抗生素效价测定操作规程

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抗生素的效价测定方法

抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。

为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。

本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。

二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。

通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。

2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。

通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。

三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。

（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。

（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。

2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。

② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。

③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。

② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。

③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。

（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。

② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。

抗生素效价操作规程

抗生素效价标准操作程序1、目的：建立一个抗生素效价的标准操作程序2、范围：抗生素效价的检测相关工作3、责任：生测组检验员4、内容：4.1 仪器用具与试药4.1.1 180℃干热灭菌2h：陶瓦盖20个；试管(30×200mm) 1支（依据菌液浓度方法而论）；镊子(23mm) 1把；100ml量筒1个（依据菌液浓度方法而论）；25ml量筒1个；锥形瓶1个；钢管80个；1ml吸管2根；大口5ml吸管2支；10ml移液管2根；碟子20个4.1.2 121℃高压湿热灭菌20分钟：抗生素Ⅰ号培养基；工服；pH7.8磷酸缓冲液约；无菌水；烂烧杯3个（盛放有菌试管）；一次性塑胶手套。

4.2操作步骤4.2.1对照品称量4.2.1.1从对照品管理人员处领取一支硫酸庆大霉素标准品（200mg），因标准品刚从冰箱取出，需放置室温平衡30分钟，然后拿到称量室，用已稳定(早点打开电源就能稳定)的万分之一天平称。

4.2.1.2取一张滤纸（1／4）称出重量，然后清零，按“F”键把“g”转化为“mg”,小心加对照品，直至39.2mg，可以多称一点，也许会粘纸。

把对照品轻轻倒入容量瓶，再复称一下称量纸，记录下来。

4.2.1.3称取量加无菌水在容量瓶颈部口径处冲洗，观察到对照品溶解后加无菌水至刻度，充分摇匀，放置在冰箱。

4.2.2 供试品称量4.2.2.1 准备一个干净50ml容量瓶，口径上附一个小漏斗（漏斗口径尽量挑选大一点的，可使供试品快速落到容量瓶）。

把上述装备放到已稳定的万分之一天平称出数据，然后清零。

从干燥器中取出供试品，倒入一部分到研钵中，顺时针快速研细颗粒，颗粒易吸潮，称取速度一定要快。

4.2.2.2从万分之一天平中取出已清零的（容量瓶+漏斗），用药匙挑取供试品到漏斗中，再轻轻振动漏斗，使供试品落到容量瓶，加到一定量，拿容量瓶+漏斗+供试品到天平称重，如已接近12.5g，就打开天平上面的玻璃门，从上面慢慢加样，直到12.5g。

抗生素效价测定操作规程

QCA/QC-SOP-0061.主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。

本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。

2.引用标准《中国药典》2010年版二部。

3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。

抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

本法采用的是管碟法。

4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。

室温控制20-25℃。

注意抗生素的污染。

4.2双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。

4.3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。

4.4钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用.4.5钢管放置器4.6恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。

抗生素效价测定操作规程

抗生素效价测定操作规程1. 主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。

本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。

2. 引用标准《中国药典》2010年版二部。

3. 术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。

抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

本法采用的是管碟法。

4. 操作技术（仪器与用具）4.1 操作室：光线明亮，操作间分 a.一般操作间b 半无菌操作间。

室温控制20-25℃。

注意抗生素的污染。

4.2 双蝶：内径90mm 高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。

4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。

4.4 钢管：内径 6.0±0.1mm 高7.8±0.1mm 或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h 以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min 或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW 冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用. 4.5 钢管放置器4.6 恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml 、20ml ），用后立即置5%石碳酸或QCA/QC-SOP-006山东良福制药有限公司起草人日期抗生素效价测定操作规程审核人日期批准人日期第五版实施日期总页数共5页1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡,水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。

抗生素效价测定实验报告

抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。

然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。

为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。

本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。

材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。

2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。

3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。

4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。

5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。

6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。

7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。

8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。

实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。

2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。

3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。

4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。

5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。

6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。

7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。

结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。

通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。

通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。

效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。

实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。

例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。

抗生素微生物检定操作规程

[转载]抗生素微生物检定法（上）(2010-07-30 16:00:26)转载原文标签：转载原文地址：抗生素微生物检定法（上）作者：yingying本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。

抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。

除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。

管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

（一）基本设备、用具、试验材料及标准品1. 基本设备（1）抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。

该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。

（2）超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。

（3）抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。

2. 用具（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。

新购的双碟应按上述要求进行检查。

检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160 ℃干热灭菌2小时后备用。

（2）陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。

（3）不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。

（4）小钢管放置器：四孔和六孔各一台。

（5）游标卡尺：精密度0.02mm。

（6）滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。

抗生素微生物测定法操作规程

抗⽣素微⽣物测定法操作规程抗⽣素微⽣物测定法操作规程1．⽬的：建⽴抗⽣素微⽣物测定操作规程，便于操作者正确进⾏抗⽣素效价测定。

2．适⽤范围：适⽤于抗⽣素的效价测定。

3．责任⼈：QC质量检验员4．正⽂：4.1 仪器设备与试液：4.1.1 仪器设备4.1.1.1 操作室：应在抗⽣素检定室中进⾏。

4.1.1.2 超净⼯作台：（⽤于菌种的接种或传代）4.1.1.3 恒温培养箱：隔板上可备有带孔的玻璃板并垫平。

4.1.1.4 电热⿎风⼲燥箱4.1.1.5 电热压⼒蒸汽灭菌器4.1.1.6 电热恒温⽔浴锅4.1.1.7 天平：分析天平，感量0.1mg4.1.1.8 游标卡尺：精度0.05mm，长度125mm。

4.1.1.9 双碟：为硬质玻璃培养平⽫，内径90mm，⾼16～17mm，碟底厚薄均匀⽔平，⽆⽓泡。

4.1.1.10 陶⽡盖：内径约130mm，外径108mm，平坦，吸⽔性强。

4.1.1.11 钢管：内径（6.0±0.1）mm 或（7.8±0.1），⾼（10.0±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端⾯光滑平坦，管壁厚薄⼀致。

4.1.1.12 钢管放置器：置于半⽆菌操作间内，应保持清洁，防⽌抗⽣素污染。

可定期按钢管放置器操作规程进⾏消毒。

4.1.1.13 ⽑细滴管：⽤玻璃管拉制，管⼝光滑。

4.1.1.14 称量瓶：25ml、50ml、100ml、200ml、250ml4.1.1.15 刻度吸管：1ml、2ml、5ml、10ml、20ml4.1.1.16 移液管2ml、5ml、10ml、20ml4.1.1.17 其他玻璃仪器4.1.2 试液：41.2.1 缓冲液、磷酸盐缓冲液（pH 6.0）、磷酸盐缓冲液（pH 7.8）4.1.2.2 ⽣理盐⽔4.1.2.3 0.1%新洁尔灭4.1.2.4 5%⽯炭酸4.1.2.5 75%⼄醇溶液（配制酒精棉球⽤）4.1.2.6 3%煤酚皂溶液4.1.3 培养基：培养基Ⅰ、培养基Ⅱ、培养基Ⅵ4.1.4 试验⽤菌种：检定⽤标准菌种，由中国兽药监察所提供，为冷冻⼲燥菌种，其复苏、接种与保存均参照《菌种复苏操作规程》、《菌种接种操作规程》。

CHB-1型抗生素效价测定仪标准操作规程

一、目的：制定抗生素效价测定仪标准操作规程，便于操作者的正确操作。

二、适用范围：适用于抗生素效价测定仪的操作。

三、责任者：QC检验员。

四、正文：1.准备：1.1开机前的检查1.1.1检查仪器与计算机的信号线及控制线是否联好。

1.1.2检查计算机、显示器、打印机的连线。

1.1.3检查计算机、显示器、打印机及仪器的电源线是否连接好。

2.开机检查：2.1分别依次打开计算机、仪器和打印机的电源开关。

2.2 POWER总电源指示灯及CAMERA摄像指示灯亮后方可正常工作。

2.3 LIGHT SOURCE2照明光源指示灯应点亮，再打开测量室门，检照明光源是否亮。

2.4用手按下“¤”键，检查测量室内主光源是否点亮。

2.5用手按下“¤”键，检查测量室内菌碟的放置台是否清洁。

3.系统的进入：打开计算机，在“开始”菜单中单击“程序”选项后，单击“抗生素效价测量仪”即可测量。

4. 各种工作的步骤4.1 测量抑菌圈菌碟的步骤文件----建立报告----测量4.2 校正滴错位的菌圈，即菌圈定位编辑----菌圈定位4.3 仪器所测量的若干组数据，进行组间合并计算文件----组间合并计算4.4 手工测量的抑菌圈数据的处理实验步骤按照（见说明书，7-1测量）开始进行，直到（图7-6），这时直接选择关闭项将进入下图，单击上面的数据进入手工输入。

4.5 以f、Sm、Pt数值，进行合并计算文件----建立报告----合并计算4.6 删除旧文件的菌碟步骤文件----删除记录4.7 旧报告的查看及输出文件----打开记录4.8 如何放置菌碟将待测菌碟放置在测量台上，分别按正确方向放置，将标准溶液的低剂量抑菌圈，对准仪器测量内的箭头，即放置在外侧。

每次测量时，即在Light Sources批示灯亮时，严禁打开测量室门，待其熄灭后，即可开门取出菌碟，再依照前图示放入下一个菌碟。

5 结束5.1 退出系统5.2 关机当测量工作全部完成后，其关机顺序与开机时的顺序相反，并关闭测量室门，盖上防护罩。

抗生素效价检测

抗生素效价检测
抗生素效价测定
⒈准备工作
①干热灭菌（150-160℃干热灭菌2小时）：带盖培养皿，陶瓦盖（定期清洗灭菌），钢管，刻度吸管（25ml，10ml，1ml各一根）
②湿热灭菌（121℃蒸汽灭菌30分钟）：水，缓冲液，培养基（根据要求设置灭菌温度和时间）
③试验用菌悬液活化
④效价操作间紫外灯消毒30分钟后开通风，室温控制在20-25℃
⑤实验前检查酒精灯，打火机，酒精棉球，洗耳球，温度计，移液枪，枪头等
⒉对照溶液和样品溶液的制备
①一步用灭菌水稀释至1000μ/ml（即称样量=稀释浓度×1000/标识效价），黏菌素稀释至10000μ/ml（即称样量=稀释浓度×10000/标识效价），称样量必须大于等于理论值，根据实际称样量补水
②二步以后用灭菌缓冲液稀释，根据兽药典稀释到要求的浓度范围
⒊双碟的制备（一批需6个以上）
①底层：用25ml刻度管吸取20ml培养基注入双碟内，静置待其凝固
②菌层：待培养基温度降至实验菌适应范围（一般细菌48-50℃，芽孢可至60℃），加入适量菌悬液摇匀，用10ml刻度管吸取带菌培养基5ml，使均匀分布在底层培养基上（一边放带菌培养基一边在平面上摇晃培养皿）
③放置钢管，做好标记，静置
④滴加对照溶液和样品溶液，移液枪调至245μL，注意枪头不能挂壁
⑤滴加完毕后盖上陶瓦盖，移入培养箱，于35-37℃培养至所需
时间
⒋抑菌圈的测量与计算
测量抑菌圈直径，根据公式P=log-1[(T2+T1-S2-S1)/ (T2+S2-T1-S1)×0.301]×100％计算。

抗生素效价测定操作规程

1.主题内容和适用范圉本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。

本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。

2.引用标准《中国药典》2010年版二部。

3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。

抗生素微主物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

本法釆用的是管碟法。

4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明壳，操作间分&一般操作间b半无菌操作间。

室温控制20-25°Co 注意抗生素的污染。

4. 2双蝶：内径90mm高16-17呗用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160°C干热灭菌2小时或高压灭菌121o C30min,备用。

4. 3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。

4. 4 钢管：内径 6. 0±0. 1mm 高7. 8±0. 1mm 或8. 0±0. 1mm, 10. 0±0. lmm.重量差异不超±0. 05g.用后置1:1000苯扎澳钱溶液内浸泡2h以上，再灭菌洗涤，先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160°C干热灭菌2小时备用.4. 5钢管放置器4. 6恒温培养箱：隔水式为宜35-37°C4. 7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸或1:1000 苯扎漠鞍溶液中消毒后再常规洗涤.150- 160°C干热灭菌2小时备用.4. 8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4. 9称量瓶:具塞，重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW 冲3次，置洁净的大平皿中.120°C干热3h,待冷到70-60°C时,取出置干燥器中备用.4. 10 毛细滴管：清洁液浸泡，水洗、PW冲3次.120°C干燥3h4.11 天平:分析天平，感量0. lmg4. 12 抑菌圈测量仪（多功能微主物自动测量分析仪）4.13 超净工作台5.菌悬液制备取短小芽泡杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水广2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35〜37°C 培养7天。

31 抗生素效价的测定

A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个抑菌圈的直径。分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法比浊法管碟琼脂扩散法（中国）

抗生素的生物效价测定法(管碟法)

抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。

生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。

抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。

稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。

这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。

所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。

由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。

比浊法原理及操作大致与稀释法相同。

比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。

这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。

这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。

扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。

经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。

抗生素生物效价测定[参考]

抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。

该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。

测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。

抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。

试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。

操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。

2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。

3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。

4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。

观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。

5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。

6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。

其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。

7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。

反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。

抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。

在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。

抗生素微生物检定标准操作规程完整

抗生素微生物检定标准操作规程1 简述抗生素微生物检定法系在适宜条件下，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。

依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。

后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。

中国药典也采用这两种方法。

抗生素微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。

此法系根据抗生素在一定浓度围，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。

抗生素微生物比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验菌的液体培养基，混均后，经培养，测量培养基浊度。

此法系根据抗生素在一定的浓度围，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度（浊度与细菌群体质量及细菌细胞容积的增加之间存在直接关系）之间存在线性关系而设计，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。

抗生素效价以“单位（u）”或“微克（µg）”表示。

抗生素管碟测定法2 仪器与用具2.1 操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。

半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100级～10，000级）及空调设备，控制室温在20～25℃之间，达到无菌或半无菌状态。

操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。

注意操作，避免室抗生素污染。

2.2 双碟径约90mm，高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。

碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一白纸，碟加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。

用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，至150℃～160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟，备用。

杯碟法测定抗生素效价的原理

杯碟法测定抗生素效价的原理抗生素是可以破坏或阻止细菌生长的药物，常用于治疗细菌感染。

测定抗生素的效价是指确定一定量的抗生素可以有效抑制细菌生长的最小浓度。

常见的测定方法有杯碟法、肉汤稀释法、滴定法、渐进浓度法等。

杯碟法是测定抗生素效价最为常用的方法。

杯碟法是通过在含有细菌的培养基上放置不同浓度的抗生素溶液，观察不同浓度抗生素在培养基中形成的抑菌区域的大小，来确定细菌抑制最小浓度的方法。

具体操作步骤如下：1. 准备培养基：为了使实验结果更准确，通常采用标准化的稀释培养基，如Mueller Hinton培养基或Tryptic Soy培养基等。

2. 制备细菌悬液：从纯培养物中挑取1-2个菌落，在含有培养基的试管中，通过匀浆、加水稀释等方式制备出一定浓度的细菌悬液。

3. 处理杯和碟：将无菌培养基倒入消毒好的培养皿中，在其表面均匀涂布细菌悬液，再通过光学密度法或草屑法将不同浓度的抗生素液均匀滴入培养皿中的小圆片（碟）或凹坑（杯），形成抗生素浓度逐渐递减的浓度梯度。

注意，应尽量减少气泡形成，以免干扰细菌生长和抑制效果的判定。

为了控制实验条件的统一，通常使用标准的尺寸和厚度的杯或碟。

4. 培养：将已处理好抗生素和细菌悬液的培养皿放入恒温箱中，以维持适宜的温度、通气和湿度条件。

通常培养时间为18-24小时，但根据不同的细菌种类和抗生素特性会有所不同。

需要注意的是，杯碟法虽然是一种简单可行的方法，但对实验条件的控制要求较高，需要熟练的技术和严格的操作流程，否则会影响到实验结果的准确性。

在实际使用中，还应该根据不同细菌种类和抗生素类型选择不同的培养基、抗生素和其浓度等参数，以达到更好的效果。

杯碟法由于操作简单、容易控制，因此在临床医学领域得到了广泛应用。

其主要作用是为临床医生提供了确定正确用药方案的重要依据，可以根据不同细菌种类及其药敏性，选择最合适的抗生素类别，并测定其最低抑菌浓度，为临床治疗提供有效参考依据。

杯碟法也可应用于食品、环境监测等领域。

CHB-1型抗生素效价测定仪标准操作规程

一、目的：制定抗生素效价测定仪标准操作规程，便于操作者的正确操作。

二、适用范围：适用于抗生素效价测定仪的操作。

三、责任者：QC检验员。

四、正文：1.准备：1.1开机前的检查1.1.1检查仪器与计算机的信号线及控制线是否联好。

1.1.2检查计算机、显示器、打印机的连线。

1.1.3检查计算机、显示器、打印机及仪器的电源线是否连接好。

2.开机检查：2.1分别依次打开计算机、仪器和打印机的电源开关。

2.2 POWER总电源指示灯及CAMERA摄像指示灯亮后方可正常工作。

2.3 LIGHT SOURCE2照明光源指示灯应点亮，再打开测量室门，检照明光源是否亮。

2.4用手按下“¤”键，检查测量室内主光源是否点亮。

2.5用手按下“¤”键，检查测量室内菌碟的放置台是否清洁。

3.系统的进入：打开计算机，在“开始”菜单中单击“程序”选项后，单击“抗生素效价测量仪”即可测量。

每次测量时，即在Light Sources批示灯亮时，严禁打开测量室门，待其熄灭后，即可开门取出菌碟，再依照前图示放入下一个菌碟。

5 结束5.1 退出系统5.2 关机当测量工作全部完成后，其关机顺序与开机时的顺序相反，并关闭测量室门，盖上防护罩。

效价测定

抗生素效价（二剂量法）链霉素的效价1、试验用试验器材：双碟、陶瓦盖、钢管、钢管放置器、玻璃容器、毛细滴管、灭菌刻度吸管、称量瓶、恒温培养箱、万分之一天平、干燥箱、恒温水浴箱、显微镜、抑菌圈测量仪或游标卡尺、超净工作台、冰箱、酒精灯、接种环2、供试品称量量：50mg3、缓冲液：磷酸盐缓冲液（ph7.8）取磷酸氢二钾5.59g与磷酸氢二钾0.41g,加水使成1000ml,摇匀滤过。

121℃蒸汽灭菌30min备用。

4、培养基制备数量1个供试品效价测定5个每平100ml4个用于预实验1个用于预实验 7个三角瓶2个，每瓶250ml1个供试品效价测定5、营养琼脂培养基：100ml,作为菌种活化用。

6、双碟数量：8套（供试品效价测定）+8套（预试验）。

共16副。

小钢管（牛津杯）：32个+32个（预试验），共64个，每个双碟中放置4个。

7、操作步骤7.1菌种1）枯燥芽孢杆菌【Bacillus subtilis CMCC(B)63501】2）枯燥芽孢杆菌菌悬液的制备（供试品效价测定）7.2 菌液制备取枯燥芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，加灭菌水2ml冲下菌苔，制成悬液，用吸管将此悬液接种于营养琼脂培养基上，均匀摊布，在37℃培养7天，取菌苔少许涂片，用革兰染色镜检，应有芽孢85%以上。

用灭菌水将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，65℃水浴内加热30min，将菌体杀死，待冷后放冰箱储藏为浓菌液。

7.3 供试品溶液的制备供试品估计效价1000000U/g.精密称取样品50.0mg，加水50ml，稀释制成1000U/ml溶液，吸取2ml加入100ml容量瓶中，加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成20U/ml溶液，吸取7ml加入100ml容量瓶中，加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成1.4U/ml溶液（T1），吸取25ml加入50ml容量瓶中，加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成0.7U/ml溶液（T2），作为供试品溶液。

抗生素生物效价测定(详细参考)

实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。

【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。

管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。

管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。

管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。

根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。

常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。

后二法已经列入药典。

二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。

取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。

先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。

（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。

抗生素效价测定技术—抗生素效价微生物检定法

知识点3：浊度法
四、检定操作方法
（一）线性试验
除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各试验
管内精密加入含试验菌的液体培养基9. 0ml，再分别精密加入各浓
度的标准品溶液1.0ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定
条件下培养至适宜测量的浊度值（通常约为4小时）。
知识点3：浊度法
（三）空白试验
线关系，可采用t检验。
4．测定结果的计算及可信限率估计。
5．实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的1 10%，则检验
结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
知识点3：浊度法
6．原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符
合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
供试品低剂量溶液
（即SH→TH→SL→TL）
6.测量抑菌圈双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破
圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
在恒温培养箱中培养至规定时间
技能点1：二剂量法操作规程
• 测量抑制圈
的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。
玻璃/塑料
平皿(d=90mm
h=16-17mm)
菌层
5ml
含菌培养基
底层
20ml
灭菌培养基
技能点1：二剂量法操作规程
制备底层
制备菌层
技能点1：二剂量法操作规程
4.放置钢管
5.滴碟、培养
毛细滴管（或滴管）滴碟
滴加顺序：按标准品高剂量溶液→供试品高剂量溶液→标准品低剂量溶液→