《生物化学实验》(精)
《生物化学试验》实验五：改良Mohun法测定谷-丙转氨酶活性
临床意义
用本法测定血ALT正常值为40 U/ml以下
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT 活性增高。 测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死， 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞， 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。
glutamate pyruvate
在520nm波长测定其光密度，与经同样处理标准
丙酮酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性。
pyruvate
2, 4-dinitrate phenylhydrazine
(brown) pyruvate dinitrate
phenylhydrazone
血清谷-丙转氨酶活性单位定义：每毫升血清在pH值7.4，
复习分光光度计的使用
（1） 开机，调波长，预热15-20分钟 （2）将待比色溶液倒入比色杯 • 高度2/3 - 4/5比色杯 • 手握毛面，注意光面整洁 • 依次放入样品室（空白管放第一槽，毛面朝向操作者）
（3）测定
T档 拉杆0档
调T100% ： 空白管
T档 拉杆1档
调T 0%, 转为A档 A=1.-----
1 、保温温度和时间要精确， 即谷丙转氨酶发挥催化作用环境
2 、概念：酶活性单位
3、 微量移液器的使用 P4
（1） 套吸头 （2） 吸取溶液： 按到第一档，垂直进入液面（0.5cm）
缓慢松开控制按钮，使之慢慢回到初始位置。 （3）移入试管中：吸头贴壁并有一定角度，将溶液全部吹出。
吸头弃于烧杯中，微量移液器放回盒内。
1.0
0.5
－
－
－
《生物化学实验》教学大纲
《生物化学实验》教学大纲《生物化学实验》课程实验教学大纲课程名称（中文）：生物化学实验课程名称(英文)experimentofbiochemistry课程编号课程类型专业必修课教材和实验说明名称教材：《生物化学实验》自编教材教学：生物化学实验原理与方法（北京大学出版社）是否独立设课是学时和学分：实验学时72实验学分2开始时间：二年级第二学期和第三学期适用于专业生物科学、生物技术、生态学和生物化学备注：课程类型分为公共必修课、公共选修课、专业必修课、专业选修课一、课程介绍和基本要求《生物化学实验》课程内容分为三个层次：基础验证实验、综合性实验和研究设计性实验。
基础验证实验是一些加强学生基本实验技能训练的传统实验。
综合实验包括一些新近发展起来的生化实验技术。
经过多层次的训练后，学生应达到下列要求：1.进一步巩固和加深对生物化学基础知识的理解，掌握生物化学实验的基础知识和基本操作技能。
如生化分离、制备、分析和鉴定技术。
2、提高观察问题、分析问题和解决问题的能力。
通过独立思考，深入钻研有关问题，初步具有解决生物化学实验问题的能力。
3.能正确使用仪器设备，掌握仪器的工作原理。
4、能利用所学知识准确分析实验结果，并能独立设计实验。
5、课前做好预习，课后认真完成实验报告，全面分析实验结果。
二、课程实验的目的和要求《生物化学实验》是《生物化学》理论教学的深化和补充，具有较强的实践性，是一门重要的基础实验课程，可作为生物技术、生物科学、药学专业学生的必修课。
掌握生化实验的基本知识和基本技能，包括生化分离、制备、分析和鉴定技术（如滴定、比色、色谱和电泳），并掌握各种仪器的使用。
随着生物化学的快速发展，新的实验方法和技术不断出现。
我们还需要掌握一些新的、实用的实验技能，比如一些分子生物学的基础实验。
通过本课程的学习，学生可以巩固和深化生物化学的理论知识，进一步增强通过实践分析和解决问题的能力，提高设计和创新能力，使学生具有一定的科研能力和严谨的科学态度，为学生进行更高水平的生物化学和分子生物学实验奠定基础。
《生物化学》实验讲义
实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应一、目的意义1、学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。
2、学习和了解一些鉴定蛋白质的特殊颜色反应及其原理。
二、实验原理1、双缩脲反应当尿素加热到180℃左右时，2分子尿素发生缩合放出1分子氨而形成双缩脲.双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物,这一呈色反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中含有多个与双缩脲相似的键，因此也具有双缩脲的颜色反应.借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。
应当指出，双缩脲反应并非蛋白质的特异颜色反应，因为凡含有肽键的物质并不都是蛋白质.2、茚三酮反应蛋白质与茚三酮共热,产生蓝紫色化合物，此反应为一切蛋白质及α-氨基酸（除脯氨酸和羟脯氨酸）所共有。
含有氨基酸的其他化合物也呈此反应.该反应十分灵敏，1:1500000浓度的氨基酸水溶液就能呈现反应。
因此，此反应广泛用于氨基酸的定量测定.3、黄色反应含有苯环侧链的（特别是含酪氨酸）蛋白质溶液与硝酸共热时，呈黄色（硝基化合物)，再加碱则变为橙黄色，此反应也称为黄蛋白反应。
OH+HNO3HO NO2+H2OHO NO2+O NOH三、仪器与试剂1、试剂(1) 蛋白质溶液：取10mL鸡蛋清,用蒸馏水稀释至100mL,搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。
（2) 0。
3％色氨酸溶液、0。
3%酪氨酸溶液、0。
3％脯氨酸溶液、0。
5％甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。
(3） 0.1％茚三酮－乙醇溶液:称取0。
1g茚三酮，溶于100mL 95％乙醇。
(4） 10%NaOH溶液、1％硫酸铜溶液、尿素、浓硝酸.2、仪器：试管及试管夹、酒精灯。
四、操作方法1、双缩脲反应(1) 取一支干燥试管，加入少量尿素,用微火加热使之熔化,待熔化的尿素开始变硬时停止加热。
此时，尿素已缩合为双缩脲并放出氨气（可由气味辨别）.待试管冷却，加入约1mL10％NaOH溶液，振荡使其溶解，再加入1滴1%硫酸铜溶液。
混匀后观察出现的粉红色. (2）另取1支试管，加入1mL蛋白质溶液，再加入2mL 10%NaOH溶液摇匀，然后再加入2滴1%的硫酸铜溶液。
《生物化学》实验课件：实验三 组织匀浆的制备方法和琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察
血液化学分析干扰少。
• 肝素抗凝血不宜作血细胞培养，不宜作纤维蛋白原测定，作 DC时，染色性较差。作血液量元素分析时慎用。
• 一般配成1%水溶液，取0.5ml于试管，37～50℃烘干，可抗 凝5ml血液。
• 2．血液样品的区别 • ①血浆与血清的区别 • 血浆：抗凝采血后立即分离，含有纤维蛋原和前凝血酶 • 血清：血液凝固，血清析出后分离，不含纤维蛋原和前
凝血酶。 • ②全血一般用于血细胞分析，不宜作系列化分析。
生化分析一般用血清或血浆。
• 3．常用抗凝剂
• ①EDTA—Na2 ：能较好地保存血细胞成分，可得较纯的细胞 悬液。对血细胞形态影响很小，适于血细胞分析。
剪碎，
3-4ml 1/15mol/L Na2HPO4 1 g 猪心
匀浆
6-7ml, 1/15mol/L Na2HPO4
放置20min
2000r / min 上 清 液 离心10min （酶液）
细胞破碎
抽提
分离
2ห้องสมุดไป่ตู้ 琥珀酸脱氢酶的作用及酶竞争抑制作用的观察
试管号
1 2 3 4
心脏提取 琥珀酸钠 丙二酸钠 蒸馏水
实验器材与试剂:
（一）试剂 pH=7.4 磷酸缓冲液 1.5% 琥珀酸钠溶液 1% 丙二酸钠溶液 0.02% 甲烯蓝溶液 生理盐水 液体石蜡
实验器材与试剂：
（二）器材
研钵、手术剪、手术镊子 2 mL 移液管 1000 uL微量可调仪器 10 mL 离心管 低速离心机等
实验操作：
1. 琥珀酸脱氢酶酶液的制备
本实验设计在无氧的条件下使底物脱下来的氢交给氧化型的受氢体甲烯 蓝（蓝色）使之成为还原型受氢体甲烯白（无色），通过观察蓝色到无色的 变化从而了解脱氢酶的活性。
生物化学实验
生物化学实验》课程实验大纲一、学时学分总学时：30 学分：1 实验时数：30二、实验目的生物化学是生物技术及生命科学相关专业的专业基础课程，其实验教学是使学生理解和掌握生物化学基本原理的必需环节。
生物化学实验所包含的基本技能涉及生物科学的各个领域，是完成其它专业课程实验的基础，在教学中占有重要地位。
本课程的实验目的主要包括：（1）加深生物化学基本概念和基本原理的理解与掌握；（2）培养学生掌握基本生化实验方法和实验技术，掌握各个实验的基本原理；（3）系统训练专门的实验技能，熟练使用各种常用生化实验仪器；（4）训练学生观察实验现象、准确记录实验数据、正确处理与分析实验结果的技能，培养严谨细致的科学作风。
三、实验基本原理蛋白质的溶解受盐、酸、碱、重金属等因素的影响，发生可逆和不可逆沉淀；在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，加入SDS后由于各种蛋白质分子量大小不同，所以蛋白质在电泳中迁移率也会有不同；蛋白质的分子大小不同，小分子蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留，大分子被排阻在凝胶颗粒外面而迅速通过层析柱；碱性缓冲液中DNA分子带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动；激活剂、抑制剂、温度等对酶促反应速度有极大影响；电子传递过程中的氧化还原反应可通过伴有颜色变化的化合物作受体来研究；纸层析技术可以用于转氨基作用中不同物质的检测。
四、实验基本要求严格遵守实验室各项规章制度；实验前认真预习实验指导书中有关实验的原理与步骤；认真听取理解教师在实验进行前的重点讲解；分小组进行实验，保持实验室安静，保持实验台整洁有序；正确使用实验仪器；认真观察与分析实验现象，客观真实地填写实验数据并进行结果分析；认真、准确、整洁地撰写实验报告并按时上交。
五、考核与报告考核分笔试和平时成绩两项。
笔试成绩占70%，平时成绩占30%。
平时成绩根据整个课程实验过程中学生的各方面表现和实验报告撰写情况打分。
六、主要仪器与设备组织捣碎机、水浴锅、高速冷冻离心机、台式离心机、柱层析系统、电泳仪、垂直与水平电泳槽、紫外与可见分光光度计、蛋白质检测仪、紫外透射反射仪、冰箱、电子天平、反渗透系统等。
生物化学实验
实验一、甲醛滴定法测定氨基氮一、 实验目的：初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。
二、 实验原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：对溶液氨基酸含量的测定主要依据平衡中电离H +的浓度来确定。
因此，反应平衡应向右进行。
平衡向右的促进方式：1）增加底物的浓度——A 、增加AA 的浓度（本实验目的是测定氨基酸的含量，必须保证固定的氨基酸浓度；B 、加碱，让H +电离。
但—NH 3+ 是弱酸，完全解离时pH 为11~12或更高，若用碱滴定—NH 3+所释放的H + 不测量氨基酸，一般指示剂色域小于10，很难准确指示终点。
因此，直接用碱滴定是不可行的。
2）降低产物的浓度——在本实验中用加入过量甲醛的方式：常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使平衡右移，促使—NH 3+释放H +，使溶液的酸度增加，同时也使滴定终点从强碱区域（pH11~12）移至弱碱区域（pH9.0左右）。
而这一区域正好是酚酞的敏感变色区域(pH8~10)。
因此，可用酚酞用指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定（刚好微红）。
由滴定所用的NaOH 量就可计算出溶液中氨基酸的含量，这就称氨基酸的甲醛滴定法。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。
当然，如样品是蛋白质水解液，（实际上是多种氨基酸的混合物），则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但是，基本规律如下：当蛋白质水解时，放出游离的氨基，随着水解程度的增加，滴定值也增加。
当滴定值不再增加，表示水解作用已完全。
相反，蛋白质合成时游离氨基减少。
因此，可以用此法测定溶液中的氨基量，就能大体判断出蛋白质水解或合成的进度。
二羟甲基氨基酸三、实验器材1、25ml锥形瓶2、微量滴定管3、吸管4、移液管四、实验试剂1、0.1mol/L标准甘氨酸溶液300ml准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100ml。
2、0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液500ml3、酚酞指示剂20ml0.5%酚酞的50%乙醇溶液4、中性醛溶液400ml在50ml 36%~37% 分析纯甲醛溶液中加入1mL 0.1% 酚酞乙醇水溶液，用0.1mol/L的NaOH溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的精品文档，你值得期待掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
《生物化学实验》课程大纲
《生物化学实验》课程大纲一、课程概述课程名称（中文）：生物化学实验（英文）：Biochemistry Experiment课程编号：课程学分：1.0课程总学时：30课程性质：科类基础课前修课程：无机化学实验，有机化学实验二、课程内容简介（300字以内）生物化学是农学、畜牧学、生物学等各专业相关课程的重要基础课程，是一门实验性很强的学科，其生物化学实验课在生物化学教学中占据重要地位。
生物化学实验紧密围绕生物化学实验技术的教学需求，主要针对蛋白质、酶、核酸、脂类、糖、维生素等生物分子的分离、提取、分析、鉴定和定量测定技术等内容进行课程实验项目的设计和教学，加强学生对生物化学实验技术的学习，巩固和掌握生物化学实验技术的基本理论、基本知识、实验技能，提高学生创新思维意识、综合分析问题和科学实验的能力，鼓励学生将所学知识运用于实际工作中去。
三、教学目标与要求生物化学实验是农业院校重要的专业基础课程，是培养学生创新精神、实践能力的重要平台，是塑造高层次农业科技专门人才的基本环节之一。
通过该课程的学习后，学生能够掌握生物化学实验的基本原理和操作方法，能够独立进行实验并具有发现问题和解决问题的能力，能够根据实验记录，结合理论知识，合理地分析结果，并学习对实验中出现的问题进行讨论，提出解决方案或改进措施。
总的目标是提高学生综合分析能力，培养学生熟悉科学研究的基本程序和基本思维。
四、学时分配注：生物化学实验课程总计1学分，安排8次实验（不含选修），其中验证性实验占62.5%，综合性、设计性实验占37.5%。
五、教学内容与安排实验一：酶促转氨反应的分析鉴定(3学时)（一）实验目的：通过本实验掌握纸层析的一般原理和方法；掌握利用纸层析研究代谢的基本方法，了解酶促转氨反应在中间代谢中的意义。
（二）实验主要仪器：层析缸；培养皿；电吹风机；烘箱；恒温水浴锅；培养皿；毛细管；研钵；针、线。
（三）实验内容与方法：1. 提取材料的酶液；2. 用纸层析法鉴定酶促转氨反应中转氨基产物丙氨酸的存在与否；3. 通过计算其R f并与标准氨基酸对照，判断反应产物样品的氨基酸组成。
生物化学实验
（二）样品蛋白质浓度的测定 待测样品必须进行适当的稀释，使每毫升中含有0.5mg左右的蛋白质，才能进行测定。 该过程至少重复两次或平行测定两次。
7200分光光度计的使用
四、结果处理
固体样品中蛋白质含量＝m’×Vm/Vn×1/m×10-3×100% 式中m′——由标准曲线查到的样品的蛋白质含量（mg） Vn ——用于显色的样品体积（ml） Vm —— 样品稀释后的体积（ml） m ——样品的质量（g）
三、操作方法
1. 样品制备 称取粉碎过40目筛的（玉米）样品2.50 g（精确至0.01 g）放入100 mL锥形瓶中； 沿器壁缓慢加入50 mL l％的盐酸溶液，并轻轻摇动使全部样品润湿； 将锥形瓶放入沸水浴中，预热3min，在沸水中准确加热15min； 立即取出，迅速冷却至室温。
2．样品测定 先加1 mL30％的硫酸锌溶液，充分混匀； 再加入1 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀并全部转 移至 100 mL容量瓶中，用少量蒸馏水将锥形瓶冲洗几次； 若泡沫过多，加几滴无水乙醇消泡； 用蒸馏水定容至刻度； 混匀后过滤，弃去初始滤液15 mL，收集其余滤液 充分混匀； 进行旋光测定。
四、结果处理 皂化值=
式中 VA—空白瓶盐酸用量（mL）； VB—样品瓶盐酸用量（mL）； m—油脂的质量（g）。
五、思考题
1. 上式中（VA - VB ）的含义是什么? 2. 试列出由皂化值计算油脂相对分子质量的公式。
生物化学实验
温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。
通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用基质在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的基质—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
淀粉被酶水解的变化，可以借遇碘呈不同颜色来观察。
淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、试剂1.0.5%淀粉溶液称取可溶性淀粉0.5g加蒸馏水少许搅拌成糊状，然后用煮沸的;1%氯化钠溶液稀释至1Ooml。
2.碘化钾一碘溶液取碘化钾2g及碘1.27g溶解于2OOml蒸馏水中，使用前用蒸馏水稀释5倍。
3.1%尿素溶液。
4.奈斯勒试剂(见实验二十二)5.1%CuSO4溶液台秤称取CuSO4•5H2O， 1g用蒸馏水溶解至1OOml。
6.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0:A. 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液称35.62gNa2HPO4·2H2O用蒸馏水溶解后，定容至10OOml。
B. O.lmol/L柠檬酸溶液称取19.21g无水柠檬酸，用蒸馏水溶解后定容10OOml。
用A、B两液，按附录五，配制pH5.O、pH6.2、pH6.8、pH7.4、pH8.0各lOml。
7.0.5%NaCl溶液。
8.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。
9.脲酶提取液取黄豆粉6g，加30%乙醇250ml，振摇lOmin，过滤，滤液供实验用。
生物化学实验参考答案
《生物化学实验Ⅰ》总复习思考题部分是自己做的，部分是百度的，各位看官如果要借鉴请酌情考虑，后果自负。
——江湖游子1. 请掌握下列生物化学实验常用仪器的正确操作使用方法，并能回答以下问题：（1）离心机使用时为什么要平衡？普通离心机与高速离心机在平衡时有什么不同要求？平衡是为了让转动物体重心正好在转轴上，如果不在，会对转轴产生很大作用力，有时整台机器会跟着晃动。
这对机器损耗很大。
转速越高的离心机不光重量很重，使用时还要特别放平衡，就连离心管里面的试液都要放置等量，离心管还要对称放入转子试管孔内，以确保转子平衡运行，而且在调节转速时，还要使用分段升速法。
(2)为什么用高速组织捣碎机进行动、植物组织捣碎时，需采用间歇式方式进行操作？为了防止产热过高，破坏组织内的蛋白质。
防止蛋白变性。
(3)用真空泵进行减压抽滤时，为什么要连接缓冲瓶？防止负压产生，引起水泵里的水或油泵里的油倒吸，进入滤瓶中，污染滤液。
2.为什么肝糖元只能从刚宰杀的动物肝脏中获取？在提取肝糖元过程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？糖元水解产物中如果存在提取中残留蛋白质时，在用班氏试剂检测水解产物，有什么影响！动物死亡后，体内的细胞还能存活一段时间，由于进行细胞呼吸作用，肝细胞会消耗肝糖元，所以必须用新鲜的肝脏细胞。
三氯乙酸是固定作用（蛋白质能被三氯乙酸沉淀）；乙醇：糖元不溶于乙醇，可以提取糖元。
班氏试剂使用时需要加热，而加热会时残留的蛋白质变性水解，对最终测得的水解产物颜色可能有影响。
（水解的产生的氨气结合铜离子，是铜离子的氧化性失去，导致生产绛蓝色沉淀，实验将失败）3.请阐述分光光度仪的主要部件及其功能；阐述紫外与可见光的光波长范围；在紫外与可见光范围内测定物质吸光度时，对光源与吸收池有何要求？光电管的功能是什么？为什么说光电管是分光光度仪最脆弱和最易损的部件？光源（钨灯）：发光。
单色器：把混合光波分解为单一波长光的装臵。
吸收池：盛放待测流体（液体、气体）试样的容器。
生物化学实验内容
《生物化学实验》内容课程类型：制药工程专业必修实验总学时：32课时开设实验项目数：8个适用对象：2017制药工程1、2班实验教师：段志芳一、实验目标及基本要求生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。
包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。
四、要求（1）实验过程中同组人可以配合进行；（2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；（4）对实验结果进行简单的分析.实验一植物组织中可溶性总糖的提取一、实验目的1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。
2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。
3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。
二、实验原理可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。
它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。
总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。
其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。
本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。
三、实验用品1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。
可共用。
2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。
生物化学实验指导书
《生物化学实验》指导书西安工程大学生物工程系二〇一一年十一月二十五日目录实验1 蛋白质的沉淀,变性反应 (3)实验2 蛋白质含量的测定 (8)实验3 氨基酸的分离鉴定—薄层层析法 (10)实验4 液化淀粉酶活力测定 (13)实验5 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 (17)实验6 核酸浓度测定—紫外线（UV）吸收法 (20)实验7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (22)实验8 植物中抗坏血酸含量的测定 (24)实验1 蛋白质的沉淀,变性反应目的要求：了解蛋白质的沉淀反应,变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
原理：在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而形成稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应，这种反应可以分为以下两种类型。
一、可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子结构并未发生显著的变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去以后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫做不变性沉淀反应，属于这一类的反应有盐析作用；在低温下，乙醇，丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子结构，空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。
重金属盐，植物碱试剂，过酸，加热，震荡，超声波，有机溶剂等都能够使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
实验操作一、试剂1．蛋白质溶液取5mL鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20mL蛋清，加蒸馏水200mL和饱和氯化钠溶液100mL，充分混匀后，以纱布过滤不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。
生物化学实验教案
1.浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜1张（7cm×2cm识别出光泽面与无光泽面，并在角上用笔做上记号）放在缓冲液中浸泡20分钟。
2.点样：把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器先在放置在白瓷反应板上的血清中沾一下，再在膜条一端1cm处轻轻地水平水平划线（注意样品线两头与膜条两侧保留一定间隙），这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
重点与难点
1.点样的大小，展层剂的配制。
主要内容与课堂安排
实验四氨基酸的薄层层析
一、主要内容
掌握氨基酸的薄层层析操作过程，学习应用薄层层析来分离和鉴定某些物质。
（一）原理：薄层层析法是一种微量而快速的层析方法。一般薄层层析法是把吸附剂如氧化铝或硅藻土涂步于薄板上（玻璃或金属）成一薄板，把要分析的样品溶液滴加到薄层的一端，用适当的溶剂进行展开而达到分离、鉴定和定量物质的目的。因为层析是在薄层上进行的，所以称它为薄层层析法。
3.透析过程中搅拌蒸馏水能加快透析速度。
主要内容与课堂安排
实验三蛋白质的盐析和透析
一、主要内容
（一）了解蛋白质的沉淀作用。
1.原理：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析。
2.操作：(1)取10%鸡蛋白溶液5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出。如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液；(2)取少许沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解，另取剩余的混合物，加入过量的硫酸铵粉末，使其成为硫酸铵的饱和液，观察沉淀产生。
(二)蛋白质的透析
1.原理：蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐常用的方法为透析法
蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其他低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，透析袋可用玻璃纸、火棉胶、动物膜、羊皮纸等制成，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中进行透析，这时盐离子通过透析袋扩散到水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。
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《生物化学实验》
教学方案
湖南文理学院生命科学学院学院生化与分子生物学教研组
实验一蛋白质的性质实验（1）—蛋白质和氨基酸的呈色反应
实验二蛋白质的性质实验（2）—蛋白质等电点的测定和沉淀反应
实验三牛乳中蛋白质的提取与鉴定
教学内容提要及时间分配
1、实验原理讲解： 8分钟
➢蛋白质在其等电点pH溶液中溶解度降底。
根据这个原理，将牛乳的pH调整至4.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。
用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯的酪蛋白
➢所得酪蛋白的定性鉴定
2、实验条件及步骤讲解： 7分钟
➢酪蛋白的制备
➢酪蛋白的性质鉴定
➢乳清中可凝固性蛋白质的鉴定
实验四氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验五酶的特性（设计型实验）
教学内容提要及时间分配
1、实验原理讲解： 10分钟
➢酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下，酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃
➢酶的活力受环境pH的影响极为显著。
不同酶的最适pH值不同
➢酶的活性受活化剂或抑制剂的影响
➢酶具有高度的专一性，淀粉和蔗糖无还原性
2、实验设计方案讲解： 5分钟
实验六酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
实验七紫外分光光度法测定核酸的含量
实验八维生素C的定量测定
实验九血糖的定量测定—GOD-PAP法
实验十 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验十一蛋白质的透析
实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细菌蛋白质。