药理实验设计

药物治疗大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究

【目的】

（1）掌握非酒精性脂肪肝的造模方法

（2）观察药物对大鼠非酒精性脂肪肝的作用

【原理】

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liverdisease, NAFLD) 是病理组织学改变与酒精肝相似, 但无过量饮酒史的一种慢性疾病具有脂肪变性、肝细胞损伤及炎症细胞浸润等病理组织损伤,以肝细胞大泡性脂肪变为特征, 是一个从单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎到肝硬化乃至肝癌的病理过程，超质量或肥胖可成为其诱因。

动物模型是研究人类疾病的重要手段, 高脂饮食诱导的NAFLD模型最为常见. 本实验采用由喂养复合高脂饲料（复合高脂饲料的制备方法：基础饲料中添加成分2%胆固醇+10%猪油+0.2%丙基硫氧嘧啶+0.5%胆酸钠，构成比均为质量分数)喂养8周后可形成中至重度大泡性肝脂肪变, 伴转氨酶增高, 100%复制出非酒精性脂肪性肝病模型的造模方法。造模成功后分别给予空白组和模型组以生理盐水和药物。4周后，通过比较对照组与药物组的大鼠血清中血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的含量是否有显著性差异（P ＜0.05）来评定药物的治疗作用。

【材料】

1.动物：健康SD大鼠50只,体重(200±10)g，雌雄各半

2.药物及试剂：生理盐水、药物、阳性对照组药物菲诺贝特

3.试剂：苦味酸试剂

4.主要器材：全自动生化分析仪、大鼠灌胃针头、注射器、天平、鼠笼

【方法】

1、动物模型的建立和分组造模：

取50只SD大鼠饲养于SPF级动物房,给予普通饲料喂养, 自由饮水进食, 环境温度为17 ℃-24 ℃，正常喂养1周后,随机分为两组,正常组(A)8和模型组(M),正常组给予标准饲料,模型组给予复合高脂饲料（复合高脂饲料的制备方法：基础饲料中添加成分2%胆固醇+10%猪油+0.2%丙基硫氧嘧啶+0.5%胆酸钠，构成比均为质量分数)喂养, 喂养期间,实验动物自由饮水和进食,动物房保持安静,自然采光,温度25℃左右。8周后,分别从正常组和模型组随机挑选1只,取肝脏做病理切片,证实非酒精性脂肪肝形成。再将模型组40只随机分为5组:空白模型组(B1)、阳性对照组（B2）、药物高剂量组(C1)、药物中剂量组(C2)、药物低剂量组(C3),每组8只,组间大鼠体重差异无显著性(P>0. 05)。正常对照组以标准饲料喂养,其余高脂饲料喂养。

2、给药

8周后,A组、B1组予以生理盐水灌胃, 5 ml/次。B2组以100 mg·kg-1·d-1菲诺贝特溶液灌胃。C1、C2、C3分别以160, 80, 40 mg·kg-1·d-1药物溶液灌胃。持续4周。？3、样品制备与检测：

从造模开始算,第10周末当晚大鼠禁食不禁水12 h,次日上午称重后，眼眶内眦取血1 mL，分离血清，全自动生化分析仪测定血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平。

4、肝脏形态学观察与病理切片观察：

小鼠处死后迅速剪开腹腔，观察肝脏形态。取出完整肝脏，滤纸吸干表面水分后称质量，计算肝指数，肝指数=肝脏质量(mg)/体质量(g)×100%。完整分离肝脏左叶，40 g/L多聚甲醛固定，脱水，包埋，切片，苏木精-伊红染色，封固，光镜下观察肝组织病理变化并进行分级和评分。

【结果】统计各组检测结果：

表：药物治疗大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究（n）

组别剂量动物数TG TC HDL-C LDL-C ATL AST 正常组

模型组

阳性组100

高剂量160

中剂量80

低剂量40

注:剂量（mg·kg-1）, TG（mmol/L）、TC（mmol/L）、HDL-C （mmol/L）、LDL-C（mmol/L）ATL(IU/L) AST (IU/L)