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5. 生物芯片技术（biochip） 生物芯片技术是在1个平方厘米大小的薄型载体上，
通过微加工技术获得微米级结构，并与生物化学处理 等技术相结合而发展起来的一种新型技术。它可以把 多至几十万个的生命信息集成在一块芯片上，进行各 种与生命科学和医学相关的生物化学反应，对基因、 蛋白、活体细胞及组织等进行分析和检测。
免疫组织化学方法—把神经元的功能与其神经递质的 分析熔为一体。
组织培养、细胞培养—把复杂的神经元回路还原成简 单的单元进行分析。
新的电生理技术和分子生物学方法（重组DNA技术等） －神经信号发生、传递的基本单元-离子通道的结构、 功能特性及运转方式；神经递质的合成、维持、释放 及与受体的相互作用。
(2) 诱发电位有一定的类型，是由于诱发电极和记录 电极记录神经元群相对位置影响电位的波形。
(四)生物化学方法
1. 放射免疫法(radioimmunoassay, RIA)
用抗原－抗体反应原理，将抗原标记上放射性同位 素，用来测定与此抗原性质相同的物质。RIA包括以下 基本步骤：样品采集、加样、反应、分离、测定抗原－ 抗体复合物的放射性（cpm）, 与标准曲线对照计算待测 物质含量。
4. 基因敲除(gene knockout) 基因敲除是80年代初出现的一项新的基因工程技术。
采用同源重组的方法,用体外合成的无效基因或突变基因取 代相应正常基因,再应用转基因方法孵育出转基因动物,即 为基因敲除动物。通过分析基因敲除动物单基因缺陷来研 究基因调控、基因功能、建立疾病模型、药物作用及基因 治疗。
液中选择性地大量扩增某一种核酸分子的特定序列。该方法 具有极高的灵敏度和特异性，在含有多种杂质的条件下，可 选择性扩增细胞基因组中一个特定的DNA片段达数百万至数 千万倍。
3. 转基因(Transfers gene) 根据遗传学原理,在体外合成含有突变序列的DNA片段,
植入细胞染色体，通过制造定位定向转基因改变哺乳动物 的基因型以产生转基因的动物。
生物素追踪法： 一般使用生物素的衍生物作追踪剂，如生物胞素
（biocytin）电泳导入脑内被神经元摄取，主要用于 顺向追踪。该法有效范围明确，无过路纤维吸收问题。 神经生物素（neurobiotin）用于顺行、逆行追踪，运 送速度较快，灵敏度高。
2. 免疫组化法(immunohistochemistry) 用特异性抗体显示组织化学成分的一种方法。
三、神经生物学的研究方法
(一) 形态学方法
1.束路追踪法
辣根过氧化物酶法（horseradish peroxdase, HRP）： HRP注射于神经末梢所在部位，通过非特异性胞饮 方式摄入，逆向运至胞体，然后用组织化学方法显 示。或经胞体摄入，顺向运送至末梢部位。
荧光染料法： 主要用作逆向追踪，其优点是可作双标或多标。如核 黄标记胞核，固蓝或荧光金标记胞质。
2.高效液相层析 ( high performance liquid chromatography, HPLC)
利用分子间特异性及可逆性的结合，将其一方固定于 层析的固定相中，使流动相中能特异性结合于该分子的物 质与其结合，然后再改变条件，使被分离物质洗脱，用一 定波长紫外光检测。 HPLC是分离分析生物活性物质和受 体的重要手段。
(三) 电生理学方法
1. 电压钳 (voltage clamp)
Hodgkin等，20世纪50年代 电压电极、电流电极 反馈放大器 (feedback amplifer) 结合药理学方法（TTX、TEA）
2. 膜片钳 (patch clamp)
Neher和Sakmann，1976（nAchR单离子通道电流， 1991，Noble ）
可测量单通道离子电流 现在发现：通道的开放和关闭都是突然发生并似乎是
全或无式的，开放的持续时间长短不一，但都有恒定 的电导值。
3. 诱发电位 诱发电位是慢电位变化，不是单细胞放电，主要是由突触 后电位的总和而成。诱发放电是刺激引起的，所以它常常 出现在自发放电的背景之上。 特点：(1) 诱发电位有一定的潜伏期；
(五)分子生物学方法
1. 基因分子克隆及表达 人类染色体大约有3×109碱基和5-10万个基因。基因克隆
是特定基因从基因组中分离出来在细菌中扩增的过程。克隆 基因目的是获得大量的纯DNA分子。
2. 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） PCR是一种酶促化学反应,可在含有多种核酸分子的混合
免疫组化法的基本步骤有固定、制片、反应三步。 常用于显示各种神经肽。
3. 原位杂交法 ( in situ hybridization) 用于显示细胞内的mRNA，标记物分为同位素和非
同位素，同位素有32P，35S，3H。非同位素有生物素 (biotin)，地高辛等。
4. 激光共聚焦显微镜
(laser scanning confocal microscopy ) 用0.2 m的光束可透射厚0.5~1mm的细胞组织，用 于神经递质、受体和转运体的定位；神经元结构的三维 重建；活的神经细胞的动态变化；也可对活细胞进行连 续扫描，显示细胞内某种成分（如Ca 2+ ）的变化过程， 线粒体、内质网、高尔基体、染色体等的探测和分析， DNA、RNA、酶的含量测定。
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绪论
Introduction
神经生物学
➢ 概念：研究人和动物的神经系统的科学。 特别是脑的结构和功能及其相互关系。
➢ 从分子、细胞水平到神经网络乃至整体系统水 平对神经系统进行研究。
神经生物学的研究
神经活动机制------细胞和分子结构 和功能紧密地联系了起来。
(二) 生理学方法
1. 行为学方法 行为学方法是建立在条件反射基础之上。条件
反射是著名的俄国生理学家巴甫洛夫于20世纪初提 出的。条件反射是动物个体生活过程中适应环境的 变化，在非条件反射基础上逐渐形成的。
2. 神经递质释放量的测定
脑透析法： 可测定不同脑区的多巴胺及其代谢产物，氨基
酸，乙酰胆碱，去甲肾上腺素，5－HT等。神经肽 的测定较难，主要由于探头半透膜要求较高。