验室获取，也可引用正式发布文件。
人源细胞系／株须拥有细胞系／株的组织或器官根源、种族及地区根源、年纪、性别及生理状况的有关资料。
动物根源的细胞系／株须拥有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官根源、地区根源、年纪、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的有关资料。
2．细胞系／株培育历史的资料应拥有细胞分别方法、细胞体外培育过程及成立细胞系／株过程的有关资料，包含所使用的物理、化学或生物学手段，能否有外源增添序列，以及细胞生长特点、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。
同时还应拥有细胞鉴识、检定、内源及外源因子检测结果的有关资料。
应供给细胞培育液的详尽成分。
如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其余生物学活性的物质，应拥有这些成分的根源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的有关资料。
( 二 ) 细胞库的成立细胞库的成立可为生物制品的生产供给已标定好的、细胞质量同样的及能连续稳固传代的细胞种子。
1．原资料的选择成立细胞库的各样种类细胞的供体均应切合细胞库细胞的检定中有关规定。
神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。
培育细胞用牛血清应根源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应符合规定 ( 附录 XIII D)。
不得使用人血清作为细胞培育液。
如需使用人血白蛋白，则须使用有同意文号的合格制品。
消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。
特别应检测胰蛋白酶根源的动物可能携带的病毒，如渺小病毒等。
用于生物制品生产的培育物中不得使用青霉素或β- 内酰胺 ( β-Lactam) 类抗生素。
2．细胞培育操作的要求细胞培育生产人员应按期检查身体。
细胞株和细胞系的区别---精品资料
细胞株和细胞系的区别摘要“细胞株”和“细胞系”是动物细胞工程中常用的两个名词，但由于概念不清，使用混乱，为中学生物教学带来不必要的困惑。
本文拟就这两个名词的历史渊源和现实应用进行讨论。
关键词细胞株细胞系1 名词的由来：细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela 系称为“株”。
1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长期混用。
即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦十分严重。
2 名词使用的现实情况2．1 中学教材定义在人教版高中生物（选修）全一册第70页中，细胞株被定义为经原代培养的组织细胞，培养到第10代左右，度过第一次死亡危机后的细胞群，这种细胞的遗传物质没有发生改变；细胞系则被定义为可以度过第二次死亡危机，传代培养到40~50代的细胞，这部分细胞的遗传物质发生了部分改变并且细胞带有癌变的特点，这种细胞在适宜条件下无限传代。
2．2 文献定义由新鲜组织制成的细胞培养物称原代细胞，这种细胞经首次传代成功后的细胞称做细胞系，可泛指一般可能传代的细胞，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成，这种细胞世系含有多种细胞类型。
若用胰蛋白酶等将原代细胞消解分散后，再培养一代，称次代培养。
如果不能继续传代或传代有限，可称为“有限细胞系（finite cell line）”或“已建立的细胞系（established line）”。
细胞株和细胞系
Ｇ ｏｇ ｅ ｅｒｅ Ｇ ｙ把 其 建 立 的 人 体 宫 颈 癌 细 胞 Ｈ ｌ 称 为 ｅａ系
“ ” ９ ４年 ， ｉ 株 。１５ Ｗｈｔ 外 使 用 了“ ” 称 呼 Ａ．ａｒｌ ｅ另 系 来 Ｃｒ ｅ
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２ 名词 使 用 的现 实 情 况
２ １ 中学 教 材定 义 ．
在 人教 版高 中生物 （ 修 ） 一册 选 全
生 ， 后 这 ２个 名 词 长 期 混用 。即使 在 １７ 之 ９ ９年 国际 组
织培养协会 专业术语 委员会颁 布 “ 业名词建 议” 专 和 １８ ９ ４年 在 宁 波 召 开 的 全 国 动 物 组 织 和 细 胞 培 养 会 议 Ａ Ｏ 型 数 据无 法 按 常 规 检验 平衡 。 Ｂ血 ３ Ａ Ｏ 血 型 相 关 算 法 的应 用 Ｂ
关 键 词 细 胞 株 细 胞 系
中国 图 书分 类 号 ： Ｑ２
１ 名 词 的 由 来
文 献 标 识码 ： Ｅ
通 过 “ 物 细 胞 、 织 和 器 官 培 养 技 术 的 一 些 术 语 的 动 组
译 名 和 解 释 ” 后 ， 目前 为 止 国 内 对 这 ２个 名 词 的 之 到
划 并 在 相 关 教 学 中 探 究 “ 讨 课 （ｅ ｎ ｒ） 规 律ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ， 研 ｓｍｉａｓ ” 对
上述 平 衡 群体 的频 率 做 预 期 频 率 去求 预 期 数 值 ． 进 再 行 ｘ检验 （ ： 请分 析 ： 时 的 ｄ＝ ） 此 ｆ ？ 另外 ， 常常 遇 到 求 出 的 ３个 频 率 加 和 ｐ ｑ ｒ １ ＋ ＋≠ 的 情 况 。此 时 可 求 出校 正 因 子 ０＝ 一 － — （ 论 上 １ｐ ｑ ｒ 理 ０＝ ）再 求 校 正 频率 ： ＝ ｒ ０／ ）１ ０／ ） ＝ １ ０， 矫 （＋ ２ （＋ ２， Ｐ矫 ｐ（ ＋ Ｏ／） ＝ １ Ｏ／） ２， ｑ ｑ（ ＋ ２ 。这 一 步 可 以重 复 ， 到 ０＝ ， 直 ０ 即 ｐ ｑ ｒ １ ［ ａ ｉ ．Ｈ ｒ Ｐ ｒｕ ｎｖｒｉ ） ‘ ｒ — ＋ ＋ ＝ 。 Ｄ ｎｅ Ｌ ａｔ ｕｄ ｅ Ｕ ｉｅｓ ｙ ， Ｐ ｉ ｌ ｌ（ ｔ ｎ
细胞系与细胞株的建立过程及影响因素PPT精品课程课件讲义
此在培养初期，存活和生长的细胞类型也是多种多样
的。所以再培养不仅仅是为了维持细胞不断地生长， 而且是使培养物逐步成为具有增殖能力、特征专一、 类型均匀的培养细胞，即细胞系(或株)。
1. 细胞系鉴定指标
• 当细胞系建立后，应对细胞系进行一系列鉴定后，才能应用于细胞生物 学、免疫学、细胞遗传学等方面的研究。鉴定内容应包括: • • • 1)细胞系的细胞来源； 2)细胞系的纯度，即除了主类细胞外，还杂有哪类细胞； 3)细胞系的稳定性，即细胞连续培养过程中主要指标应无明显变
• 反转录酶检测 • 细胞建立者 • 检测者
细胞系或细胞株的命名
HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）
CHO：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary）
宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974（National Institute of Health）建立；
生物进化过程中DNA分子结构发生重排，使DNA碱基排列序列改
变，影响内切酶切点,使内切酶酶切片断呈多态性。 一般采用Southern印迹杂交法检测。
细胞转化及恶性程度检查
• 一般利 用软琼 脂培养 法检测
四、档案资料的建立及其管理
◆ 细胞系（或株）的建立者
◆ 组织来源
◆ 细胞学性状
◆ 培养条件和方法
克隆细胞株
1. 细胞克隆技术
培育细胞株可采用细胞克隆技术。
一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁
殖而来，分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群
体的方法称为克隆化(cloning)。
2. 细胞克隆培养的技术方法
• ◆ 稀释铺板法
• ◆ 饲养层克隆法
• ◆ 胶原膜板或血纤维蛋白膜板克隆法
细胞株和细胞系的概念
细胞株和细胞系的概念细胞株和细胞系，听起来是不是有点高大上？但其实它们就是一些小家伙，科学家们为了研究各种生物现象而养的“宠物”。
想象一下，你在实验室里，有那么一群微小的生命在培养皿里欢快地生活，这就是细胞株和细胞系的世界。
细胞株，顾名思义，就是从某个细胞取出来的，然后放到一个特定的环境中，让它们在那儿滋生、繁殖。
就好比你从家里的植物上剪下一根枝条，放进水里，等着它长根。
细胞株就像这根枝条，最开始的细胞是“母细胞”，它的后代们就像小宝宝一样，慢慢长大。
每一代都可以在实验室里活得好好的，研究人员能够用它们来做各种实验，看看细胞是如何工作的，或者测试新药物的效果。
再说细胞系，听起来像是个团队，其实它就是细胞株的一种特定分类。
有些细胞株能够无限增殖，就像那些不怕被时间追赶的年轻人，永远充满活力。
细胞系就像是那些经过特殊训练的精英，能够在特定条件下稳定繁殖。
它们可以保持一种特定的性状，这样研究者就能在实验中得到一致的结果。
就想象一下，你有一支篮球队，大家都很默契，训练出来的水平也差不多，这就是细胞系的魅力所在。
细胞株和细胞系有什么区别呢？可以说细胞株是个大杂烩，任何地方的细胞都能变成细胞株；而细胞系则是精挑细选的“明星”，只从那些能稳定繁殖的细胞中选出。
细胞株可能性格各异，有的脾气大，有的安静，反正就是个性迥异。
而细胞系就像是经过时间考验的老友，性格稳定，不容易变化。
这样一来，研究者在进行实验时，可以选择最合适的细胞来进行比较，这可比胡乱挑选要靠谱多了。
再说到这些细胞的用途，真的是五花八门。
有些细胞株被用来研究癌症，有些则用于药物筛选。
比如，研究人员可能会用癌细胞株来测试新药的效果，看看能不能打败这些不请自来的“敌人”。
想象一下，科学家们像是电影中的超级英雄，手里拿着“药物”，对抗那些“恶势力”。
而细胞系的作用就更广泛了，它们可以帮助我们了解细胞的基本机制，甚至用于基因治疗，帮助那些需要“修复”的细胞。
细胞系的建立及鉴定课件
3．获得永生性
正常细胞原代培养物经过数次传代就逐渐停止 增殖。在肿瘤性演化过程中，细胞可能获得生长无 限代数的能力。永生性是肿瘤演化的一个特征。
成纤维及上皮细胞的原代培养经过初期的适应 培养条件之后，便进入较稳定的生长时期，生长速 度逐渐下降，进入退化期即衰老期。细胞系的寿命 差别很大，取决于培养细胞来自的动物种属。
非干系细胞：除了干系瘤细胞，肿瘤还具有失去自 我保持能力的细胞的后代，可称为“肿瘤的非干系 细胞”。
动物肿瘤移植实验证实，肿瘤结节在新宿主身上多 次传代之后仍具有原来肿瘤的主要特征，包括形态、 生化、抗原及细胞遗传的标志。所有恶性肿瘤的转 移瘤结节的细胞都具有与亲代原发病损类似的形态 学及生物学性质。
分化为脂肪细胞： 油红O 染色阳性
肿瘤细胞系的生物学鉴定
肿瘤细胞系建立后,要对其生物学性状进行 鉴定,以便日后的研究有可比较的科学依据
肿瘤细胞的生物学特征
干系细胞：每个肿瘤内都含有一个或几个具有相对 稳定特性的自我保持的（Selfmaintaining）细胞 系。肿瘤的生长就是这些细胞系的增殖；
丧失生长抑制性
当培养细胞所需任何一种关键性营养物质或生长因子 降到阈值以下时,正常细胞的生长即受到抑制,如异 亮氨酸,磷酸盐,上皮生长因子等。
转化的细胞对一些生长因子需求降低,或失去了对激素 和生长因子的需求，在营养不足的情况下可继续生 长,它们甚至可以杀死一些自身的细胞,以便在不可 能生存的环境下继续生长。或者由于某些转化产生 了生长因子类似物,为自身提供了生长因子。
细胞悬液的制备
要求：5个浓度的细胞悬液分别是： 10000个；8000个；6000个；4000 个；2000个/100ul/孔 每个浓度3个复孔
原代细胞 细胞株 细胞系
原代细胞细胞株细胞系原代细胞、细胞株和细胞系是细胞生物学中常用的概念，它们在细胞研究和生物医学领域有着重要的意义。
一、原代细胞原代细胞是指从组织或器官中分离出的第一代细胞，保持了体内原有细胞的生理特性和功能。
原代细胞的制备通常涉及组织切割、细胞分离和细胞培养等步骤。
这些细胞可以直接来源于活体组织，也可以通过细胞培养的方式进行扩增和保存。
原代细胞的研究可以提供更接近体内环境的模型，有助于深入了解细胞的生理和病理过程。
原代细胞的特点是具有较高的生物学活性和较短的细胞寿命。
由于原代细胞的来源和特性的限制，其使用范围相对较窄，主要用于初步的细胞功能研究、药物筛选和毒性测试等方面。
二、细胞株细胞株是指通过细胞分裂和细胞培养等手段得到的具有相同遗传特性和生物学行为的细胞群体。
细胞株的制备通常是从原代细胞中选择具有较好生长状态和细胞形态的细胞进行分离和扩增。
细胞株在细胞生物学和生物医学研究中被广泛应用，具有重复性好、来源稳定、保存方便等优点。
细胞株的建立需要经过一系列的培养和筛选步骤，以确保细胞的纯度和稳定性。
细胞株具有较长的细胞寿命，可以在体外长时间生长并进行大规模培养。
细胞株的使用范围非常广泛，包括基础细胞生物学研究、疾病机制研究、药物开发和生物制药等领域。
三、细胞系细胞系是指通过细胞分裂和细胞培养等手段得到的具有相同遗传特性和生物学行为的细胞群体，并且可以无限制地传代下去。
与细胞株相比，细胞系更具有细胞寿命长和繁殖能力强的特点。
细胞系的建立需要经过一系列的培养和筛选步骤，以确保细胞的稳定性和纯度。
细胞系可以持续进行细胞培养，并通过冻存和复苏等技术手段进行长期保存。
细胞系的应用广泛，包括基础研究、疾病模型建立、药物筛选和生物医学工程等领域。
总结：原代细胞、细胞株和细胞系是细胞生物学中重要的概念，它们在细胞研究和生物医学领域有着广泛的应用。
原代细胞是从组织或器官中分离得到的第一代细胞，具有较高的生物学活性和较短的细胞寿命；细胞株是通过细胞分裂和培养得到的具有相同遗传特性和生物学行为的细胞群体，具有较长的细胞寿命和较好的重复性；细胞系是具有无限制传代能力的细胞群体，细胞寿命长且繁殖能力强。
细胞株构建cld
细胞株构建cld
【原创版】
目录
1.细胞株构建的概述
2.细胞株构建的过程
3.细胞株构建的意义
4.细胞株构建的挑战与未来发展
正文
一、细胞株构建的概述
细胞株构建，指的是通过特定的技术手段，将某一种细胞在体外培养并扩增，形成具有稳定遗传特性的细胞群体。
这些细胞群体可以用于生物学研究、药物筛选、基因编辑等领域，具有重要的科学价值和应用前景。
二、细胞株构建的过程
细胞株构建的过程主要包括以下几个步骤：
1.选择合适的细胞来源：可以从人体、动物或者植物中提取细胞。
2.细胞培养：将提取的细胞在含有营养物质和生长因子的培养基中进行培养，使其在体外继续生长和繁殖。
3.筛选和鉴定：通过特定的筛选方法，如药物敏感性测试、基因型鉴定等，筛选出具有稳定遗传特性的细胞株。
4.细胞株的扩增和保存：将筛选出的细胞株在适当的条件下进行扩增，同时进行冷冻保存，以便在后续的研究中使用。
三、细胞株构建的意义
细胞株构建对于生物学研究和医学应用具有重要的意义：
1.为生物学研究提供实验材料：细胞株可以用于研究生物学现象，如细胞生长、分化、凋亡等。
2.为药物筛选提供模型：利用细胞株可以建立药物筛选模型，从而加速新药的研发。
3.为基因编辑提供技术支持：通过细胞株构建，可以获得具有特定遗传特性的细胞，为基因编辑技术的应用提供可能。
四、细胞株构建的挑战与未来发展
尽管细胞株构建已经取得了显著的成果，但仍然面临着一些挑战，如细胞株的稳定性、扩增效率、保存方法等。
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三、细胞系（或株）的鉴定
原代培养的培养物中所含的细胞类型多而复 杂。因此在培养初期，存活和生长的细胞类型也 是多种多样的。所以再培养不仅仅是为了维持细 胞不断地生长，而且是使培养物逐步成为具有增 殖能力、特征专一、类型均匀的培养细胞，即细 胞系(或株)。
1. 细胞系鉴定指标
当细胞系建立后，应对细胞系进行一系列鉴定后，才能应用于细胞生物学、 免疫学、细胞遗传学等方面的研究。鉴定内容应包括:
◆Animal Cell Engineering◆
Chapter 4 Animal Cell Culture
◆ Biology of cells in culture ◆ Fluid for cell culture ◆ Standard cell culture techniques ◆ Establishing a cell line or cell strain ◆ Cell freezing and recovery
二、细胞株的建立过程
❖通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中 获得的稳定的、具有特殊性质或标志的培养物。 ❖稳定的特殊标记，如：染色体组型，特殊的染色体 标志或特定的同功酶谱。 ❖特殊性质，如：一定的生化特性，温度敏感突变株
克隆细胞株
1. 细胞克隆技术(p59)
❖培育细胞株可采用细胞克隆技术。 ❖一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞 繁殖而来，分离单一细胞并使其繁殖为一细 胞群体的方法称为克隆化(cloning)。
Section 5：细胞系和细胞株的建立
一、肿瘤细胞的体外培养与建系过程
以人上皮型鼻咽癌CNE-2细胞系的建立为例
问题：具体的建系过程应该包括？
1. 取材
用鼻咽活检钳从一鼻咽癌 患者的鼻咽部肿物获得组 织块。
2. 原代培养
1） 鼻咽部肿物组织放入含青霉素和链霉素的 RPMI 1640培养液内，于4℃下静置2小时。 2） 然后将组织剪切成1-2mm3的小块。用含青霉 素和链霉素的RPMI 1640培养液洗涤后，接种于预 先涂有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中。 3） 37℃、CO2培养箱内培养2小时后，再补加含 20%的小牛血清的RPMI 1640培养液，继续培养。
3. 建系过程
■组织块在接种1周后，上皮细胞从组织块周围向外迅 速迁移和生长，相互连接成片。2周后，可以见到成纤 维细胞生长。8周后，上皮细胞生长开始明显加快，并 向周围延伸。 ■用胰蛋白酶消化法和刮脱法等手段除掉成纤维细胞。 这样处理后的细胞在传代三次后，贴壁生长的细胞呈现 上皮状，核清晰可见核仁。2周后细胞形成群落。第4代 后细胞开始呈单层生长，命名为CNE-2。CNE-2经生物 学特性分析后确定细胞系建立成功
• 组织起源和已经传代的代 数
• 冻存液
• 细胞活力
• 培养液：培养基、血清和 抗生素
• 融解后细胞生长特性
• 接种存活率
• 细胞形态 • 核型 • 无菌检测：细菌、真菌
等 • 物种检测：检测同工酶
谱 • 反转录酶检测 • 细胞建立者 • 检测者
细胞系或细胞株的命名
HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌） CHO：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary） 宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立 NIH3T3：美国国立卫生研究院（National Institute of Health）建立；每3 天传代，每次接种3×105细胞／毫升。
2. 细胞克隆培养的技术方法
◆ 稀释铺板法 ◆ 饲养层克隆法 ◆ 胶原膜板或血纤维蛋白膜板克隆法 ◆ 琼脂克隆法 ◆ 毛细管单细胞克隆法
饲养层克隆法
饲养细胞：一层经过特殊处理的用做 克隆细胞底物的细胞层。 制备过程过程如下：
饲细胞层克隆法
琼脂克隆培养
3. 影响克隆形成率的因素
◆ 接种细胞的密度 ◆ 培养基、血清 ◆ 饲养细胞 ◆ 激素和生长因子 ◆ CO2、适应性生长基质
1)细胞系的细胞来源； 2)细胞系的纯度，即除了主类细胞外，还杂有哪类细胞； 3)细胞系的稳定性，即细胞连续培养过程中主要指标应无明显变化； 4)累积细胞系的形态及其表达特征的基本数据，以及其与来
源细胞的差异等
2. 细胞系的鉴定方法
1）形态学：活细胞观察；固定染色观察培养细胞。 2）染色体：
染色体是一种鉴定细胞系的种属、性别来源较为确切的 指标；也是检查细胞系是否趋于稳定，在离体培养条件下细胞 有否发生转化的可靠指标；是区别正常细胞与恶性细胞的指标。
一般采用Southern印迹杂交法检测。
细胞转化及恶性程度检查
• 一般利 用软琼 脂培养 法检测
四、档案资料的建立及其管理
◆ 细胞系（或株）的建立者 ◆ 组织来源 ◆ 细胞学性状 ◆ 培养条件和方法 ◆ 冻存液等
建立细胞株（系）的要求
•以美国ATCC细胞库的标准，必须有以下 的鉴定数据，才能入库。
采用染色体数目、核型分析以及染色体分带技术检
测。
3）同工酶谱：
通常采用G6PD(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、 LDH(乳酸脱氢酶)、核苷磷酸化酶三种方法，根 据条件选择。
4）细胞DNA遗传特征:
限制性片断长度多态性(restriction fragment length polymorphism RFLP) 是指那些在生物进化过程中，DNA序列 发生某些中性突变，突变的结果是失去或获得一个酶切点，因 此当基因组DNA用限制性内切酶酶切后，限制性内切酶片断加 长或缩短；用同源的克隆DNA为探针可以探测出来。另外也可 能在生物进化过程中DNA分子结构发生重排，使DNA碱基排列 序列改变，影响内切酶切点,使内切酶酶切片断呈多态性。