生物化学实验内容

生物化学实验内容

《生物化学》实验教学大纲

课程类别：专业基础

适用专业：本科临床学专业

课程总学时：实验学时：32

实验指导书：生物化学与分子生物学实验教程

开课实验室名称：生化实验室

一、目的和任务

生物化学是一门在分子水平上研究生命现象的学科，紫外分

光光度

计的正

确使用

方法

1

考察学生平时对紫外分光光

度计的使用情况是否正确与

熟练程度

是一门重要的实验性较强的基础医学课程．随着医

的发展，该学科已渗透到医学的各个领域。生物化学

验技术已被广泛地应用于生命科学各个领域和医

实验的研究工作。生物化学实验是生物化学教学的

要组成部分，它与理论教学既有联系，又是相对独立

组成部分，有其自身的规律和系统。我们根据国家教

对医学生物化学课程基本技能的要求，开设了大分

物质的常用定量分析法、酶活性分析、电泳法、层析技

术、离心技术及临床生化，使学生对生物化学实验有一

比较系统和完整的概念，培养学生的基本技能和科

思

维

的

形

成，

提

高

学

生

的

动

手

能

力。

四、说明

实验教材及参考书：

1.揭克敏主编：生物化学与分子生物学实验教程（第2版）。科学出版社，2010

参考资料：

1..袁道强主编：生物化学实验（第1版）。化

学工业出版社，2011五、实验项目数据表

序号实验

名称

学

时

类

别

要

求

类

型

设

备

套

数

每

组

人

数

每组常

规仪器

设备名

称，数量

每组主要

消耗材料

名称、数

量、消耗

额

1 蛋白

质的

沉淀

反应3 2 0 1 3 10

人

水浴锅1

台

试管2支、

滤纸3张

2 影响

酶活

性的

因素3 2 0 1 3 10

人

水浴锅1

台

试管5支

3 血清

醋酸

纤维

素薄

膜电

泳6 2 0 2 1 25

人

电泳仪1

台电泳

槽1台

薄膜条1

张干

4 血清

胆固

醇的

测定3 2 0 1 1 25

人

分光光

度计1台

试管3支

5 转氨

基作

用6 2 0 1 1 25

人

烘干箱1

台层析

缸1个

层析滤纸

1张

6 血清

尿素

氮的

测定3 2 0 1 1 25

人

分光光

度计1台

试管2支、

移液管4

支

7 动物

组织

基因

组

DNA

的提

取6 2 0 2 1 25

人

分光光

度计1台

EP管6

支、移液

枪3支

8 实验

基本

操作

考核2 2 0 3 1 25

人

分光光

度计1台

试管1支、

移液枪1

支、移液

管1支

[注] 1）类别：2：指为技术（或专业基础）课开设的教学实验项目。

2）要求：0：必修1选修

3）类型：0：演示1：验证2：综合3：设计

4）每组人数：指教学实验项目中一次实验在每套仪器设备上完成实验项目的人数。

六、各实验项目教学大纲

实验一蛋白质的沉淀反应

【预习要求】

预习四个小实验的具体实验原理和操作内容。

【实验目的】

1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识；

2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

【实验内容】

（一）蛋白质的盐折

1. 原理

大量中性盐类如硫酸铵((NH4)

2SO4)、硫

酸钠(Na

2SO4)和氯化钠(NaCl)等加入到蛋白质

溶液后，可引起蛋白质颗粒因失去水化膜和电荷而沉淀。各种蛋白质分子的颗粒大小和电荷数量不同，用不同浓度中性盐可使各种蛋白质分段沉淀。例如血清中的球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中沉淀。当硫酸铵浓度达到饱和时血清中的白蛋白使沉淀下来。盐析沉淀蛋白质时能保持蛋白质不变性，加水稀释降低盐浓度，能使沉淀的蛋白质重新溶解，并保持其生物活性。因此，利用盐析法可达到分离提纯蛋白质的目的。

2. 操作步骤

①取小试管1支、加入5％鸡蛋清溶液20滴，饱和硫酸铵溶液20滴，充分摇匀后静置5min，记录结果。

②另取1小试管置于试管架上，插入准备好的滤纸和漏斗。将操作“1”之混合液倾入漏斗内过滤。观察结果。

③向操作“2”的滤液中逐步加入米粒大小固体(NH4)2SO4, 边加边摇匀，直至饱和为止。观察结果。再向管内加入少量蒸馏水，观察结果有何变化。

④将操作“2”的滤液漏斗置于1支小试管上，用玻棒戳穿滤纸尖部，加少量蒸馏水将滤纸上的沉淀粉洗入试管内，摇匀后观察和解释结果。

（二）重金属盐和三氯乙酸沉淀蛋白质

1. 原理

重金属粒子如Pb2+、Cu2＋、Hg2+、Ag+等可