小鼠巨噬细胞试验
巨噬细胞功能实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
2. 掌握巨噬细胞的分离、培养和鉴定方法。
3. 学习巨噬细胞吞噬功能的检测方法。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有强大吞噬功能的免疫细胞，在免疫过程中起着重要作用。
巨噬细胞能够识别、吞噬和消化病原微生物、凋亡细胞等异物，并参与抗原呈递、免疫调节等过程。
本实验通过分离、培养和鉴定小鼠腹腔巨噬细胞，并检测其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：6-8周龄小鼠2. 试剂：胎牛血清、RPMI-1640培养基、无菌生理盐水、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液等3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、移液器、培养皿、离心机等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离与培养（1）小鼠处死后，打开腹腔，取出肠系膜，剪成1cm×1cm的小块。
（2）将小块组织放入装有生理盐水的培养皿中，用剪刀剪碎，制成组织悬液。
（3）将组织悬液移入离心管，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。
（4）加入适量RPMI-1640培养基，重悬细胞，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。
（5）加入适量胎牛血清的RPMI-1640培养基，重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/mL。
（6）将细胞悬液接种于培养皿中，放入CO2培养箱中培养24h。
2. 巨噬细胞的鉴定（1）取少量细胞悬液，加入适量台盼蓝染液，混匀，室温放置5min。
（2）用血细胞计数板计数，计算细胞死亡率。
（3）收集培养24h的细胞，用倒置显微镜观察细胞形态，判断细胞类型。
3. 巨噬细胞吞噬功能的检测（1）取适量鸡红细胞，用生理盐水洗涤3次，调整红细胞浓度为2×10^9个/mL。
（2）将鸡红细胞加入巨噬细胞培养液中，37℃、5%CO2条件下孵育30min。
（3）取出细胞，用生理盐水洗涤3次，弃去上清液。
（4）加入适量冷亚甲蓝染液，混匀，室温放置5min。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
02
通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
03
基本原理
STEP1
STEP2
STEP3
STEP4
器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片、盖玻片、吸管等
试剂：
85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；蛋白胨2.0g加水100ml灭菌备用。
材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
实验用品
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
实验前三天，每天向小鼠腹腔注射2%的蛋白胨溶液1ml，实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1ml。
脱椎致死 吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。
吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞
未被吞噬的鸡红细胞
实验报告
镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 活化的吞噬细胞的数量 吞噬百分数= 100个吞噬细胞 活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量 吞噬指数= 100个活化的吞噬细胞
06
实验报告
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了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理
熟悉细胞吞噬作用的基本过程
了解细胞吞噬实验的研究意义
目的要求
吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。
小鼠巨噬细胞实验报告
小鼠巨噬细胞实验报告实验报告: 小鼠巨噬细胞实验引言：巨噬细胞是免疫系统中重要的细胞类型，对于清除细菌、病毒和其他病原体起着关键作用。
小鼠巨噬细胞是研究人类巨噬细胞功能的理想模型。
本实验旨在通过培养小鼠巨噬细胞并观察其对厌氧菌的吞噬作用，以了解巨噬细胞的基本功能。
材料与方法：1. 材料：- 小鼠巨噬细胞株- 营养物质适配的培养基- 96孔板- 厌氧菌培养物- 杀菌剂- 显微镜2. 方法：1）培养小鼠巨噬细胞：将小鼠巨噬细胞接种在含有营养物质适配的培养基的96孔板中，放置在37C的恒温培养箱中培养至细胞数量达到适当密度。
2）准备厌氧菌培养物：将厌氧菌培养到适当的浓度，用杀菌剂杀死细菌并洗涤，以适当浓度悬浮于无菌PBS中。
3）观察吞噬作用：将适量的小鼠巨噬细胞加入96孔板的每个孔中，再加入适量的厌氧菌悬液。
孔板放置在37C的恒温培养箱中培养一定时间后，取出样品，在显微镜下观察吞噬作用。
结果：在观察过程中，我们发现小鼠巨噬细胞对厌氧菌表现出了明显的吞噬作用。
在将小鼠巨噬细胞与厌氧菌接触后，许多巨噬细胞出现了吞噬现象。
巨噬细胞将厌氧菌囊泡化并向细胞内融合，形成吞噬体。
在吞噬体形成后，巨噬细胞进一步进行吞噬作用，并最终将吞噬的厌氧菌消化。
讨论：巨噬细胞的吞噬作用是通过细胞表面的受体与目标物质结合，并通过胞吞作用将其摄入细胞内。
在本实验中，巨噬细胞通过与厌氧菌表面的分子结合，形成吞噬体。
吞噬体进一步与溶酶体融合，释放酸性溶液，将厌氧菌降解并消化。
小鼠巨噬细胞的吞噬作用是免疫系统抵抗病原体入侵的重要机制之一。
吞噬作用不仅消除了细菌等病原体，还能迅速调动其他免疫细胞参与免疫防御。
此外，巨噬细胞还能产生和释放多种细胞因子，调节和激活其他免疫细胞，如淋巴细胞等。
然而，需要注意的是，吞噬作用可能受到多种因素的影响，如细胞状态、病原体类型和数量等。
在实验中，我们观察到的吞噬作用是基于体外条件下的实验模型，因此无法完全代表体内情况。
2024年小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的改良法
2024年小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的改良法一、实验材料选择与准备在进行小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验时，材料的选择与准备是实验成功的关键。
首先，应选用健康、无病原体的小鼠作为实验对象，以确保巨噬细胞的活性与纯度。
其次，需准备无菌操作台、离心机、显微镜等实验设备，以及PBS缓冲液、RPMI 1640培养基、胎牛血清等试剂。
此外，还需准备适量的酵母菌悬液作为吞噬对象。
二、酵母菌培养条件优化酵母菌培养条件的优化对于提高其实验效果至关重要。
在培养酵母菌时，应控制适宜的温度、湿度和pH值，以促进酵母菌的生长和繁殖。
同时，还需选择合适的培养基和添加适量的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。
此外，定期更换新鲜的培养基并避免过度生长，也是确保酵母菌质量和活性的重要措施。
三、巨噬细胞获取与培养巨噬细胞是小鼠体内的主要吞噬细胞，对于吞噬酵母菌实验具有重要意义。
为了获取高质量的巨噬细胞，可采用小鼠腹腔灌洗法或骨髓分离法。
在获取巨噬细胞后，应使用RPMI 1640培养基（含10%胎牛血清）进行培养，并置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中。
在培养过程中，应定期观察巨噬细胞的生长状态，并适时进行换液和传代。
四、吞噬实验方法与步骤吞噬实验是验证巨噬细胞吞噬功能的关键环节。
在实验前，需将巨噬细胞与酵母菌悬液按一定比例混合，并在适宜的温度和湿度条件下进行共培养。
共培养一定时间后，可通过显微镜观察巨噬细胞的吞噬情况。
在观察过程中，应注意巨噬细胞的形态变化以及酵母菌被吞噬的过程。
此外，还可采用流式细胞术或免疫荧光等技术对吞噬过程进行定量和定性分析。
五、实验结果观察与记录实验结果的观察与记录是评估实验效果的重要依据。
在吞噬实验结束后，应使用显微镜对巨噬细胞进行形态学观察，记录吞噬酵母菌的巨噬细胞数量及吞噬程度。
同时，还可采用拍照或录像等方式记录实验结果，以便后续分析和讨论。
此外，还应详细记录实验过程中的各项参数和条件，以便复现实验结果并进行对比分析。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片 端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数 分钟后，再放在微镜下观察计数。
温育30min。
取1滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察 计数。
高倍镜下观察计算： 吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
细胞)×100％
吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
注意事项
1、菌与细胞混合后充分混匀非常重要。对于此实验，菌 与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。但 是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比 例为1：1。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
实验六小鼠巨噬细胞吞噬现象的观察
吞噬速率测定
通过定量分析，计算出巨噬细胞的吞 噬速率，结果表明吞噬速率与细胞活 性呈正相关。
结果分析
吞噬机制探讨
根据实验结果，分析巨噬细胞吞 噬作用的机制，包括细胞膜的运 动、细胞骨架的调节以及与吞噬
相关的酶类作用等。
吞噬与免疫关系
探讨巨噬细胞吞噬作用与免疫系统 的关系，分析其在机体防御和炎症 反应中的作用。
利用荧光物质标记细胞或 外来物质，以便在显微镜 下观察和追踪。
细胞培养技术
在体外培养巨噬细胞，以 便观察其吞噬行为。
显微观察技术
通过显微镜观察巨噬细胞 吞噬现象，记录并分析实 验结果。
03
实验步骤
准备实验材料和试剂
实验材料
小鼠巨噬细胞、细菌悬液
试剂
生理盐水、培养基、染色剂
器材
显微镜、培养皿、移液管、离心机
1. 用染色剂对细胞进 行染色。
步骤三：染色与观察
实验操作流程
01 2. 在显微镜下观察并记录吞噬现象，如吞 噬数量、吞噬程度等。
02
步骤四：数据记录与处理
03
1. 详细记录实验数据，包括吞噬数量、吞 噬程度等。
04
2. 对实验数据进行统计分析，得出结论。
数据记录和处理
01
使用表格或电子表格记录每组实验数据。
学习并掌握相关实验技术和方法
通过本实验，学生将学习并掌握相关的实验技术和方法，如细胞培养、显微镜观 察、染色等技术。这些技术是生物学和医学领域中常用的基本技能，对于学生未 来的学习和工作具有重要意义。
通过实践操作，学生可以加深对相关理论知识的理解，提高实验操作能力和科学 探究能力。此外，本实验还可以为学生提供实践经验，为后续的课程和科研工作 打下基础。
巨噬细胞迁移实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的迁移特性及其影响因素。
2. 探讨巨噬细胞在炎症反应和免疫调节中的作用。
3. 为后续研究提供实验依据。
二、实验材料1. 实验动物：昆明小鼠（体重20-25g，雌雄不限）。
2. 实验试剂：小鼠巨噬细胞分离试剂盒、Ficoll分离液、细胞培养液、PBS缓冲液、多聚赖氨酸、荧光素标记的小鼠红细胞（MRBC）、FITC标记的小鼠巨噬细胞（MAC）。
3. 实验仪器：离心机、倒置显微镜、荧光显微镜、酶标仪、培养箱等。
三、实验方法1. 巨噬细胞分离与培养（1）小鼠腹腔巨噬细胞分离：无菌操作下，取昆明小鼠腹腔液，加入Ficoll 分离液，离心分离出巨噬细胞。
（2）细胞培养：将分离出的巨噬细胞加入细胞培养液，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 巨噬细胞迁移实验（1）细胞标记：将巨噬细胞用FITC标记，MRBC用荧光素标记。
（2）迁移实验：将培养好的巨噬细胞与MRBC混合，加入多聚赖氨酸包被的盖玻片，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
（3）观察与分析：使用倒置显微镜观察巨噬细胞在盖玻片上的迁移情况，使用荧光显微镜观察巨噬细胞与MRBC的相互作用。
3. 影响巨噬细胞迁移的因素（1）炎症因子：将巨噬细胞与不同浓度的炎症因子（如IL-1β、TNF-α等）共培养，观察巨噬细胞的迁移情况。
（2）细胞因子：将巨噬细胞与不同浓度的细胞因子（如IFN-γ、M-CSF等）共培养，观察巨噬细胞的迁移情况。
四、实验结果1. 巨噬细胞在盖玻片上的迁移情况：巨噬细胞在多聚赖氨酸包被的盖玻片上能够迁移，且迁移速度较快。
2. 巨噬细胞与MRBC的相互作用：巨噬细胞能够吞噬MRBC，并对其产生明显的荧光信号。
3. 影响巨噬细胞迁移的因素：（1）炎症因子：IL-1β和TNF-α能够促进巨噬细胞的迁移，而IFN-γ则抑制巨噬细胞的迁移。
（2）细胞因子：M-CSF能够促进巨噬细胞的迁移，而IFN-γ则抑制巨噬细胞的迁移。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
实验目的：
本实验的主要目的是观察小鼠腹腔巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬作用并初步探究巨噬细胞的吞噬过程及机制。
实验材料：
1. 胶体金溶液；
2. 无菌生理盐水；
3. 酶消化试剂；
5. 显微镜和激光共聚焦显微镜。
实验步骤：
1. 将腹腔巨噬细胞准备好，收集细胞的方法可以在Gibco™血清教育中心找到。
2. 将100微升的胶体金颗粒溶液加入小鼠巨噬细胞的培养基中。
3. 将培养基加入培养箱中，并调节适当的条件，使细胞生长。
4. 观察并拍摄巨噬细胞吞噬胶体金颗粒的过程。
5. 经过一段时间后，将巨噬细胞用生理盐水洗涤几次，以去除吞噬的颗粒和其他杂质。
6. 对巨噬细胞进行显微镜观察，并用激光共聚焦显微镜观察细胞的粒饱和度，探究吞噬过程中的机制。
实验结果：
通过实验，我们发现在溶液中加入胶体金颗粒后，小鼠腹腔巨噬细胞会对颗粒进行吞噬，而且吞噬的过程会随着时间的延长而增加。
在观察吞噬过程时，我们发现颗粒先进入到巨噬细胞的液泡内，液泡随后与溶质相合并，颗粒进入到细胞内部。
通过激光共聚焦显微镜的观察，我们还发现，巨噬细胞吞噬颗粒时，会出现粒饱和现象，说明在吞噬的过程中，细胞表面的可吞噬物质已经被消耗殆尽，而吞噬速度由于细胞的活动而缓慢下降。
结论：
细胞吞噬是一种重要的细胞生理过程，对于身体的免疫防御系统具有重要意义。
而小鼠腹腔巨噬细胞具有良好的吞噬能力，对于异物、死亡细胞和各种病原体的清除起到了重要作用。
此次实验成功观察了巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬过程，并初步探究了其机制，这对于深入了解细胞免疫机制具有重要意义。
小鼠小吞噬实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬过程，加深对细胞吞噬作用机制的理解。
2. 测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，评估其非特异性免疫功能。
二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质的过程。
在高等动物体内，巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用是非特异性免疫的重要组成部分。
巨噬细胞能够识别并结合病原体、凋亡细胞及其它异物，通过胞吞作用将其吞噬并消化。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠若干。
2. 仪器：显微镜、离心机、无菌操作台等。
3. 试剂：大肠杆菌悬液、生理盐水、甲醛固定液、姬姆萨染液等。
四、实验步骤1. 制备腹腔巨噬细胞悬液：- 将小鼠麻醉后，无菌操作下取其腹腔液。
- 将腹腔液离心，弃去上清液，沉淀即为腹腔巨噬细胞。
- 用生理盐水洗涤腹腔巨噬细胞，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为纯化的腹腔巨噬细胞悬液。
2. 制备大肠杆菌悬液：- 将大肠杆菌接种于生理盐水中，37℃培养过夜。
- 将过夜培养的大肠杆菌用生理盐水洗涤，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为大肠杆菌悬液。
3. 实验分组：- 将纯化的腹腔巨噬细胞悬液分为实验组和对照组。
- 实验组：将腹腔巨噬细胞悬液与大肠杆菌悬液混合，37℃孵育30分钟。
- 对照组：将腹腔巨噬细胞悬液与生理盐水混合，37℃孵育30分钟。
4. 制片与染色：- 将实验组和对照组的细胞悬液分别制片。
- 用姬姆萨染液染色，显微镜下观察细胞形态和吞噬现象。
5. 结果分析：- 计算吞噬百分率和吞噬指数。
- 吞噬百分率 = 吞噬有细菌的巨噬细胞数 / 巨噬细胞总数× 100%- 吞噬指数 = 吞噬的细菌总数 / 吞噬有细菌的巨噬细胞数五、实验结果实验结果显示，实验组巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组，表明小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬功能。
六、讨论1. 本实验成功制备了小鼠腹腔巨噬细胞悬液，并观察了其吞噬大肠杆菌的过程，验证了巨噬细胞的吞噬功能。
巨噬细胞拓展实验报告
一、实验目的1. 深入了解巨噬细胞的生物学特性及其在免疫反应中的作用。
2. 探究巨噬细胞在不同实验条件下的吞噬功能变化。
3. 学习和掌握巨噬细胞分离、培养及功能检测的方法。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的免疫细胞，具有强大的吞噬和抗原呈递功能。
在本实验中，我们将通过分离小鼠腹腔巨噬细胞，观察其在不同实验条件下的吞噬功能，以探讨巨噬细胞在免疫反应中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠（雄性，体重18-22g）2. 仪器：解剖显微镜、离心机、培养箱、显微镜、细胞培养板等3. 试剂：无菌生理盐水、无菌淀粉液、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液、胰蛋白酶、RPMI-1640培养基、胎牛血清等四、实验方法1. 巨噬细胞分离与培养- 将小鼠麻醉后处死，打开腹腔，用无菌生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
- 将腹腔液离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入胰蛋白酶消化液（1mg/ml）消化细胞，消化时间为5-10min。
- 消化结束后，加入胎牛血清终止消化，离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入RPMI-1640培养基重悬细胞。
- 将细胞接种于培养板中，置于培养箱中培养。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 将培养好的巨噬细胞分为实验组和对照组。
- 实验组：加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
- 对照组：不加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
3. 数据分析- 通过显微镜观察巨噬细胞的吞噬现象，记录吞噬细胞的数量和吞噬指数。
- 对实验组和对照组的数据进行统计分析，比较两组间的差异。
五、实验结果1. 巨噬细胞分离与培养- 成功分离出巨噬细胞，细胞形态呈圆形或椭圆形，大小不一。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 实验组巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力明显强于对照组。
六、实验分析1. 通过分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，成功建立了巨噬细胞培养体系。
2. 实验结果表明，巨噬细胞具有较强的吞噬功能，在免疫反应中发挥着重要作用。
巨噬细胞吞噬实验报告
巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，它们在机体内起着清除病原体和细胞垃圾的重要作用。
巨噬细胞通过吞噬和消化来清除这些有害物质，从而维护机体的健康。
本次实验旨在探究巨噬细胞的吞噬能力，并观察不同条件下巨噬细胞的吞噬效果。
实验材料和方法：1. 巨噬细胞：从小鼠腹腔摘取巨噬细胞，经过离心、洗涤后制备成细胞悬液。
2. 有害物质：使用荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞吞噬的目标。
3. 细胞培养基：提供适宜的营养和环境条件供巨噬细胞生长。
4. 显微镜：观察和记录巨噬细胞的吞噬情况。
实验步骤：1. 将巨噬细胞悬液均匀分配到培养皿中，加入适量的细胞培养基，使巨噬细胞处于良好的生长状态。
2. 在巨噬细胞培养基中加入荧光染料标记的细菌和细胞碎片，使其与巨噬细胞悬液充分接触。
3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件下培养巨噬细胞。
4. 在培养的不同时间点，取出培养皿进行显微镜观察，并记录巨噬细胞吞噬的数量和程度。
5. 对实验结果进行统计和分析，得出结论。
实验结果：在观察巨噬细胞吞噬的过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，在实验开始的早期，巨噬细胞对细菌和细胞碎片的吞噬速度较快，数量也相对较多。
然而，随着时间的推移，巨噬细胞的吞噬速度逐渐减慢，吞噬的数量也逐渐减少。
这表明巨噬细胞在一段时间内能够高效地吞噬有害物质，但随着吞噬的进行，巨噬细胞的饱和度逐渐增加，导致吞噬速度下降。
此外，我们还发现了巨噬细胞对不同类型有害物质的吞噬能力存在差异。
在实验中，我们使用了荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞的吞噬目标。
观察结果显示，巨噬细胞对细菌的吞噬效果较好，吞噬数量较多，而对细胞碎片的吞噬效果相对较差。
这可能是因为细菌具有较小的体积和较强的运动能力，更容易被巨噬细胞捕获和吞噬。
而细胞碎片可能较大且较为静态，巨噬细胞需要更多的时间和能量来吞噬。
结论：通过本次实验，我们对巨噬细胞的吞噬能力有了更深入的了解。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告一、实验目的本实验旨在研究小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，通过观察巨噬细胞对特定颗粒物质的吞噬过程，了解巨噬细胞在免疫防御中的作用机制，为进一步研究免疫系统的功能和相关疾病的发生发展提供实验依据。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要细胞成分，具有强大的吞噬能力。
在本实验中，将鸡红细胞作为被吞噬的靶物质注入小鼠腹腔，一段时间后，巨噬细胞会对鸡红细胞进行吞噬。
通过涂片、染色等处理，可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并计算吞噬百分率和吞噬指数，以评估巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、实验动物：健康昆明小鼠，体重 18 22 g。
2、试剂：生理盐水、6%淀粉肉汤、鸡红细胞悬液、瑞氏染液等。
3、器材：注射器、显微镜、载玻片、盖玻片、离心机等。
（二）实验方法1、小鼠腹腔注射 6%淀粉肉汤 1 ml，诱导腹腔巨噬细胞产生。
2、三天后，给小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液 1 ml。
3、注射 30 分钟后，将小鼠断颈处死，腹腔注入生理盐水 2 ml，轻揉腹部，然后抽取腹腔液。
4、抽取的腹腔液以 1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清，留沉淀。
5、沉淀用生理盐水重悬，制成细胞涂片。
6、涂片自然干燥后，用瑞氏染液染色。
7、油镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，并计数。
四、实验结果（一）巨噬细胞形态观察在油镜下，巨噬细胞体积较大，形态不规则，胞浆丰富，常含有吞噬的颗粒物质。
未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞胞浆呈淡蓝色，细胞核呈紫红色，形状多样。
（二）吞噬现象观察可以观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的不同阶段，有的巨噬细胞胞浆内含有 1 2 个鸡红细胞，有的则含有多个。
被吞噬的鸡红细胞形态完整，部分已被消化。
（三）吞噬百分率和吞噬指数计算随机观察 200 个巨噬细胞，计算其中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，得出吞噬百分率。
同时，计算每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数，即为吞噬指数。
本次实验中，吞噬百分率为____%，吞噬指数为____。
小鼠吞噬能力实验报告
一、实验目的本实验旨在观察和评估小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，以了解其非特异性免疫功能。
通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验，加深对细胞吞噬作用过程的理解，并分析不同条件下吞噬能力的变化。
二、实验原理吞噬作用是指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。
巨噬细胞是动物体内重要的免疫细胞，具有吞噬和消化病原体、凋亡细胞等异物的功能。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，评估其吞噬能力。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：昆明种小鼠2. 仪器：解剖显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、移液枪等3. 试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、甲醛固定液、苏木素染液、伊红染液等四、实验方法1. 实验分组：将实验小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 诱导腹腔巨噬细胞：实验组小鼠腹腔注射生理盐水1ml，对照组小鼠腹腔注射生理盐水2ml。
3. 制备鸡红细胞悬液：将鸡红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2%的红细胞悬液。
4. 吞噬实验：实验组小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液1ml，对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水。
5. 观察与计数：30分钟后，取小鼠腹腔液，用生理盐水稀释，涂片，固定，染色，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并计数吞噬细胞数和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象明显，对照组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象不明显。
2. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组。
六、分析与讨论1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬能力，能够有效地吞噬鸡红细胞。
2. 诱导腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力可能与其非特异性免疫功能有关。
3. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组，可能与注射鸡红细胞悬液刺激有关。
七、结论本实验成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，并分析了不同条件下吞噬能力的变化。
实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬能力，其非特异性免疫功能可能与其吞噬能力有关。
小鼠巨噬细胞功能测定
（1） 器具：注射器、离心管、载玻片、平皿、烧 杯、橡皮乳头、解剖剪和镊子、解剖盘。
（2） 材料：无菌生理盐水、Hank’s液、6%淀粉 肉汤液、瑞氏染色液、 1%鸡红细胞悬液、 小鼠。
4.实验方法（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能体内测定法）
（1）实验前3d，给小鼠腹腔内注射无菌6%淀粉肉汤液1ml。 （2）实验当天，给小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml ，轻
（7）结果判断：高倍镜/油镜下镜检。镜下可见巨噬细胞 核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆Байду номын сангаас红色而核
被染成蓝色。计数巨噬细胞吞噬鸡红细胞情况，计算吞噬百 分率和吞噬指数。
①吞噬百分率：即100个巨噬细胞中吞噬有鸡红细胞的 巨噬细胞数。
②吞噬指数：将100个巨噬细胞中所吞噬的鸡红细胞 总数除以100即得吞噬指数，即平均每个巨噬细胞吞噬的鸡 红细胞数。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的巨噬细胞
5.注意事项
（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 （2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 （3）如小鼠腹腔液过少，可腹腔注入适量Hank’s液揉动
后再取。 （4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 （5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未
被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
揉腹部使鸡细胞分散，令其活动20~30min。 （3）然后颈椎脱臼处死小鼠，仰卧固定。常规消毒腹部皮肤，
左手持镊提起腹中部皮肤。右手用剪子剪长5mm的小口， 从剪口处朝头、尾部用力，撕开皮肤，暴露腹壁。
（5）提起腹前壁，避开血管剪一小口，用毛细吸管吹吸 混匀腹腔内液体，并收集于试管内。
（6）在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液制作涂片 。待涂 片晾干后，瑞氏染液染色5min。
培养巨噬细胞实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握巨噬细胞的培养方法。
2. 观察巨噬细胞的形态变化，了解其生物学特性。
3. 掌握巨噬细胞的功能检测方法。
二、实验原理巨噬细胞是免疫系统中一类重要的细胞，具有吞噬、消化、呈递抗原等生物学功能。
在体外培养巨噬细胞，可以通过诱导单核细胞分化为巨噬细胞，进而研究其生物学特性及功能。
三、实验材料1. 实验动物：昆明小鼠。
2. 试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、二甲基亚砜（DMSO）、佛波酯（PMA）、台盼蓝染液、结晶紫染液等。
3. 仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器、培养皿、培养瓶等。
四、实验方法1. 小鼠腹水制备：取昆明小鼠，无菌条件下，经腹腔注射5ml无菌生理盐水，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀。
48小时后，无菌条件下抽取腹水，用台盼蓝染液检测细胞活力，确保细胞活力大于95%。
2. 单核细胞分离：将腹水以1000r/min离心5分钟，弃上清，加入RPMI-1640培养基重悬细胞，计数后按每毫升含1×10^6个细胞浓度接种于培养皿中。
3. 巨噬细胞诱导：在单核细胞培养液中加入10^-6mol/L PMA，37℃、5%CO2条件下培养24小时，诱导单核细胞分化为巨噬细胞。
4. 巨噬细胞培养：诱导后的细胞用RPMI-1640培养基洗涤2次，加入胎牛血清（含10%FBS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素）重悬细胞，按每毫升含1×10^6个细胞浓度接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2条件下培养。
5. 巨噬细胞形态观察：在倒置显微镜下观察巨噬细胞的形态变化，记录其吞噬功能。
6. 吞噬功能检测：将培养的巨噬细胞用RPMI-1640培养基洗涤2次，加入适量鸡红细胞（浓度约为1×10^6个/ml），37℃、5%CO2条件下培养30分钟。
收集细胞，用台盼蓝染液染色，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。
五、实验结果1. 巨噬细胞形态观察：诱导后的单核细胞形态发生变化，细胞体积增大，细胞器增多，表面出现伪足，表明巨噬细胞已经成功诱导。
小鼠腹腔巨噬细胞收集及形态观察
小鼠腹腔巨噬细胞收集及形态观察引言：巨噬细胞是免疫系统中的重要成员，能够吞噬和分解各种病原体，清除损伤组织，参与炎症反应等。
研究巨噬细胞的形态和功能对于了解它们的生物学特性以及炎症反应等方面具有重要意义。
本实验旨在收集小鼠腹腔巨噬细胞并观察它们的形态特征。
材料与方法：1.小鼠2.工作台、显微镜、离心管3.生理盐水、PBS、各种培养基4.细胞培养试剂：DMEM培养基、FBS、青霉素/链霉素溶液5.腹腔巨噬细胞培养培养基：RPMI1640培养基、FBS、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）步骤：1.准备培养基：将适量的DMEM培养基倒入离心管中，添加相应比例的FBS和青霉素/链霉素溶液，配置成完整的培养基。
2.预备小鼠：将小鼠按照实验需要进行麻醉。
3.收集巨噬细胞：在小鼠的腹腔注射适量的生理盐水，轻轻按摩腹部，使细胞悬浮在生理盐水中。
4.过滤：将悬浮液通过过滤网过滤，以去除大部分红细胞和细胞碎片。
5.离心：将过滤后的悬浮液离心10分钟，以沉淀巨噬细胞。
6.培养：将离心沉淀中的巨噬细胞重新悬浮在腹腔巨噬细胞培养基中，将细胞转移至培养皿中，放置于培养箱中，37℃、5%CO2梯度培养。
7.形态观察：将巨噬细胞转移至载玻片上，使用显微镜观察其形态特征。
结果：收集的巨噬细胞呈现典型的悬浮生长，细胞核呈圆形或椭圆形，胞质丰富，颗粒较少，呈现相对均匀的染色。
巨噬细胞的大小约为10-30μm。
讨论：巨噬细胞是免疫系统中的重要成员，在免疫防御作用中扮演着关键角色。
通过本实验，我们成功地收集了小鼠腹腔巨噬细胞，并对其进行了形态观察。
巨噬细胞细胞核呈圆形或椭圆形，胞质丰富，颗粒较少，这与其吞噬和分解病原体的功能密切相关，说明巨噬细胞的形态结构与其功能密切相关。
总结：本实验收集了小鼠腹腔巨噬细胞并观察了其形态特征。
巨噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，了解其形态特征以及功能对于进一步研究免疫调节以及炎症反应等方面具有重要意义。
巨噬细胞吞噬实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本特性及其在免疫反应中的作用。
2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
3. 掌握显微镜下观察细胞吞噬作用的实验技术。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞类型，具有强大的吞噬能力。
当巨噬细胞遇到抗原时，会通过吞噬作用将其捕获、消化并清除。
本实验以鸡红细胞作为抗原，观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，从而了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠（体重20-25g）2. 实验器材：解剖显微镜、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子、吸管等3. 实验试剂：生理盐水、鸡红细胞悬液、冷亚甲蓝染色液、无菌淀粉液四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞诱导：实验前3小时，将小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞渗出。
2. 鸡红细胞悬液制备：将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，制成红细胞悬液，浓度为1×10^9/L。
3. 腹腔巨噬细胞收集：将小鼠处死，打开腹腔，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
4. 巨噬细胞染色：取腹腔液1ml，加入1ml冷亚甲蓝染色液，混匀，染色5分钟。
5. 制片观察：取载玻片，滴加1滴腹腔液，盖上盖玻片，用解剖显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的形态学变化。
五、实验结果1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，细胞核较大，呈蓝色。
2. 鸡红细胞呈圆形，直径约为7-8μm，呈红色。
3. 观察到部分巨噬细胞周围有红细胞聚集，说明巨噬细胞已经吞噬了鸡红细胞。
4. 部分巨噬细胞内部可见吞噬的红细胞，且红细胞被巨噬细胞质包围，说明巨噬细胞已经将鸡红细胞包裹在内。
六、实验分析1. 本实验观察到巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，说明巨噬细胞具有吞噬能力。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞通过质膜内陷形成吞噬泡，将鸡红细胞包裹在内，然后将其消化。
3. 吞噬作用是机体免疫系统的重要组成部分，有助于清除体内的病原体和衰老细胞。
小鼠巨噬细胞试验
一、小鼠巨噬细胞分离培养小鼠脱颈处死，浸入75%酒精中5min后，于腹中线处剪开皮肤，暴露腹壁肌肉，用酒精消毒腹膜壁，用无菌注射器将PBS或无血清DMEM培养液5ml 注入腹腔，仰卧平放并轻柔小鼠腹部2~3min，静置5min后，使动物体倾向一侧，用注射器抽取腹腔液约4~4.5ml，1500rpm离心8min，去上清，用含10%小牛血清的DMEM培养液进行细胞计数，调整细胞浓度为lx10∧6个/ml(取出一滴细胞悬液经台盼蓝染色，细胞存活率大于99%)，5ml/瓶接种于25cm2的培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，2-3小时后更换培养液除去未贴壁细胞，贴壁细胞则为腹腔巨噬细胞。
注：巨噬细胞不增殖，不传代，能培养存活2-3周，细胞形态基本不变，细胞贴壁成不规则形状。
二、细胞计数1.制备细胞悬浮液，用DMEM培养基进行计数2.准备记数板：用蒸馏水冲洗，擦镜纸擦拭，再用酒精擦净，2-3次3.加样4.计数：用台盼蓝染色计数。
细胞悬液细胞数/ml=4个大方格总数/4×10∧4，如计算前已稀释再乘稀释倍数三、药物配制将挥发油配成64mg/ml母液，用DMSO助溶，用无血清DMEM培养液稀释，使其终浓度为3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/ml。
四、挥发油对细胞毒性检测将浓度为1×10∧6个/ml的细胞悬液1ml/孔接种于16孔板中，置培养箱中培养，24h后加入不同浓度的挥发油，同时设DMSO对照、空白对照及空白调零孔。
培养24h后弃培养液，每孔加入ml无血清培养液和20ulMTT(5mg/ml)液，继续培养4h，然后弃培养液每孔加入 150ulDMSO，微量振荡器振荡10min后，采用酶标仪测定其在570nm波长的吸光度(A值)，并用下列公式计算细胞的存活率:药物组A值均数细胞存活率(%)= x100空白组A值均数五、细胞炎症模型建立为建立体外细胞炎症模型，确定后续实验中LPS刺激巨噬细胞的时间和浓度，对LPs刺激巨噬细胞的时效与量效关系进行了研究。
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。
2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。
注意避免玻片液体干涸。
五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。
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一、小鼠巨噬细胞分离培养
小鼠脱颈处死，浸入75%酒精中5min后，于腹中线处剪开皮肤，暴露腹壁肌肉，用酒精消毒腹膜壁，用无菌注射器将PBS或无血清DMEM培养液5ml 注入腹腔，仰卧平放并轻柔小鼠腹部2~3min，静置5min后，使动物体倾向一侧，用注射器抽取腹腔液约4~4.5ml，1500rpm离心8min，去上清，用含10%小牛血清的DMEM培养液进行细胞计数，调整细胞浓度为lx10∧6个/ml(取出一滴细胞悬液经台盼蓝染色，细胞存活率大于99%)，5ml/瓶接种于25cm2的培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，2-3小时后更换培养液除去未贴壁细胞，贴壁细胞则为腹腔巨噬细胞。
注：巨噬细胞不增殖，不传代，能培养存活2-3周，细胞形态基本不变，细胞贴壁成不规则形状。
二、细胞计数
1.制备细胞悬浮液，用DMEM培养基进行计数
2.准备记数板：用蒸馏水冲洗，擦镜纸擦拭，再用酒精擦净，2-3次
3.加样
4.计数：用台盼蓝染色计数。
细胞悬液细胞数/ml=4个大方格总数/4×10∧4，如计算前已稀释再乘稀释倍数
三、药物配制
将挥发油配成64mg/ml母液，用DMSO助溶，用无血清DMEM培养液稀释，使其终浓度为3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/ml。
四、挥发油对细胞毒性检测
将浓度为1×10∧6个/ml的细胞悬液1ml/孔接种于16孔板中，置培养箱中培养，24h后加入不同浓度的挥发油，同时设DMSO对照、空白对照及空白调零孔。
培养24h后弃培养液，每孔加入ml无血清培养液和20ulMTT(5mg/ml)液，继续培养4h，然后弃培养液每孔加入 150ulDMSO，微量振荡器振荡10min后，采用酶标仪测定其在570nm波长的吸光度(A值)，并用下列公式计算细胞的存活率:
药物组A值均数
细胞存活率(%)= x100
空白组A值均数
五、细胞炎症模型建立
为建立体外细胞炎症模型，确定后续实验中LPS刺激巨噬细胞的时间和浓度，对LPs刺激巨噬细胞的时效与量效关系进行了研究。
采用ELISA或RT-PCR测定小鼠腹腔巨噬细胞上清液中TNF-a含量来研究时效与量效关系。
时效关系：培养24h后的细胞分组加药：空白组（完全培养液）、LPS 1h组（终浓度为1ug/ml）、LPS 3h组（1ug/ml）、LPS 6h组（1ug/ml）、LPS 12h组（1ug/ml），分别在规定时间终止培养，弃去培养液。
用ELISA法，450nm测TNF-a含量。
量效关系：方法同上，分6组LPS浓度分别为0、0.001、0.01、0.1、1、10ug/ml
六、细胞炎性因子检测
小鼠β-actin Forward 5’一GCTACAGCTTCACCACCACAG一3’Reverse 5’-GGTCTTTACGGATGTCAACGTC一3’288bp。