第十二章抗生素测定ppt课件

第一节 抗生素的效价和单位
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时 不加区别统称为效价单位。 效价（ｐ otency），指检品的实际单位数与 其标示量的比值。常表示为效价的百分数。 单位（ unit,u ）单位是衡量抗生素有效成分 的具体尺度。 标准品与国际单位(international unit,iu) 抗生素微生物测定用的标准品，除国内的新 品种外，凡已制备国际标准品的品种，在制备国家 标准品时，均与国际标准品比较而定出效价。
第十二章抗生素 测定
学习目标
知识目标
掌握抗生素微生物检定法的基本原理； 掌握管碟法二剂量法的具体操作步骤及相关 注意事项

技能目标
能使用管碟法对药物进行效价测定
第一节
概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便具有选 择性地杀死或抑制其他病原微生物生长的一类天 然有机化合物。 抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗 菌效力作为效价的衡量标准。
2. 标准品与供试品溶液的制备 按药典规定制备标准品 与供试品高低不同浓度溶液。 3. 双碟的制备 制备底层及含一定量试验菌的菌层，并安 置小钢管。 4. 滴加药液到小钢管内 将标准品、供试品溶液滴入相应 的小钢管中。 5. 培养 在恒温培养箱中培养至规定时间。 6. 测量抑菌圈 可用手工测量或仪器测量。 7. 计算结果 先进行可靠性测验,符合规定,再进行效价计算
（一）管碟法测定原理
3 、管碟法：是利用抗生素在 含敏 感试 验菌 的琼 脂培养 基中的球面扩散渗透作用 ， 从而形成一定的抑菌圈。
通过琼脂培养基，可观察并测 量出抑菌圈的大小。
Ⅻ试验菌
Ⅰ超净工作台 Ⅱ抑菌圈测量仪
Ⅵ恒温培养箱
Ⅷ玻璃仪器
Ⅲ双碟
仪器用 具材料
Ⅸ游标卡尺 Ⅹ缓冲液 Ⅺ培养基
Ⅳ陶瓦盖
Ⅴ钢管 Ⅶ灭菌刻度吸管
（二）管碟法的材料
（二）管碟法的材料
（二）管碟法的材料
（二）管碟法的材料
（二）管碟法的材料
类别
实验菌
培养基
PH 7.88.0 6.56.6
Байду номын сангаас
链、卡 枯草芽胞杆菌 Ⅰ 庆、红 四、土 滕黄八叠球菌 Ⅱ 氯、林
（二）管碟法的材料
第三节
管碟法测定操作
按兽药典
1. 试验用菌液、缓冲液、培养基的制备 规定进行制备。
三、抗生素效价微生物测定技术
（一）概述
简便、快速，本身纯度不高， 采用该法会引起偏差，因此只 有在纯度较高情况下可采用
原理和临床应用的要求相一 致，直接反映出抗生素的疗 效，且灵敏度较高，需用量 较小，因此被广泛使用。
物理、化学法 效价测 定技术 方法
微生物法
微生物法分类:
分为：
稀释法
浊度法
双碟法
①培养基及 其制备方法
② 缓冲溶液
⑦检定法
管碟法测定操作
③菌 悬液 的制 备
⑥双碟的制备
⑤供试品溶 液的制备
④标准品溶 液的制备
抗生素效价检定管碟法操作流程
标准品的称量 →标准品的稀释→标准品溶液 --─┐ 缓冲液的制备 供试品的称量 →供试品的稀释→供试品溶液 ─┐ ┌───平板的制备────┐ ↓ 凝固后 凝固后 ↓20 ml─→菌层5ml ─→ 加小钢管 底层 培养基的制备→ 加菌液 菌液的制备
在称量抗生素样品过程中，操作者的工作服
上有可能会沾染抗生素粉末，在配培养基、 加底层培养基、加菌层培养基或滴加抗生素 溶液时，会随衣袖的抖动落入培养基，造成 破圈或者无抑菌圈。 所以配制抗生素溶液应单独使用一套工作服。
双碟的制备：
•
取内径90mm、高16—17mm的平底双碟； • 注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均匀 摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
细菌浓度：在试验之前，可以先做一个关于
用不同浓度菌液配制的琼脂培养基菌层预试 验，选择抑菌圈直径在18～22mm的菌液浓 度为试验用浓度 6 （菌液浓度约为10 个/mL）。
2 供试品及标准品的配制
标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平 衡。供试品应放于干燥器内至少30min方可称 取。称量最好为一次取样称量，动作迅速，不 得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好， 以免吸水。 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天 平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。 天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
国际通用法定方法: 扩散法中的管碟法
2 、浊度法系利用抗生 素在液体培养基中对试 验菌生长的抑制作用， 通过测定培养后细菌浊 度值的大小，比较标准 品与供试品对试验菌生 长抑制的程度，以测定 供试品效价的种方法。
第二节 管碟法测定抗生素效价 原理和方法
一 原理
在一定的抗生 素浓度范围内，对 数剂量 ( 浓 度 ) 与抑 菌圈的表面积或直 径成正比，可以得 出一条曲线。 抗生素浓度换 算成对数，则抑菌 圈直径与抗生素对 数成直线关系
加陶瓦园盖
可靠性测验，计算结果 ←──测量抑菌圈←─培
养
1.
试验用菌液 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的 营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上， 在35~37℃培养20h到22h，；临用前用水或者 灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用。 大肠杆菌悬液：取大肠杆菌的营养斜面培养 物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37 ℃培 养20h到22h；临用前用水或者灭菌生理盐水 溶液将菌苔洗下，备用。
二、抗生素标准品含量的表示方法
１、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作 单位
１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类 的重量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四 环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内） １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００ 个单位。这是根据国际使用习惯而来的。 ３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的 质量为单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单 位 ４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一 质量定为一单位。
• 另取培养基适量加热融化后，放冷至48－50℃ （芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量（能 得清晰的抑菌圈为度。） •二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在 18－24 mm。