抗生素效价培训大全

抗生素效价培训内容

一、需要干热灭菌的器皿：

C

二、以检磷酸泰乐菌素为例配置培养基和缓冲液的准备如下：

㈠①磷酸泰乐菌素原料含量测定标准：精密称取本品适量，加灭菌水定量制成每1ml中约

含1000单位的溶液，照抗生素微生物检定法测定。1000泰乐菌素单位相当于1mg的泰

乐菌素。

成品含量测定标准：精密称取本品适量，置100ml量瓶中，加灭菌磷酸盐缓冲液（pH6.0）40ml，加甲醇40ml，超声15分钟，摇匀，放冷，加灭菌磷酸盐缓冲液（pH6.0）稀释至

刻度，使成每1ml中约含1000单位的溶液，取上清液，照磷酸泰乐菌素项下的方法测定，即得。

②查《中国兽药典》2005年版附录103页抗生素微生物检定法，可知：

泰乐菌素试验菌——藤黄微球菌（28001）；培养基——Ⅱ，pH值为6.5~6.6或7.8~8.0；

灭菌缓冲液pH值——6.0；抗生素浓度范围2.5~10.0；温度——35~37；

时间——16~18

培养基Ⅱ制备方法：

胨6g；酵母浸出粉6g；琼脂15~20g；牛肉浸出粉 1.5g；葡萄糖1g；水1000ml 磷酸盐缓冲液（6.0）——取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml。

③缓冲液及培养基配置完成后进行高压121℃湿热灭菌，时间为15~20min。

㈡①标准品、原料、成品取样量的计算方法：

标准品效价：1034u/mg 原料效价：800u/mg 成品效价：880×104/100g

原料800u/mg×x=1000u×10ml x=0.0125g

成品 100g: 880×104=x:100ml×1000u x=1.13636g

标准品 1034u/mg×x=1000u×10ml x=0.00967g

注意事项：a.称量量必须大于应取的量，多余的量要另加溶液使溶液浓度达到标准；如

标准品取0.00992g,多加溶液量为x, 1034u/mg×9.92mg=1000u×x，x=10.26ml，则

另加溶液0.26ml。另外也要考虑容量瓶的体积，以免称量量过多使之盛不下。b.标准品

应从冰箱拿出后放置室温再进行称量。

②稀释步骤：

取5ml

1000u/ml 50u/ml

缓冲液6.0定容至100ml

取5ml

50u/ml 5u/ml

缓冲液6.0定容至50ml

取5ml

50u/ml 2.5u/ml

缓冲液6.0定容至100ml

二、具体操作过程：

①试验操作过程在生物测定室的半无菌室内进行，一切准备就绪后就进行如下操作：

a.将所有双碟平铺在水平台上,事先加热融化的培养基吸取20ml均匀摊布每个双碟内；

等培养基凝固后盖上陶瓦盖，放置培养箱中。

b.将作为菌层的培养基水浴至90℃左右，然后再放置到菌层培养的控制温度（藤黄微

球菌的控制温度是48～50℃)，这其中时间内可将菌液配制好(吸取2ml灭菌水至细

菌斜面内，摇匀），等温度降至控制温度时吸取菌液（一般为0.6ml）至培养基内并

摇匀，迅速吸取5ml至每个双碟使之均匀摊布。

c.菌层完全凝固后放置牛津杯，牛津杯应四角对称的放置在菌层平面上，然后再加高

低浓度溶液，牛津杯和抑菌圈的位置如下图所示：

d.

注意事项：a.细菌斜面应提前从冰箱拿出放置室温。b.吸取菌层5ml刻度吸管应放置

培养箱中保温。c.在双碟上记录标准品所对应位置以便测量数据，两个样品的标记应

区分开来。d.菌层培养的控制温度应直接量培养基的温度，因为水浴所用水的温度肯

定低于培养基的温度，使用的温度计要用75%酒精搽拭。