抗生素效价的测定
抗生素效价的测定方法
抗生素效价的测定方法1. 磁敏感性法：该方法是将细菌和抗生素共同培养在琼脂平板上，然后在琼脂平板的一侧放置磁性探针，通过磁力对菌落的影响，测定抗生素效价。
这种方法操作简单，结果可重复性好。
2. 微量滴定法：该方法是将不同浓度的抗生素加入含有微生物的培养基中，控制每次加量相同，直至培养基中出现明显的抑菌圈，然后根据最小抑菌浓度来测定抗生素的效价。
这种方法对药物浓度的变化比较敏感，但误差较大。
3. 黏度测定法：该方法是根据细菌代谢后产生的黏性物质的变化，来测定抗生素的效价。
该方法操作简单，但对试验条件较为严格。
4. 限制性酶切割法：该方法是将抗生素和细菌混合后，通过限制性酶将其切割成小片段，进而测定抗生素的效价。
这种方法需使用限制性酶切割试剂和设备，相对较为复杂。
5. 形态学观察法：该方法是观察抗生素对细菌的形态和结构的影响，来判断抗生素的效价。
这种方法适用于细菌的菌落比较大的情况，但操作比较繁琐。
6. 代谢产物测定法：该方法是根据细菌代谢产物的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法操作比较简单，但对试验条件较为严格。
7. 荧光标记法：该方法是将抗生素用荧光标记，然后与细菌共同培养，通过荧光强度的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件要求比较高，但结果可靠性较高。
8. 酶联免疫吸附测定法：该方法是将抗生素用于特定的抗体结合，然后通过检测抗体与细菌结合的情况，来测定抗生素的效价。
这种方法的优点是灵敏度高，同时避免了细菌对抗生素的耐药性。
9. 质谱法：该方法是使用质谱仪分析样品中的分子质量的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法可分析多种抗生素，但设备价格昂贵。
10. 核磁共振法：该方法是使用核磁共振仪测定样品中的氢、碳、氮等原子的共振频率和空间结构，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件的要求非常高，且设备也价格昂贵。
测定抗生素效价的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据具体情况选择合适的方法，以确保测定结果的准确性和可靠性。
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
抗生素效价测定实验报告
抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。
然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。
为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。
本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。
材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。
3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。
4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。
5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。
6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。
7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。
8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。
2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。
4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。
5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。
6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。
7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。
通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。
效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。
实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。
例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。
抗生素效价测定
项目２青霉素效价测定一、知识连接(一)抗生素效价表示方法效价就是评价抗生素效能得标准,也就是衡量抗生素活性成分含量得尺度。
效价一般指得就是生物活性得大小或者高低,生物活性得大小与高低就是与效价成正比得。
实际应用中,合理使用抗生素得剂量十分重要。
抗生素应用时剂量小,因此除重量外,常用特定得效价单位(unit)表示,效价单位也称抗菌活性单位。
最初,由于抗生素无法制得纯品,用其生物活性得大小来表示其剂量、一个青霉素得效价单位(Ｕ):能在5０mL肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株得发育得最小青霉素剂量。
一个链霉素效价单位(U):能在1mＬ肉汤培养基中完全抑制大肠杆菌(ATCC9６3７)发育得最小剂量。
重量单位(μg):以抗生素得有效成分(生理活性成分)得重量作为抗生素得基准单位(大多数使用)。
(二)抗生素效价测定抗生素微生物检定法可分为稀释法、比浊法与琼脂扩散法(管碟法与打孔法)。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素得效价。
管碟法就是利用抗生素在琼脂培养基得扩散渗透作用,在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6、0±0。
l mm,外径8、0±０。
l mm,高1０±０.lmm),管内放入标准品与检品得溶液,经16～1８小时恒温培养,当抗生素在菌层培养基中扩散时,会形成抗生素浓度由高到低得自然梯度,即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此,当抗生素浓度达到或高于MIC(最低抑制浓度)时,试验菌就被抑制而不能繁殖,从而呈现透明得无菌生长得区域,常呈圆形,称为抑菌圈。
抑菌圈得大小代表药剂抗菌力得高低。
在一定得药剂浓度范围内,药剂得浓度越高则抑菌圈得直径越大。
目前最常用得就是游标卡尺与直尺直接测量抑菌圈直径、根据扩散定律得推导,抗生素总量得对数值与抑菌圈直径得平方成线性关系,即通过检测抗生素对微生物得抑制作用,比较标准品与供试品产生抑菌圈得大小,计算出供试品得效价。
管碟法得基本操作与设计适用于各种抗生素,试验结果较稳定;样品用量少,灵敏度高;适合于大批样品得测定。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
抗生素生物效价测定[参考]
![抗生素生物效价测定[参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/ed9845a5dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f5.png)
抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。
该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。
测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。
抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。
试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。
操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。
2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。
3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。
4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。
观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。
5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。
6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。
其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。
7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。
反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。
抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。
在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。
抗生素效价测定方法
抗生素效价测定方法抗生素效价测定方法引言：抗生素是一类用于抑制或杀灭细菌生长的药物。
它们的广泛应用已经在医学领域产生了积极的影响，但随之而来的是细菌对抗生素产生的抗药性问题。
为了准确评估抗生素的效力以及制定合适的治疗方案，科学家们研发了多种抗生素效价测定方法。
本文将深入探讨这些方法的原理、应用和局限性。
正文：一、生物学测定法生物学测定法是一种常见的抗生素效价测定方法，它基于抗生素对细菌的抑制或杀菌作用。
主要包括最小抑菌浓度（MIC）测定和最小杀菌浓度（MBC）测定。
1. 最小抑菌浓度（MIC）测定：MIC测定是通过在含有细菌的培养基上逐渐加入不同浓度的抗生素，观察最低的有效浓度，以抑制细菌的生长或形成可见的生长抑制区域。
这个测定方法通常可以定量地测量出抗生素的最低有效浓度。
2. 最小杀菌浓度（MBC）测定：MBC测定是在MIC测定的基础上，进一步通过将培养基转移到不含有抗生素的培养基中培养，观察最低有效浓度，以杀灭细菌生长。
这个测定方法可以提供更准确的抗生素效价评估，因为它考虑了抗生素的细菌杀菌作用。
二、色谱分析法色谱分析法是一种基于抗生素化学性质的效价测定方法。
它通过使用色谱柱将样品中的抗生素分离出来，并测量其峰面积或峰高，以定量分析其浓度。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的色谱分析技术，可以有效地分离、定量和鉴定抗生素。
它利用高压泵将样品溶液推入色谱柱，通过样品在固定相和流动相之间的分配系数差异来实现分离。
定量的抗生素效价可以通过峰面积或峰高与标准曲线的关系来计算。
2. 气相色谱法（GC）：GC是一种适用于易挥发性物质的色谱分析方法，在某些情况下可以用于抗生素浓度测定。
样品经过气相柱，抗生素蒸发后进入气相检测器进行分析和定量。
三、生物化学测定法生物化学测定法是一种基于抗生素与生物体或其代谢产物之间的相互作用来评估抗生素效力的方法。
常见的生物化学测定法包括酶抑制测定法和細胞毒性試驗。
杯碟法测定抗生素效价的原理
杯碟法测定抗生素效价的原理抗生素是可以破坏或阻止细菌生长的药物，常用于治疗细菌感染。
测定抗生素的效价是指确定一定量的抗生素可以有效抑制细菌生长的最小浓度。
常见的测定方法有杯碟法、肉汤稀释法、滴定法、渐进浓度法等。
杯碟法是测定抗生素效价最为常用的方法。
杯碟法是通过在含有细菌的培养基上放置不同浓度的抗生素溶液，观察不同浓度抗生素在培养基中形成的抑菌区域的大小，来确定细菌抑制最小浓度的方法。
具体操作步骤如下：1. 准备培养基：为了使实验结果更准确，通常采用标准化的稀释培养基，如Mueller Hinton培养基或Tryptic Soy培养基等。
2. 制备细菌悬液：从纯培养物中挑取1-2个菌落，在含有培养基的试管中，通过匀浆、加水稀释等方式制备出一定浓度的细菌悬液。
3. 处理杯和碟：将无菌培养基倒入消毒好的培养皿中，在其表面均匀涂布细菌悬液，再通过光学密度法或草屑法将不同浓度的抗生素液均匀滴入培养皿中的小圆片（碟）或凹坑（杯），形成抗生素浓度逐渐递减的浓度梯度。
注意，应尽量减少气泡形成，以免干扰细菌生长和抑制效果的判定。
为了控制实验条件的统一，通常使用标准的尺寸和厚度的杯或碟。
4. 培养：将已处理好抗生素和细菌悬液的培养皿放入恒温箱中，以维持适宜的温度、通气和湿度条件。
通常培养时间为18-24小时，但根据不同的细菌种类和抗生素特性会有所不同。
需要注意的是，杯碟法虽然是一种简单可行的方法，但对实验条件的控制要求较高，需要熟练的技术和严格的操作流程，否则会影响到实验结果的准确性。
在实际使用中，还应该根据不同细菌种类和抗生素类型选择不同的培养基、抗生素和其浓度等参数，以达到更好的效果。
杯碟法由于操作简单、容易控制，因此在临床医学领域得到了广泛应用。
其主要作用是为临床医生提供了确定正确用药方案的重要依据，可以根据不同细菌种类及其药敏性，选择最合适的抗生素类别，并测定其最低抑菌浓度，为临床治疗提供有效参考依据。
杯碟法也可应用于食品、环境监测等领域。
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价的测定
•
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，
样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平
中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
• 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
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12
• 双碟的制备：
•
•
取内径90mm、高16—17mm的平底双碟；
•
注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均
匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
•
另取培养基适量加热融化后，放冷至48－
50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液
适量（能得清晰的抑菌圈为度。）
• 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
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微生物发的分类
• 稀释法 • 浊度法 • 双碟法
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6
• 2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
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3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。
抗生素效价微生物检定法
赵永成 生工1001 4104100139
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1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
抗生素生物效价测定(详细参考)
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价测定技术—抗生素效价微生物检定法
知识点3：浊度法
四、检定操作方法
（一）线性试验
除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各试验
管内精密加入含试验菌的液体培养基9. 0ml，再分别精密加入各浓
度的标准品溶液1.0ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定
条件下培养至适宜测量的浊度值（通常约为4小时）。
知识点3：浊度法
（三）空白试验
线关系，可采用t检验。
4．测定结果的计算及可信限率估计。
5．实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的1 10%，则检验
结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
知识点3：浊度法
6．原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符
合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
供试品低剂量溶液
（即SH→TH→SL→TL）
6.测量抑菌圈 双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破
圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
在恒温培养箱中培养至规定时间
技能点1：二剂量法操作规程
• 测量抑制圈
的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。
玻璃/塑料
平皿(d=90mm
h=16-17mm)
菌层
5ml
含菌培养基
底层
20ml
灭菌培养基
技能点1：二剂量法操作规程
制备底层
制备菌层
技能点1：二剂量法操作规程
4.放置钢管
5.滴碟、培养
毛细滴管（或滴管）滴碟
滴加顺序：按标准品高剂量溶液→供试品高剂量溶液→标准品低剂量溶液→
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定是用来评估抗生素药物对特定微生物的杀菌或抑菌能力的方法。
以下是几种常见的抗生素效价测定方法：
1. 系列稀释法：通过将抗生素药物制剂按照一定比例进行稀释，然后将每个浓度的药物与一定数量的微生物接种在培养基上，观察药物对微生物生长的影响。
根据微生物的生长情况，确定能抑制或杀灭微生物生长的最小药物浓度，即最低抑菌浓度（MIC）。
2. 纸片扩散法：将含有一定浓度抗生素的纸片放置在含有微生物的琼脂平板上，通过抗生素扩散至琼脂中的方式，形成药物浓度递减的梯度。
培养一段时间后，观察纸片周围菌落的生长情况，根据纸片周围菌落的性状和大小，判断抗生素在不同浓度下对微生物的效果。
3. 悬浮液法：将一定浓度的微生物悬浮液与不同浓度的抗生素药物混合，在一定时间后，通过感光度测定、比色法或荧光法等方法，测定混合液中微生物的生长情况，根据微生物的生长情况确定抗生素的效价。
4. 动物试验法：选择一种特定的动物模型，如小鼠、兔子等，将不同浓度的抗生素药物注射或灌胃给动物，观察抗生素对动物体内微生物的杀菌或抑菌效果。
根据动物的生理反应、细菌计数等指标，确定抗生素的效力。
需要注意的是，不同的抗生素和微生物对上述方法的适用性可能有所差异，具体选择方法时需要根据具体实验目的和条件进行判断。
此外，还需要遵循相关实验操作规范和安全操作指南，确保实验的准确性和安全性。
抗生素效价测定
项目2青霉素效价测定一、知识连接（一）抗生素效价表示方法效价是评价抗生素效能的标准，也是衡量抗生素活性成分含量的尺度。
效价一般指的是生物活性的大小或者高低，生物活性的大小和高低是和效价成正比的。
实际应用中，合理使用抗生素的剂量十分重要。
抗生素应用时剂量小，因此除重量外，常用特定的效价单位（unit）表示，效价单位也称抗菌活性单位。
最初，由于抗生素无法制得纯品，用其生物活性的大小来表示其剂量。
一个青霉素的效价单位（U）：能在50mL肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株的发育的最小青霉素剂量。
一个链霉素效价单位（U）：能在1mL肉汤培养基中完全抑制大肠杆菌（ATCC9637）发育的最小剂量。
重量单位（μg）：以抗生素的有效成分（生理活性成分）的重量作为抗生素的基准单位（大多数使用）。
（二）抗生素效价测定抗生素微生物检定法可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。
管碟法是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作用，在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0.lmm），管内放入标准品和检品的溶液，经16～18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
目前最常用的是游标卡尺和直尺直接测量抑菌圈直径。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，即通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
管碟法的基本操作和设计适用于各种抗生素，试验结果较稳定；样品用量少，灵敏度高；适合于大批样品的测定。
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单位（unit,位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重量 作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸 盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕ ｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是 根据国际使用习惯而来的。
2 供试品及标准品的配制
标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。 供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。 称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反 复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免 吸水。
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天 平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平 。天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单 位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位
４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。
微生物发的分类
稀释法 浊度法 双碟法
2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中 对试验菌生长的抑制作用，通过测定培 养后细菌浊度值的大小，比较标准品与 供试品对试验菌生长抑制的程度，以测 定供试品效价的种方法。
抗生素效价赵微永成生生物工检10定01 法
4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量 便具有选择性地杀死或抑制其他病原微 生物生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微 生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。
管碟法的材料
一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液
管碟法测定操作
1. 试验用菌液 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球 菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂 斜面上，在35~37℃培养20h到22h，；临 用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔 洗下，备用
称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液 ，定容至刻度，过滤并稀释。
双碟的制备：
取内径90mm、高16—17mm的平底双碟； 注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均 匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
另取培养基适量加热融化后，放冷至48－ 50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液 适量（能得清晰的抑菌圈为度。） 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
（二）抑菌圈的形成
在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、 “SL” 和“UH”、 “UL”标记
将不锈钢小管(俗称为牛 津杯)放置在含敏感试验 菌的琼脂培养基上。
th
sl
uh
以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外
且四杯内液面高度相同 ，盖上平皿盖，静置30 分钟。
3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。
通过琼脂培养基，可观 察并测量出抑菌圈的 大小。
管碟法测定抗生素效价 原一理原理和方法
在一定的抗生素浓度 范围内，对数剂量(浓度 )与抑菌圈的表面积或直 径成正比，可以得出一 条曲线。
抗生素浓度换算成对 数，则抑菌圈直径与抗 生素对数成直线关系
将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中 ，琼脂培养基中的试 验菌开始生长。
抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；
比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小 ，可计算出抗生素的效价。
计算检品的效价
求出W和V W=（SH+TH）-（SL+TL） V=（TH+TL）-（SH+SL） TH供试品高剂量的抑菌圈 TL供试品低剂量的抑菌圈 SH标准品高剂量的抑菌圈 SL标准品低剂量的抑菌圈
求出θ=D· log（IV/W）
θ供试品和标准品的效价比 D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一 般为1 I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 Pr = Ar×θ Pr供试品实际单位数
Ar供试品标示量或估计单位