生化检测方法汇总
常见的生化检测方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------常见的生化检测方法Western-blot 法 Western Blot 印迹法是把通过电泳分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持物，通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生特异性反应进行检测。
Western Blot 既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定靶蛋白表达的最方便也是最通用的方法。
1、试剂耗材的准备：⑴、转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl， 39 mM 甘氨酸， 0. 037% SDS， 20%甲醇）：⑵、 10丽春红染液：⑶、 TBS 缓冲液：⑷、 TBST 缓冲液（含 20%Tween20 的 TBS 缓冲液）：⑸、封闭液（含 5%脱脂奶粉的 TBST 缓冲液）：⑹、一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或 TBST 进行稀释。
⑺、底物显色液 ECL，4℃ 避光保存，现用现配。
⑻、显影液和定影液。
用水稀释 10-20 倍于铝盒中，可多次使用。
室温避光存放。
2、实验步骤：⑴、蛋白样品制备：1 / 15用细胞裂解液抽提蛋白，并测蛋白浓度。
⑵、取 1mg 蛋白进行 SDS-PAGE。
⑶、转膜：（转膜缓冲液4℃预冷备用，冷却装置于-80℃冰箱冷冻备用）。
⑷、将 2 张海绵垫、 2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑸、戴上手套，剪一张与凝胶尺寸相近的 PVDF 膜（83 mm75 mm），左上角剪一缺口作为标记，浸泡在盛有 20mL 甲醇的平皿中约 15 sec，直到膜变半透明。
用纯水冲洗膜2 次。
浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑹、 SDS-PAGE 结束后，小心地剥下两块凝胶，一块用于考马斯亮兰染色观察电泳情况，另一块浸泡在转膜缓冲液中预平衡。
生化检验项目
生化检验项目一、任务背景生化检验项目是临床医学中常用的一种检验方法，通过对人体血液、尿液、体液等样本中的生化指标进行检测，可以评估人体的生理功能状态，帮助医生进行疾病的诊断、治疗和预防。
本文将针对生化检验项目进行详细的介绍和解释。
二、项目介绍1. 血液生化指标检测血液生化指标检测是通过采集患者的血液样本，运用生化分析仪器对其中的各种生化指标进行检测。
常见的血液生化指标包括血红蛋白、白细胞计数、血小板计数、血糖、血脂、肝功能指标（谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素等）、肾功能指标（尿素氮、肌酐等）等。
通过对这些指标的检测，可以了解患者的血液状况、肝脏功能、肾脏功能等信息。
2. 尿液生化指标检测尿液生化指标检测是通过采集患者的尿液样本，运用生化分析仪器对其中的各种生化指标进行检测。
常见的尿液生化指标包括尿蛋白、尿糖、尿酮体、尿红细胞、尿白细胞、尿液比重等。
通过对这些指标的检测，可以了解患者的肾脏功能、糖尿病情况、尿路感染等信息。
3. 体液生化指标检测体液生化指标检测是通过采集患者的体液样本，运用生化分析仪器对其中的各种生化指标进行检测。
常见的体液生化指标包括血清蛋白、血清电解质（钠、钾、氯等）、血清肌酸激酶、血清乳酸脱氢酶等。
通过对这些指标的检测，可以了解患者的电解质平衡、肌肉损伤情况等信息。
三、检测方法生化检验项目的检测方法主要包括传统的手工检测和自动化生化分析仪器检测两种。
1. 手工检测手工检测是指通过人工操作，使用试剂盒和显微镜等工具对样本进行检测。
这种方法操作简单，成本低，但检测速度较慢，且存在人为误差的可能。
2. 自动化生化分析仪器检测自动化生化分析仪器检测是指使用先进的仪器设备对样本进行检测，通过仪器自动化的操作和分析，可以提高检测速度和准确性。
这种方法广泛应用于临床实验室和医院，可以大大提高工作效率和减少人为误差。
四、检测结果解读生化检验项目的检测结果通常以数字形式呈现，需要医生或专业人员进行解读和分析。
如何进行生化检验
如何进行生化检验生化检验是一项重要的医学检验方法，主要用于检测人体内各种生物分子的含量和分布情况，以揭示疾病的发生和发展状况。
这项检验对于现代医学的诊断和治疗起着至关重要的作用。
以下将详细介绍如何进行生化检验。
一、选择适当的生物样本生化检验通常涉及到多种不同类型的生物样本，包括血液、尿液、唾液、毛发等。
这些样本中所含有不同种类的生物分子，如蛋白质、酶、代谢产物等，可以被生化方法分析出来。
在选择生物样本时需要根据具体疾病和检测目的选择适当的样本进行检测分析。
二、收集样本在进行生化检验之前，需要先收集所需的生物样本。
对于血液、尿液等样本，可以通过采血管和尿采集器等器具进行采集。
对于唾液和毛发等样本，则需要经过特别的处理方式，如使用唾液采集器或化学分解等方法来进行处理。
在收集样本时需要在保持样本稳定的情况下，最大限度的减少检验过程对样本的影响，以保证检验结果的准确性。
三、样本处理将采集到的生物样本加入样品杯中，对样本进行加热、冷却、离心、萃取、过滤等样本处理方法，以消除样品中的杂质，并得到足够的生化分析物质测定。
样本处理过程中需要控制样本的温度、时间、加盐量等因素，以保证样品的质量和稳定性。
四、分离和纯化这是生化检验的核心过程之一，该过程需要将样品中的目标生物分子从其他成分中分离出来，并纯化出所需的生物分子。
目前用来分离和纯化目标生物分子最多的方法包括色谱法、电泳法、南方杂交等方法。
在分离和纯化过程中需要严格控制实验室环境的卫生等条件，以免影响检验结果的准确性。
五、生化分析分离和纯化后得到的生物分子需要进行定量的生化分析。
这是生化检验过程中最关键的环节之一。
目前主要采用的生化分析方法有光学法、放射性同位素法、荧光法、化学发光法等方法。
在进行生化分析时，需要严格控制实验室环境的温度、湿度、反应时间等因素，同时要注意实验室设备的卫生和维护。
总之，生化检验是现代医学中不可缺少的检验方法之一。
在进行生化检验时需要掌握一定的专业知识和实验技术，并严格按照标准程序进行操作，以保证检验结果的准确性和可靠性。
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:（1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。
②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,4℃保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
（2）标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准拟定容为50mL。
此液须当天用当天配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（由于转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降），加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
（4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α-酮戊二酸 2mmol/L):称取α- 酮戊二酸29.2mg 和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH 至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。
放置冰箱内保存。
（5）2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/L HCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液:称取16g固体NaOH，用蒸馏水溶解，冷却至室温，定容至1000mL，备用。
操作环节：1、标准曲线绘制：取试管18支按下表操作。
生化项目测定方法整理
生化项目的基本分析方法1．终点法检测1.1定义完全被转化成产物，不再进行反应达到终点，取反应终点的吸光度来计算被测物质的浓度。
生化检验中除酶和BUN、CRE外几乎都用终点法来进行检测。
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计算出该标本中待测物的浓度。
1.2检测流程一点终点法：取反应达终点时的一个点的吸光度来计算结果。
对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点终点法。
以试剂和样品混合之前的空气空白(GB)、水空白(WB)或试剂空白(RB)的吸光度值为测定计算基点，以反应终点的吸光度读数减去空白读数，得到反应吸光度。
通过与相同条件下校准液反应吸光度的比较，求得测定结果。
常与一点校准法配合使用，即采用一个校准浓度，校准曲线通过零点且成线性。
也应用多点校准。
•计算公式：C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光度Ab----试剂空白吸光度K----校正系数二点终点法：加入第一试剂，主要起缓冲或者消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点。
取反应尚未开始时读取一个点的吸光度，待反应达终点时再取第二点的吸光度，用第二点吸光度减去第一点吸光度的差值来计算结果。
以试剂和样品混合之后的某一时间点作为始点，以反应终点的吸光度读数减去始点读数。
一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰(主要指色度干扰)。
常采用双试剂，多以加R2前某一点作测定始点；某些情况下，也可以加R2后一点作测定始点。
若使用单试剂，主反应启动太快或仪器起始读数点受限时难以运用。
主要用于扣除试剂和样品空白，保证结果的准确性，一般双试剂用。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
各种生化指标测定方法
2.3 各项指标的测定方法2.3.1 生物学指标的测定于芥蓝菜薹采收期，每处理随机抽取6株，测定芥蓝生物学性状指标，包括株高，薹粗，节数，单株产量和叶面积。
2.3.1.1 株高测定菜薹长度为第一片真叶基部至生长点的距离，取平均值。
2.3.1.2 薹粗测定用游标卡尺测量第5与第6片叶之间的粗度，取平均值。
2.3.1.3节数和节间长度测定节数为第一片真叶基部起至生长点的节数，节间长度=株高/节数2.3.1.4 单株产量测定取第4节位以上植株进行测定，求单株鲜重。
2.3.1.5 蜡粉含量的测定参照Kumar.S方法测定（Kumar S，1987）。
将芥蓝叶片剪成条状，称取1.0g，放于培养皿中，用10ml氯仿浸泡30秒，取出叶片立即烘干。
将培养皿在室温下蒸发干燥，蜡粉含量为培养皿增重（mg/g）。
重复三次。
2.3.2 光和系统指标的测定2.3.2.1 叶面积的测定取第5片及以上共6片叶进行测定，求单株总叶面积。
采用Li-COR 公司生产的Li-3000A 型叶面积仪测量叶面积。
用直尺测量芥蓝叶片的长度（L，叶柄基部到叶尖的距离）和宽度（W，与主脉垂直的最大宽度），用Li- COR公司的Li- 3000A型叶面积仪测量实际叶面积（LA）。
用回归的方法建立实际叶面积与芥蓝叶片长乘以宽面积之间的回归方程，找出最佳回归系数。
2.3.2.2 比叶重测定于各处理中随机取10片叶子，用0.8mm打孔器，在叶片最宽处离主脉两侧的中心位置打孔，将10个小圆片放在烘样盒后在105℃杀青10min，再80℃烘至恒重。
比叶重=总叶干重/总叶面积(g/m2)2.3.2.3 叶绿素含量测定采用95%乙醇浸泡法（李合生，2000），称取剪碎的新鲜样品0.1g放入试管，用95%的乙醇15ml，在黑暗条件下浸泡24h，至叶片表皮变白，取上清夜在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。
计算公式：叶绿素a（mg/L）=13.95A665－6.88A649 （1）叶绿素b（mg/L）=24.96 A649－7.32A665 （2）类胡萝卜素（mg/L）=（1000A470-2.05C a－114.8C b）/245(1)、(2)相加即得叶绿素总浓度，在按照下式计算叶绿素和类胡萝卜素的含量。
生化检测技术(
2021-02-10—2021-02-12学习总结：一、经常使用的生化检测方式1.终点法通过检测终点吸光度转变的大小来求出被测物的含量。
选择终点法的重要因素，终点时刻的确信a)依照时刻—吸光度曲线来确信：选取吸光度趋于稳固后的时刻b)依照被测物反映终点，结合干扰物的反映情形来确信如:溴甲酚绿法测血清白蛋白溴甲酚绿（BCG）是一种pH指示剂，变色域（黄色）（蓝绿色）溴甲酚绿不但与清蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成份呈色，其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反映速度较清蛋白稍慢。
由于在30s内呈色对清蛋白特异，因此溴甲酚绿与血清混合后，在30s内读数可明显减少非特异性呈色反映。
1.1一点终点法反映达到终点，即在时刻—吸光度曲线上，当吸光度再也不改变时，选择一个终点吸光度值。
待测物浓度=（待测吸光度AU-空白AB）*K(校准系数)1.2两点终点法在被测物反映尚未开始时，选择第一个吸光度，在反映达到终点或平稳时，选择第二个吸光度，用两次吸光度之差计算结果。
优势：有效地排除溶血、黄疸和脂浊本身光吸收造成的干扰，适应于反映初期吸光度无明显转变的被测物。
1.3固按时刻法在时刻—吸光度曲线上选择两个测光点，既非反映物初始也非终点，差值用于计算结果例：苦味酸法测定肌酐，反映初30s,血清中快反映干扰物（微生物、丙酮酸、乙酰乙酸等）与碱性苦味酸反映；第二个30s要紧与肌酐反映，而且吸光度线性良好；80-120s以后，苦味酸能够与蛋白质和其他慢反映干扰物反映。
因此用第二个30s为测按时刻，有利于提高实验特异性和准确性。
1.4持续监测法也称速度法，测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，持续选择时刻—吸光度曲线中线性期的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度转变值△A/min计算结果二、了解免疫学查验经常使用的技术1.免疫比浊技术原理：免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生必然大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
生化分析技术与分析方法
生化分析技术与分析方法生化分析技术是指应用生化学、分子生物学等原理和技术，对生物体内分子、细胞及其组织和器官进行分析的一种技术。
生化分析技术的目的是研究生物体内分子、细胞及其组织和器官的结构、功能、代谢和调节等生理和病理过程。
生化分析技术有许多种类，其中主要包括光谱分析技术、色谱分析技术、质谱分析技术、电泳分析技术、生物传感器技术和免疫学技术等。
下面简要介绍几种常见的生化分析技术和方法。
光谱分析技术光谱分析技术是指利用物质的吸收、发射、散射等光学特性，对物质的结构、组成、性质等进行分析的一种方法。
光谱分析技术主要包括紫外光谱、红外光谱、拉曼光谱和核磁共振光谱等。
其中，紫外光谱是一种常用的方法，可以用于检测DNA、RNA等生物大分子的含量和质量。
红外光谱则可以用于检测细胞膜、酶、蛋白质等生物分子的结构和组成。
拉曼光谱则可以用于分析药物、生物大分子的结构和组成等。
核磁共振光谱则可以用于观察细胞内各种分子的运动和分子间的相互作用等。
色谱分析技术色谱分析技术是指按照不同物质在某种载体或柱子上的分配、吸附或沉淀等特性，将混合物分离为单一物质的一种方法。
色谱分析技术包括气相色谱、液相色谱和超高效液相色谱等。
其中，液相色谱是一种应用最广泛的方法，可以检测并分离大部分生物分子。
液相色谱又可分为高效液相色谱（HPLC）、离子交换色谱（IEC）、凝胶过滤色谱（GF）等。
HPLC是一种灵敏度高、分离效果好的分析方法，可用于检测DNA、RNA、蛋白质、酶等生物大分子。
IEC则可用于分离不同电荷的生物分子，GF则可用于分离不同大小的生物分子。
质谱分析技术质谱分析技术是指利用物质在电磁场中的离子化和分子裂解等特性，对物质的质量、结构、分子量、元素组成等进行分析的一种方法。
质谱分析技术包括质谱法、时间飞行质谱（TOF-MS）、离子陷阱质谱（IT-MS）等。
其中，质谱法是一种常用的方法，可用于检测试剂、药物、天然产物等生物分子的结构和组成。
常用生化检测项目分析方法与参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法
生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。
终点法：指经过一段时间的反应，反应达到平衡，由于反应的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。
这类方法通常称为“终点”法，更确切地说应称“平衡”法。
单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂（体积为V），t2刻加入样本（体积为S），然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度，在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时间。
反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。
其中：Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。
单试剂双波长终点法：基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2)并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。
t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。
在项目参数中，如果反应起始时间设为0，则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。
如果反应起始时间小于0，则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×（V1＋S）/(V1＋S＋V2)。
双试剂双波长终点法：基本上同“双试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。
由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。
这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。
t1时刻加入试剂(体积为V)，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，t4时刻停止对反应进行监测；t2－t3为延迟时间，t3－t4为测定时间。
检验科生化学常见检测与分析方法
检验科生化学常见检测与分析方法生化学是一门研究生物体内化学变化及相互关系的科学。
在检验科中，生化学是一项重要的技术领域，用于检测和分析样本中的化学成分和反应。
本文将介绍一些生化学常见的检测与分析方法。
一、色谱法色谱法是一种常见的分离和检测技术，广泛应用于生化学领域。
其中，气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）是两种常见的色谱方法。
1. 气相色谱法气相色谱法是将气体或者挥发性液体样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的挥发性有机化合物和气体。
它的原理是通过样品在高温下蒸发，然后被带动进入色谱柱中。
在色谱柱中，不同物质由于相互作用力的差异而分离，最终通过检测器检测。
气相色谱法常用于环境监测、食品安全等领域。
2. 液相色谱法液相色谱法是将溶解在溶剂中的样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的非挥发性有机化合物和离子。
它的原理是将样品溶解在流动相中，通过色谱柱的分离作用，不同物质在色谱柱中的停留时间不同，从而实现分离和检测。
液相色谱法常用于药物分析、食品成分分析等领域。
二、光谱法光谱法是一种通过物质对光的吸收、散射或者发射来进行分析的方法。
常见的光谱方法包括紫外可见光谱法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）和质谱法（MS）。
1. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种用于测定物质在紫外和可见光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物、无机物和生物分子等。
紫外可见光谱法的原理是通过物质对紫外或者可见光的吸收来得到样品的吸收光谱，进而推断出样品中的成分和浓度。
紫外可见光谱法在药物分析、环境监测等领域得到广泛应用。
2. 红外光谱法红外光谱法是一种用于测定物质在红外光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物和无机物等。
红外光谱法的原理是通过物质对红外光的吸收来得到样品的红外光谱，进而推断出样品中的分子结构和化学键的类型。
红外光谱法在药物研发、聚合物材料分析等领域具有重要应用价值。
生化检验项目
生化检验项目一、任务背景生化检验项目是临床医学中常用的检验方法之一，通过对血液、尿液、体液等样本中的生化指标进行检测，可以评估人体的生理功能和病理状态，为临床诊断和治疗提供重要依据。
本文将详细介绍生化检验项目的标准格式文本。
二、检验项目及标准格式文本1. 血液生化指标检测血液生化指标检测是常规的生化检验项目之一，主要包括以下指标：(1) 血糖测定血糖测定是评估糖代谢功能的重要指标，可用于糖尿病的诊断和治疗监测。
标准格式文本如下：检测方法：酶法测定正常参考范围：空腹血糖浓度为3.9-6.1 mmol/L结果解读：血糖浓度高于正常范围可能提示糖尿病或其他糖代谢异常。
(2) 血脂检测血脂检测用于评估血液中脂质的水平，包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇等指标。
标准格式文本如下：检测方法：酶法测定正常参考范围：- 总胆固醇：＜5.2 mmol/L- 甘油三酯：＜1.7 mmol/L- 高密度脂蛋白胆固醇：＞1.0 mmol/L- 低密度脂蛋白胆固醇：＜3.4 mmol/L结果解读：血脂水平异常可能与心血管疾病的风险增加相关。
(3) 肝功能检测肝功能检测用于评估肝脏的生理功能和病理状态，包括丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、直接胆红素和白蛋白等指标。
标准格式文本如下：检测方法：酶法测定正常参考范围：- 丙氨酸氨基转移酶：男性＜40 U/L，女性＜32 U/L- 天门冬氨酸氨基转移酶：男性＜37 U/L，女性＜31 U/L- 总胆红素：＜17.1 μmol/L- 直接胆红素：＜6.8 μmol/L- 白蛋白：35-55 g/L结果解读：肝功能异常可能与肝炎、肝硬化等肝脏疾病相关。
2. 尿液生化指标检测尿液生化指标检测是评估尿液中的生化成分的重要方法，主要包括以下指标：(1) 尿蛋白定性检测尿蛋白定性检测用于评估尿液中蛋白质的存在与否，可用于肾脏疾病的筛查和监测。
标准格式文本如下：检测方法：免疫层析法结果解读：阳性结果可能提示肾脏疾病或其他病理状态。
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。
终点法：指经过一段时间的反应，反应达到平衡，由于反应的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。
这类方法通常称为“终点”法，更确切地说应称“平衡”法。
单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂（体积为V），t2刻加入样本（体积为S），然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度，在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时间。
反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。
其中：Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。
单试剂双波长终点法：基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2) 并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。
t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。
在项目参数中，如果反应起始时间设为0，则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。
如果反应起始时间小于0，则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×（V1＋S）/(V1＋S＋V2)。
双试剂双波长终点法：基本上同“双试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。
由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。
这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。
生化分析仪的常用检测方法
（时间）
两点速率法
主要用于其反应过程不成线性，这样只注意 其反应的起始点和终止点，而忽视其中间 过程的线性变化。
如：苦味酸法测Cr，反应过程中Vit C、丙酮酸、 蛋白质等均可与苦味酸生成红色化合物而 干扰反应，通常选择1min内的两点进行测 定。
两点速率法
• 缺点：人为确定t 1、t 2，不定因素较多， 不能保证反应在t 1-t 2期间呈线性，影响 结 果准确性 。
1.连续监测法
• 即零级反应速率法,亦称斜率法 在较长反应时间区段内(90-180秒)，每隔一 定时间(5~30秒)读取一次吸光度值，至 少读 取4点，得到3个以上△A，最后算出 反应速 率△A/min。
U / L Au 106 VTu
tu l Vu
固定时间法（两点速率法）
• 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品 的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有 效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸， 脂血等的干扰。
(
A
两点终点
An
吸
光
度
）
样本空白
Am
Ax= An - k0 Am
S+R1
2020/2/19
R2
k （体积校正因子） 0
Sv+Rl =Sv+R1+R2
T
（时间）
生化分析仪的常用检测方法
基本原理
• 临床生化分析仪最常使用的是——分光光度 法
• 分光光度法——是通过测定被测物质在特定 波长处或一定波长范围内光的吸收度，对 该物质进行定性和定量分析的方法。
Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律
• 当一束平行单色光通过均匀的非散射样品 时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚 度成正比
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置常用生化检测项目分析方法举例及参数设置常用生化检测项目有哪些你知道吗?你对常用生化检测项目了解吗?下面是yjbys店铺为大家带来的关于常用生化检测项目分析方法举例及参数设置的知识，欢迎阅读。
一、常用生化检测项目1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数(analysis paramete)大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
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一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:（1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。
②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,4℃保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
（2）标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为50mL。
此液须当日用当日配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) :取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降），加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
（4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α-酮戊二酸2mmol/L):称取α- 酮戊二酸29.2mg 和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。
放置冰箱保存。
（5）2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/L HCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液:称取16g固体NaOH，用蒸馏水溶解，冷却至室温，定容至1000mL，备用。
每个样做3个平行，置37水浴30分钟，各管加2，4-二硝基苯肼液0.5mL，混匀，再在37℃水浴中放置20mL，各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL，混匀，10分钟后，从水浴箱中取出，以蒸馏水调“零”点，用520nm波长比色，读取各管之吸光值，各管之吸光值均减去空白的吸光值，然后以吸光值为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标。
绘制成标准曲线。
为了方便，可列出各光度相当于转氨酶单位表。
对照及样品各做3个平行，充分摇匀，静置10分钟后，用520nm波长比色，以蒸馏水调节零点，读取吸光值，用样品减去对照吸光值，求得样品的谷丙转氨酶活力。
●谷丙转氨酶活性单位：37℃，pH7.4，每小时每毫升血清催化生成1μmol 丙酮酸为1个单位。
例：0.1ml 血清每小时催化生成0.1μmol丙酮酸, 即相当于GPT 100U / 100ml 血清。
●注意：1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无作用。
实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，会影响测定效果。
5. 血清样品的测定需在显色后30分钟完成。
6.丙酮酸标准液的浓度要求十分精确。
由于丙酮酸后易变质为多聚丙酮酸，而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不易察觉。
建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。
7.每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管优点：尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确.故卫生部临检中心建议国无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法.1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理, 缺点：由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足,反应速度只能达到最大速度的65%;显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只及反应液中酮酸浓度的一半;保温30min的酶促反应后,新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控制的竞争显色的几率问题,如此等等,使赖氏法的重现性较差,在测量精度上仍与连续监测法相差甚大.* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
* 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1个活性单位，即1IU=1umol/min。
* King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单位。
* Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
二、尿素氮（BUN）（二乙酰一肟法尿素测定）（一）仪器设备：水浴锅、紫外分光光度计、10mL试管（二）试剂：1、尿素氮试剂：蒸馏水100mL，浓硫酸44mL，85%磷酸66mL，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg，硫酸镉（3CdSO4·8H2O）2g，溶解后稀释至1000mL。
2、20g/L二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g，加入蒸馏水溶解，定容至1000mL。
3、尿素氮标准贮存液（357mmol/L）：称取尿素1.072g溶解于蒸馏水中定容至1000mL，至于棕色瓶中贮存。
4、尿素氮标准应用液（17.85mmol/L）：取贮存液5mL，加蒸馏水定容至100mL。
（三）操作步骤按下面表格的试剂配比操作：按上述表的配方每个样做3个平行样，混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。
分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。
尿素（mg%）=测定管吸光度/标准管吸光度×17.85(mg/ml)⏹ 1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。
本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”⏹ 2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。
⏹ 3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。
⏹ 4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
⏹ 5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。
由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。
如果呈色后吸光度仍超过本法的线性围，还需将尿液再稀释，重新测定。
⏹3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。
世界卫生组织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
尿素氮mg% = 测定管/标准管×0.002×100/0.1×5= 测定管/标准管×10【参考围】5-20 mg/dl三、肌酐（Cr）四、血糖（Glu）（邻甲苯胺法）血糖是指血液中的葡萄糖，葡萄糖与冰醋酸、邻甲苯胺共热时，葡萄糖先脱水转化为羟甲基糠醛，再与邻甲苯胺缩合为蓝绿色的薛夫碱，其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。
可用比色法进行定量测定。
1、仪器：紫外分光光度计、水浴锅2、试剂：（1）葡萄糖标准母液（10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制）（2）邻甲苯胺溶液：2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升。
3、操作步骤：（1）配置不同浓度葡萄糖标准溶液：取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀（则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200，300mg ）；（2）分别精密吸取不同浓度葡萄糖标准溶液于试管中，设平行管，空白管加0.1mL蒸馏水，各管加入邻甲苯胺试剂5.0mL，混匀后，置沸水中15分钟，立即移入冷水浴中冷却；（3）以空白号管调零，于紫外分光光度计波长630nm 处测吸光值，以各管的吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线，得出线性方程。
（4）测试样品：取全血0.1mL，设平行样，按上述方法测出其A630nm吸光值，通过线性方程求出其血糖含量。
注意事项：1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原性物质基本上无影响。
2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。
此法显色稳定，24小时无变化。
如将加热时间缩短，生成颜色容易消褪。
3. 轻度溶血的血清对结果无明显影响。
根据推导，血清中含血红蛋白450毫克/100毫升时，可使测定结果降低约10%。
4.高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。
可先制备血滤液后再行测定。
五、血清白蛋白（Alb）（溴甲酚绿法BCG）原理：血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630纳米处有光吸收峰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清白蛋白含量。
试剂：1. 溴甲酚绿（BCG）贮存液：取BCG 419mg，用10ml 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至1000mL。
贮于棕色瓶备用。
如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。
2. 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）：分别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。
每1000ml混合液加入NaN3 100mg。
3. 30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。
4. BCG应用液：BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2)750ml，30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替）混合而成。
5.标准蛋白溶液（10mg/ml)：称取白蛋白1.00g，用生理盐水。