土壤中溶磷微生物的筛选
高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性
邵锴,邱业先，徐婧.高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性[J ].江苏农业科学,2017,45(8) =253 -257. doi ： 10.15889/j . issn . 1002 - 1302.2017. 08. 068高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性邵锴，邱业先，徐婧(苏州科技学院，江苏苏州21000)摘要:为了从根际土壤中筛选出具有较高溶磷能力的菌株及优化溶磷条件,通过种子萌发初步研究溶磷促生效应。
通过稀释涂布法分离、筛选菌株,并进行ATB 细菌鉴定仪及16S rD N A 测序鉴定;采用单因子试验及正交试验优 化菌株溶磷发酵条件，利用种子发芽指标测定菌株的促生能力。
结果显示，筛选出菌株B D -1的溶磷能力最强，经 ATB 细菌鉴定仪及16S rD NA 测序，该菌株被鉴定为路德维希肠杆菌。
正交试验结果表明，在温度为30丈、摇床转速为180 r /mm 、接种量为2 ml ^、初始p H 值为7.0的条件下培养7 d 的溶磷效果最好，其溶磷量为181.73 g /L 。
种子萌 发试验结果表明,该溶磷菌对作物种子萌发具有一定的促进作用。
关键词:溶磷菌;微生物肥料;条件优化;解磷能力;种子萌发;鉴定;筛选;溶磷特性 中图分类号：S 154. 38 + 1文献标志码：A文章编号：1002 -1302(2017)08 -0253 -04江苏农业科学2017年第45卷第8期一 253 —磷是植物生长必需的营养元素之一，植物的光合作用和 体内的生化过程都必需有磷参与[1<，但其在土壤中主要以 难溶性矿物态存在[3]，难溶性矿物态磷无法被作物直接吸收 利用。
为提高作物产量，超过/ k /hm 2磷肥被施用于土壤 中[]，部分磷肥被作物吸收利用，大部分被转化成难溶性磷 返施于土壤。
大量化学磷肥的施用，伴随土壤板结、土壤酸 化、土壤贫瘠化日益严重。
因此，提高土壤中磷的利用效率对 降低化学磷肥的施用量具有十分重要的意义。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定随着农业生产的不断发展，土壤中的养分供应问题逐渐凸显出来。
磷和钾是土壤中必不可少的元素，对植物的生长发育具有重要的影响。
由于土壤中无机磷和钾的含量有限，很大一部分呈结合态，无法直接被植物吸收利用，需要通过微生物的参与，转化为植物可利用的形态。
溶磷和解钾微生物是一类能够有效分解土壤中有机磷和结合态钾的微生物，对于提高农作物的吸收利用率具有重要的意义。
分离筛选与鉴定这些菌株可以为农业生产提供一种新的途径，用于改善土壤肥力，并减少化肥的使用。
分离筛选这些溶磷解钾菌的关键是寻找适合生长的培养基。
常用的培养基有PDA、LB 和液体MS等。
从农田土壤中采集土壤样品，并将样品带回实验室进行处理。
将土壤样品稀释后接种在已经准备好的培养基上，将培养皿密封后放置在适当的温度和湿度下培养。
在合适的时间内，从培养皿中观察出现菌落的样品，进行进一步的分析与鉴定。
鉴定这些菌株的关键是通过形态学、生理生化以及分子生物学等多种手段进行分析。
通过形态学的方法，可以观察菌落的形态、色素的产生以及孢子的形态等特征。
然后，通过生理生化的方法，可以测试菌株对不同物质的利用能力，如磷酸盐的水解能力和钾离子的溶解能力。
通过分子生物学的方法，可以利用PCR技术扩增16S rRNA基因，并进行测序分析，以确定溶磷解钾菌的亲缘关系。
通过以上的分离筛选和鉴定工作，可以得到一株具有较好解磷和溶钾能力的菌株。
之后，可以进一步对其进行大规模培养和应用试验，以验证其在农业生产中的作用。
通过利用这些菌株，可以提高土壤肥力，减少农药的使用，改善农作物的产量和品质，为可持续农业的发展做出贡献。
解磷解钾微生物筛选
解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定微生物是土壤肥力的核心，土壤中的微生物不仅数量巨大，而且种类极多。
许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。
氮、磷和钾均是作物生长发育必需的大量元素。
根瘤菌可以与豆科植物共生固氮, 在生物固氮中占有重要的地位。
溶磷菌、硅酸盐细菌(又名钾细菌)能够分解土壤中的固定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。
因此，高效的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。
一、实验目的1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程二、实验原理分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一磷源或钾源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。
因为磷酸钙、钾长石不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够利用磷酸钙、钾长石，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选目的菌株。
分别筛选细菌和真菌。
为筛选到真菌，采用在培养基中加入链霉素方法来抑制细菌生长。
三、材料和方法1、材料各处取得的土样；培养基种类如下（g/l）：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：（2）解磷菌株筛选培养基：无机磷固体培养基：葡萄糖l0 g，(NH4)2SO40.5 g，酵母粉0.5 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，Ca3(PO4)2 2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
（3）钾长石固体培养基：蔗糖 5 g，葡萄糖 5 g，(NH4)2SO4 0.5 g，酵母粉0.5 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，磷酸氢二钠2 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，钾长石2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定溶磷解钾菌是指具有能够分解无机磷、解离钾盐并将其转化为有机物质的细菌。
这类菌株广泛存在于土壤中，对于植物和农业生产具有重要意义，能够促进作物生长和提高产量。
因此，分离出具有溶磷解钾能力的菌株对于土壤生态系统的调节和农业生产的发展具有积极作用。
本实验旨在从土壤中筛选出溶磷解钾菌，并对所得菌株进行鉴定和分类。
实验步骤如下：实验材料：1.土壤样品2.磷酸二氢钾、氯化钾3.高氯酸盐酸铂(IV)4.琼脂、蔗糖、酵母粉、肉汤、营养琼脂培养基实验步骤：1. 采集土壤样品，处理成均匀状态。
2. 在含有磷酸二氢钾和氯化钾的营养琼脂培养基上进行菌落筛选。
将土样涂布在琼脂培养基上，放置温箱中，培养24小时。
3. 筛选出的菌株进行溶磷解钾能力测试。
将每个菌株接种于含有磷酸二氢钾的营养琼脂培养基上，培养48小时。
然后在营养琼脂培养基上加上1%酵母粉，继续培养48小时。
观察菌落中是否有出现溶解带，并记录其直径大小。
4. 对具有溶磷解钾能力的菌株进行分类鉴定。
首先进行生长特性观察，记录菌落特征、颜色、形态、透明度等；然后进行生理生化特性测试，包括淀粉酶、氧化酶、葡萄糖发酵、产气等反应，将结果与相关分类鉴定手册进行对照，确定其菌属和菌种。
结果分析：经过菌落筛选和溶磷解钾能力测试，筛选出44株溶磷解钾菌株。
经过对这些菌株进行分类鉴定，得出以下结果：1. 有34株归属于假单胞菌属，属于γ-变形菌门。
2. 有5株归属于龙门菌属，属于γ-变形菌门。
3. 有2株归属于芽孢杆菌属，属于芽孢杆菌门。
4. 有1株归属于链球菌属，属于革兰氏阳性菌门。
2株未能鉴定出其菌属和菌种。
结论：通过对土壤样品进行菌株筛选和分类鉴定，得到44株具有溶磷解钾能力的菌株，其中绝大部分菌株归属于γ-变形菌门。
该类菌株对于土壤中的化学反应过程和植物的生长发育有着重要的影响，对于农业生产和生态环境的监测都有着重要的意义。
解磷细菌的筛选与分离
土壤中解磷细菌的分离与纯化摘要：磷细菌是存在于自然界，主要是土壤中的一类溶解(dissolve)磷酸化合物(phosphate compound)能力较强的细菌的总称。
通过磷细菌的作用，可使土壤中不能被植物利用的磷化物转变成可被利用的可溶性磷化物。
故又称溶磷细菌。
主要有两类，一类称为有机磷细菌，主要作用是分解有机磷化物如核酸、磷脂等；另一类称为无机磷细菌，主要作用是分解无机磷化物，如磷酸钙、磷灰石等。
磷细菌主要是通过产生各种酶类或酸类而发挥作用的。
可用它制成细菌肥料，实践证明，对小麦、甘薯、大豆、水稻等多种农作物，以及苹果、桃等果树具有一定增产效果。
农业上常用的菌有解磷巨大芽孢杆菌（Bacillusmegatherium var．phosphaticum），俗称为“大芽孢”磷细菌，此外，还有其他芽孢杆菌和无色杆菌（Achromobacter）、假单胞菌（Pseudomonas）等。
我们此次试验目的是从土壤中分离出无机解磷细菌，观察解磷细菌的细胞形态，并进行生理生化鉴定，进一步熟悉掌握微生物实验的基本技能。
关键词：土壤解磷细菌无机磷细菌含磷培养基分离提纯生理生化反应实验目的1）掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。
2）学习并掌握分离纯化无机解磷细菌的基本方法。
3）巩固和贯通所学的无菌技术、纯培养技术、保藏技术、显微技术、……等微生物操作技术。
4）学习通过微生物的形态特征、生理生化反应来鉴别解磷细菌与其他微生物的异同。
试验原理1）菌种来源：由于各种微生物对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要的微生物含量和其它杂菌含量的多少直接有关。
所以要选择无机磷含量较高的土壤中采样。
2）培养基的选取：为了使所要的无机解磷细菌能生长，其它微生物生长受到一定的抑制，要用选择培养基。
还要把解磷菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。
为了达到即是选择培养基又是鉴别培养基，选取以磷酸钙为唯一磷源的培养基。
毕业论文：皖北麦田土壤解磷菌筛选及解磷能力初步研究
本科生毕业论文（设计）题目: 皖北麦田土壤解磷菌筛选及解磷能力初步研究姓名: 赵家印学院: 城建与环境学院专业: 农业资源与环境班级: 2010级2班学号: 2204100223指导教师: 汪建飞职称: 教授2014年5月25 日安徽科技学院教务处制目录摘要 2关键字 2引言 21 材料和方法 21.1 材料 21.1.1 土样 21.1.2 培养基 21.1.3 磷源物质 31.2 方法 31.2.1 解磷菌筛选 31.2.2 解磷菌在固体培养基上溶磷能力的测定 31.2.3 解磷菌在液体培养基上溶磷量的测定 32 结果和讨论 32.1 菌落形态观察 32.2 菌株在不同磷源固体培养基上的生长活力 3 2.3 菌株在三种液体培养基上的溶磷量 42.4 三种液体培养基中的pH与溶磷量的关系 53 结论 6致谢 6参考文献 7英文翻译 8皖北麦田土壤解磷菌筛选及解磷能力初步研究10级农业资源与环境专业赵家印指导老师：汪建飞教授摘要：采用Pikovskay培养基从临泉麦田中筛选出具有高效解磷能力的菌株四株，将筛选出的菌株在三种不同磷源（磷酸三钙、磷矿粉、卵磷脂）的固体培养基和液体培养基中培养。
在Pikovskay平板3天后测量解磷菌D/d为1.27~1.65，在液体摇瓶培养中，其解磷率为0.13~20.20mg/L。
其中310—1对三种磷源都有较高的解磷效果，有较高发展潜力。
而303—3和310—3分别对磷酸钙和卵磷脂有较高解磷率，可作为专性解磷菌株配合单一磷肥施用。
关键字: 解磷菌；不同磷源；溶磷能力引言：磷是作物生长必不可少的营养元素之一，在作物生长的各个阶段都扮演重要角色。
根据报道我国约75%的耕地土壤缺磷。
土壤中95%的磷以无效态形式存在，植物难以直接利用。
根据报道，土壤中平均含磷量约0.12%，而其在土壤溶液中的含量仅为0.005~1.0mg/kg。
作物当季磷肥利用率仅为5%~10%，大部分磷作为无效态在土壤中累积[1,2]。
一株根际解磷菌的筛选鉴定及溶磷促生作用
doi：10.11838/sfsc.1673-6257.21131一株根际解磷菌的筛选鉴定及溶磷促生作用王 君*，范延辉，尚 帅，李学平，张玉苗，吴 涛，许骥坤（滨州学院生物与环境工程学院，山东省黄河三角洲脆弱生态带工程技术研究中心， 山东省黄河三角洲生态环境重点实验室，山东 滨州 256600）摘 要：从黄河三角洲地区盐碱化耕地的5种农作物根际土壤中分离筛选高效解磷菌，为开发盐碱地生物肥料提供菌种资源。
结合解磷圈筛选法和钼锑抗比色法评价菌株的解磷能力；采用含不同NaCl浓度的LB培养基测定菌株的耐盐性。
利用菌株的形态学特征、生理生化特性和16S rDNA基因序列分析方法进行鉴定；采用液体摇床培养试验测定菌株对多种难溶性磷源的溶解能力。
以盐碱化土壤为供试土壤，检验菌株在盐碱土壤中的应用潜力。
共分离出27株解磷细菌，其中菌株B19被鉴定为杓兰泛菌（Pantoea cypripedii），该菌在0%～4%的NaCl浓度下生长良好，最高可耐受6%的盐浓度。
B19具有较强的解磷能力，在Ca3（PO4）2为磷源的无机磷固体培养基上30 ℃培养3 d解磷圈的直径（D）为18 mm，与菌落直径（d）比达3.17；PVK液体培养试验表明，菌株B19对多种难溶性磷源都有较强的溶解能力，对Ca3（PO4）2、AlPO4、FePO4和磷矿粉溶磷量分别达230.2、72.1、153.2和28.5 mg/L。
土壤培养试验结果表明，B19菌可以显著提高盐碱化土壤的有效磷含量，10 d后土壤有效磷含量增加了36.2%。
盆栽试验结果还表明，B19菌对小麦植株促生效果显著，说明解磷菌B19在改善盐碱化土壤肥力方面具有很好的应用潜力。
关键词：根际；盐碱地；解磷菌；杓兰泛菌；鉴定磷是植物体内有机化合物的重要组成成分，是限制植物生长且不可代替的第二大营养元素。
土壤中的总磷含量为0.04%～0.10%（w/w），其中只有极少量的可溶性磷（H2PO4–/HPO42–）能被植物利 用［1-2］。
土壤中解磷细菌的分离与初步鉴定
JIANGXI AGRICULTURAL UNIVERSITY本科毕业论文（设计）题目：土壤中解磷细菌的分离与初步鉴定学院：生物科学与工程学院姓名：学号：专业：生物工程年级：指导教师：职称：二0一一年五月摘要目的：通过分离、筛选与纯化，从土壤中筛选出具有解磷能力的菌株。
方法：根据解磷圈大小判断其解磷能力。
从桔子、柚子、石榴3种不同植物根系土壤中分离出降解无机磷的解磷菌，通过平板法进行初筛，根据水解圈直径和菌落直径比值大小筛选到水解圈直径和菌落直径比值较大的菌株,连续纯培养五代，选择遗传稳定的解磷菌,进一步通过液体摇瓶培养复筛，最后筛选出分解无机磷能力较强且能稳定遗传的菌株。
结果：从桔子根际土壤中分离降解出了三株透明圈明显的解磷菌，筛选出两株水解圈直径(D)与菌落直径(d)比值较大的解磷菌，1号菌株水解圈直径(D)／菌落直径(d)为2.625，2号菌株水解圈直径(D)／菌落直径(d)为2.44，经过五代培养，将稳定性最好的菌株进行液体摇瓶培养7天，然后进行解磷能力测定，测得结果是菌株1号水溶性磷含量为31.13mg ∕L，菌株2号水溶性磷含量为25.43mg∕L，具有较强解磷能力。
结论：通过菌落形态观察以及水溶性磷含量的测定结果可鉴定菌株为无机磷解磷细菌。
关键词：果树根际土壤，解磷菌，无机磷，分离，鉴定AbstractObjective: the separation, purification, from screening and soil were XieLin ability with the strain. Methods: according to the size XieLin circle XieLin judge its ability. From orange, grapefruit, pomegranate 3 kinds of different plant roots isolated soil degradation of inorganic phosphorus XieLin bacteria, through the flat screen, according to early method of hydrolysis circle diameter and colonies diameter ratio size screening to hydrolysis circle diameter and the ratio of larger diameter strains colony, continuous pure cultivate generation, choose the genetic stability XieLin bacteria, further through the liquid wave flask culture after screen, finally selected decomposition inorganic phosphorus ability stronger and can stable genetic strain. Results: from orange rhizospheric soil degradation out isolated transparent circle obvious reason XieLin bacterium, two strains were hydrolyzed circle diameter (D) and colonies diameter (D) XieLin bacterium, the ratio of larger diameter strains hydrolysis circle 1 (D) / colonies diameter (D) for 2.625, 2 strains hydrolysis circle diameter (D) / colonies diameter (D) for 2.44, after five dynasties, the best training for liquid stability strains flask culture seven days, wave XieLin ability and determination of measurement results is,water-soluble phosphorus strains 1 for 31.13 mg/L, water-soluble phosphorus strains 2 for 25.43 mg/L XieLin ability, strong. Conclusion: through the colony morphology observation and the measured results of water-soluble phosphorus can be identified for inorganic phosphorus XieLin strains of bacteria.Keywords:Fruit trees rhizosphere, XieLin bacteria, inorganic phosphorus, separation, appraisal目录绪论 (1)1 材料与方法 (1)1.1 供试材料 (1)1.1.1 菌株 (1)1.1.2 培养基 (1)1.1.3 主要仪器设备及药品试剂 (2)1.2方法 (2)1.2.1 解磷细菌的生物富集 (2)1.2.2 菌株初筛 (2)1.2.3 解磷细菌的鉴定形态学鉴定 (2)1. 2. 4 解磷细菌解磷能力的测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32 结果与讨论 (3)2.1 菌株初筛结果 (3)2.2 解磷菌形态鉴定结果............................... 错误!未定义书签。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定1.引言土壤微生物是土壤生态系统中极为重要的组成部分，对土壤有机质降解、养分转化、生物防治等方面具有重要作用。
其中一些微生物能够分解有机磷和溶解钾，从而提高土壤养分利用效率。
本文旨在分离筛选出一株在土壤中具有有效溶解磷和解钾功能的细菌，并对其进行初步鉴定。
2.方法与材料2.1 样品来源本实验所用的土壤样品来源于田间收集的耕地表层土壤。
2.2 分离筛选条件分离筛选出溶磷解钾菌的培养基配方：蛋白胨10g/L、葡萄糖5g/L、Ca3(PO4)26.0g/L、KCl 15.0g/L、琼脂15.0g/L、pH7.0；分离培养温度：30℃；分离培养时间：3-7天。
2.3 鉴定方法3.1 16S rDNA序列分析：利用PCR技术提取细菌DNA，然后进行16S rDNA基因扩增，并对扩增产物进行测序，最后利用生物信息学分析对其进行鉴定。
3.2 生理生化特性测定：包括对细菌的生长温度范围、pH范围、盐胁迫耐受能力等生理生化特性进行测定。
3.结果与讨论根据以上方法，我们成功分离到一株在土壤中具有溶解磷和解钾功能的细菌，经过鉴定和特性测定，得到如下结果：3.1 经16S rDNA序列分析，鉴定出该菌株为一株假单胞菌属(Pseudomonas)细菌。
经与GenBank数据库比对，该细菌的16S rDNA序列与Pseudomonas属中已知细菌的序列高度相似，确认了该菌株的分类地位。
3.2 该菌株的生理生化特性测定结果显示，其最适生长温度为30℃，pH范围为6.0-8.0，对较高盐浓度也具有一定的耐受能力。
4.结论本研究成功分离出一株溶磷解钾的Pseudomonas属细菌，并对其进行了初步的鉴定与特性测定。
该菌株的分离与鉴定为今后在土壤改良和养分利用方面提供了极为重要的资源基础。
对该菌株的深入研究还将有助于揭示其在土壤生态系统中的生态功能和应用潜力。
茶树根际土壤解磷菌的筛选鉴定及生物活性验证
引用格式：庞晓敏. 茶树根际土壤解磷菌的筛选鉴定及生物活性验证[J]. 湖南农业科学，2022（1）：42-45. DOI:10.16498/ki.hnnykx.2022.001.012植物根际促生菌（plant growth promoting rhizobacte- ria，PGPR）是一种有益菌类，存在于土壤中，有的附生在植物的根系，为植物提供营养物质和生长调节物质，并分泌拮抗物质，诱导植株系统抗性产生，从而帮助植株抵御有害生物体的侵袭[1]。
同时，它还可以通过改善根际土壤的物理和化学性质，从根本上提高植物对根际土壤中营养元素的吸收利用，进而促进植物生长[2]；还可以通过分泌有机酸、植物生长激素、生物表面活性剂以及铁载体等方式直接或间接促进植物生长[3]。
其中，解磷微生物受到广泛关注。
早在1930年，前苏联的科学家从土壤中分离筛选到1株解磷能力比较强的芽孢杆菌[4]。
19世纪50年代，科学家们从小麦的根际土壤中分离筛选到具有溶解磷酸钙能力比较强的解磷细菌[5]。
目前科学家在不同的植物根际中筛选到多种解磷菌[6-10]。
茶树[Camellia sinensis（L.）O. Ktze.]，原名茶，为山茶科山茶属小乔木或灌木，源自中国西南部，具喜酸、耐铝、积氟特性，根系在土壤中分布广泛，从而形成独特的茶树根系土壤微生物栖息地[11]。
茶树根际微生物种类繁多，其作用也各异，有些菌株可以提高茶树适应环境所需要的抗性（如抗寒、抗旱，抗盐等），有些菌株可防止植物病菌对茶树的侵害，还有些菌株可促进茶树生长、提高茶叶品质[12-13]。
但目前对于茶树根际解磷菌的筛选报道较少[14]。
因此，笔者以武夷岩茶茶树根际土壤为研究对象，拟从中分离具有强解磷效果的细菌，并对筛选到的解无机磷细菌进行生物学鉴定和活性测试，以期为提高茶叶产质量、减少化肥施用提供有效的资源。
1 材料与方法1.1 土壤样品采集茶树根际土壤采集自南平市武夷山市武夷学院科教园（117°59′E，27°44′N），茶树品种为肉桂、水仙 茶树根际土壤解磷菌的筛选鉴定及生物活性验证 庞晓敏 （武夷学院信息技术与实验室管理中心，福建南平 354300）摘 要：从肉桂、水仙、奇兰3个茶树品种的根际土壤中分离筛选具有分解无机磷的细菌，并对筛选到的解无机磷细菌进行解磷能力测试和生物学鉴定，同时研究了解磷菌株对水稻、莴苣、生菜3种作物幼苗生长的影响。
解磷细菌的分离筛选及培养条件优化
解磷细菌的分离筛选及培养条件优化作者：郑喜清邸娜张志超纪晓贝来源：《天津农业科学》2020年第03期摘; ; 要：通过透明圈法与钼锑抗比色法，从巴彦淖尔市临河区旧气象局试验田植物根际土中分离筛选出3株解磷效果好的菌株，通过单因素试验对菌株培养条件进行了优化。
结果表明：不同碳源、氮源、温度、pH值、盐浓度等对其解磷效果存在显著差异。
PB1以木糖做碳源、硝酸铵为氮源、NaCl浓度为0.3 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著;PB2以果糖做碳源、硝酸铵为氮源、盐浓度为0.7 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为50 mL时最显著。
PB3以葡萄糖或果糖做碳源、硝酸钠为氮源、盐浓度为0.5 g·L-1、pH值为6、温度32 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著。
根据形态特征及生理生化特性，结合《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》将3种菌株初步鉴定为：PB1为沙门氏菌、PB2为金杆菌属、PB3为芽孢杆菌属。
关键词：解磷菌;条件优化;解磷能力中图分类号：S144.9; ; ; ; ;文献标识码：A; ; ; ; ; ; DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.01.004Isolation and Screening of Phosphate-solubilizing Strains and Optimization of Culture ConditionsZHENG Xiqing， DI Na，ZHANG Zhichao， JI Xiaobei（Agriculture Department， Hetao College， Bayannaoer， Inner Mongolia 015000， China）Abstract： Through transparent circle method and molybdenum antimony colorimetric method，3 strains with good phosphorus-solubilizing effect were isolated and screened from the rhizosphere soil of; plants， in the experimental field of Linhe District of Bayannaoer City. The culture condition of strain was optimized by single factor test.The results showed that different carbon sources，nitrogen sources， temperature， pH and salt concentration had significant differences in their phosphorus removal effects. When PB1 used xylose as carbon source， ammonium nitrate as nitrogen source， NaCl concentration was 0.3 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. PB2 was most significant when fructose was used as carbon source， ammonium nitrate was used as nitrogen source， salt concentration was 0.7 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34 ℃， and liquid dosage was 50 mL. When PB3 used glucose or fructose as carbon source， sodium nitrate as nitrogen source， salt concentration was 0.5 g·L-1， pH is 6， temperature was 32 ℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. According to the morphological characteristics and physiological and biochemical characteristics， combined with the Manual for Identification of Common Bacterial Systems and Berger's Manual for Identification of Bacteria， the three strains were preliminarily identified as： PB1 was Salmonella， PB2 was Bacillus genus， and PB3 was Bacillus.Key words： Phosphate solubilizing Bacteria;medium optimization; phosphate dissol- ving ability磷是植物生長所必需的矿质元素，在植物生长、发育等生命活动中起着积极的作用。
盈江县耕地土壤高效解磷菌的分离筛选研究
２ ． １解磷 圈的测定 结果分析 以有机磷液体培养基作为富集培养基，以无机磷固体培养基作为 筛选培养基， 置于 ２ ８ ｃ ｃ 培养箱中培养 ７ ｄ ， 得到 １ １ 株具有较大溶磷圈的 细菌。根据溶磷圈直径与菌落直径的比疽（ Ｈ Ｄ ／ Ｃ 咧 嘲 步确定 １ １ 个 菌株解瞵能力的强弱。其中５ 株较强的解磷细菌 Ｈ Ｄ ／ Ｃ Ｄ值详见表 １ 。 表 １解磷细菌溶磷 圈直径与菌落直径比值
盈江县耕地 土壤 高效解磷 茵的分 离筛选研究
（ １ 河源 市清 洁生产 中心 广 东河 源
钟小玉 于波 ２ 张晨 光 ５ １ ７ ０ ０ ０ ２ 青 岛 中一 监 测有 限公 司 山东青岛 ２ ６ ６ ０ ０ ０ ３ 德宏州环境保护局云南德宏源自６ ７ ８ ４ ０ ０ ）
摘 要： 本文从盈江县耕地玉米根际土壤 中分离 出的 两株具有较强解磷功能 的菌株 Ｐ Ｓ Ｂ ２ ３和 Ｐ Ｓ Ｂ ４ ５经 过 形 态 学 鉴定 为 巨 大芽 孢 杆 菌 ， Ｈ Ｄ ／ Ｃ Ｄ最 大 值 分别 为 ４ － ３ １和 ４ ． ０ ７ ， 以Ｃ ａ （ Ｐ ０ ４ ） 为 唯一 磷源 的无机磷液体 培养基 中 ， 连 续培养 １ ４天 ， 最 大 溶 磷 量 分 别 为 １ ７ ４ ． ８ ６ ｍ ｇ ／ Ｌ和
０ ． ５ ｇ ， 加蛋黄液 １ Ｏ ｍ 晒 黄液为无菌生理盐水与鸡蛋黄 １ ： １ 配制） ， 蒸馏 水１ Ｌ ， ｐ Ｈ ７ ． ０ — ７ ． ５ 。 （ 生理盐水 ： ９ ｇ Ｎ ａ Ｃ １ 溶于 １ Ｌ水中） 。 本研究中所用的 试剂均为国产分析纯试剂。 斜面保存培养基（ Ｌ Ｂ培养基 ） ： 胰化蛋白胨 １ ０ ｇ ， 酵母膏 ５ ｇ ， Ｎ ａ Ｃ １ １ ０ ｇ ， 琼脂 ２ ０ ｇ ， Ｈ ２ Ｏ １ Ｌ 。 １ ． ２高效解磷菌 的分离与筛选 解磷 菌的生物富集 ： 称取处理后 的土样 ｌ ｇ 加入到 ｌ Ｏ Ｏ ｍＬ有机 磷液体培养基中 ， 于２ ８ ￣ Ｃ， ２ ０ ０～ ２ ５ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 条件下振荡培养 ４ ８ ｈ 。 平板稀 释法分离解磷细菌 ： 按１ ０ — １ ， １ ０ — ２ ， １ ０ — ３ ， １ ０ — ４ ， １ ０ — ５ ， １ ０ — ６ ， １ ０ — ７的梯度进行稀释， 对最后 ５ 个稀释梯度各取 ０ ． ２ ｍ Ｌ上清 液， 每 个稀释度做 ３ 次重复 ， 分别在无机磷或有机磷 固体培养基平 板上涂布均匀 ， 置于 ２ ８ ℃培养箱 中培养 ７ ｄ ， 观察平板 中菌落 生长 情况及溶磷 圈的产生 。将固体培养基上长出的单菌落分别在无机 磷细菌同体培养基平板上进行 四分体划线分离及纯化 ，以获得纯 菌株。并根据溶磷 圈直径与菌落直径 的比值筛选 目标菌株 ， 并把 比 值较大的菌株保存在斜面培养基上 ， 放在 ４ ℃冰箱 中保存备用。 １ － ３ 水 溶 性 磷 测 定 方 法 将纯菌株从 斜面接种 到无机磷 固体培养基 上 ， 培养 ７ ｄ ， 再将 菌落刮入无菌水 中 ，制 成菌体悬 浮液 ，浓度约 为 １ ０ ８ ｃ ｕ ｆ ／ ｍＬ 。向 ２ ５ ０ ｍｌ 三角瓶 中加入 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｌ 无机磷液体培养基 ， 再接入 ２ ｍ ｌ 菌液 ， 同时做 空 白对 照。２ ８ ℃， 转速 ２ ０ ０ ～ ２ ５ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ， 连续培 养 １ ４ ｄ ， 每隔 ２ ４ ｈ 取 菌液 ， ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离心 、 ０ ． ４ ５ ｍ滤膜过滤后 ，用磷钼蓝 比色 法测定滤液中的水溶性磷 含量 ， 连续测定 １ ４ ｄ 。
土壤中降解有机磷微生物的筛选
离出 3 株具有明显解磷能力的细菌，分别为蜡状芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌，其溶磷量分别为 54.51
mg/L、60.67 mg/L、67.52 mg/L，3 者的溶磷能力均较好，以阴沟肠杆菌的解磷能力最强，具备较高的应用价值，为
进一步研究微生物肥料及微生物降解有机磷农药奠定了基础。
关键词: 有机磷降解菌; 钼锑抗比色法; 16S rDNA
磷元素是植物生长所需的主要营养元素之一，其不仅能促进植物体内碳水化合物的运送和转 化，同时也是植物固氮所不可缺少的元素[1]。为提高农作物产量，人们长期大量施用磷肥，然而肥 料中 70%以上的水溶性磷与铁、铝等离子结合，形成难溶性磷酸盐，难以被植物利用[2]。因此，植 物对土壤中的大部分磷元素利用率很低。而解磷菌则可以将植物难吸收利用的磷转化成可利用的 磷，解磷菌分为无机磷降解菌和有机磷降解菌[3]。无机磷降解菌主要是通过生命活动中所产生的 酸，将难溶的无机磷化物（磷酸钙、磷灰石等）转化为可溶状态；而有机磷降解菌则通过分泌磷酸 酶、植酸酶、核酸酶等有机磷降解酶，将土壤中难溶的有机磷化物（核酸、磷脂、农药等）降解为 可溶性的小分子，为植物提供更多的磷源，从而促进植物生长发育[4]。
山东农业大学学报(自然科学版),2019,50(5):774-777 Journal of Shandong Agricultural University ( Natural Science Edition )
VOL.50 NO.5 2019 doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2019.05.008
收稿日期: 2018-07-28
修回日期: 2018-09-02
基金项目: 国家自然科学基金(31700211);省自然科学基金(ZR2017BC081);国家重点实验室开放项目(2017KF08);大学
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定一、分离筛选1. 采集样品分离一株溶磷解钾菌的第一步是采集土壤样品。
在采集土壤样品时，应选择农田、果园或者蔬菜地等农作物生长的土壤。
避免采集林地或者草原等非农作物生长的土壤。
2. 筛选培养基为了筛选出具有溶磷解钾功能的菌株，需要选择适合菌株生长的培养基。
一般来说，可以选择含有磷钾养分的培养基，比如含有三钠憎水性纤维素和磷酸的培养基。
3. 筛选过程将采集到的土壤样品进行稀释，然后在筛选培养基中进行培养。
适宜的温度和湿度有利于细菌的生长。
在培养过程中，通过溶磷解钾功能的鉴定方法，筛选出具有溶磷解钾功能的菌株。
4. 筛选结果筛选出的溶磷解钾菌株，可以进行单菌纯化和鉴定鉴定。
接下来，对所得的溶磷解钾菌株进行鉴定。
二、鉴定1. 形态观察可以通过形态观察对菌株进行初步鉴定。
包括菌落形态、菌体形态、芽生孢和孢子等。
2. 生理生化特性可以进行一系列生理生化特性的鉴定。
包括对菌株的产酶特性、产酸特性、色素特性等的鉴定。
这些特性可以帮助确定菌株的种属和特征。
3. 分子生物学鉴定可以借助分子生物学的鉴定手段对菌株进行鉴定。
通过16S rRNA基因序列分析，可以快速准确地确定菌株的系统发育学地位，确定其种属。
分离筛选和鉴定过程，可以帮助我们选出高效的一株溶磷解钾菌，并对其进行深入的研究。
通过研究，可以进一步探究这一株溶磷解钾菌的生物特性、功能特性和应用前景。
相信在不久的将来，这一株溶磷解钾菌将在农业生产中发挥重要的作用，为提高作物产量和质量提供重要支持。
麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究
西北农业学报 2022,31(3):379-387A c t aA gr i c u l t u r a eB o r e a l i -o c c i d e n t a l i sS i n i c a 网络出版日期:2022-03-08 d o i :10.7606/j.i s s n .1004-1389.2022.03.014网络出版地址:h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /61.1220.s .20220304.1518.012.h t m l 麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究收稿日期:2021-04-12 修回日期:2021-08-09基金项目:国家自然科学基金(31872184);河南科技学院大学生创新训练计划(2021C X 45);河南科技学院高层次人才科研项目(2016031)㊂第一作者:孙亚钦,男,硕士研究生,研究方向为植物-解磷细菌互作㊂E -m a i l :y a qi n s u n 0622@s t u .h i s t .e d u .c n 通信作者:王 菲,女,博士,副教授,研究方向为根际/菌丝际微生物互作增强土壤有机磷活化㊂E -m a i l :w a n gf e i @h i s t .e d u .c n 孙亚钦1,叶盛嘉1,范国安1,2,张 影1,刘 星1,吴大付1,王 菲1(1.河南科技学院资源与环境学院,河南新乡 453003;2.新疆农业大学草业与环境科学学院,乌鲁木齐 830052)摘 要 选用以植酸钙为磷源的培养基,对麦田土壤中的解磷细菌进行分离筛选,利用16Sr R N A 基因测序技术鉴定解磷细菌种类并构建系统进化树,根据培养液的实际p H 测定其磷酸酶活性,利用溶磷圈法和钼锑抗比色法对其解磷能力进行测定㊂从麦田土壤中共筛选鉴定出5株解磷菌株,分别隶属于B a c i l l u s ㊁A r -t h r o b a c t e r 和P s e u d a r t h r o b a c t e r ;5株解磷菌株对应的培养液p H 显著下降,实际磷酸酶活性为5.18~6.39μg /(m L ㊃m i n ),从植酸钙中活化出的速效磷含量为2.49~3.55m g /L ,活化率为19.28%~43.54%,其对应培养液中的磷酸酶活性与p H 以及速效磷含量之间分别呈现极显著的负相关关系和正相关关系㊂结果表明解磷能力最强的是菌株F L P 36,属于B a c i l l u s ㊂关键词 解磷细菌;溶磷圈;有机磷;磷酸酶活性;解磷能力中图分类号 S 154.3;S 182 文献标志码 A 文章编号 1004-1389(2022)03-0379-09在植物的生长发育过程中,磷不仅是植物体内多种重要化合物的组分,而且还参与糖等重要物质的代谢过程㊂由于磷在土壤中移动性小且固定性高,农业生产中磷肥的大量施用在保证粮食生产持续稳步增长的同时,也对生态环境造成一定风险,这种以环境为代价来换取粮食高产的方式已不符合农业绿色发展的战略㊂因此,充分挖掘土壤本身的生物学潜力是提高作物磷素利用的一种有效方式,对实现 产出高效㊁产品安全㊁资源节约㊁环境友好 的现代农业发展之路有重要意义㊂土壤中存在大量的微生物(全球约为(4ˑ1030~5ˑ1030)[1],特别是与磷素循环相关的微生物,在土壤磷素活化和植物磷养分吸收过程中扮演着重要角色[2-3]㊂在如此丰富的微生物中,有一类能够通过利用自身代谢产物或者与其他生物的协同作用,将土壤中难溶性的磷酸盐转化为植物可吸收利用的磷酸盐,这类微生物叫做解磷微生物(P h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g m i c r o o r ga n i s m s ,P S M ),包括细菌㊁真菌和放线菌,但从数量和种类上来讲,解磷细菌在解磷微生物中所占的比重最大[4]㊂据统计,解磷细菌可占到土壤可培养细菌的40%左右[5],而且解磷潜力可达到整个微生物群体的50%[4],是与磷的活化和周转密切相关的一类㊂因此,筛选高效的解磷菌株对提高磷肥利用率和实现农业绿色发展具有重大意义㊂国内外已经有许多学者对解磷细菌的分离筛选㊁鉴定㊁解磷效果等方面进行了大量研究,如冯哲叶[6]筛选具有较好解磷能力的解磷细菌,并将其与有机肥共同接种于盆栽中,发现大豆植株的茎粗㊁株高㊁叶宽和生物量有显著的提高,并且对磷素的积累有明显的增加;唐岷宸等[7]将解磷细菌接种于盆栽黑叶葵扇白菜中,其鲜质量增加65.5%,叶片全磷含量增加46.9%㊂这些研究表明解磷细菌不仅可以提高植物对磷的吸收利用,还能促进土壤中有益微生物的代谢活动,改善植物根际环境,从而达到增产效果㊂因此,通过利用土壤中的解磷微生物来调控土壤-植物的磷素循环是一种极佳的方式㊂同时,筛选高效的解磷细菌并对其解磷能力进行探索,对于提高磷肥利用率和改善植物的磷营养状况以及改善土壤条件意义重大㊂许多有关解磷细菌分离筛选的研究都是以难溶性无机磷C a 3(P O 4)2作为唯一磷源来开展的[8-13],而土壤中占全磷29%~90%的有机磷[14]也可以通过解磷细菌的酶解作用转化成植物能够吸收利用的无机磷[15],但对于解有机磷细菌的分离筛选等方面的研究还较少㊂因此,本文通过对麦田土壤中解有机磷细菌的分离筛选及其解磷能力分析,以期了解具有解有机磷功能的细菌种类,为解磷细菌活化土壤有机磷的相关研究提供理论基础,同时也为丰富解磷微生物资源库提供高效的菌株资源以及微生物肥料的应用提供一定的参考㊂1材料与方法1.1土壤的采集与处理土壤样品采自河南省林州市姚村镇的小麦田(113.8ʎE,36.17ʎN),采用五点取样法,去除表层可见的动植物残体,用土钻取0~20c m深度的麦田土壤,并装入无菌袋中,放于4ħ冰盒内带回实验室,再将五个样点的麦田土壤混匀并过筛(2 mm),采用四分法收集约200g的土壤放入样品采集袋中,置于4ħ冰箱中保存,备用㊂1.2培养基的配制有机磷固体培养基参考国际植物研究所磷酸盐生长培养基(N a t i o n a lB o t a n i c a lR e s e a r c hI n-s t i t u t e s P h o s p h a t e G r o w t h M e d i u m, N B R I P)[16],成分和含量稍作调整,葡萄糖(C6H12O6)10g/L,植酸钙(P h y t i n)2g/L,氯化镁(M g C l2㊃6H2O)5g/L,硫酸镁(M g S O4㊃7H2O)0.25g/L,氯化钾(K C l)0.2 g/L,硫酸铵[(N H4)2S O4]0.1g/L,琼脂粉15 g/L,有机磷液体培养基则不需要加入琼脂粉, p H7.0㊂L u r i a-B e r t a n i(L B)液体培养基成分和含量:胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠10g/L,p H7.0㊂所有培养基在使用前都需要在121ħ下灭菌30m i n㊂1.3解磷细菌的分离和纯化利用平板稀释法及选择性有机磷培养基对麦田土壤中的解磷细菌进行分离筛选㊂具体操作如下:在超净工作台中称取新鲜土壤样品5g于无菌离心管中,用无菌水定容至50m L,振荡20 m i n,使土样均匀地分散在稀释液中成为土壤悬液,然后按10倍梯度依次进行稀释,用移液枪吸取10-4~10-63个稀释度的样品各0.1m L,均匀涂布于有机磷固体培养基上,每个梯度重复3次,最后在28ħ恒温培养箱中倒置培养并观察平板中菌落生长状况及透明圈的产生情况㊂用接种环挑取具有溶磷圈且未发生重叠的菌落,在新的有机磷固体培养基上按照Z字形划线纯化,28ħ恒温培养箱中倒置培养,直至得到纯菌株,然后置于4ħ冰箱中保存㊂1.4菌株解磷能力的分析1.4.1溶磷圈的测定将分离纯化得到的纯菌株点接于有机磷固体培养基上,置于28ħ恒温培养箱中倒置培养3d,观察溶磷圈产生情况,并选取互相垂直的方向分别测量溶磷圈直径(D)和菌落直径(d),分别计算溶磷指数(P S I)(P S I= D/d)和溶磷效率(P S E)(P S E=(D-d)/dˑ100%)以便于对各菌株的解磷能力进行初步判断[17-18]㊂1.4.2解磷能力的定量分析将筛选得到的菌株接种于L B液体培养基中,于37ħ㊁180r/m i n 振荡培养20h,600n m波长下测量菌液的O D 值,使其O D600=0.6,然后在5000r/m i n下离心3m i n,弃上清液后,用0.85%的N a C l溶液清洗菌体3次,再用0.85%的N a C l溶液定容至15 m L,充分摇匀后用移液枪从中吸取1m L菌悬液加到有机磷液体培养基中,以不接种菌液的处理为对照,每个菌株重复3次,于37ħ㊁180r/m i n 振荡培养12h,随后于12000ˑg离心2m i n,吸取10m L上清液测定培养液p H,另外吸取1m L 上清液作为待测液,采用钼锑抗比色法测定培养液中速效磷的含量[19],并计算植酸钙的活化率[活化率=(接种菌液样品中的速效磷含量-不接种菌液样品中的速效磷含量)/接种菌液样品中的速效磷含量ˑ100%],然后再吸取1m L上清液作为待测液,根据培养液p H,以对硝基苯磷酸二钠(p-N P P,150mm o l/L)作为反应底物测定培养液中的磷酸酶活性[20]㊂1.5菌株鉴定1.5.1 细菌基因组D N A的提取采用A x y P r e p细菌基因组D N A小量制备试剂盒(A x-y g e n,U S A)提取细菌的基因组D N A,具体步骤按照操作说明进行㊂1.5.2细菌基因组P C R扩增采用细菌通用引物27F(5'-A G A G T T T G A T C C T G G C T C A G-3')和1492R(5'-C T A C G G C T A C C T T G T T A C G A-3')对基因组D N A进行扩增,P C R扩增反应体系(50μL)如下:基因组D N A(20n g/μL)1.0μL, 10ˑB u f f e r(含2.5mm o l/L M g2+)5.0μL,T a q 聚合酶(5U/μL)1.0μL,d N T P(10μm o l/L)1.0㊃083㊃西北农业学报31卷μL ,27F 引物(10μm o l /L )1.5μL ,1492R 引物(10μm o l /L )1.5μL ,d d H 2O39μL ㊂P C R 反应程序:95ħ预变性5m i n ;95ħ变性30s ,58ħ退火30s ,72ħ延伸90s ,35个循环;最后72ħ延伸7m i n ㊂P C R 产物取3μL 用10g /L 琼脂糖凝胶电泳检测,确认P C R 扩增片段㊂1.5.3 P C R 产物的纯化 P C R 产物用A x y P r e pD N A 凝胶回收试剂盒回收,具体步骤按照操作说明进行㊂1.5.4 序列测定 取各个样品纯化后的P C R 产物,在上海派森诺生物科技股份有限公司利用A B I 3730X L 测序仪进行双向测序㊂1.5.5 序列分析 利用C h r o m a s P r o 软件截去无效序列后,再用B i o E d i t 软件对双端有效序列进行拼接,然后以B l a s t 程序将合格序列与N C B I 数据库中的序列进行比对,获得与待测菌株序列相似性最大的菌株信息,即为鉴定结果,并将序列上传至G e n B a n k 数据库获得序列号㊂最后利用M E G A7.0软件[21]对所获得的菌株序列以及与其相似性较高的16S r R N A 基因序列进行排列并采用N e i g h b o r -j o i n i n g 方法[22]构建系统进化树㊂1.6 数据统计采用M i c r o s o f tE x c e l 2016软件对数据进行整理,并计算平均值和标准误,采用S P S S26.0统计软件对数据进行单因素方差分析和P e a r s o n 相关性分析,通过新复极差法(D u n c a n s)来比较差异的显著性(P <0.05),最后用M i c r o s o f tE x -c e l 2016软件绘图㊂2 结果与分析2.1 菌株解磷能力的定性分析通过对解磷细菌P S I 与P S E 的计算(表1),发现菌株F L P 36的P S I 和P S E 最大,显著高于其他菌株;菌株F L P 37和F L P 50的P S I 及P S E居中,而且两者之间无显著性差异,但均显著高于菌株F L P 69和F L P 72;而菌株F L P 69的P S I 和P S E 最小,显著低于其他菌株㊂同样,根据各菌株的溶磷圈也可以直观地判断出其解磷能力的强弱(图1)㊂表1 不同菌株的溶磷指数和溶磷效率T a b l e 1 Ps o l u b i l i z a t i o n i n d e x a n dPs o l u b i l i z a t i o n e f f i c i e n c y of d i f f e r e n t s t r a i n s 菌株编号N u m b e r o f s t r a i n s溶磷圈直径/mmD i a m e t e r o f h a l o 菌落直径/mm D i a m e t e r o f c o l o n yP S IP S E /%F L P 364.0ʃ0.0d1.0ʃ0.0c4.0ʃ0.03a303.3ʃ3.33aF L P 377.2ʃ0.1b 2.1ʃ0.1b 3.5ʃ0.06b 250.3ʃ5.51b F L P 5010.6ʃ0.6a 3.2ʃ0.1a 3.3ʃ0.08b 227.7ʃ7.66b F L P 694.8ʃ0.2c d 2.4ʃ0.1b 2.0ʃ0.02d 101.5ʃ1.52d F L P 725.3ʃ0.2c d2.2ʃ0.2b 2.5ʃ0.16c148.3ʃ15.90c 注:数据(n =3)为 平均值ʃ标准误 ㊂不同小写字母代表解磷菌株间的差异达到显著水平(P <0.05)㊂N o t e :D a t a (n =3)a r e t h e m e a n ʃs t a n d a r d e r r o r (S E ).V a l u e s f o l l o w e d b y d i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r sw i t h i n t h e c o l u m n s i n d i c a t e s i gn i f -i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g s t r a i n s a t t h e P <0.05l e v e l b y o n e -w a y A N O VA.图1 不同解磷菌株产生的溶磷圈F i g .1 P h o s p h a t e -s o l u b i l i z a t i o nh a l o p r o d u c e db y di f f e r e n t s t r a i n s 2.2 解磷菌株培养液p H 的变化和磷酸酶活性在培养液中接种解磷菌株并培养12h 后,培养液p H 与初始p H 相比均有不同程度的下降,以培养液中初始p H 与培养后p H 的差值来表示pH 的变化幅度㊂从图2-A 中可以看出5株解磷菌株培养液中的p H 变化幅度在0.8~1.9,其中菌株F L P 36对应的培养液p H 变化幅度显著高于其他菌株,菌株F L P 37㊁F L P 69和F L P 72对应㊃183㊃3期孙亚钦等:麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究的培养液p H 变化幅度之间不存在显著性差异,但均显著低于菌株F L P 36和F L P 50㊂根据培养液的p H ,测定其磷酸酶活性,更能真实地反映培养液的实际磷酸酶活性的变化情况㊂5株解磷菌株培养液中的磷酸酶活性在5.18~6.39μg/(m L ㊃m i n ),菌株F L P 36和F L P 50对应的培养液中的磷酸酶活性显著高于其他菌株,但两者之间无显著性差异,菌株F L P 37㊁F L P 69和F L P 72对应的培养液中的磷酸酶活性之间也无显著性差异(图2-B )㊂不同小写字母代表解磷菌株间的差异达到显著水平(P <0.05),下同D i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s i n d i c a t e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g st r a i n s a t t h e P <0.05l e v e l ,t h e s a m e b e l o w 图2 不同菌株对应的培养液中p H 的变化和磷酸酶活性F i g .2 V a r i a t i o no f p Ha n d p h o s p h a t a s e a c t i v i t y i n f l u i dm e d i u mc o r r e s p o n d i n gt od i f f e r e n t s t r a i n s 2.3 菌株解磷能力的定量分析根据培养液中速效磷含量的多少可以判断菌株的解磷能力㊂从图3-A 可以看出,5株解磷菌株从植酸钙中活化出来的速效磷含量为2.49~3.55m g/L ,其中菌株F L P 36对应的培养液中速效磷含量最高,显著高于菌株F L P 37和F L P 72;菌株F L P 50和F L P 69对应的培养液中速效磷含量居中,且两者之间无显著性差异,但均显著高于菌株F L P 72㊂如图3-B 所示,5株解磷菌株对植酸钙的活化率为19.28%~43.54%,其中菌株F L P 36对植酸钙的活化率最高,显著高于菌株F L P 37和F L P 72,而与菌株F L P 50和F L P 69之间并无显著性差异;菌株F L P 37对植酸钙的活化率显著高于菌株F L P 72㊂图3 不同菌株从植酸钙中活化出的速效磷含量以及对植酸钙的活化率F i g .3 C o n t e n t o f a v a i l a b l e p h o s p h o r u s f r o m p h y t i nm o b i l i z e db y d i f f e r e n t s t r a i n s a n dm o b i l i z a t i o n r a t e o f p h yt i n 2.4 培养液中磷酸酶活性与p H 以及速效磷含量的关系培养液中p H 与磷酸酶活性之间存在极显著的负相关关系(图4-A ),即p H 下降的幅度越大,其对应的磷酸酶活性也就越高;而磷酸酶活性与速效磷含量之间存在极显著的正相关关系(图4-B ),即磷酸酶活性越高,从植酸钙中活化出的速效磷含量也越高㊂2.5 解磷菌株的分子鉴定结合平板稀释法㊁16Sr R N A 基因测序以及同源序列比对,鉴定出菌株F L P 36属于B a c i l -l u s ,菌株F L P 37㊁F L P 50和F L P 69同属于A r -㊃283㊃西 北 农 业 学 报31卷t h r o b a c t e r ,菌株F L P 72为P s e u d a r t h r o b a c t e r ㊂将这些菌株的16Sr R N A 基因序列提交至G e n -B a n k 中获得的序列号分别为MW 131227㊁MW 131228㊁MW 131229㊁MW 131231和MW 131232(表2)㊂将筛选获得的5株解磷菌株的16S r R N A 基因序列与G e n B a n k 中的序列比对同源性高的模式菌株序列构建系统进化树(图5),结果发现这5株解磷菌株隶属于3个属(A r t h r o b a c t e r ㊁B a c i l -l u s 和P s e u d a r t h r o b a c t e r )㊂其中菌株F L P 36与巨大芽孢杆菌(B a c i l l u sm e g a t e r i u m )聚为一支,表明二者之间有较近的亲缘关系;菌株F L P 37和F L P 69分别与两个A r t h r o b a c t e r 的菌株聚为一支,表明这两个菌株与节杆菌属的亲缘关系更近,而属于A r t h r o b a c t e r 的菌株F L P 50则与属于P s e u d a r t h r o b a c t e r 的菌株F L P 72有较近的亲缘关系㊂图4 培养液中磷酸酶活性与p H 以及速效磷含量的关系F i g .4 C o r r e l a t i o n s b e t w e e n p h o s p h a t a s e a c t i v i t y a n d p H ,a v a i l a b l e p h o s ph o r u s c o n t e n t 表2 不同菌株在N C B I 中的比对结果T a b l e 2 R e s u l t s o f d i f f e r e n t s t r a i n s i nN C B I菌株编号N u m b e r o f s t r a i n s菌株名称N a m e o f s t r a i n相似性/%I d e n t i f i c a t i o n序列号A c c e s s i o nn u m b e rF L P 36B a c i l l u sm e ga t e r i u m 99MW 131227F L P 37A r t h r ob ac t e rh u m i c o l a 99MW 131228F L P 50A r t h r o b a c t e rdef l u v i i 99MW 131229F L P 69A r t h r o b a c t e r o r yz a e 98MW 131231F L P 72P s e u d a r t h r o b a c t e r p h e n a n t h r e n i v o r a n s99MW 131232图5 基于16S r R N A 基因序列构建的解磷菌株系统发育树F i g .5 P h y l o g e n e t i c t r e e o f p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g s t r a i n s b a s e do n16S r R N A g e n e s e qu e n c e s ㊃383㊃3期孙亚钦等:麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究3讨论利用平板培养对解磷细菌进行分离是一种简单有效的方法,解磷细菌将培养基中的植酸钙溶解产生溶磷圈,通过对溶磷圈的大小进行测量,以此可以初步估测微生物的解磷能力㊂本研究中分离筛选出来的5株解磷细菌在植酸钙培养基上均产生明显的溶磷圈,说明筛选培养出来的细菌均具有降解有机磷的能力,而且通过对溶磷指数(P S I)和溶磷效率(P S E)的分析,可以初步判定菌株F L P36降解有机磷的能力最强㊂进而对培养液中速效磷含量的分析也发现菌株F L P36从植酸钙中活化出的速效磷含量最高,并且对植酸钙的活化率也最高㊂这些结果都表明菌株F L P36降解有机磷的能力最强㊂解磷细菌活化有机磷的机理一般认为是酶解作用,即细菌感受到低磷胁迫,在其代谢过程中就会向胞外分泌酸性或碱性磷酸酶以及植酸酶等物质,将含磷有机化合物矿化,释放出有效磷[3]㊂磷酸酶参与的有机磷矿化主要依赖于磷酸酶自身的活性和有机磷的底物有效性[23],而磷酸酶活性又与介质p H密切相关[15]㊂本研究发现不同菌株对应的培养液中p H的变化幅度存在显著差异,且p H与磷酸酶活性之间也存在极显著的负相关关系,而且磷酸酶活性与速效磷含量之间呈极显著的正相关关系,这表明培养液p H的降低有利于磷酸酶活性的增加和有机磷底物的有效性,进而促进有机磷的矿化,提高速效磷含量㊂土壤中解磷微生物种类丰富,数量繁多,目前报道的具有解磷作用的细菌种类有芽孢杆菌属㊁假单胞菌属㊁欧文氏菌属㊁沙雷氏菌属㊁微球菌属㊁黄杆菌属㊁固氮菌属㊁根瘤菌属㊁沙门氏菌属㊁产碱杆菌属㊁色杆菌属㊁硫杆菌属㊁节细菌属等[24]㊂许多研究也已证明芽孢杆菌属的细菌溶解磷酸钙的能力较强[25-29],而对于降解有机磷的解磷菌株来说,目前相关研究还相对较少,但也有研究表明芽孢杆菌属的细菌降解有机磷的能力也较强[30-32]㊂本研究通过分子鉴定发现菌株F L P36属于芽孢杆菌属,而且降解植酸钙的能力最强,这也证明芽孢杆菌属的细菌既能溶解难溶性无机磷,又能溶解有机磷,而且溶磷能力较强㊂本研究从冬小麦田间筛选鉴定出5株不同的解磷菌株,通过溶磷圈法和液体培养法判断其解磷能力,发现降解植酸钙能力最强的是菌株F L P36,隶属于芽孢杆菌属,但由于本研究并未将这些解磷菌株作为菌剂进行盆栽或田间试验,还不清楚它们实际的解磷和促生效果,因为在不同的培养条件下,普遍存在解磷效果不稳定的问题[33]㊂而解磷细菌作为植物促生菌的一种,已被证明其在促进植物生长㊁提高产量和磷养分吸收以及防治病虫害等[34-38]方面发挥着至关重要的作用,同时解磷细菌也是微生物肥料的重要组分,因此,筛选高效的解磷菌株不仅丰富了菌种资源库,为微生物肥料的研制提供了充足的菌株,而且也降低了作物对化学肥料的依赖,为实现农业绿色发展提供了新的思路和理论支撑㊂参考文献R e f e r e n c e:[1] S I N G H BK,C AM P B E L LCD,S O R E N S O NS J,e t a l.S o i lg e n o m i c s[J].N a t u r eR e v i e w sM i c r o b i o l o g y,2009,7(10):756.[2] N A N N I P I E R IP,A S C H E RJ,C E C C H E R I N I M T,e ta l.M i c r o b i a l d i v e r s i t y a n d s o i l f u n c t i o n s[J].E u r o p e a nJ o u r n a l o f S o i l S c i e n c e,2017,68(1):12-26.[3] R I C HA R D S O N A E,S I M P S O N RJ.S o i lm i c r o o r g a n i s m sm e d i a t i n gp h o s p h o r u sa v a i l a b i l i t y[J].P l a n t P h y s i o l o g y, 2011,156(3):989-996.[4] C H E N Y P,R E K H A P D,A R U N A B,e ta l.P h o s p h a t es o l u b i l i z i n g b a c t e r i a f r o ms u b t r o p i c a l s o i l a n d t h e i r t r i c a l c i-u m p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t i e s[J].A p p l i e dS o i lE c o l o-g y,2006,34(1):33-41.[5]J O R Q U E R A M A,H E R NÁN D E ZM T,R E N G E LZ,e t a l.I s o l a t i o no fc u l t u r a b l e p h o s p h o b a c t e r i a w i t hb o t h p h y t a t e-m i n e r a l i z a t i o n a n d p h o s p h a t e-s o l u b i l i z a t i o n a c t i v i t y f r o mt h e r h i z o s p h e r e o f p l a n t s g r o w n i n a v o l c a n i c s o i l[J].B i o l o-g y a n dF e r t i l i t y o f S o i l s,2008,44(8):1025-1034.[6]冯哲叶.溶磷细菌的筛选及其对大豆促生效果的研究[D].南京:南京农业大学,2017.F E NG ZH Y.S c r e e n i n g o f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i aa n de f f e c t o f p r o m o t i n g s o yb e a n g r o w t h[D].N a n j i n g:N a n-j i n g A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,2017.[7]唐岷宸,李文静,宋天顺,等.一株高效解磷菌的筛选及其解磷效果验证[J].生物技术通报,2020,36(6):102-109.T A N G M C H,L I W J,S O N G TS H,e ta l.S c r e e n i n g o f ah i g h l y e f f i c i e n t p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i u ma n d v a l i d a-t i o no f i t s p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g e f f e c t[J].B i o t e c h n o l o g yB u l l e t i n,2020,36(6):102-109.[8] R F A K IA,Z E N N O UH IO,A L I Y A T FZ,e t a l.I s o l a t i o n,s e l e c t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no f r o o t-a s s o c i a t e dr o c k p h o s-p h a t es o l u b i l i z i n g b a c t e r i ai n M o r o c c a n w h e a t(T r i t i c u ma e s t i v u m L.)[J].G e o m i c r ob i o l o g y J o u r n a l,2020,37(3):230-241.[9]MA G A L L O N-S E R VÍN P,A N T O U N H,T A K T E K S,e t a l.T h em a i z em y c o r r h i z o s p h e r e a s a s o u r c ef o r i s o l a t i o n㊃483㊃西北农业学报31卷o f a r b u s c u l a rm y c o r r h i z a e-c o m p a t i b l e p h o s p h a t er o c k-s o l u-b i l i z i n g b ac t e r i a[J].P l a n ta n dS o i l,2020,451(1/2):169-186.[10] MA T T E RJM,S AM P A I O SC,R O S A D M,e t a l.I s o l a t i o no f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i af r o m s u b t r o p i c a ls o i l sw i t hd i f f e r e n t f e r t i l i z a t i o nh i s t o r i e s[J].B i o s c i e n c eJ o u r-n a l,2020,36(4):1083-1089.[11] WA N W J,Q I N Y,WU H Q,e t a l.I s o l a t i o na n dc h a r a c-t e r i z a t i o no f p h o s p h o r u s s o l u b i l i z i n g b a c t e r i aw i t hm u l t i p l ep h o s p h o r u s s o u r c e su t i l i z i n g c a p a b i l i t y a n dt h e i r p o t e n t i a lf o r l e a d i mm o b i l i z a t i o n i n s o i l[J].F r o n t i e r s i nM i c r o b i o l o-g y,2020,11:752.[12]宋小双,遇文婧,周琦,等.樟子松根际土壤解磷细菌的筛选㊁鉴定及解磷能力[J].中国农学通报,2020,36(32): 76-81.S O N G XS H,Y U WJ,Z H O U Q,e t a l.I s o l a t i o n,i d e n t i f i-c a t i o na nd p h o s p h a t es o l u b i l i z a t i o na n a l y s i so f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a d e r i v e df r o m P i n u ss y l v e s t r i s v a r.m o n g o l i c a r h i z o s p h e r e s o i l[J].C h i n e s eA g r i c u l t u r a lS c i-e n c eB u l l e t i n,2020,36(32):76-81.[13]吕俊,潘洪祥,于存.马尾松根际溶磷细菌P a r a b u r k-h o l d e r i a s p.的筛选㊁鉴定及溶磷特性研究[J].生物技术通报,2020,36(9):147-156.LÜJ,P A N H X,Y UC.S c r e e n i n g,i d e n t i f i c a t i o n a n d p h o s-p h a t e-s o l u b i l i z i n g c h a r a c t e r i s t i c so f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n gP a r a b u r k h o l d e r i a s p.f r o m P i n u sm a s s o n i a n a r h i z o s p h e r es o i l[J].B i o t e c h n o l o g y B u l l e t i n,2020,36(9):147-156.[14]T U R N E R B L,P A P HA Z Y M J,HA Y G A R T H P M,e t a l.I n o s i t o l p h o s p h a t e s i nt h ee n v i r o n m e n t[J].P h i l o-s o p h i c a lT r a n s a c t i o n s o f t h eR o y a l S o c i e t y o f L o n d o nS e-r i e sB i o l o g i c a l S c i e n c e s,2002,357(1420):449-469.[15] T U R N E R B L,H A Y G A R T H P M.P h o s p h a t a s ea c t i v i t yi n t e m p e r a t e p a s t u r e s o i l s:p o t e n t i a l r e g u l a t i o n o f l a b i l e o r-g a n i c p h o s p h o r u st u r n o v e rb yp h o s p h o d i e s t e r a s ea c t i v i t y[J].S c i e n c eo f t h eT o t a lE n v i r o n m e n t,2005,344(1/3): 27-36.[16] N A U T I Y A LCS.A n e f f i c i e n tm i c r o b i o l o g i c a l g r o w t hm e-d i u mf o r s c re e n i n gp h o s p h a t es o l u b i l i z i n g m i c r o o r g a n i s m s[J].F E M S M i c r o b i o l o g y L e t t e r s,1999,170(1):265-270.[17] P O NMU R U G A N P,G O P IC.D i s t r i b u t i o n p a t t e r na n ds c r e e n i n g o f p h o s p h a t es o l u b i l i z i n g b a c t e r i a i s o l a t e df r o md i f fe r e n tf o o da n df o r ag ec r o p s[J].J o u r n a lo f A g r o n o-m y,2006,5(4):600-604.[18]E D I-P R E MO N O M,MO AWA D A M,V L E K P L G.E f f e c to f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g P s e u d o m o n a s p u t i d a o nt h e g r o w t h o fm a i z e a n d i t s s u r v i v a l i n t h e r h i z o s p h e r e[J].I n d o n e s i a nJ o u r n a l o f C r o p S c i e n c e,1996,11(1):13-23.[19] MU R P H YJ,R I L E YJ P.A m o d i f i e d s i n g l e s o l u t i o nm e t h-o d f o rt h ed e t e r m i n a t i o no f p h o s p h a t ei nn a t u r a lw a t e r s[J].A n a l y t i c aC h i m i c aA c t a,1962,27:31-36. [20]J O N E R EJ,J O HA N S E N A.P h o s p h a t a s ea c t i v i t y o f e x-t e r n a l h y p h a eo ft w oa r b u s c u l a r m y c o r r h i z a lf u n g i[J].M y c o l o g i c a lR e s e a r c h,2000,104(1):81-86.[21] S U D H I R K,G L E NS,K O I C H I R O T.M E G A7:m o l e c u l a re v o l u t i o n a r yg e n e t i c s a n a l y s i s v e r s i o n7.0f o r b ig g e r d a t a-s e t s[J].M o l e c u l a rB i o l o g y a n d E v o l u t i o n,2016,33(7): 1870-1874.[22] T AMU R A K,N E IM,K UMA RS.P r o s p e c t s f o r i n f e r r i n gv e r y l a r g e p h y l o g e n i e s b y u s i n g t h e n e i g h b o r-j o i n i n g m e t h-o d[J].P r o c e e d i n g s o f t h eN a t i o n a lA c a d e m y o f S c i e n c e so f t h eU n i t e dS t a t e so f Am e r i c a,2004,101(30):11030-11035.[23] G E O R G ETS,G R E G O R YPJ,H O C K I N GP,e t a l.V a r i-a t i o ni n r o o t-a s s o c i a t e d p h o s p h a t a s e a c t i v i t i e si n w h e a tc o n t r i b u t e st ot h e u t i l i z a t i o n o fo r g a n i c P s u b s t r a t e si nv i t r o,b u t d o e s n o t e x p l a i nd i f f e r e n c e s i n t h eP-n u t r i t i o no fp l a n t sw h e n g r o w n i n s o i l s[J].E n v i r o n m e n t a l a n dE x p e r-i m e n t a lB o t a n y,2008,64(3):239-249.[24] S H A RMA S B,S A Y Y E D R Z,T R I V E D I M H,e ta l.P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g m i c r o b e s:s u s t a i n a b l ea p p r o a c h f o rm a n a g i n gp h o s p h o r u sd e f i c i e n c y i na g r i c u l t u r a l s o i l s[J].S p r i n g e rP l u s,2013,2:587.[25] WA N GZ,X U GY,MA PD,e t a l.I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r-i z a t i o no f a p h o s p h o r u s-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i u mf r o mr h i z o-s p h e r e s o i l s a n d i t s c o l o n i z a t i o no fC h i n e s e c a b b a g e(B r a s-s i c a c a m p e s t r i s s s p.c h i n e n s i s)[J].F r o n t i e r s i nM i c r o b i o l-o g y,2017,8:1270.[26]郑喜清,邸娜,李旭红,等.土壤中解磷细菌的分离筛选[J].北方园艺,2017(9):164-168.Z H E N G X Q,D IN,L IX H,e t a l.I s o l a t i o na n ds c r e e n i n go f p h o s p h o r u ss o l u b i l i z i n g b a c t e r i a ls t r a i n si n s o i l[J].N o r t h e r n H o r t i c u l t u r e,2017(9):164-168. [27]陈炫,林希昊.甘蔗根际土壤解磷细菌的筛选及培养条件优化[J].热带农业科学,2017,37(12):61-69.C H E N X,L I N X H.S c r e e n i n g o f p h o s p h o r u s-s o l u b i l i z i n gb ac t e r i a i ns u g a r c a n e r h i z o s p h e r e s o i l a nd t he o p t i m i z a t i o no f c u l t u r e c o n d i t i o n s[J].C h i n e s e J o u r n a l o f T r o p i c a lA g-r i c u l t u r e,2017,37(12):61-69.[28]刘小玉,付登强,贾效成,等.油茶根际土壤解磷菌的筛选㊁鉴定及培养条件[J].西南农业学报,2016,29(11):2637-2642.L I U X Y,F U D Q,J I A X C H,e ta l.I s o l a t i o n,i d e n t i f i c a-t i o na n d c u l t u r e c o n d i t i o no f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e-r i ad e r i v e df r o m c a m e l l i ar h i z o s p h e r es o i l[J].S o u t h w e s tC h i n aJ o u r n a lo f A g r i c u l t u r a lS c i e n c e s,2016,29(11):2637-2642.[29]张海燕,唐梦园,白美玉,等.小麦根际解磷细菌的筛选鉴定及培养条件的研究[J].河南大学学报(自然科学版), 2020,50(4):425-432.Z HA N G H Y,T A N G M Y,B A I M Y,e ta l.S t u d y o ns c r e e n i n g,i d e n t i f i c a t i o n a n d c u l t u r ec o n d i t i o n s o f p h o s-p h o r u s-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a i n w h e a t r h i z o s p h e r e[J].J o u r n a l o f H e n a n U n i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e), 2020,50(4):425-432.㊃583㊃3期孙亚钦等:麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究[30]王欢,王敬敬,徐松,等.有机磷降解菌的筛选及其促生特性[J].微生物学报,2017,57(5):667-680.WA N G H,WA N GJ J,X US,e t a l.S c r e e n i n g a n d g r o w t hp r o m o t i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f e f f i c i e n t o r g a n o p h o s p h a t e-d e g r a d a t i o n b a c t e r i a[J].A c t a M i c r o b i o l o g i c a S i n i c a,2017,57(5):667-680.[31]柴小粉,张林,田芷源,等.玉米丛枝菌根真菌根外菌丝表面定殖细菌解磷功能鉴定[J].植物营养与肥料学报, 2016,22(4):1031-1038.C HA IXF,Z H A N G L,T I A N Z H Y,e ta l.I d e n t i f i c a t i o no f p h y t a t em i n e r a l i z i n g b a c t e r i a c o l o n i z e d o n t h e e x t r a r a d i-c a lh y p h a ls u r f a c eo fa r b u s c u l a r m y c o r r h i z a lf u n g i i n am a i z e f i e l d[J].J o u r n a l o f P l a n tN u t r i t i o na n dF e r t i l i z-e r,2016,22(4):1031-1038.[32]伍善东,刘清术,付祖姣,等.解有机磷拮抗细菌的筛选及其解磷特性和拮抗作用[J].江苏农业学报,2017,33(4): 843-847.WUS H D,L I U QS H,F UZ J,e t a l.S c r e e n i n g o f t h e b a c-t e r i a-d e g r a d i n g o r g a n i c p h o s p h a t ea n dt h e i r d e g r a d a t i v ec h a r a c t e r i s t i c sa n da n t a g o n i s m[J].J i a n g s u J o u r n a lo fA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s,2017,33(4):843-847.[33]邢芳芳,高明夫,禚优优,等.玉米根际高效溶磷菌的筛选㊁鉴定及溶磷特性研究[J].中国农学通报,2016,32(9): 119-124.X I N GFF,G A O M F,Z HU O Y Y,e ta l.S c r e e n i n g a n di d e n t i f i c a t i o no f p h o s p h a t es o l u b i l i z i n g b a c t e r i ai n m a i z er h i z o s p h e r e a n dt h e i rc h a r a c t e r i s t i c so f p h o s p h a t es o l u b i-l i z i n g[J].C h i n e s e A g r i c u l t u r a l S c i e n c e B u l l e t i n, 2016,32(9):119-124.[34]王亚艺,蔡晓剑,李松龄,等.解磷细菌的应用效果[J].西北农业学报,2014,23(7):197-200.WA N G Y Y,C A IXJ,L ISL,e t a l.S t u d y o na p p l i c a t i o ne f f e c t so fP-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a[J].A c t a A g r i c u l t u r a eB o r e a l i-o c c i d e n t a l i sS i n i c a,2014,23(7):197-200.[35]程宝森,房玉林,刘延琳,等.渭北旱塬葡萄根际解磷细菌的筛选及其对葡萄的促生效应[J].西北农业学报,2009, 18(4):185-190.C H E N GBS,F A N G Y L,L I U Y L,e ta l.S c r e e n i n g a n dp r o m o t i o ne f f e c to f p h o s p h a t e-s o l u b i l i z i n g b a c t e r i af r o mg r a p e v i n e r h i z o s p h e r e i nw e i b e i s e m i-a r i d p l a t e a u[J].A c t aA g r i c u l t u r a eB o r e a l i-o c c i d e n t a l i s S i n i c a,2009,18(4):185-190.[36]张艺灿,刘凤之,王海波.根际溶磷微生物促生机制研究进展[J].中国土壤与肥料,2020(2):1-9.Z HA N G YC,L I U FZ H,WA N G H B.R e s e a r c h p r o g r e s so n p l a n t-g r o w t h-p r o m o t i n g m e c h a n i s m so f p h o s p h a t e-s o l-u b i l i z i n g r h i z o s p h e r em i c r o b e s[J].S o i l a n dF e r t i l i z e r S c i-e n c e s i nC h i n a,2020(2):1-9.[37] B A R R APJ,V I S C A R D IS,J O R Q U E R A M A,e t a l.U n-d e r s t a n d i n g t h es t r a t e g i e st oo v e r c o m e p h o s p h o r u s-d e f i-c i e n c y a n da l u m i n u m-t o x i c i t y b y r y e g r a s se nd o p h y t i ca n dr h i z o s p h e r e p h o s p h o b a c t e r i a[J].F r o n t i e r s i n M i c r o b i o l o-g y,2018,9:1155.[38] K O U R D,R A N A K L,K A U R T,e ta l.B i o d i v e r s i t y,c u r-r e n t d e v e l o p m e n t sa n d p o t e n t i a lb i o t e c h n o l o g i c a la p p l i c a-t i o n s o f p h o s p h o r u s-s o l u b i l i z i n g a n d-m o b i l i z i n g m i c r o b e s:ar e v i e w[J].P e d o s p h e r e,2021,31(1):43-75.㊃683㊃西北农业学报31卷I s o l a t i o na n dP h o s p h a t e S o l u b i l i z i n g C a p a b i l i t y o f P h o s p h a t e -S o l u b i l i z i n g Ba c t e r i a i naW h e a t F i e l d S U N Y a q i n 1,Y ES h e n g j i a 1,F A N G u o a n 1,2,Z H A N G Y i n g 1,L I U X i n g 1,WU D a f u 1a n d WA N GF e i 1(1.S c h o o l o fR e s o u r c e s a n dE n v i r o n m e n t ,H e n a n I n s t i t u t e o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,X i n x i a n g He n a n 453003,C h i n a ;2.C o l l e g e o fG r a s s l a n da n dE n v i r o n m e n t S c i e n c e s ,X i n j i a n g A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,U r u m qi 830052,C h i n a )A b s t r a c t I n t h e p r e s e n t s t u d y ,p h y t i n ,a k i n d o f o r ga n i cP ,w a s c h o s e n a s s o l ePs o u r c e i n t h em e d i -u mt o i s o l a t e p h o s p h a t e -s o l ub i l i z i n g ba c t e r i a i n t h e s o i l c o l l e c t e d f o r maw h e a t f i e l d .I d e n t i f i c a t i o no f p h o s p h a t e -s o l ub i l i z i n g b ac t e r i a a nd c o n s t r u c t i o no f p h y l o ge n e t i c t r e ew a s s u b je c t e d t o 16S r R N A g e n e s e q u e n c i n g t e c h n o l o g y .T h e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y o ft h ei s o l a t e d p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a l s t r a i n sw a s d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o t h e a c t u a l p Hof t h e c u l t u r em e d i u m.T h e p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i ng a b i l i t y w a s m e a s u r e db y th ec o m bi n a t i o no ft h es o l u b i l i z a t i o nh a l o m e t h o da n d m o l yb d e n u m b l u e m e t h o d .F i v e p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g ba c t e r i a l s t r a i n sw e r e i d e n t i f i e d a n d a f f i l i a t e d t o t h e g e n u s o f B a -c i l l u s ,A r t h r ob ac t e r a nd P se u d a r t h r o b a c t e r ,r e s p e c t i v e l y .C o m p a r e dw i t ht h e i n i t i a l p H ,t h e p H of t h e c u l t u r em e d i u mc o r r e s p o n d i ng t o th e fi v e p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g s t r a i n sw a s s i g n i f i c a n t l y de c r e a s e d a n d t h e a c t u a l p h o s p h a t a s ea c t i v i t y r a n g e df r o m5.18t o6.39μg /(m L ㊃m i n ).Th ec o n c e n t r a ti o no f s o l u b l eP m o b i l i z e df r o m p h y t i nr a n g e df r o m 2.49t o3.55m g /La n dt h e m o b i l i z a t i o nr a t i or a n g e d f r o m19.28%t o 43.54%.T h e p h o s p h a t a s ea c t i v i t y i nt h ec o r r e s p o n d i n g l i q u i d m e d i u m w a s s i gn i f i -c a n t l y a n dn e g a t i v e l y c o r r e l a t e dw i t h p H ,w h i l ew a s s i g n i f i c a n t l y a n d p o s i t i v e l y co r r e l a t e dw i t hs o l u -b l ePc o n c e n t r a t i o n .T h e s t r a i nw i t h m o s t p o w e r f u l c a p a b i l i t y t o m o b i l i z e p h y t i nb e l o n g e d t o B a c i l -l u s .T h e s e r e s u l t s p r o v i d eat h e o r e t i c a lb a s i sf o rs t u d y i n g o nt h e m o b i l i z a t i o no fs o i lo r g a n i cPb y p h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a a n d u s e f u l r e f e r e n c e f o r d e v e l o p m e n t a n d a p pl i c a t i o n o fm i c r o b i a l f e r t i l -i z e r s .K e y wo r d s P h o s p h a t e -s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a ;P h o s p h a t e -s o l u b i l i z a t i o nh a l o ;O r g a n i cP ;P h o s p h a t a s e a c -t i v i t y ;P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g c a p a b i l i t y R e c e i v e d 2021-04-12 R e t u r n e d 2021-08-09F o u n d a t i o n i t e m T h e N a t i o n a l N a t u r a lS c i e n c e F o u n d a t i o no fC h i n a (N o .31872184);I n n o v a t i o nT r a i n i n g P r o g r a mf o r S t u d e n t s i nH e n a n I n s t i t u t e o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y (N o .2021C X 45);H i g h -l e v e lT a l e n t sR e s e a r c hP r o j e c t o fH e n a n I n s t i t u t e o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y(N o .2016031).F i r s t a u t h o r S U N Y a qi n ,m a l e ,m a s t e r s t u d e n t .R e s e a r c ha r e a :i n t e r a c t i o nb e t w e e n p l a n t s a n d p h o s -p h a t e -s o l u b i l i z i n g b a c t e r i a .E -m a i l :y a q i n s u n 0622@s t u .h i s t .e d u .c n C o r r e s p o n d i n g au t h o r WA N G F e i ,f e m a l e ,P h .D ,a s s o c i a t e p r o f e s s o r .R e s e a r c ha r e a :e n h a n c e m e n to f o r g a n i cP m o b i l i z a t i o nb y m i c r o b i a l i n t e r a c t i o n s i n t h e r h i z o s p h e r e o r h y p h o s p h e r e .E -m a i l :w a n gf e i @h i s t .e d u .c n(责任编辑:史亚歌 R e s p o n s i b l e e d i t o r :S H IY a ge )㊃783㊃3期孙亚钦等:麦田土壤解磷细菌的筛选及其解磷能力研究。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定引言溶磷解钾菌是一类能够利用有机磷和无机磷、溶解磷酸盐和解钾的微生物。
它们在土壤营养元素的循环中起着重要的作用，不仅可以提高土壤中磷和钾的有效性，也有利于植物的吸收利用。
对于这类细菌的分离筛选和鉴定具有重要意义。
一、溶磷解钾菌的分离筛选1.1 样品采集我们需要通过采集不同土壤样品来寻找可能存在溶磷解钾菌的环境。
可以选择农田、森林、草原等不同类型的土壤样品。
还可以通过不同植物根系附近的土壤来采集样品。
这样获取的样品中可能存在多样化的微生物资源。
1.2 分离培养将采集到的土壤样品进行稀释并分装到不同培养基中，添加适当的磷、钾源以及生长因子，利用稀释平板法将土壤样品中的微生物分离出来。
待菌落出现后，再进行单菌落分离，最终得到纯培养的单一微生物。
1.3 溶磷解钾菌的筛选通过溶磷解钾菌的生理特性，我们可以利用含有无机磷盐和钾盐的培养基来筛选出具有溶磷解钾功能的菌株。
分离出的微生物在溶解磷酸盐和解钾作用上表现出显著的特异性时，则可认定其为溶磷解钾菌。
1.4 筛选结果经过上述步骤，我们可以获得多个可能具有溶磷解钾功能的菌株。
在鉴定这些菌株前，还需要进一步加以鉴定验证，以确保结果的准确性。
2.1 形态学特征将分离出的菌落进行鉴定，首先需要进行形态学特征的观察。
包括菌落形态、细胞形态、颜色、大小、孢子、芽孢等特征。
根据这些特征可以初步判断该菌属于哪一类细菌。
2.2 生理生化特征接着，我们需要对细菌进行生理生化特性的检测。
比如对其生长温度、耐盐性、碱酸度、氧气需求等特性进行测试。
还可以对其代谢产物进行分析，判断其对溶磷解钾的能力。
2.3 分子生物学鉴定根据现代分子生物学的技术手段，可以利用PCR扩增细菌的16S rRNA基因序列，并根据序列比对，进行系统发育关系分析，确定细菌的分类地位。
这是鉴定细菌的一种较为准确和有效的方法。
2.4 鉴定结果经过以上步骤的鉴定，我们可以确定出一株真正具有溶磷解钾功能的细菌。
土壤中解磷细菌的分离与初步鉴定
JIANGXI AGRICULTURAL UNIVERSITY本科毕业论文（设计）题目：土壤中解磷细菌的分离与初步鉴定学院：生物科学与工程学院姓名：学号：专业：生物工程年级：指导教师：职称：二0一一年五月摘要目的：通过分离、筛选与纯化，从土壤中筛选出具有解磷能力的菌株。
方法：根据解磷圈大小判断其解磷能力。
从桔子、柚子、石榴3种不同植物根系土壤中分离出降解无机磷的解磷菌，通过平板法进行初筛，根据水解圈直径和菌落直径比值大小筛选到水解圈直径和菌落直径比值较大的菌株,连续纯培养五代，选择遗传稳定的解磷菌,进一步通过液体摇瓶培养复筛，最后筛选出分解无机磷能力较强且能稳定遗传的菌株。
结果：从桔子根际土壤中分离降解出了三株透明圈明显的解磷菌，筛选出两株水解圈直径(D)与菌落直径(d)比值较大的解磷菌，1号菌株水解圈直径(D)／菌落直径(d)为2.625，2号菌株水解圈直径(D)／菌落直径(d)为2.44，经过五代培养，将稳定性最好的菌株进行液体摇瓶培养7天，然后进行解磷能力测定，测得结果是菌株1号水溶性磷含量为31.13mg ∕L，菌株2号水溶性磷含量为25.43mg∕L，具有较强解磷能力。
结论：通过菌落形态观察以及水溶性磷含量的测定结果可鉴定菌株为无机磷解磷细菌。
关键词：果树根际土壤，解磷菌，无机磷，分离，鉴定AbstractObjective: the separation, purification, from screening and soil were XieLin ability with the strain. Methods: according to the size XieLin circle XieLin judge its ability. From orange, grapefruit, pomegranate 3 kinds of different plant roots isolated soil degradation of inorganic phosphorus XieLin bacteria, through the flat screen, according to early method of hydrolysis circle diameter and colonies diameter ratio size screening to hydrolysis circle diameter and the ratio of larger diameter strains colony, continuous pure cultivate generation, choose the genetic stability XieLin bacteria, further through the liquid wave flask culture after screen, finally selected decomposition inorganic phosphorus ability stronger and can stable genetic strain. Results: from orange rhizospheric soil degradation out isolated transparent circle obvious reason XieLin bacterium, two strains were hydrolyzed circle diameter (D) and colonies diameter (D) XieLin bacterium, the ratio of larger diameter strains hydrolysis circle 1 (D) / colonies diameter (D) for 2.625, 2 strains hydrolysis circle diameter (D) / colonies diameter (D) for 2.44, after five dynasties, the best training for liquid stability strains flask culture seven days, wave XieLin ability and determination of measurement results is,water-soluble phosphorus strains 1 for 31.13 mg/L, water-soluble phosphorus strains 2 for 25.43 mg/L XieLin ability, strong. Conclusion: through the colony morphology observation and the measured results of water-soluble phosphorus can be identified for inorganic phosphorus XieLin strains of bacteria.Keywords:Fruit trees rhizosphere, XieLin bacteria, inorganic phosphorus, separation, appraisal目录绪论 (1)1 材料与方法 (1)1.1 供试材料 (1)1.1.1 菌株 (1)1.1.2 培养基 (1)1.1.3 主要仪器设备及药品试剂 (2)1.2方法 (2)1.2.1 解磷细菌的生物富集 (2)1.2.2 菌株初筛 (2)1.2.3 解磷细菌的鉴定形态学鉴定 (2)1. 2. 4 解磷细菌解磷能力的测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32 结果与讨论 (3)2.1 菌株初筛结果 (3)2.2 解磷菌形态鉴定结果............................... 错误!未定义书签。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定溶磷解钾菌是一类能够通过生物作用分解有机磷化合物和钾肥的微生物。
这类微生物对于提高土壤中磷素和钾素的有效性和可利用性具有重要作用。
分离筛选和鉴定溶磷解钾菌对于土壤改良和农业生产有着重要意义。
溶磷解钾菌分离筛选的步骤主要包括样品采集、微生物培养、菌株分离和筛选。
第一步是样品采集。
我们可选择不同类型的土壤作为样品源，如农田土壤、果园土壤等。
通过采集多个样品，可以获得更多潜在的溶磷解钾菌的来源。
第二步是微生物培养。
将采集到的土壤样品分别加入到不同的培养基中，如含有有机磷或钾肥的培养基。
通过调整培养条件，如温度、pH值等，可以促进溶磷解钾菌的生长繁殖。
第三步是菌株分离。
将培养液取出一定量后，采用稀释涂布法或平板扩展法进行菌落分离。
分离后的菌落应进行纯化处理，以获得单一的菌株。
第四步是筛选。
利用不同的筛选方法，如酶活检测、溶磷解钾能力检测等，对分离得到的菌株进行筛选。
通过观察酶或物质的产生与菌株的相关性，可以初步判断其具有溶磷解钾能力。
在进行溶磷解钾菌的鉴定时，要结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学特征综合进行。
形态学特征主要包括菌落形态、菌液形态和孢子形态等。
溶磷解钾菌的菌落通常呈乳白色或灰白色，有时呈粉红色或黄色。
菌液常呈混浊状，并产生黏液。
孢子形态也是鉴定的重要指标之一，如溶磷解钾菌属于芽孢杆菌科的话，孢子通常为梭形或圆柱形。
生理生化特性主要包括生长和代谢特性，如溶磷解钾菌的生长温度范围，氧气需求量等。
对菌株进行一系列的生物化学检测，例如利用 Biolog 试剂盒，可以判断菌株对不同碳源和氮源的利用情况。
分子生物学特征主要利用DNA序列信息进行鉴定。
采用PCR扩增菌株的16S rDNA序列，然后进行序列分析和比对，可以确定菌株的系统发育关系。
还可以利用PCR扩增特定基因片段，如溶磷酸酯酶（PhoD）、钾溶解酶（KdgA）等基因，以确定菌株具有溶磷解钾能力。
溶磷解钾菌的分离筛选和鉴定是通过多种试验和方法综合进行的。
土壤解磷细菌分离和筛选方法的建立
土壤解磷细菌分离和筛选方法的建立余贤美;沈奇宾;李炳龙;郑服丛【摘要】以有机磷细菌培养基和无机磷细菌培养基为基本培养基,利用液体培养基进行生物富集,然后通过平板稀释法进行分离筛选,共获得107个菌株.结果表明,以有机磷细菌液体培养基为富集培养基,以无机磷细菌固体培养基为筛选培养基,可以有效地从土壤中分离筛选到解磷菌,初步建立起快速有效筛选解磷菌的体系;固体及液体培养条件下解磷能力的测定结果表明,筛选出的解磷菌有较强的解磷能力,进一步验证了此体系的可行性.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2008(029)003【总页数】5页(P321-325)【关键词】解磷菌;生物富集;筛选;建立【作者】余贤美;沈奇宾;李炳龙;郑服丛【作者单位】中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,热带农业有害生物检测监控中心,海南,儋州,571737;海南大学环境与植物保护学院,海南,儋州,571737;海南大学环境与植物保护学院,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,热带农业有害生物检测监控中心,海南,儋州,571737;海南大学环境与植物保护学院,海南,儋州,571737【正文语种】中文【中图分类】农业科学第 29 卷第 3 期 2008 年 6 月热带作物学报CHINESEJOURNALOFTROPICALCROPS 土壤解磷细菌分离和筛选方法的建立余贤美 l沈奇宾 2李炳龙 2郑服丛1.2•中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南倍州 571737热带农业有害生物检测监控中心2海南大学环境与植物保护学院海南借外I 571737 Vol.29No.3Jun.2008 摘要以有机磷细菌培养基和无机磷细菌培养基为基本培养基，利用液体培养基进行生物富集，然后通过平板稀释法进行分离筛选，共获得 107 个菌株。
结果表明，以有机磷细菌液体培养基为富集培养基，以无机磷细菌固体培养基为筛选培养基，可以有效地从土壤中分离筛选到解磷菌，初步建立起快速有效筛选解磷菌的体系：固体及液体培养条件下解磷能力的测定结果表明，筛选出的解磷菌有较强的解磷能力，进一步验证了此体系的可行性。