金标Bt-CryIAb／Ac试纸条定性检测转Bt基因棉花的方法研究

的鉴定 结果 。
关键 词 ： 转Ｂ ｔ 基 因； 抗 虫棉 ； 抗 虫检测
中图分 类号 ： ￥ ４ ３ ５ ． ６ ２ ２ 文献标 志 码 ： Ａ 文 章编 号 ： １ ０ ０ ０ — ６ ３ ２ Ｘ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ － ０ ０ １ ５ — ０ ３
转 Ｂ ｔ （ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｔ ｈ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｉ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ） 基 因抗 虫棉 （ 简
我 国 目前转 基 因抗 虫 棉 主要 为 单 价 （ Ｂ ｔ ） 或 双
ｇ ） 、 低速离 心机、 低温 冰箱 （ 长 时 间保 存 样 品 时 使
用） 、 取样 专 用 Ｐ Ｅ袋； 金 标 Ｂｔ － Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａｂ ／ Ａｃ 抗 虫检 测试 纸条 ， 购 于北京 银 土地生 物技 术有 限公 司 。
释 倍数 应 控制 在 １ Ｏ ～１ ５ ； 检测 花 蕾 时 ， 应控制在 １ ５ ～２ Ｏ倍 ； 检 测 开 花 期 的 顶部 第 二 叶 时， 应 控 制在 ５ ～１ Ｏ
倍； 检 测铃 期 的 顶 部 第 二 叶及 苞 叶 的种 子 应 为 １ ５ ～２ Ｏ倍 。金 标 Ｂ ｔ － Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａｂ ／ Ａｃ 试 纸 条定 性 检测 转 Ｂ ｔ 基 因棉花 时 ， 不 同时 期 、 不 同器 官应 采 用相 应 适 宜 的浓 度 才 能获 得 可靠
Ｔ ●●
ＮＩ Ｅ Ｘｉ ｎ － ｈ ｕ ｉ ， ＹＯＵ Ｃｈ ｕ ｎ － ｙ ｕ ａ ｎ， ＣＨＥＮ Ｈｕ ｉ — ｙ ｕ ， ＫＯＮＧ Ｊ ｉ ｅ ， ＬＥ Ｉ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ － ｒ ｏ ｎ ｇ， Ｆ ＥＮＧ Ｇｕ ｏ － ｌ ｉ ， Ｌ Ｕ Ｊ ｕ ｎ
摘要 ： 鉴于转 Ｂ ｔ 基 因抗 虫 棉 的抗 虫 性 存 在 时 空表 达 差 异 的现 象 ， 因此 ， 采用 免疫检 测法 中的金标 Ｂ ｔ －
１ ． ２方 法
价（ Ｂｔ ＋Ｃ ｐ 丁Ｄ携 带 外 源 基 因选 择 标 记 基 因 （ ＮＰＴ
Ⅱ） 类型 ， 由于 ＮＰＴⅡ基 因的 产物 能 对卡 那 霉 素产
生抗 性口 ］ ， 因此 当前 使 用 卡 那 霉 素 筛 选 鉴 别 转 基 因材料 的方 法 较 为 普 遍 ， 但其精确度 不高（ 存 在 假 阳性 ） 。这 与 Ｂ ｔ 棉 毒 蛋 白 存 在 时 空 表 达 差 异 有 关 。因此 ， 如何 快 速 准 确 鉴 定 材料 的抗 虫 性 是
Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａｂ ／ Ａｃ抗 虫检 测试 纸条 进行 Ｂ ｔ 毒蛋 白定 性 检 测 ， 并 对其 使 用 方 法 中 的样 品取 样 部位 、 时 期 与样 品稀 释 参数 进 一步 调整 。结 果表 明， 检测 苗 期 的子 叶、 顶 部 第 二 叶及 蕾期 的顶 部 第 二 叶 等组 织 器 官 时 ， 样 品稀
育种 单位 所 关 注 的 问 题 之 一 ＿ １ 。 。本 文 采 用 金 标
１ ． ２ ．１检 测 方 法 及 样 品 制 备 。 采 用 金 标 Ｂ ｔ － Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａｂ ／ Ａｃ 抗虫 检 测 试 纸 条 （ 检测精 度 ０ ． １ ２ ５ ） 进行 Ｂ ｔ 蛋 白定 性 检测 ， 将 原 抗 虫 检测 试 纸 条 中样
３ ． 新疆 石 河子 市科 技局 ８ ３ ２ ０ ０ ０ ； ４ ． 新疆 农业 科 ｅ － 院经 济作 物所 ， 乌 鲁木齐 ８ ３ ０ ０ ９ １ ）
Ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｎ Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｕｓ ｉ ｎ ｇ Ｌａ ｔ ｅ ｒ ａ ｌ Ｆ ｌ ｏ ｗ Ｓ ｔ ｒ ｉ ｐ ｏ ｆ Ｂｔ － Ｃ ｒ ｙ ｌ Ａｂ ／ Ａｃ
Ｂ ｔ － Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａｂ ／ Ａｃ 抗 虫检 测试 纸条 （ 免疫 检测 法 ） 进 行
检测 ， 并 对其 使 用 中 的取样 部 位 、 时期 与 样 品 稀 释 参数 进一 步优 化 。
称Ｂ ｔ 棉） 是 当今世 界 上种 植 面 积最 大 、 分 布 范 围最 广 的转基 因作物 之 一 。Ｂ ｔ 棉 自身 合 成 的 杀虫 蛋 白 可有 效毒 杀 棉铃 虫等 一些 鳞 翅 目害虫 ， 不 仅 节省 了
的抗 虫 性 ［ ２ － ８ ］ 。
转Ｂ ｔ 基 因抗 虫 棉 材 料 为 ： 美 国孟 山都 公 司 转
单价 Ｂ ｔ 基 因 的抗 虫 棉 ３ ３ Ｂ， 由 中 国农 业科 学 院 棉
花研 究所 种 质 资 源 库 提 供 。非 转 基 因材 料 为 新 陆
早 ３ ６号 ， 由石 河 子 棉 花 研 究 所 提 供 ； 试 剂 及 仪器 ： 石英 砂 、 剪刀、 离心 管 、 研钵、 电子 天平 （ 精 确度 ０ ． ０ １
害虫 防 治 的成本 ， 而 且缓 解 了 因大 量 喷施 化 学农 药
ｌ材 料 和 方 法
１ ． １材 料
而造 成 的环 境污 染 ， 深受 农 民的 欢迎 １ ］ 。但 目前 已 商业 化 生产 的 国 内外 抗 虫 棉 品种 的抗 虫 性 均 存 在
时空 表达 差 异 。主要 表 现在 ， Ｂ ｔ 棉 的抗虫 性 因不 同 发 育 阶段 、 不 同器 官 或 部 位 而 表现 出 明显 的差 异 ， 某些 环 境 因子 和农艺 管理 措 施 也会 显 著 影 响 Ｂ ｔ 棉
中国棉花 ・ 金标 Ｂ ｔ － Ｃ ｒ ｙ ｌ Ａ ｂ ／ Ａ ｃ 试纸条定性检测转 堕 基固 垄
窒：
！
二 ！
金标 Ｂ ｔ － Ｃ ｒ ｙ Ｉ Ａ ｂ ／ Ａ ｃ 试 纸 条 定性检 测转 Ｂ ｔ 基 因棉 花 的方 法研 究
聂 新辉 ， 尤 春源 ， 陈惠 瑜。 ， 孔 杰 ， 雷江 荣 ， 冯国 礼 ， 吕 军 （ １ ． 新疆 石 河 子农 业科技 开发 研 究 中心／ 棉 花研 究所 ， 新疆 石 河子 ８ ３ ２ ０ ０ ０ ； ２ ． 中国农 业大 学 ， 北京 １ ０ ０ ０ ８ ３ ；