实验室生物安全工作及危险防范措施上课讲义

实验室生物安全工作及危险防范措施生物安全工作的核心是危险度评估。

可以借助许多方法来对某一个特定的操作程序或实验进行危险度评估，其中最重要的是专业判断。

危险度评估应当由那些对所涉及的微生物特性、设备和规程、动物模型以及防护设备和设施最为熟悉的人员来进行。

实验室主任或项目负责人应当负责确保进行充分和及时的危险度评估，同时也有责任与所在机构的安全委员会和生物安全工作人员密切合作，以确保有适当的设备和设施来进行相关的研究工作。

危险度评估一旦进行，还应当考虑收集与危险程度相关的新资料以及来自科学文献的其他相关的新信息，以便必要时对危险度评估结果进行定期检查和修订。

进行微生物危险度评估最有用的工具之一就是列出微生物的危险度等级。

然而对于一个特定的微生物来讲，在进行危险度评估时仅仅参考其危险度等级是远远不够的，适当时还应考虑其他一些因素，包括：1、微生物的致病性和感染数量2、暴露的潜在后果3、自然感染途径4、实验室操作所致的其他感染途径（非消化道途径、空气传播、食入）5、微生物在环境中的稳定性6、所操作微生物的浓度和浓缩标本的容量7、适宜宿主（人或动物）的存在8、从动物研究和实验室感染报告或临床报告中得到的信息9、计划进行的实验室操作（如超声处理、气溶胶化、离心等）10、可能会扩大微生物的宿主范围或改变微生物对于已知有效治疗方案敏感性的所有基因技术11、当地是否能进行有效的预防或治疗干预。

根据危险度评估过程中所明确的上述信息，可以确定所计划开展的研究工作的生物安全水平级别，选择合适的个体防护装备，并结合其他安全措施制订标准操作规范（standard operating procedure，SOP），以确保在最安全的水平下来开展工作。

每个实验室都应该采用“安全手册”或“操作手册”，其中定义了已知的和潜在的危害，并规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害。

规范的微生物学操作技术是实验室安全的基础，而专门的实验设备仅仅是一种补充，绝不能替代正确的操作规范。

下面列出了一些最重要的概念。

一、进入规定1、在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。

2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。

3、实验室的门应保持关闭。

4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。

5、进入动物房应当经过特别批准。

6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。

二、人员防护1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。

2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。

手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。

3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。

4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。

5、严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。

6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。

7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。

9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。

三、操作规范1、严禁用口吸移液管。

2、严禁将实验材料置于口内。

严禁舔标签。

3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。

4、应限制使用皮下注射针头和注射器。

除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。

5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。

实验室应保存这些事件或事故的书面报告。

6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。

7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。

根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。

8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。

四、实验室工作区1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。

2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。

3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。

4、在进行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。

5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。

五、生物安全管理1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。

2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。

3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。

实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。

实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。

4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。

5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。

六、实验室的设计和设施在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成安全问题的情况要加以特别关注，这些情况包括：1、气溶胶的形成2、处理大容量和∕或高浓度微生物3、仪器设备过度拥挤和过多4、啮齿动物和节肢动物的侵扰5、未经允许人员进入实验室6、工作流程：一些特殊标本和试剂的使用。

七、设计特征1、必须为实验室安全运行、清洁和维护提供足够的空间。

2、实验室墙壁、天花板和地板应当光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。

地板应当防滑。

3、实验台面应是防水的，并可耐消毒剂、酸、碱、有机溶剂和中等热度的作用。

4、应保证实验室内所有活动的照明，避免不必要的反光和闪光。

5、实验室器具应当坚固耐用，在实验台、生物安全柜和其他设备之间及其下面要保证有足够的空间以便进行清洁。

6、应当有足够的储存空间来摆放随时使用的物品，以免实验台和走廊内混乱。

在实验室的工作区外还应当提供另外的可长期使用的储存间。

7、应当为安全操作及储存溶剂、放射性物质、压缩气体和液化气提供足够的空间和设施。

8、在实验室的工作区外应当有存放外衣和私人物品的设施。

9、在实验室的工作区外应当有进食、饮水和休息的场所。

10、每个实验室都应有洗手池，并最好安装在出口处，尽可能用自来水。

11、实验室的门应有可视窗，并达到适当的防火等级，最好能自动关闭。

12、二级生物安全水平时，应在靠近实验室的位置配备高压灭菌器或其他清除污染的工具。

13、安全系统应当包括消防、应急供电、应急淋浴以及洗眼设施。

14、应当配备具有适当装备并易于进入的急救区或急救室。

15、在设计新的设施时，应当考虑设置机械通风系统，以使空气向内单向流动。

如果没有机械通风系统，那么实验室窗户应当能够打开，同时应安装防虫纱窗。

16、必须为实验室提供可靠和高质量的水。

要保证实验室水源和饮用水源的供应管道之间没有交叉连接。

应当安装防止逆流装置来保护公共饮水系统。

17、要有可靠和充足的电力供应和应急照明，以保证人员安全离开实验室。

备用发电机对于保证重要设备的正常运转（如培养箱、生物安全柜、冰柜等）以及动物笼具的通风都是必要的。

18、要有可靠和充足的燃气供应。

供气设施必须得到良好维护。

19、实验室和动物房偶尔会成为某些人恶意破坏的目标。

必须考虑物理和防火安全措施。

必须使用坚固的门、纱窗以及门禁系统。

适当时还应使用其他措施来加强安全保障。

八、实验室设备处理生物安全危害时，使用安全设施并结合规范的操作将有助于降低危险。

本节阐述了适用于所有生物安全实验室的相关设备的基本原则。

实验室主任应咨询生物安全官员和安全委员会（如果有），确保配备足量的设备，并能正确使用。

选择设备时应符合一些基本原则，即：1、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触2、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求3、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件4、设备的设计、建造与安装应便于操作、易于维护、清洁、清除污染和进行质量检验。

应尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品。

需要详细咨询设备的性能和结构规格，以确保设施具备必要的安全特性。

九、基本生物安全设备1、移液辅助器——避免用口吸的方式移液。

有不同设计的多种产品可供使用。

2、生物安全柜，在以下情况使用：——处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心——空气传播感染的危险增大时——进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采集感染性组织）。

3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少生成气溶胶。

4、螺口盖试管及瓶子。

5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。

6、一次性巴斯德塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。

7、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进行验收。

应参照生产商的说明书定期检测。

十、健康和医学监测主管机构有责任通过实验室主任来确保实验室全体工作人员接受适当的健康监测。

监测的目的是监控职业获得性疾病。

为达到这些目的，应进行如下工作：1、根据需要提供主动或被动免疫2、促进实验室感染的早期检测3、应禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中工作4、提供有效的个体防护装备和方法。

十一、在一级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员的监测指南历史证据表明，在一级生物安全水平操作的微生物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病。

但理想的做法是，所有实验室工作人员应进行上岗前的体检，并记录其病史。

疾病和实验室意外事故应迅速报告，所有工作人员都应意识到应用规范的实验室操作技术的重要性。

十二、在二级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员的监测指南1、必须有录用前或上岗前的体检。

记录个人病史，并进行一次有目的的职业健康评估。

2、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。

3、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未出生孩子的危害。

保护胎儿的正确措施因妇女可能接触的微生物而异。

十三、培训人为的失误和不规范的操作会极大地影响所采取的安全措施对实验室人员的防护效果。

因此，熟悉如何识别与控制实验室危害的、有安全意识的工作人员，是预防实验室感染、差错和事故的关键。

基于这一原因，不断地进行安全措施方面的在职培训是非常必要的。

一个有效的安全规程首先始于实验室管理者，管理者应确保将安全的实验室操作及程序融合到工作人员的基本培训中。

安全措施方面的培训是新工作人员岗前培训的有机组成部分，应向工作人员介绍生物安全操作规范和实验室操作指南，包括安全手册或操作手册。