生物制药 抗体
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• 1、化学交联法 • 2、生物学方法（杂种-杂交瘤）杂交瘤细胞与脾
细胞融合得到可分泌两种亲代抗体和杂种抗体的 杂种-杂交瘤细胞。
• 3、基因工程方法 采用适当的接头连接不同抗体 的VH和VL区，使它们不能形成链内的分子内配对， 让其形成原抗体的分子内配对，构建双特异性 （ SCFV)2。
五、抗体融合蛋白
• 防止出现新生儿溶血症，O型血的妇女与A 型、B型或AB型的男子结婚后，怀孕后所 得的胎儿可分A型、B型、AB型。胎儿由父 亲遗传而获得血型抗原为母亲所缺少，这 中抗原通过胎盘进入母体，刺激母体产生 相应的免疫抗体，抗体又进入胎儿体内， 抗原抗体相结合使胎儿细胞凝集破坏，发 生溶血，可出现流产和死胎。
• 母胎血型不合的新生儿可出现早发性黄疸， 发生心力衰竭或黄疸后遗症，抢救不及时， 则造成脑性瘫痪、呆傻甚至死亡。
二、免疫标记技术用的抗体类试剂
• 给抗体标记放射性核素、荧光素或酶活性，能将 抗原抗体反应放大，使常规方法难以观察或检测 的反应得以显现，因而大幅度提高抗原抗体反应 的敏感性，用于对微量抗原物质进行定性或定量 检测，结合显微镜或电子显微镜技术，还可对抗 原物质作出组织内或细胞内的定位测定。除用于 临床诊断外，还能为探讨发病机制提供有力的研 究手段。免疫标记技术有三种基本类型：免疫荧 光技术、免疫酶技术和放射免疫技术。
三、小分子抗体
• 基因工程小分子抗体仅表达鼠源性单克隆抗体的 V区片段，其相对分子量仅为原抗体的1/80-1/3。 也就是说，保留了CDR区，而Ig分子的C区不表达。 现在研制的小分子抗体有以下几种类型：
• （1）Fab抗体，由完整的轻链和重链（VH和CH1） 所组成。（2）FV抗体，由VH和VL组成，天然FV片 段中VH和VL为非共价性结合。（3）单链抗体 （single chain antibody SCA 或single chain FV,SCFV），由VH和VL通过一段连接肽（linker） 连接而成的重组蛋白。有分子量小、穿透力强、 免疫原性小特点，可与效应分子相连接构建新功 能抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理 想元件。
• b、免疫动物和制备抗体血清：动物：家兔、马、 羊、豚鼠。 免疫途径：静脉、腹腔、皮下。接种次数3-7次， 每次间隔3-4d，末次注射后6-8d取血样测效价， 达到要求，即可采血，离心分离血清。
• C、诊断血清的诊断方法：直接凝集反应
• （2）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的反向被 动血凝诊断试剂
• 分泌表达：在起始密码和目的基因之间加 入信号肽，可以引导目的蛋白穿越细胞膜， 避免表达产物在细胞内的过度累积而影响 细胞生长，或者形成包含体，而且表达产 物是可溶的活性状态不需要复性。通常这 种分泌只是分泌到细胞膜和细胞壁之间的 周质空间。
第五节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体类试剂 （1）鉴定病原菌用的抗体试剂 A、常用诊断血清的品种和用途 B、诊断血清的制备步骤 a、制备细菌抗原：细菌接种---培养---收集菌 苔---制成菌液。
• 目前的客观现实是：研究进展迅速，但未达到常 规治疗的应用阶段。
• 障碍（原因）：抗体相对分子质量大，穿透力低， 不能达到靶部位或摄取量低。鼠源性抗体的排斥 反应。
• 常用的抗癌药物：氨甲喋呤 （methotrexate,MTX）、阿霉素 (adriamycin,ADM)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)、 环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX) 、新抑癌蛋 白(neocarzinostatin, NCS) 、正定霉素 (doxorubicin, DOX)等。
一、人-鼠嵌合抗体
• 制备方法：提取杂交瘤细胞系的mRNA，经过逆转 录成cDNA，并以其为模板，采用特异引物，用
P达C所R方需法的分上别游扩启增动V子L和、VH前基导因肽，序再列分和别下连游接剪真切核供表 体到Ig信G人1号I的g、的C基增CL因基强真因子核表真表达核达载调载体控体上序上，列，将后再V，H将基将人因VL-基克鼠因隆嵌到克合人隆的
• 1、荧光抗体诊断试剂 荧光色素如异硫氰酸荧光素（FITC）等标记抗体 球蛋白，即成为荧光抗体。用荧光抗体浸染含有 抗原物质的组织切片或细胞，荧光抗体与抗原集 合，在荧光显微镜下成为可发光的可视物，从而 达到诊断或定位的目的。 （1）荧光抗体的制备 （2）免疫荧光测定法有直接和间接两种方法。
• 2、免疫酶抗体诊断试剂
用引物采自多个人体，具有人的种属普遍性。VH和 VL随机重组增加抗体的多样性。
• 2、避开了人工免疫和杂交瘤技术
• 3、可获得高亲和力的人源化抗体
在噬菌体抗体库中，VH 和VL基因的随机重组
模拟了体内抗体亲和力成熟过程，所用抗体基因 又都是来自人体，因此产生的抗体必然都是高亲 和力的。
三、基因工程抗体的表达
• 一、噬菌体抗体库技术的基本方法 1、获得目的基因 2、抗体库技术的载体：现在普遍使用噬菌粒 （phagemid）载体，其中的pHEN1为新一代载体，转 化效率高，有利于提高库容量。
• 3、淘筛：抗原固定化后，对噬菌粒群的吸附、洗 涤和洗脱后再感染扩增，与辅助噬菌体超感染获 得大容量次级文库，再反复与抗原吸附，经几轮 淘筛后，淘汰了非目的克隆，且使目的克隆大量 扩增。
• A、试剂制备原理：红细胞经甲醛处理后，在酸性 条件下能吸附蛋白质，当纯化的抗HBs血清吸附其 上时便具有抗体活性，若待测样品中存在有HBsAg 时，则发生特异性结合而使血细胞发生凝集。
•
反向间接凝集反应
• B、制备步骤：先用HBsAg免疫豚鼠---获得抗HBs 血清---硫酸铵盐析/柱层析---取其IgG ---在 pH4.0醋酸缓冲液中致敏醛化血细胞----洗去多 余蛋白成分，用含1%兔血清的稀释液稀释至一定 浓度，分装即成。
• 4、表达与鉴定：目的克隆经过鉴定后，再导入感 受态菌株，进行可溶性表达，其产物用western blot分析确定后，就完成了全过程。
二、噬菌体抗体库技术的特点
• 1、模拟天然全套抗体库 抗体文库1011库容，能包含B细胞全部克隆。
建库的外源基因来自人外周血、骨髓或脾脏的淋巴 细胞提取的mRNA反转录形成的cDNA扩增，使用的通
抗体药物
张忠山
第三节 鼠源性单克隆抗体的改进
• 改造鼠源性单克隆抗体的目的： 一是降低免疫原性； 二是降低相对分子量，增加组织通透性。
• 如将鼠源性单克隆抗体的C区用人的Ig分子的C区 置换，则对人的免疫原性消失。对鼠源性抗体的 改造已有很多成果报道，见书中表4-4，给出了改 造后的单抗的类型和特性。
• C、诊断方法：RPHA法
在V型血凝板上进行，阴性样品不凝集，许血细 胞沉积于V型孔底部，呈尖点状；阳性样品血细 胞凝集成块状。
• （3）妊娠诊断试剂 妇女妊娠后，血液和尿液中的HCG含量增高，在 3个月内可达到高峰。此时检测尿液中的HCG，就 可确定是否怀孕。
• （4）抗ABO血型系统血清
• 凝集原附着在红细胞表面，是一种抗原。 凝集素存在于血浆（或血清）中，是抗同 名凝集原的抗体。同名的凝集原和凝集素 相遇（如凝集原A和抗A凝集素）会发生红 细胞凝集。
• （4）单域抗体，由VH(VL)单个可变区组成的，只 有抗体分子的1/12，而且表面疏水性强，与抗原 非特异结合能力也强。（5）最小识别单位（MRU） 是由单个CDR区构成的小分子抗体，亲和力较低。
四、双功能抗体
• 双功能抗体就是双特异性抗体（biospecific antibody, BsAb源自文库。它是一种非天然性的抗体， 其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。
• 其中较为成熟的是配基-Ig型嵌合蛋白，而酶-抗 体型融合蛋白（即抗体酶，abeneyme）在药物治 疗中应用前景广阔，它可在靶向位置上将前体药 物转化成有效的药物，避免对正常组织的伤害， 此法称为抗体介导的酶前体药物治疗。
• 构建抗体融合蛋白的原则是：将第一个蛋白的终 止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个 蛋白基因，即可实现两个基因共表达。
• 抗体的一部分被非抗体序列替代，所形成 的融合蛋白具有新特性，称之为抗体融合 蛋白。
• 类型有： （1）配基-配基型融合蛋白，如CD4-Fc。 （2）配基-Ig嵌合型蛋白，如IL-2-Ig。 （3）配基-FV型嵌合蛋白，如CD4-FVCD3。 （4）受体-FV型融合蛋白。 （5）酶-抗体型融合蛋白。
发生凝集。
输血检测
• 将供血者的红细胞与受血者的血清（主侧） 及受血者的红细胞与供血者的血清（次 侧），分别做配血试验，观察有无凝集反 应。
• 主侧出现凝集反应，为配血不合，不能输 血，主侧无凝集反应，次侧出现凝集反应， 为配血基本相合，在紧急情况下才可输血， 但要特别慎重，不可输得太快、太多，并 密切观察有无输血反应。
• （3）放射免疫用抗体诊断试剂 把同位素分析的高灵敏性与抗原抗体反应的特异 性两大特点结合起来建立的检测技术。能测出 ng/ml，甚至pg/ml水平的微量抗原物质。 常用的标记抗体试剂： HBsAg、HBeAg、 HAV抗原、AFP、CEA放射性核素 标记抗体诊断试剂。
第六节 抗体治疗药物
• 以抗体为载体的导向治疗药物的研究已有20多年 的历史，已制备出百余种单克隆抗体，鉴定出数 十种与肿瘤相关的抗原，受试病人超过数千例。 但治疗用的制剂尚没有一种达到商品化的程度。 在治疗药物中，单克隆抗体与毒素的偶联物治疗 淋巴瘤效果最佳，但有效率仅30%。
免疫酶技术是用酶标记抗体来检测抗原的方法， 本法分为免疫酶染色和酶免疫测定两种类型。
（1）免疫酶染色法用抗体诊断试剂：常用的酶为 HRP，其底物为二氨基联苯胺（DAB），两者作用 可生成棕褐色沉淀物质，使抗原呈色。
（2）酶免疫测定用抗体诊断试剂：重点掌握酶免 疫法的基本概念。比如ELISA方法（夹心法、间接 法）。
二、改形抗体
• 如果用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中 CDR序列，则可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体 的抗原结合特异性。抗体分子中鼠源性部分只占很 小比例，可基本消除免疫原性。这种改形抗体 （reshaping antibody）又称CDR移植抗体（CDR grafting antibody）。书中表4-5给出几种改形抗 体及其潜在的临床应用。
V-C区基因质粒DNA等量混合，在脂质体介导下共 转染骨髓瘤细胞SP2/0，转染后用含霉酚酸进行 筛选，形成集落的细胞即为共转染细胞，所分泌 的抗体为嵌合抗体。它保持鼠源性单克隆抗体的 抗原结合的特异性，但对人的免疫原性大幅下降 了。如若用人IgG1或IgG3的C基因替换鼠IgG1或 IgG2b，则可有效地加强多肽的ADCC效应与免疫 调理作用。
第四节 抗体工程
• 噬菌体抗体库技术的原理，简言之就是用PCR技术 从人免疫细胞中扩增出整套的抗体重链可变区 （VH）和轻链可变区（VL）基因，克隆到噬菌体 载体上并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面。 这样一来噬菌体DNA中有抗体基因的存在，同时在 其表面又有抗体分子的表达，就可以方便地利用 抗原—抗体特异性结合而筛选出所需要的抗体， 并进行克隆扩增。
• 1、原核细胞表达：融合表达、分泌型表达 • 2、真核细胞表达 • 3、转基因植物表达 • 4、转基因动物表达
• 融合表达：表达载体的多克隆位点上有一 段融合表达标签（Tag），表达产物为融合 蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便 后继的纯化步骤或者检测。对于特别小的 分子建议用较大的Tag（如GST）以获得稳 定表达；而一般的基因多选择小Tag以减少 对目的蛋白的影响。His-Tag是最广泛采用 的Tag。
• 红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B 凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血 清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都 有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红 细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗 A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗 A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞
细胞融合得到可分泌两种亲代抗体和杂种抗体的 杂种-杂交瘤细胞。
• 3、基因工程方法 采用适当的接头连接不同抗体 的VH和VL区，使它们不能形成链内的分子内配对， 让其形成原抗体的分子内配对，构建双特异性 （ SCFV)2。
五、抗体融合蛋白
• 防止出现新生儿溶血症，O型血的妇女与A 型、B型或AB型的男子结婚后，怀孕后所 得的胎儿可分A型、B型、AB型。胎儿由父 亲遗传而获得血型抗原为母亲所缺少，这 中抗原通过胎盘进入母体，刺激母体产生 相应的免疫抗体，抗体又进入胎儿体内， 抗原抗体相结合使胎儿细胞凝集破坏，发 生溶血，可出现流产和死胎。
• 母胎血型不合的新生儿可出现早发性黄疸， 发生心力衰竭或黄疸后遗症，抢救不及时， 则造成脑性瘫痪、呆傻甚至死亡。
二、免疫标记技术用的抗体类试剂
• 给抗体标记放射性核素、荧光素或酶活性，能将 抗原抗体反应放大，使常规方法难以观察或检测 的反应得以显现，因而大幅度提高抗原抗体反应 的敏感性，用于对微量抗原物质进行定性或定量 检测，结合显微镜或电子显微镜技术，还可对抗 原物质作出组织内或细胞内的定位测定。除用于 临床诊断外，还能为探讨发病机制提供有力的研 究手段。免疫标记技术有三种基本类型：免疫荧 光技术、免疫酶技术和放射免疫技术。
三、小分子抗体
• 基因工程小分子抗体仅表达鼠源性单克隆抗体的 V区片段，其相对分子量仅为原抗体的1/80-1/3。 也就是说，保留了CDR区，而Ig分子的C区不表达。 现在研制的小分子抗体有以下几种类型：
• （1）Fab抗体，由完整的轻链和重链（VH和CH1） 所组成。（2）FV抗体，由VH和VL组成，天然FV片 段中VH和VL为非共价性结合。（3）单链抗体 （single chain antibody SCA 或single chain FV,SCFV），由VH和VL通过一段连接肽（linker） 连接而成的重组蛋白。有分子量小、穿透力强、 免疫原性小特点，可与效应分子相连接构建新功 能抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理 想元件。
• b、免疫动物和制备抗体血清：动物：家兔、马、 羊、豚鼠。 免疫途径：静脉、腹腔、皮下。接种次数3-7次， 每次间隔3-4d，末次注射后6-8d取血样测效价， 达到要求，即可采血，离心分离血清。
• C、诊断血清的诊断方法：直接凝集反应
• （2）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的反向被 动血凝诊断试剂
• 分泌表达：在起始密码和目的基因之间加 入信号肽，可以引导目的蛋白穿越细胞膜， 避免表达产物在细胞内的过度累积而影响 细胞生长，或者形成包含体，而且表达产 物是可溶的活性状态不需要复性。通常这 种分泌只是分泌到细胞膜和细胞壁之间的 周质空间。
第五节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体类试剂 （1）鉴定病原菌用的抗体试剂 A、常用诊断血清的品种和用途 B、诊断血清的制备步骤 a、制备细菌抗原：细菌接种---培养---收集菌 苔---制成菌液。
• 目前的客观现实是：研究进展迅速，但未达到常 规治疗的应用阶段。
• 障碍（原因）：抗体相对分子质量大，穿透力低， 不能达到靶部位或摄取量低。鼠源性抗体的排斥 反应。
• 常用的抗癌药物：氨甲喋呤 （methotrexate,MTX）、阿霉素 (adriamycin,ADM)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)、 环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX) 、新抑癌蛋 白(neocarzinostatin, NCS) 、正定霉素 (doxorubicin, DOX)等。
一、人-鼠嵌合抗体
• 制备方法：提取杂交瘤细胞系的mRNA，经过逆转 录成cDNA，并以其为模板，采用特异引物，用
P达C所R方需法的分上别游扩启增动V子L和、VH前基导因肽，序再列分和别下连游接剪真切核供表 体到Ig信G人1号I的g、的C基增CL因基强真因子核表真表达核达载调载体控体上序上，列，将后再V，H将基将人因VL-基克鼠因隆嵌到克合人隆的
• 1、荧光抗体诊断试剂 荧光色素如异硫氰酸荧光素（FITC）等标记抗体 球蛋白，即成为荧光抗体。用荧光抗体浸染含有 抗原物质的组织切片或细胞，荧光抗体与抗原集 合，在荧光显微镜下成为可发光的可视物，从而 达到诊断或定位的目的。 （1）荧光抗体的制备 （2）免疫荧光测定法有直接和间接两种方法。
• 2、免疫酶抗体诊断试剂
用引物采自多个人体，具有人的种属普遍性。VH和 VL随机重组增加抗体的多样性。
• 2、避开了人工免疫和杂交瘤技术
• 3、可获得高亲和力的人源化抗体
在噬菌体抗体库中，VH 和VL基因的随机重组
模拟了体内抗体亲和力成熟过程，所用抗体基因 又都是来自人体，因此产生的抗体必然都是高亲 和力的。
三、基因工程抗体的表达
• 一、噬菌体抗体库技术的基本方法 1、获得目的基因 2、抗体库技术的载体：现在普遍使用噬菌粒 （phagemid）载体，其中的pHEN1为新一代载体，转 化效率高，有利于提高库容量。
• 3、淘筛：抗原固定化后，对噬菌粒群的吸附、洗 涤和洗脱后再感染扩增，与辅助噬菌体超感染获 得大容量次级文库，再反复与抗原吸附，经几轮 淘筛后，淘汰了非目的克隆，且使目的克隆大量 扩增。
• A、试剂制备原理：红细胞经甲醛处理后，在酸性 条件下能吸附蛋白质，当纯化的抗HBs血清吸附其 上时便具有抗体活性，若待测样品中存在有HBsAg 时，则发生特异性结合而使血细胞发生凝集。
•
反向间接凝集反应
• B、制备步骤：先用HBsAg免疫豚鼠---获得抗HBs 血清---硫酸铵盐析/柱层析---取其IgG ---在 pH4.0醋酸缓冲液中致敏醛化血细胞----洗去多 余蛋白成分，用含1%兔血清的稀释液稀释至一定 浓度，分装即成。
• 4、表达与鉴定：目的克隆经过鉴定后，再导入感 受态菌株，进行可溶性表达，其产物用western blot分析确定后，就完成了全过程。
二、噬菌体抗体库技术的特点
• 1、模拟天然全套抗体库 抗体文库1011库容，能包含B细胞全部克隆。
建库的外源基因来自人外周血、骨髓或脾脏的淋巴 细胞提取的mRNA反转录形成的cDNA扩增，使用的通
抗体药物
张忠山
第三节 鼠源性单克隆抗体的改进
• 改造鼠源性单克隆抗体的目的： 一是降低免疫原性； 二是降低相对分子量，增加组织通透性。
• 如将鼠源性单克隆抗体的C区用人的Ig分子的C区 置换，则对人的免疫原性消失。对鼠源性抗体的 改造已有很多成果报道，见书中表4-4，给出了改 造后的单抗的类型和特性。
• C、诊断方法：RPHA法
在V型血凝板上进行，阴性样品不凝集，许血细 胞沉积于V型孔底部，呈尖点状；阳性样品血细 胞凝集成块状。
• （3）妊娠诊断试剂 妇女妊娠后，血液和尿液中的HCG含量增高，在 3个月内可达到高峰。此时检测尿液中的HCG，就 可确定是否怀孕。
• （4）抗ABO血型系统血清
• 凝集原附着在红细胞表面，是一种抗原。 凝集素存在于血浆（或血清）中，是抗同 名凝集原的抗体。同名的凝集原和凝集素 相遇（如凝集原A和抗A凝集素）会发生红 细胞凝集。
• （4）单域抗体，由VH(VL)单个可变区组成的，只 有抗体分子的1/12，而且表面疏水性强，与抗原 非特异结合能力也强。（5）最小识别单位（MRU） 是由单个CDR区构成的小分子抗体，亲和力较低。
四、双功能抗体
• 双功能抗体就是双特异性抗体（biospecific antibody, BsAb源自文库。它是一种非天然性的抗体， 其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。
• 其中较为成熟的是配基-Ig型嵌合蛋白，而酶-抗 体型融合蛋白（即抗体酶，abeneyme）在药物治 疗中应用前景广阔，它可在靶向位置上将前体药 物转化成有效的药物，避免对正常组织的伤害， 此法称为抗体介导的酶前体药物治疗。
• 构建抗体融合蛋白的原则是：将第一个蛋白的终 止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个 蛋白基因，即可实现两个基因共表达。
• 抗体的一部分被非抗体序列替代，所形成 的融合蛋白具有新特性，称之为抗体融合 蛋白。
• 类型有： （1）配基-配基型融合蛋白，如CD4-Fc。 （2）配基-Ig嵌合型蛋白，如IL-2-Ig。 （3）配基-FV型嵌合蛋白，如CD4-FVCD3。 （4）受体-FV型融合蛋白。 （5）酶-抗体型融合蛋白。
发生凝集。
输血检测
• 将供血者的红细胞与受血者的血清（主侧） 及受血者的红细胞与供血者的血清（次 侧），分别做配血试验，观察有无凝集反 应。
• 主侧出现凝集反应，为配血不合，不能输 血，主侧无凝集反应，次侧出现凝集反应， 为配血基本相合，在紧急情况下才可输血， 但要特别慎重，不可输得太快、太多，并 密切观察有无输血反应。
• （3）放射免疫用抗体诊断试剂 把同位素分析的高灵敏性与抗原抗体反应的特异 性两大特点结合起来建立的检测技术。能测出 ng/ml，甚至pg/ml水平的微量抗原物质。 常用的标记抗体试剂： HBsAg、HBeAg、 HAV抗原、AFP、CEA放射性核素 标记抗体诊断试剂。
第六节 抗体治疗药物
• 以抗体为载体的导向治疗药物的研究已有20多年 的历史，已制备出百余种单克隆抗体，鉴定出数 十种与肿瘤相关的抗原，受试病人超过数千例。 但治疗用的制剂尚没有一种达到商品化的程度。 在治疗药物中，单克隆抗体与毒素的偶联物治疗 淋巴瘤效果最佳，但有效率仅30%。
免疫酶技术是用酶标记抗体来检测抗原的方法， 本法分为免疫酶染色和酶免疫测定两种类型。
（1）免疫酶染色法用抗体诊断试剂：常用的酶为 HRP，其底物为二氨基联苯胺（DAB），两者作用 可生成棕褐色沉淀物质，使抗原呈色。
（2）酶免疫测定用抗体诊断试剂：重点掌握酶免 疫法的基本概念。比如ELISA方法（夹心法、间接 法）。
二、改形抗体
• 如果用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中 CDR序列，则可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体 的抗原结合特异性。抗体分子中鼠源性部分只占很 小比例，可基本消除免疫原性。这种改形抗体 （reshaping antibody）又称CDR移植抗体（CDR grafting antibody）。书中表4-5给出几种改形抗 体及其潜在的临床应用。
V-C区基因质粒DNA等量混合，在脂质体介导下共 转染骨髓瘤细胞SP2/0，转染后用含霉酚酸进行 筛选，形成集落的细胞即为共转染细胞，所分泌 的抗体为嵌合抗体。它保持鼠源性单克隆抗体的 抗原结合的特异性，但对人的免疫原性大幅下降 了。如若用人IgG1或IgG3的C基因替换鼠IgG1或 IgG2b，则可有效地加强多肽的ADCC效应与免疫 调理作用。
第四节 抗体工程
• 噬菌体抗体库技术的原理，简言之就是用PCR技术 从人免疫细胞中扩增出整套的抗体重链可变区 （VH）和轻链可变区（VL）基因，克隆到噬菌体 载体上并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面。 这样一来噬菌体DNA中有抗体基因的存在，同时在 其表面又有抗体分子的表达，就可以方便地利用 抗原—抗体特异性结合而筛选出所需要的抗体， 并进行克隆扩增。
• 1、原核细胞表达：融合表达、分泌型表达 • 2、真核细胞表达 • 3、转基因植物表达 • 4、转基因动物表达
• 融合表达：表达载体的多克隆位点上有一 段融合表达标签（Tag），表达产物为融合 蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便 后继的纯化步骤或者检测。对于特别小的 分子建议用较大的Tag（如GST）以获得稳 定表达；而一般的基因多选择小Tag以减少 对目的蛋白的影响。His-Tag是最广泛采用 的Tag。
• 红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B 凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血 清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都 有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红 细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗 A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗 A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞