黄瓜绿斑驳花叶病毒发生概况、检测鉴定及防治

黄瓜绿斑驳花叶病毒发生概况、检测鉴定及防治纽内姆（北京）种子有限公司齐中举（病理助理）
1.黄瓜绿斑驳花叶病毒病概况
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)，为烟草花叶病毒属，是西瓜、黄瓜、南瓜等葫芦科作物上的一种毁灭性病害，具有危害严重，致病性强，防止难度大等特点。

1.1危害症状：CGMMV 侵染许多葫芦科作物，引起植物叶片斑驳、系统性花叶及果肉恶化等症状。

在黄瓜上, 最初新叶上出现黄色小斑点, 随后逐渐发展为花叶、斑驳和浓绿泡状突起等症状, 叶脉间褪色呈绿带状。

在西瓜上，初期茎端幼叶呈现淡黄色花叶，随后出现浓绿凹凸斑，随叶片老化症状减轻；果实表现有浓绿圆斑，中央有坏死点，种子周围的果肉呈赤紫色水渍状，成熟时变为暗褐色且出现空洞。

在甜瓜上，受害的新叶上出现黄斑，随叶片老化症状减轻；成株侧枝的叶片呈现不定形或星状黄化叶，生长后期顶部叶片有时产生大型黄色轮斑；幼果受害后有绿色花纹，后期为绿色斑，或在绿色斑中央出现灰白色斑。

在黄瓜叶片上引起色斑、水泡及变形，使植株矮化、结果延时，果实大部分黄化或变白并产生黑绿色水疱状的坏死斑，产量损失达15%；可延缓黄瓜植株的生长发育，甚至导致不孕。

1.2发生分布：黄瓜绿斑驳花叶病毒病20世纪30年代在欧洲国家发生，60年代因黄、西瓜和瓠瓜而传入印度和日本，80年代传入台湾。

2002年中国从日本引进种苗中截获，2004年厦门从日本进口的南瓜种子上检测到CGMMV，2005年中国辽宁省盖州市感染CGMMV 在我国辽宁盖州地区造成西瓜大面积毁灭,受害面积达333 hm2，约13hm2绝收，CGMMV 现在中国部分地区已造成西瓜毁灭性的损失。

农业部发布的第788 号公告，郑重宣布将CGMMV 确定为全国农业植物检疫性有害生物，属国家三类检疫性病害。

目前，CGMMV 在中国主要分布于辽宁、河北、湖北、广东和山东，发生率达80%，河南、四川、江西、上海、新疆、陕西及宁夏等省份还未发现。

1.3传播方式：该病毒主要侵染甜瓜、西瓜、黄瓜及瓠瓜等多种葫芦科作物，主要通过种子、土壤、机械摩擦、田间农事操作、植物间接触、叶片接触、啮齿动物( 如兔子、小白鼠等) 的粪便、栽培营养液、河水、灌溉水、被污染的包装容器、用作肥料的
牛粪、菟丝子等方式进行传播，另外，有学者认为苋色藜、马齿苋等杂草寄主也为病毒的定殖提供了可能。

黄瓜叶甲是可能的传播介体; 但桃蚜和棉蚜不传毒, 被侵染葫芦、瓠子的根际土壤中未发现介体真菌。

根据目前关于种子带毒的研究，西瓜的种子带毒率有24%~100%不等，可能是由于CGMMV 感染西瓜时期不同导致种子感染病毒的程度不同，也可能是CGMMV 毒株的致病力不同引起的，或者和种子材料的新鲜程度也有关系，传毒率2.25%，甜瓜带毒率为93.85%，传毒率2.83%，黄瓜种子收获后一个月检测种传率为8%，保存5个月后种传率降低到0.1%。

土壤带毒率为0~ 3. 5%。

种子传播是该病毒远距离传播的主要方式。

为防止CGMMV 通过种子贸易和远距离调运而扩散，加强种子带毒检测，从源头控制该病害的蔓延，对保护西瓜、甜瓜产业的安全生产具有重要意义。

CGMMV 不同株系体外生物学特性有差异，钝化温度为一般90O C~ 100O C，稀释限点为106~ 107, 常温下病毒侵染力可保持数月, 在土壤中至少存活10个月, 在0O C则可保持数年。

2．黄瓜绿斑驳花叶病毒病的检测鉴定
2.1试剂条检测：现在有Agdia公司生产的试剂条可以对叶片上的病毒进行初步检测。

2.2电子显微镜检测：电子显微镜可检测在土壤及营养液中生长的植物中的CGMMV。

2.3血清学方法检测：DAS- ELISA 及快速免疫滤纸显色法，multi- RIPA 检测，multi- RIPA 检测纯化CGMMV 的最低量为50 ng/ ml，琼脂凝胶沉淀法( Precipitat ion in agar) 和单抗检测法，modified ELISA ( M- ELISA) 检测黄瓜种子，结果比标准ELISA 更灵敏，其灵敏度相当于检测到800 粒健康种子中的1 粒病种子。

就目前的经济条件及操作条件，国内的一般研究单位采用的是DAS-ELISA检测方法。

2.4PCR检测：cDNA杂交检测，6 碱基随机引物或oligo d( T ) 16 进行RT - PCR 检测，免疫诱捕RT- PCR( Immunocapture RT - PCR, IC- RT - PCR) 检测方法, 该方法比DAS- ELISA 灵敏105倍, 比F ( ab，) 2 ELISA 灵敏102倍，高密度乳胶微粒凝集试验( High densitylatex particle agglutination test , HDLPAT ) 、ELISA、RT- PCR 及生物测定( 使用Chenop odium amaranticolor) 检测。

国内的一般研究单位采用的是IC-RT-PCR 随机检测方法。

只有生物测定可用于检测干热处理的种子。

对未处理的种子, RT - PCR 则是一种灵敏的方法, 综合考虑样品制备、检测费用及检测时间等因素,HDLPAT 则是一种快速检测未处理种子的实用方法。

3．黄瓜绿斑驳花叶病毒病的防治
对CGMMV 的防治同其他病害一样, 最根本的要使用无侵染的种苗; 在农事操作中尽量避免病毒经器械等传播, 加强栽培管理, 及时拔除初侵染病株, 销毁病株残体。

3.1种子处理：根据国内对带毒砧木进行药剂消毒、干热处理、干热处理结合药剂消毒、温汤浸种、温汤浸种结合药剂消毒等五种种子处理方法的研究：其中干热处理结合药剂消毒的防效最好, 为100%, 发芽率85.2% , 明显优于其他处理及对照; 其次是干热处理（40O C、24h后72O C、72h）,防效为93. 46%，发芽率85.6%；温汤浸种结合药剂消毒，防效为80. 47%，发芽率87.8%；药剂消毒（10%磷酸三钠溶液浸泡20~ 30min），防效为73. 93%，发芽率90.3%；温汤浸种（55O C，1min），防效为58. 20%，发芽率93.7%。

3.2检疫处置：拔除病株并集中销毁、土壤消毒和轮作等, 采取这些措施后一般可认为已完成了疫情的处置。

其中国内研究表明经焚烧深埋10 个月后的土壤或病残体样本仍可能被检测到CGMMV 核酸的存在, 但已无侵染活性。