高效液相色谱法测定麦精中的低聚糖
高效液相色谱法测定低热量食品中的葡萄糖,果糖,蔗糖,麦芽糖醇？…
离葡萄糖、 果糖 的离 子 交 换 型 的 高 效液 相 色
１５ 标 准 曲线 的制 作 及样 品 的测定 ．
Ｌ ５ １ 标 准 曲 线 制 作 ．
谱 柱 ， 过对该柱 的进 一 步研究发 现 （ 通 见表
１ ， 柱 还 具 有 同 时 分离 麦 芽 糖 醇 和 山 梨糖 ）该 醇 的功 能 ， 用 于 对 葡 萄 糖 、 糖 、 芽 糖 醇 可 果 麦
和山 梨 糖 醇 四 种 组 分 的 同 时 测 定 （ 图 １ 如 、 图 ２ 图 ３所 示 ） 、 。由 于该 柱 对双 糖 组分 不 能
柱 的研 究发 现 （ 见表 ２ ， 管 ＮＨ ）尽 柱 可 以通 过 改变 流动 相 中 ＣＨ Ｃ 与 Ｈｚ 的 比例达 到 Ｎ Ｏ 分 离葡 萄糖 、 糖 、 果 蔗糖 、 芽 糖 的 目的 ， 不 麦 但 能 满 足麦 芽 糖 与 麦 芽糖 醇 、 萄 糖 与 山梨 糖 葡 醇 的 分 离 要 求 ； 使 通 过 提 高 Ｃ Ｎ 的 比 即 ＨＣ
维普资讯
ｌ ２
食品与发酵工 业
Ｆ ｏ ｎ ｅｍｅ ｔｔ ｎＩｄ ｓｒ ｓ ｏ ｄａ ｄＦ ｒ ｎａｉ ｎ ｕ ｔｉ ｏ ｅ
Ｖｏ． ４ １２ Ｎｏ ４
高 效液 相色 谱 法 测定 低 热 量 食 品 中的
葡萄糖 、 果糖 、 蔗糖 、 芽糖醇和 山梨糖醇的研究 麦
Ｆ 水解 后样品中果糖古 量 ２
２ 结果 与 讨 论
２ １ 分 离柱 的选 择 ． 分 离 柱 是 高 效液 相色 谱 的 核 心 ， 对 组 其 分 的 分 离 度将 直 接 影 响 分 析 结 果 ， 了研 究 为 低 热 量食 品 中 的葡 萄 糖 、 糖 、 糖 、 芽 糖 果 蔗 麦 醇 和 山梨 糖 醇 的高 效 液 相 色谱 分析 方 法 ， 本 研 究 对 常 用 来 分 离 和 测 定 糖 类 物 质 的 Ｗａ —
高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖方法的研究
高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖方法的研究
[摘要]本实验对高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖的方法进行研究，使用β半乳糖甘酶对低聚半乳糖进行酶解，通过HPLC测量酶解前后乳糖及半乳糖的质量差来计算样品中低聚半乳糖的总含量。
【关键词】高效液相色谱；β半乳糖甘酶；低聚半乳糖
1、引言
低聚半乳糖是一类可溶性食用纤维素，是1-7个半乳糖残基与葡萄糖或乳糖的还原端相连的低聚糖。
低聚半乳糖的α糖甘键中含有β折叠，小肠中的β半乳糖甘酶可以消化α糖甘键，但是β半乳糖甘酶经常缺失或其活性受到抑制。
2、实验方法
2.1 样品的前处理
2.4 数据处理
3、结果分析
3.1 萃取时磷酸缓冲溶液用量对低聚半乳糖加标回收率的影响
本实验通过对加标回收率的测量，对前处理方法中低聚半乳糖萃取时磷酸缓冲溶液用量进行了优化。
前处理其他条件设为：加酶量1.0ml，酶解温度为60℃，酶解时间为30min。
由表3-1可以看出，磷酸缓冲溶液用量小于40ml时，低聚半乳糖加标回收率随着磷酸缓冲溶液用量的增加而显著增加，其中磷酸缓冲溶液使用量为40ml时低聚半乳糖的加标回收率最高。
4、结论
本实验使用单因素分析法对HPLC检测婴儿配方食品中低聚半乳糖的方法进行研究，使用β半乳糖甘酶对低聚半乳糖进行酶解，通过使用HPLC测量酶解前后乳糖及半乳糖的质量差来计算样品中低聚半乳糖的总含量。
本实验对前处理中的磷酸缓冲溶液用量，加酶量，酶解时间和酶解温度进行优化，其最佳前处理条件为：萃取时磷酸缓冲溶液用量为40ml，加酶量为1.0ml，酶解时间为30min，酶解温度为60℃，其加标回收率达到82.40%。
利用高效液相色谱法测定食品中五种糖的含量
图1 分离效果图
样品前处理
将苹果样品洗净、擦干、切碎并混匀，称取5.00 g 于研钵中，加入6 mL的蒸馏水磨制均匀。
磨制均匀后全部移入离心管中，4000 r·min-1离心6 min。
分离出离心液之后，将离心液导入干净的试管中，再向盛有沉淀的离心管中加入12 mL蒸馏水并搅拌，然后再进，最后将所有的离心液放入150 mL容量瓶中，并加蒸馏水稀释至相应刻度。
稀释液再用微孔滤膜过准备HPLC分析用。
色谱分析
对过滤后的稀释液进行HPLC分析。
结果与分析
色谱的保留时间
1.3的色谱条件下，分别对5种糖溶液、苹果样品和酸奶样品进行测定，发现果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖的保留时间分别是7.1、8.0
13.6 min及15.7 min，分离效果良好，样品图中也未见干扰部分。
2.2 标准曲线和最低检出限
精密配制5种糖组分的混合标准溶液，按照上述操作条件分离检测，用质量浓度（X，单位为
作为横坐标，色谱峰峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，最后得5种糖组分标准曲线的回归方程
系数及最低检测限见表1。
2.3 精密度实验
配制5种糖组分的混合标准液4份，并依次进样计算变异系数，结果见表2，RSD在4.5%～
均小于10%。
实验表明，5种糖组分的回收率均大于90 RSD均小于10%，说明本测定方法有较好的准确性和重复性。
现代食品XIANDAISHIPIN
食之不完的美筵。
——爱默生。
高效液相色谱-示差折光法测定饲料中大豆低聚糖含量
高效液相色谱-示差折光法测定饲料中大豆低聚糖含量潘城;欧阳立群;林钦;黄永辉;刘芳;梁敏【摘要】A method for the determination of soybean oligosaccharides in feeds by high performance liquid chro-matography method of refractive index(HPLC-RID)was developed.The samples were extracted with50%ethanol.The sep-aration was carried out with a mobile phase of water-acetonitrile.The analytes were detected by refractive index detector. The results showed that,there was a good linear correlation(R=0.9999~1.0000)between the peak area and concentration of sucrose,raffinose and stachyose within 0.5 ~ 10 mg/mL.The qualitative detection limit (LODs)of sucrose,raffinose and stachyose were less than 0.020%,and the quantitative detection limit (LOQs)were 0.036%,0.053% and 0.066%,respec-tively.The average recoveries for samples of soybean oligosaccharide were 90.6% ~106%,and the relative standard devia-tions (RSDs)were in the range of 1.6% ~ 3.5%.The results obtained by experimental verification showed the method was simple,rapid and reliable for the determination of soybean oligosaccharides in feeds.%本实验建立了饲料中大豆低聚糖的高效液相色谱分离检测方法。
高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖
高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖（续）三、结果与分析3.1标准曲线的制作按照表1所示对标准混合液进行色谱测定。
表1 标准混合液浓度表（略）标准曲线的线性：根据实验数据求得麦芽糖、异麦芽糖、麦芽三糖、潘糖、异麦芽三糖、麦芽四糖、异麦芽四糖、麦芽五糖的线性回归方程依次为：y = 0.00000550 x + 0.09949685（R2=0.9912）；y = 0.00000769 x - 0.02658243（R2=0.9751）；y = 0.00000552 x + 0.00145331（R2=0.9877）；y = 0.00000643 x - 0.00042279（R2=0.9989）；y = 0.00001441 x - 0.00411445（R2=0.9998）；y = 0.00000630 x - 0.00224903（R2=0.9997）；y = 0.00001437 x - 0.00582476（R2=0.9996）；y = 0.00001451 x - 0.03036338（R2=0.9979）。
3.2样品的测定样品经溶解、除蛋白、定容、过滤进样，利用标准回归方程求得样品中各组分的含量，表2列出所测样品中各糖含量（%）。
表2 样品中各糖的含量（%）（略）四、讨论4.1样品前处理方法的选择4.1.1除蛋白试剂的选择样品中含有大量蛋白对糖测定时色谱出峰产生影响，本方法共采用了两种除蛋白试剂，结果显示：21.9%乙酸锌和10.6%亚铁氰化钾各加5mL去除蛋白样品测定时在固定时间出现同样的峰，而用50%三氯乙酸去除蛋白不会出现这一问题。
故，本方法采用50%三氯乙酸去除蛋白。
4.1.2样品超声时间的选择超声时间对样品中糖的溶出程度影响不大。
故，本方法对样品进行20min超声振荡处理。
4.2色谱柱的选择本方法先后采用了两类不同原理的色谱柱，分别为氨基（键合相）色谱柱和阳离子交换色谱柱（专用糖柱）。
高效液相色谱测定麦芽低聚糖的组分
（）Ｂｎａａ Ｃ８ Ｗａ ｒ） ２ ｏｄｐｋ 柱（ ｔｓ与纯水；３Ｎ ｃｏｉ １ ｅ （） ｕｌｓ ｅ ｌ
２ 实验部分
２１ 仪 器 ． Ｌ －Ａ高效液相色谱仪 ，Ｉ－ Ｓ示差折光 检 Ｃ４ ＲＤ ２ Ａ 测 器 ，－ ２ Ｘ数据 处理机 （ ＣＲ Ａ 以上 均 为 日本 岛津 产
表２ 数据表 明已处 理的样品液 同一天 内分析的
１８ ；５ （ ）１ ３ ９ ３ ２ ４ １ ：４
Ｑｕｎｉ ｔ ｅ ａｙｉ ｏ Ｆ ａｔ ｎ ｏ ａ ｔ ａｉ Ａ ｌｓ ｆ ｃｉ ｓ ｔ ｖ ｎ ｓ ｒ ｏ ｆ Ｍａｔｏｉｏａｃａｉｅ ｂ Ｈ ｇ Ｐ ｒｏｍａ ｃ ｌ ｌ ｓｃｈ ｒ ｓ ｉｈ ｆｒ ｎｅ ｏ ｇ ｄ ｙ ｅ
化物理研究所）流动相： ， 蒸馏水， 流速： ８ Ｌｍｎ ０ ｍ ／ ｉ； ． 实验在室温进行。 ２４ 测标准曲线 ．
储备液 精确 称取 无水葡 萄糖 、 麦芽糖 以及麦
３２ 标准曲线 ． 分别吸取六种糖混合液５１，５２，５Ｌ绘制 ， １，０２ ， ０
各峰面积与进样量的定量校正曲线， 得到六条通过 原 点的直线 ， 经回归分析 ，１－６ Ｇ Ｇ的相关系数分别是
２２ ４
表２ 麦芽低聚糖样品同一天重复分析结果 馗
（ ｎ＝ ５ ）
２ ｒｃ Ｐ Ｒ ｕ ｔ ．Ｊ ｒ ａ ｇ， ９２ ２４ １ ： Ｗｕ ｈ ｏｌ Ｐ ｓ ， ｅ ｈ Ｃ ｏ ｔ ｒ １８ ；４ （ ） ｈｍ ｏ
１７ ７
３ ｈｅ ａ Ｎ Ｈ， ｉｍ ｎｅ ａ Ｗ ．Ｊ ｒ－ Ｃ ｅｔ ｍ Ｗ Ｓｒ ａｎ Ｐ ｈ ｉ ，Ｄ ｙ Ｒ Ｃ ｏ ｈ ｍ ｔ ｒ１８ ；０（）４９ ａｏ ， １２７３ ：３ ｇ ９ ４ ｒ ｎ Ｐ Ｃ ｕｅ Ｊ Ｖ ｚａ ｔ Ｃ ｒｍ ｔ ｒ Ｖａ ｙ ｏｐｋ ｏｋ Ｓ ａ．Ｊ ｏ ａｏ ， ｔ ， ， ｅ ｌ ｈ ｇ
低聚木糖的测定（高效液相色谱测定方法）
低聚木糖的测定（高效液相色谱测定方法）五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。
（一）方法提要试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。
（二）仪器1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。
2. 超声清洗仪。
3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。
4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。
（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。
2. 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。
3. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。
4.木二糖对照品，Wako公司(纯度≥90%)。
5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL 容量瓶中，即得木二糖标准溶液。
（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml 容量瓶中，用水定容到刻度。
取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。
②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。
取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。
2. 标准工作曲线制作。
精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。
分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。
3．色谱条件①色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱250 mmi.d.×4.60mm, 5μm ；②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)；③流速：1.0mL/min ；④柱温：35℃；⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力 3.5Bar ；4. 样品测定。
保益加麦精纤维低聚糖的测定及其对酸奶益生菌的影响
Ｈ ｚ ０ 溶 液 ； 柱 温 ：５ Ｓ ；进 样 量 ：２ 流 速 ： ５℃ ０ＬＬ； ｔ
０．ｍ Ｌ／ ｉ ５ ｍ ｎ。
Ｃ Ｅ ｕｑ Ｕ Ｂ ｏｌｎ Ｉ ｈ ｏｗｅ 一，Ｌ ｎｈ ａ，Ｆ Ｉ ｎ Ｈ Ｎ Ｒ —ｉ，Ｌ ａ — ｇ ，Ｌ Ｕ Ｓ ａ ． ｉ ｏ Ｕ Ｙａ—ｕ Ｅ Ｎａ
（ ． ｃ ｏ ｌ ｆ ｉｔｃ ｎ ｌｇ ， ａｔ ｈｎ Ｕｎｖ ｒ ｔ ｆ ｃ ｎ ｅａ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ｇ ， ｈ ｎ ｈ ｉ ２ ０ ３ ， ｈｎ １ Ｓ ｈ ｏｅｏ Ｂ ｏｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｅ ｓ Ｃ ｉａ ｉｅｓ ｙｏ Ｓ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｓ ａ ｇ ａ ０ ２ ７ Ｃ ｉａ； ２ Ｓ ａ ｇ ａ Ａ ｏ ｄ＆ Ｂ ｖ ｒｇ ｓ ｔ． ｈ ｇ ａ ２ Ｏ ４ ， ｈｎ ） ．ｈ ｈ ＢＦ ｏ ｎ ｉ ｅ ｅａ ｅ ｄ， ａ ｈ ｉ ０ ２ ５ Ｃ ｉａ Ｌ Ｓｎ
．
ｅ ｔａ ｔ ｄ ｉ ｏ ｎｐ ｏ ｉ ｔ ｒ ｗｔ ｉ ｏ ｈ ｒ ｄ ｒｎ ｔ ｒ ｇ ｘｒ ｃ ａ ｄｔ ｎｏ ｒ ｂ ｏ ｉ ｇ ｏ ｈ ｎｙ ｇ ｕ ｔ ｕ ｉ ｇ ｓｏ ａ ｅｗａ ｅ ｔｄｂ ｐ ｅ ｄｐ ａ ｅｍｅ ｏ ． ｅｒ ｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ａ ｔｅ ｉ ｃ ｓｔｓｅ ｙ ｓ ｒ ａ ｌｔ ｈ ｔ ｄ Ｔｈ ｕｔ ｓ ｏ ｄｔ ｔ ｅ ｓ ｈ ｃ ｎ ｅ ｔ ｏ ｃ Ｕ ｔ ｏ ｅａ ｄｃ ｌ ｔ ｔ ｏ ｅｉ —Ｐ ｏ ｉ ＋”ｍａ ｔ ｘ ａ ｔ ｒ ０ ４ ｏ ｔｎ ｓ ｆ ｅ ｏｒ ｓ ｎ ｉ ｅ ｌ ｅｒ ｓ ｎ ｏ ａ ｒｂｏ ｌ ｅ ｔ ｃ ｗｅｅ１ ．５ ｒ ｎ ａ ｄ２ ７ ｇ ｍｇ ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ Ｔ ｅａ ｄ ｔ ｎ ．９￣ ／ ， ｅ ｐ ｃｉ ｌ ｈ ｄ ｉ ｏ ｖ ｉ
低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)
五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。
（一）方法提要试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。
（二）仪器1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。
2. 超声清洗仪。
3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。
4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。
（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。
2. 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。
3. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。
4.木二糖对照品，Wako公司(纯度≥90%)。
5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL 容量瓶中，即得木二糖标准溶液。
（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml 容量瓶中，用水定容到刻度。
取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。
②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。
取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。
2. 标准工作曲线制作。
精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。
分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。
3．色谱条件①色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱 250 mm i.d.×4.60mm, 5µm ； ②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)；③流速：1.0mL/min ；④柱温：35℃；⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力 3.5Bar ；4. 样品测定。
高效液相色谱_蒸发光散射检测法同时测定单糖_双糖及低聚果糖
0 . 4 5μm 滤膜过滤，备用。
1.4 标准曲线绘制 取配制好的系列标准溶液稀释至不同浓度，按 1.2
节的色谱条件分别进样，以峰面积的自然对数为纵坐标 ( y ) ，以进样量的自然对数为横坐标( x ) ，进行线性回归 计算，得标准曲线回归方程。 1.5 方法学考察
在 1.2 节的色谱条件下，将配制好的系列标准溶液分别 进样并计算，得标准曲线回归方程和最小检出限，见表 1。
表 １ 标准曲线、线性范围及检出限 Table 1 Linear regression equations, linear ranges and detection
limits of glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3, and GF4
由于单、双糖、低聚糖类物质没有紫外吸收，对 其含量测定通常采用高效液相色谱 - 示差折光检测器 (HPLC-RID)的方法和纸层析色谱分析法。目前的报道[8-11] 中，多以示差检测器测定，但此方法灵敏度低，系统 平衡时间长，对工作环境要求苛刻，要求恒温、恒流 速、且无法采用梯度洗脱。蒸发光散射检测器( E L S D ) 作为新一代通用型质量检测器，它对有质量的物质都能 进行检测，而不需其分子结构中具有发光基团。这在 一定程度上弥补了其他 HPLC 检测器的不足，特别是检 测无电子和分子吸收光谱信号的化合物时，显示出一定 的优越性。其原理是将样品与流动相的混合物通过喷射
the carrying gas was air. Under the above conditions, all glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3 and GF4 could be well separated, and the spiked recoveries were 97.62% – 99.55% with a RSD less than 3% (n = 5). This method is accurate, rapid, simple and
高效液相色谱法测定口服液中低聚木糖的含量
中对促 进钙 的吸收有很好 的作用 ｌ ４ ］ 。 目前 。 低聚木 糖
含 量测定主要有 高效液相色谱直 接测定法 ］ 、 高效 液
ｌ ＿ ４ 样 品前处理
１ ． ４ ． １ 水解 前样 品处 理溶液 制备 精密 吸 取 １ ０ ． Ｏ ｍ Ｌ 口服 液 于 已加 入 ７ ０ ｍ Ｌ水 的 １ ０ ０ ． ０ ｍＬ容 量瓶 中 ， 摇匀 ， 加 无水 乙醇 ， 边加边 摇 动 ， 用无水 乙醇定 容至 刻度 ， 摇匀， 转 入 离 心 管 离 心 ５ ｍ ｉ ｎ （ ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） 。取 上 清 液 ， 标 记 为 。取 溶 液５ ． Ｏ ｍＬ于 １ ０ ． Ｏ ｍ Ｌ容量瓶 中 ， 流动相 定容 至刻 度 ， ０ ． ４ ５ １ ｘ ｍ尼 龙膜 过滤 ， 即得 水解 前样 品处理 溶液 Ｋ ， 。 １ ． ４ ． ２ 水解 后样 品处 理溶液 制备 精 密 吸取 溶 液 １ ０ ． Ｏ ｍ Ｌ于 ２ ５ ． Ｏ ｍ Ｌ 比 色 管
淀除去 ， 然后用 ４ ． Ｏ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ硫酸水解 ， 高效液相色谱测定 ， 外标 法定 量。方法线性 范围为 ０ ． １ ４ ． Ｏ ｍ ｍ Ｌ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ） ； 回收率 ： 酸
解前为 １ ０ ０ ． １ ～ １ ０ ３ ． １ ％， 相对标准偏差 Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ０ ％（ ｎ ＝ ６ ） 。酸解后为 ８ ９ ． ８ ～ ９ ５ ． ２ ％， 相对 标准偏 差 Ｒ Ｓ Ｄ为 ２ ． ２ ％（ ｎ ＝ ６ ） ； 检
１ ． ３ 标准 溶液 的配 制
用纯化 水 准确 配制 每 ｌ ｍ Ｌ含木 糖 ｌ Ｏ ｍ ｇ的储 备
液， 然后 用 流动 相逐 步稀 释为 ０ ． １ ｒ ｃ ｔ ｍ Ｌ 、 ０ ． ５ ｍ ＃ｍ Ｌ 、 １ ． Ｏ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 ２ ． Ｏ ｍ ｇ ／ ｒ ｎ Ｌ、 ４ ． ０ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ系列梯度对照溶液。
高效液相色谱法测定乳粉中低聚果糖的研究
Ｌ ａ－ ｎ Ｓ Ｎ ｉｇｈ ｉＺ Ｎ ｈ—ｕ ， Ｕ Ｃ ｕ ， ＨＵ Ｊｎｐｎ Ｕ Ｙ ｎｊ ， ＨＥ Ｇ Ｑ ｎ—ａ， ＨＡ Ｇ Ｚ ｉ ｏ Ｌ ｈ ｎ Ｚ ｕ —ｉｇ ｕ ｇ
（ ｈ ｊａ ｈ ａ ｇ Ｓ ｎ ｕ Ｃ Ｌ ｄ ， ｈｊａ ｈ ａ ｇ ０ ０ ７１ Ｃ ｉ ａ Ｓ ｉ ｚ ｕ ｎ ａ ｌ Ｏ． ｔ ．Ｓ ｉ ｚ ｕ ｎ ５ ０ ， ｈ ｎ ） ｉ ｉ
【 】宁 正 祥 ．食 品 成 分 分 析 手 册 【 ．北 京 ：中 国 轻 工 业 出 版 社 ， １ Ｍ】
ｌ９ ． ０ ． ９ ８ ５ ０
【 】郑 建 仙 ．功 能 食 品 （ １卷 ） Ｍ１ ２ 第 ［ ．北 京 ： 国 轻 工 业 出 版 社 ， 中
ｌ ９ ８ ９ ９ ８
２ｏ 年第 ３ ｏ２ 。卷第 ５ （ 期 总第 ｌ。 ） ５期
标 样 ，提 取 液 依 次 上 机 测 定 ，结 果 列 入 表 ２ 。
可 见 回 收 率 为 ９ ． ％ ～ ８ ５ ，计 算 得 到 变 异 系 数 （ Ｖ） ４０ ９ ．％ Ｃ
为 １７ ％ 。 ．４
表 ２ 回收 率 及 精 密度 试 验
图 １ 乳 酮 糖 色 谱 图 参 考 文 献：
收 稿 日期 ：２ ０ ０ ２—０ ６—０ ８
糖 、蔗 糖 、 蔗 果 三 糖 、蔗 果 四糖 和 蔗 果 五 糖 （ 果 三 糖 、蔗 蔗 果 四糖 和 蔗 果 五 糖 统 称 为 低 聚 果 糖 ） 。 研 究 表 明 ，低 聚 果 糖 是 一 种 膳 食 纤 维 ，能 量 值 很 低 ，摄 入 人 体 后 不 易 致 肥 胖 ．在 肠 道 内 不 易 消 化 吸 收 到 大 肠 而 被 双 歧 杆 菌 利 用 ， 是 双 歧 杆 菌
保健食品中异麦芽糖低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定
保健食品中异麦芽糖低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定1.范围本方法规定了保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法。
本方法适用于保健食品（糖浆、糖粉、饮料、奶粉）中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定。
本方法最低检出量：异麦芽糖2μg；潘糖5μg；异麦芽三糖10μg；蔗果三糖(GF2)5μg；蔗果四糖(GF3)5μg；蔗果五糖(GF4)10μg；棉籽糖20μg；水苏糖30μg。
2.原理试样除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2柱分离，示差检测器测定，外标法定量。
3.试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。
3.1乙腈（色谱纯）。
3.2无水乙醇。
3.3麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖(含量≥98%)3.4低聚果糖（总含量≥96%，其中GF238%，GF351%，GF47%）。
3.5麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液：分别称取麦芽糖10.0mg，异麦芽糖15.0mg，潘糖9.0mg，麦芽三糖15.0mg，异麦芽三糖12.0mg，用水溶解，并定容至1.0mL。
将此溶液逐级稀释成下列浓度：标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖（mg/mL）10.500.750.450.750.602 1.00 1.500.90 1.50 1.203 2.00 3.00 1.80 3.00 2.40410.0015.009.0015.0012.003.6低聚果糖标准溶液：精密称取含GF238%、GF351%、GF47%的低聚果糖标准品0.0500g，用水溶解并定容至2.50mL。
将此液逐级稀释成下列浓度：标准溶液名称：GF2、GF3、GF4（mg/mL）1 1.50 2.000.302 3.00 4.000.603 4.50 6.000.904 6.008.00 1.2057.5010.00 1.403.7棉籽糖、水苏糖标准溶液：精密称取棉籽糖0.0400g，水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。
高效液相色谱法测定调制乳中低聚果糖的含量
中图分类 号：Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． ７
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ７ ５ ０ ６ ／ ｒ ｙ ｋ ｘ ｙ ｊ ｓ １ ６ ７ １ － ５ １ ８ ７ － ２ ０ １ ５ ０ ３ ０ ０ ６
文献标志码 ：Ａ
文章编号 ：１ ６ ７ １ — ５ １ ８ ７（ ２ ０ １ ５ ）０ ３ ． ０ ０ ２ ３ — ０ ３
Ｋｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ： ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｆ ｒ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ ＨＰ Ｌ Ｃ ） ； ｆ ｒ ｕ ｃ ｔ ｏ ｏ ｌ ｉ ｇ ｏ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ； ｍｏ ｄ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｍｉ ｌ ｋ
摘
要 ： 建 立 调 制 乳 中低 聚 果 糖 高 效 液 相 色 谱 的 测 定 方 法 。 采 用 水 作 为 提 取 剂 ， 乙腈 沉 淀 蛋 白， 氨 基 色 谱 柱 分
离 ，流动 相 为７ Ｏ ％乙腈溶 液 ，示 差检 测器 检 测 。每 １ ０ ０ ｇ 调 制乳 中低 聚 果糖 添加 量 为２ ０ ～５ ０ ０ ｍｇ 时 ， 回收率 为
Ｗ ＡＮ Ｐｅ ｎｇ ，ＺＨ ＡＯ Ｚｈ ｅ ｎ， ＬＩ Ｕ Ｃｈ ｕｎ ｘｉ ａ ， ＹＵ Ｅ Ｈｏｎ ｇ， ＬＩ Ｃｕｉ ｚ ｈｉ 木 ＳＨＡ Ｏ Ｊ ｉ ａ ｎｂｏ
，
（ Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍｏ ｎ ｇ ｏ ｌ ｉ ａ Ｙｉ ｌ ｉ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ Ｇｒ ｏ ｕ ｐ Ｃｏ ． Ｌｔ ｄ ． ， Ｈｏ ｈ ｈ ｏ ｔ ０ １ ０ １ １ ０ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
ａ ＮＨ２ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ７ ０ ％ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ｉ ｎ ｗａ ｔ ｅ ｒ ａ ｓ ｈｅ ｔ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｆ ｒ ｕ ｃ ｔ ｏ ｏ ｌ ｉ ｇ ｏ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ａ ｔ ｆ ｏ ｕ ｒ ｓ ｐ ｉ ｋ ｅ ｄ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ２ ０ ａ ｎ ｄ ５ ０ ０ ｍｇ ／ １ ０ ０ ｇ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ８ ０ ． ２ ％ ｔ ｏ １ ０ ７ ． １ ％． Ｔｈ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｔ ｏ ｆ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ２ ０ ｍｇ ／ １ ０ ０ ｇ ． Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｈｏ ｔ ｄ ｉ ｓ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ， ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｈｅ ｔ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｆ ｒ ｕ ｃ ｔ ｏ ｏ ｌ ｉ ｇ ｏ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｉ ｎ ｍｏ ｄ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｍｉ ｌ ｋ ．
高效液相色谱法测定低聚半乳糖的含量
.7 ᬢ䬠NJO (c) 糖浆色谱图
2.5
精密度实验
表3 精密度实验
次数 1 2 3 4 5 6 7 平均值 RSD(n=7)/%
含量/(mg/g) 葡萄糖 半乳糖 13.9 14.1 13.4 14.1 13.1 13.8 13.9 13.8 2.72 8.11 7.86 8.54 8.79 8.73 8.38 8.12 8.36 4.16 乳糖 低聚半乳糖 397 394 406 403 405 403 397 401 1.16 21.7 20.7 19.0 20.4 21.1 21.3 20.3 20.6 4.26
见表1。从表中得知，加1 mL酶液时60 min可酶解 完全，加2 mL酶液时45 min可酶解完全，加3 mL酶 液时30 min可酶解完全。考虑到β-半乳糖苷酶的 成本较高，而酶解时间差别不大，因此酶解条件 选择1 mL酶液酶解60 min。此酶解条件应用到其他 样品中时应根据其样品中乳糖和低聚半乳糖的含 量而适当调整。
2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL于10 mL容量瓶 中，用水稀释定容，分别吸20 μL注入高效液相 色谱仪，以葡萄糖、半乳糖和乳糖的浓度为横坐 标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 1.2.5 色谱条件 色谱柱：氨基柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；柱温：30 ℃；流动相：乙腈:水 =70:30；流速：1.0 mL/min；示差折光检测器内 温：40 ℃；进样量：20~50 μL。 1.2.6 计算[1] GOS=k×(GB-GA-GL)………………………(1) 式中：GB为加入半乳糖苷酶水解反应管中的 半乳糖含量，%； GL为样品中乳糖水解产生的半乳糖含 量，为乳糖含量除以系数1.9，%； GA为游离半乳糖含量，%； k=(180+162n)/(180×n) 式中：n为低聚糖的聚合度。 2 2.1 结果与分析 沉淀剂的选择 分别用乙腈和亚铁氰化钾、乙酸锌做沉淀 蛋白质的实验。乙腈沉淀蛋白质时，比例不好控 制，蛋白质沉淀不完全，滤液放置一段时间又会 有沉淀析出，而且乳糖的回收率只有70%；而亚 铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质的效果较好，回收 率也能达到要求。 2.2 色谱条件的选择[2-3] 由于葡萄糖和半乳糖2个峰不易分离，所以在 此法中对氨基柱的柱效要求比分离其他糖类物质 要高。当柱效逐渐降低后，葡萄糖和半乳糖的2个 峰就会重叠，其色谱图见图1。
高效液相色谱法测定低聚果糖的组分
应用于工业 但在国内尚未形成工业化生产∀低聚果
糖的常规分析方法有纸色谱 薄层色谱 气相色谱或
经典离子交换色谱 ∀高效液相色谱法比这些方法
更为简单 快速 准确 因此 在国外应用较多 ∀本
文提出以水为流动相 以 Λ
柱为分析
柱分析低聚果糖 获得了良好的分离效果∀本法可用
于低聚果糖生产过程的质量控制和监测∀
精密度试验
用上述处理方法并在相同的色谱条件下 对 份
样品各取样 Λ 进行测定∀果糖 蔗糖 三糖 四糖 五糖 六糖的变异系数见表 ∀
Ξ 本文收稿日期
修回日期
组分
果糖 蔗糖 低聚果糖
色
谱
卷
表 实验结果 Ταβλε Ε ξ ερι ενταλ ρεσυλτσ 样品
本底量
加标量
测得总量
样品
实验部分
仪器与试剂
美国
公司 型高效液相色谱仪 配
型 示 差 折 光 检 测 器 Λ
色谱柱
数据处理机 泵
进样器 柱温控制系
统∀低聚果糖 北海恒威生物化学有限责任公司提
供 低聚果糖质量分数为
双蒸水∀
色谱条件
色谱柱 Λ
司
≅
分析柱 美国
公
柱温 ε 流动相 水
流速
柱前压
衰减 ≅ 池
温为室温 ∗ ε 进样量 品色谱分离图见图 ∀
定性用 与本实验室使用的标准品进行对比 确认标
准图谱中的三糖是蔗果三糖
四糖中后面较
大的峰是蔗果四糖
五糖中后面较大的峰是
蔗果五糖
六糖中后面较大的峰是蔗果六糖
∀ 三糖 四糖 五糖 六糖标准品的相对含量可
以由峰面积归一化法直接由色谱工作站输出的数据 得到 通过外标法 可求出样品中与标准品对应的糖 的含量∀低聚果糖的含量是三糖 四糖 五糖 六糖的 总和∀
食品中低聚果糖的高效液相色谱检测法研究
分析与检测在食品生产领域，低聚果糖（FOS）成为一种新型甜味剂，在乳制品、糖果、饮料中广泛应用。
检测食品中FOS的含量，对于控制食品质量具有重要意义。
1 材料和方法1.1 材料来源本研究材料是从市场上购买得到的某品牌奶粉和米粉。
1.2 仪器试剂仪器主要有：HPLC仪，蒸发光散射检测器，NH2色谱柱，离心机，超声波清洗器、电子天平等。
试剂主要有：GF2标品、GF3标品、GF4标品，乙腈，石油醚，乙酸锌与六氰合亚铁酸钾等。
1.3 溶液配制配制FOS标准溶液：取3个10 mL 容量瓶，分别精准称量GF2、GF3、GF4标品各200 g，将标品置于瓶内，加入超纯水直至刻度线，然后将其液稀释到不同浓度，分别是0.5、5、50 mg/mL，然后超声处理，时间为 3 min，经0.5 μm的滤膜过滤。
再取等量配好的标准溶液，置于容量瓶中，加入超纯水直至刻度线，重复超声、过滤的处理步骤，待检。
1.4 样品预处理脱脂。
取2个100 mL烧杯，精准称量奶粉、米粉各3.0 g，将其置于烧杯内，放在通风橱中；先加入50 mL 石油醚，进行超声处理，时间为20 min 再离心处理，转速为4 800 r/min、时间5 min；最后去除上层清液，留下沉渣在通风橱内挥发，于60 ℃下干燥，研磨为粉末状待检。
提取。
取样本粉末2.0 g，加入 20 mL蒸馏水，先进行超声提取，温度为60 ℃，时间15 min；再离心处理，转速为8 000 r/min，时间为5 min；取上层清液置于25 mL容量瓶内。
脱蛋白。
采用亚铁氰化钾-乙酸锌法，对样品溶液进行脱蛋白处理，然后离心，转速为8 000 r/min、时间5 min；取上层清液置于25 mL容量瓶内，加入蒸馏水定容。
1.5 HPLC色谱条件色谱柱是NH2分析柱，4.6 mm×300 mm，5 μm。
使用乙腈和水作为流动相，实施梯度洗脱，洗脱程序是：①前20 min，70%～65%的乙腈，30%～35%的水；②第20～22 min，65%的乙腈，35%的水；③第22～25 min，65%～70%的乙腈，35%～30%的水；④第25～28 min，70%的乙腈，30%的水。
高效液相色谱法测定多糖
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的多糖分析方法，其测定多糖的步骤如下：
1. 样品制备：将待测多糖样品加入适量的水中，加热至溶解，过滤去除杂质，得到待测样品溶液。
2. 色谱柱选择：根据待测多糖的性质和分子量，选择合适的色谱柱，如凝胶过滤色谱柱、离子交换色谱柱、亲和色谱柱等。
3. 流动相选择：根据色谱柱的选择，选择合适的流动相，如纯水、缓冲液、有机溶剂等。
4. 样品进样：将待测样品溶液注入进样器中，通过自动进样器或手动进样器将样品进入色谱柱中。
5. 色谱分离：将进样器中的样品通过色谱柱进行分离，不同的多糖分子会在不同的时间点出现峰值。
6. 检测：通过紫外检测器或荧光检测器等检测器检测出不同峰值的多糖分子，得到各个多糖分子的峰面积或峰高度。
7. 数据分析：根据峰面积或峰高度计算出各个多糖分子的含量或相对含量，得到多糖的测定结果。
需要注意的是，不同的多糖分子可能需要不同的色谱柱和流动相，因此在测定多糖时需要根据具体情况进行选择。
同时，样品制备和进样过程中也需要注意避免污染和样品损失。
麦芽低聚糖工艺研究中高效液相色谱的应用
麦芽低聚糖工艺研究中高效液相色谱的应用
吴红京;唐根源;李昊;李志达
【期刊名称】《福建分析测试》
【年(卷),期】1997(000)004
【摘要】本文介绍高效液相色谱在双酶协同作用酶解制取麦芽低聚糖工艺研究中的应用。
作者以C<sub>18</sub>柱为分离柱,水作流动相,利用折光检测器来检测麦芽低聚糖产品中的七种糖,同时评估了补加酶量与麦芽低聚糖中麦芽三糖至六糖含量的关系,并测定了二次确认实验中麦芽低聚糖产品中各糖的含量。
【总页数】3页(P761-763)
【作者】吴红京;唐根源;李昊;李志达
【作者单位】[1]中国科学院福建物质结构研究所;[2]福州大学生物与食品科学工程系;[3]福州大学生物与食品科学工程系福州 350002;[4]福州 350002
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7
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麦精是从大麦和麦芽中通过酶解提取的 纯 天然营养物质。由于其含有丰富的营养物质及 特殊的风味，已被广泛应用于乳品、饮料及啤 酒酿造中 [1-2] 。但其原料中含有的β-葡聚糖溶 于水后会增加料液的黏度，而不利于料液的过 滤，所以在麦精的生产过程中会对其中的β-葡
聚糖进行降解 [3]。 β-葡聚糖属非淀粉多糖类，是以β-(1-3) 和β-(1-4)混合连接的葡萄糖聚合物[4]。经酶解后 会形成一系列由β-1,4糖苷键连接而形成的低聚 糖 [5]。而且具有重要的生理功能[6-7]。Johansson等 (2006)研究发现β-葡聚糖酶解后其中纤维三糖和
*通讯作者 收稿日期：2012-03-06 基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金和上海科委对本研究的资助课题(10dz1200904)。 作者简介：吕宝龙(1987—)，男，陕西宝鸡人，硕士研究生，研究方向为谷物化学。
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食品安全与检测
高效液相色谱法测定麦精中的 低聚糖
吕宝龙，陈如琪，卢艳花，刘少伟* (华东理工大学生物工程学院，上海 200237)
摘要 ： 采用高效液相色谱法对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行了定量测定研究 ， 最终确定 的最佳分析方法为 Carbomix H-NP10 ： 5% 分析柱 ； 示差折光检测器 55 ℃ 柱温 ； 流动相 ： 2.5 mmol/L H2SO4水溶液；流速：0.5 mL/min；进样量：20 µL。该方法精密度RSD＜2%，回收率＞ 97%。在此色谱条件下15 min内完成了三糖和四糖的分离，结果比较理想。研究表明此新建方 法准确而快速，并能适用于绝大部分食品中低聚糖的测定。 关键词：麦精；高效液相色谱法；纤维三糖；纤维四糖 中图分类号：TS 207.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)10-0257-03
Abstract: HPLC was established to determine cellotriose and cellotetrose in malt extract. The final chromatographic conditions are as follows: Carbomix H-NP10: 5% chromatographic column with refractive index detector, elution influent is 2.5 mmol/L sulfuric acid solution, flow rate 0.5 mL/min and injection volume 20 µL. The repeatability relative standard deviations of this method is below 2% and the recovery is over 97%. A satisfied result is obtained under this chromatographic conditions, and the whole separation can be finished within 15 min. The results showed that this new HPLC analysis method is not only correct but also fast enough to be used to determine most kinds of foods containing these oligosaccharide. Key words: malt extract; HPLC; cellotriose; cellotetrose
纤维四糖占所有低聚糖的90%以上[8-9]。所以准确 测定其中纤维三糖和纤维四糖含量对研究麦精的 营养品质及应用具有重要意义。 目前，测定碳水化合物的主要方法包括气 相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、配有脉冲电 流检测器的高效阴离子交换色谱(HPAEC-PAD) 等 [8-11] 。气相色谱法虽可测定糖的组成，但必须 对糖进行衍生化才可检测，其检测步骤繁琐。 HPAEC-PAD法虽然准确但对设备要求较高。 HPLC相对于其他2种比较简单、快速、准确。所 以本实验尝试利用葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶专一 性酶解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键Байду номын сангаас特性除去麦 精中的麦芽低聚糖后[12]，运用HPLC法，以示差检 测器对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行测定。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 保益加麦精：上海英联食品饮料有限公司； 麦芽三糖、麦芽四糖标准品(以此为对照测定麦精 中纤维三糖和纤维四糖的含量) [8-9]：Sigma公司； 葡萄糖淀粉酶、普鲁兰酶：诺维信公司；其他试 剂均为分析纯。 1.2 仪器与设备 Waters600高效液相色谱仪：配有自动进样 器、示差检测器，Waters公司；旋转蒸发仪：上 海亚荣生化仪器厂；离心机：上海安亭科学仪器 厂；0.22 µm微孔滤膜。 1.3 试验条件 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Carbomix H-NP10： 5%(10 µm，7.8 mm×300 mm)，检测器：示差检 测器，流动相：2.5 mmol/L H2SO4水溶液，柱温： 55 ℃，进样量：20 µL，流速：0.5 mL/min。 1.3.2 样品制备 精确称取10 g保益加麦精溶于 100 mL去离子水中，调节pH至4.0后，分别加入50 µL的葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶，在60 ℃下糖化 反应10 h，进行彻底糖化。糖化结束后沸水浴5 min灭酶后在糖化液中加入3倍于体积的95%的乙 醇，放入4 ℃的冰箱，静置24 h后取出，在4000 r/min转速下离心30 min，除去蛋白和多糖。反复 2~3次 。收集上清液旋转蒸发定容至100 mL，经 0.22 µm滤膜过滤后精密吸取上述溶液20 µL注入 液相色谱仪，记录峰面积。 1.3.3 标准溶液的配制 精确称取10 mg麦芽三糖 和麦芽四糖2种标准品溶于10 mL去离子水中，配
Determination of oligosaccharide in malt extract by HPLC method
LV Bao-long, CHEN Ru-qi, LU Yan-hua, LIU Shao-wei*
(East China University of Science and Technology, Shanghai 200237)