抗生素效价的测定教学文案
电阻法测定抗生素效价的方法
电阻法测定抗生素效价的方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：电阻法测定抗生素效价是一种常用的方法，用于评估抗生素在不同条件下的活性。
这种方法通过测定抗生素与微生物的相互作用，来确定抗生素对微生物的杀菌效果。
在医学和药物研究领域，电阻法被广泛应用于评估抗生素的效价，以指导临床治疗和研发新的抗生素药物。
电阻法测定抗生素效价的原理是利用微生物在生长过程中对电阻的改变来反映细菌或真菌的数量，从而评估抗生素对微生物的活性。
通常情况下，实验过程中需要准备一定的培养基和试验物质，将微生物接种在含有不同浓度抗生素的培养基中，然后通过测定电阻值来监测微生物的增殖情况，并进一步评估抗生素的效价。
电阻法测定抗生素效价的步骤主要包括以下几个方面：首先是准备培养基和试验物质，确保实验条件的稳定性和可重复性；其次是将微生物接种进试验管中，加入不同浓度的抗生素，培养一定时间，使微生物在不同浓度抗生素的作用下生长繁殖；然后是测定电阻值，通过测定微生物在不同条件下的电阻变化，来评估抗生素的效价；最后是分析实验结果，得出结论和建议，指导临床治疗和药物研发。
电阻法测定抗生素效价的优点在于操作简便、结果可靠和快速，可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
电阻法还可以用于筛选出更有效的抗生素，并研究抗生素的作用机制，为药物研发和临床应用提供技术支持。
不过，电阻法测定抗生素效价也存在一些局限性，例如只能评估抗生素的杀菌效果，对于其他抗生素的效力可能无法准确评估；实验过程中可能会受到一些因素的影响，如培养条件、微生物菌株和抗生素的稳定性等。
在进行电阻法测定抗生素效价实验时需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
电阻法测定抗生素效价是一种简单有效的评估抗生素活性的方法，可以为临床治疗和药物研发提供重要的参考依据。
在今后的研究和实践中，我们可以进一步完善这种方法，提高其准确性和灵敏度，为抗生素的研究和应用贡献更多的技术和经验。
【结束】.第二篇示例：电阻法测定抗生素效价是一种常用的药物测定方法，通过测定抗生素对微生物的抑制作用，来确定抗生素的效力。
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。
此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。
除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。
试验过程短于渗透法。
轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。
《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。
渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。
中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。
通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。
管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。
一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。
该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
抗生素效价检测
抗生素效价检测
抗生素效价测定
⒈准备工作
①干热灭菌（150-160℃干热灭菌2小时）：带盖培养皿，陶瓦盖（定期清洗灭菌），钢管，刻度吸管（25ml，10ml，1ml各一根）
②湿热灭菌（121℃蒸汽灭菌30分钟）：水，缓冲液，培养基（根据要求设置灭菌温度和时间）
③试验用菌悬液活化
④效价操作间紫外灯消毒30分钟后开通风，室温控制在20-25℃
⑤实验前检查酒精灯，打火机，酒精棉球，洗耳球，温度计，移液枪，枪头等
⒉对照溶液和样品溶液的制备
①一步用灭菌水稀释至1000μ/ml（即称样量=稀释浓度×1000/标识效价），黏菌素稀释至10000μ/ml（即称样量=稀释浓度×10000/标识效价），称样量必须大于等于理论值，根据实际称样量补水
②二步以后用灭菌缓冲液稀释，根据兽药典稀释到要求的浓度范围
⒊双碟的制备（一批需6个以上）
①底层：用25ml刻度管吸取20ml培养基注入双碟内，静置待其凝固
②菌层：待培养基温度降至实验菌适应范围（一般细菌48-50℃，芽孢可至60℃），加入适量菌悬液摇匀，用10ml刻度管吸取带菌培养基5ml，使均匀分布在底层培养基上（一边放带菌培养基一边在平面上摇晃培养皿）
③放置钢管，做好标记，静置
④滴加对照溶液和样品溶液，移液枪调至245μL，注意枪头不能挂壁
⑤滴加完毕后盖上陶瓦盖，移入培养箱，于35-37℃培养至所需
时间
⒋抑菌圈的测量与计算
测量抑菌圈直径，根据公式P=log-1[(T2+T1-S2-S1)/ (T2+S2-T1-S1)×0.301]×100％计算。
管碟法抗生素微生物检定法讲座
得较清晰的抑菌圈。再如，泰乐菌素对藤黄微球菌杀灭作用较弱，形成的抑菌圈边缘清晰度 较差，对枯草芽孢杆菌杀灭作用较强，形成的抑菌圈边缘很清晰。
⑵解决办法有： ａ保持菌种新鲜，定期传代，及时更换，定时进行单菌落的分离、纯化。 ｂ增强抗生素的抗菌活性：可以从培养基的成分、pH 值和缓冲液的 PH 值和浓度来控制。 ｃ严格控制操作条件：如严格控制培养基、缓冲液的 pH 和培养温度的均匀性。
②小钢管底部二端面不平，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是抗生素溶 液在琼脂培养基上扩散速度不一致。操作时使用加工相同的小钢管可防止此现象的发生。
③双碟、小钢管或其它器具被抗生素或其它杀菌剂污染。此操作会使抑菌圈破裂，有时 甚至使试验菌大部或全部被抑制，无法形成抑菌圈。因此，操作时一定要防止材料、器具、 环境被抗生素污染。
此为二剂量法效价计算公式，其中 S1、S2、T1、T2 分别为低浓度标准、高浓度标准、低
浓度样品、高浓度样品产生的抑菌圈半径。
实验证明：对数剂量与抑菌圈直径或面积在一定条件下呈直线关系，所以为工作方便在
实际工作中把半径的平方改为抑菌圈直径或面积，公式变为：
Logθ T2- S2+ T1- S1
─── ＝───────
Ⅱ
M1
9.21DT
1
Ⅰ+Ⅱ得： 2Logθ＝───〔(T22- S22)+( T12 - S12)〕
Ⅲ
9.21DT
(①+②)-(③+④)得：
(LogM 2+ LogM 2/)-( LogM 1 + LogM 1/)＝──── (S22+ T22- S12- T12)
抗生素效价测定操作规程
1.主题内容和适用范圉本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微主物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法釆用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明壳，操作间分&一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25°Co 注意抗生素的污染。
4. 2双蝶：内径90mm高16-17呗用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160°C干热灭菌2小时或高压灭菌121o C30min,备用。
4. 3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4. 4 钢管：内径 6. 0±0. 1mm 高7. 8±0. 1mm 或8. 0±0. 1mm, 10. 0±0. lmm.重量差异不超±0. 05g.用后置1:1000苯扎澳钱溶液内浸泡2h以上，再灭菌洗涤，先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160°C干热灭菌2小时备用.4. 5钢管放置器4. 6恒温培养箱：隔水式为宜35-37°C4. 7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸或1:1000 苯扎漠鞍溶液中消毒后再常规洗涤.150- 160°C干热灭菌2小时备用.4. 8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4. 9称量瓶:具塞，重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW 冲3次，置洁净的大平皿中.120°C干热3h,待冷到70-60°C时,取出置干燥器中备用.4. 10 毛细滴管：清洁液浸泡，水洗、PW冲3次.120°C干燥3h4.11 天平:分析天平，感量0. lmg4. 12 抑菌圈测量仪（多功能微主物自动测量分析仪）4.13 超净工作台5.菌悬液制备取短小芽泡杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水广2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35〜37°C 培养7天。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
抗生素的测定
抗生素效价的生物测定一、目的要求学习了解抗生素效价的生物测定（管碟法）的基本原理和方法。
二、基本原理某些微生物在代谢过程中所产生的次级代谢产物能在低浓度的情况下抑制或杀死某些微生物，这种物质称为抗生素。
抗生素效价的生物测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。
管碟法是扩散法中的一种，本法是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作用，将已知浓度的标准溶液与未知浓度的样品溶液在含有敏感性试验菌的琼脂表面进行扩散渗透，比较两者对被试菌的抑菌作用，求出抑菌圈的大小，以测定抗生素的浓度。
在一定范围内，浓度与抑菌圈直径在双周半对数表上（浓度为对数值，抑菌圈直径为数字值）成直线函数的关系，由此绘制成标准曲线，从样品的抑菌圈大小可在标准曲线上求得其效价。
由于本法是利用抗生素抑制敏感细菌的特点，所以符合临床使用的实际情况，而且灵敏度也很高，不需特殊设备，故一般实验室及生产上多采用此法。
但此法也有缺点，即操作步骤多，手续繁杂，培养时间长、得出结果慢。
尽管如此，由于它有上述的独特优点而被世界各国所公认，成为国际通用的方法被列入各国药典法规的范围内。
本实验以龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）产生的土霉素效价测定为例。
三、器材黄色八叠球菌（Sarcina flava）；（土霉素效价测定用）培养基，（供培养试验菌用）培养基Ⅰ，（供摊布双碟的上、下层用）培养基Ⅱ；培养皿，牛津杯（或不锈小钢管），陶瓦圆盖，50ml、250ml、1000ml容量瓶， 0．1mol/LHCl，土霉素标准品等。
四、操作步骤1．pH6．0磷酸缓冲液的配制准确称取KH2PO40．8g和K2HPO40．2g，置100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，灭菌备用。
2．标准土霉素溶液的配制精确称取20mg土霉素标准品，每毫克含880单位（880r/mg），先用0．1mol/LHCl溶解（按称量每10mg加酸1ml），然后加入无菌蒸馏水稀释成每毫升含1000单位（1000r/ml）的溶液，此液在5℃以下保存。
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素生物效价测定(详细参考)
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价的测定讲义
管碟法的材料
一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌
的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
适量（能得清晰的抑菌圈为度。）
• 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记
th
sl
• 将不锈钢小管(俗称为牛
uh
津杯)放置在含敏感试验
菌的琼脂培养基上。
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外
效 价 （ ｐ otency ） ， 指 检 品 的 实 际 单位数与其标示量的比值。常表示为效价 的百分数。
单位（unit,u）单位是衡量抗生素有 效成分的具体尺度。
• １、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
• １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重 量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐 酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克 （ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。 这是根据国际使用习惯而来的。
• 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；
• 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
抗生素生物效价测定
真验一抗死素死物效价测定之阳早格格创做【真验手段】1. 掌握抗死素死物效价测定的本理战要领；2. 掌握管碟法测定抗死素死物效价相闭的支配要领.【真验本理】抗死素的效价常采与微死物教要领测定，它是利用抗死素对于特定的微死物具备抗菌活性的本理去测定抗死素效价的要领，如管碟法.管碟法是暂时抗死素效价测定的国际通用要领，尔国药典也采与此法.管碟法是根据抗死素正在琼脂仄板培植基中的扩集渗透效率，比较尺度品战检品二者对于考查菌的抑菌圈大小去测定供试品的效价.管碟法的基根源基本理是正在含有下度敏感性考查菌的琼脂仄板上搁置小钢管（内径，中径，下），管内搁人尺度品战检品的溶液，经16~18小时恒温培植，当抗死素正在菌层培植基中扩集时，会产死抗死素浓度由下到矮的自然梯度，即扩集核心浓度下而边沿浓度矮.果此，当抗死素浓度达到大概下于MIC（最矮压制浓度）时，考查菌便被压制而不克不迭繁殖，进而浮现透明的无菌死少的天区，常呈圆形，称为抑菌圈.根据扩集定律的推导，抗死素总量的对于数值与抑菌圈曲径的仄圆成线性闭系，比较抗死素尺度品与检品的抑菌圈大小，可预计出抗死素的效价.时常使用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法.后二法已经加进药典.二剂量法系将抗死素尺度品战供试品各稀释成一定浓度比率（2:1大概4:1）的二种溶液，正在共一仄板上比较其抗药活性，再根据抗死素浓度对于数战抑菌圈曲径成曲线闭系的本理去预计供试品效价.与含菌层的单层仄板培植基，每个仄板表面搁置4个小钢管，管内分别搁进供试品下、矮剂量战尺度品下、矮剂量溶液.先丈量出四面的抑菌圈曲径，按下列公式预计出检品的效价.（1）供出W战V：W=（SH+UH）-（SL+UL） (式2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2)式中：UH：供试品下剂量之抑菌圈曲径；UL：供试品矮剂量之抑菌圈曲径；SH：尺度品下剂量之抑菌圈曲径；SL：尺度品矮剂量之抑菌圈曲径；（2）供出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式3)式中：θ：供试品战尺度品的效价比；D：尺度品下剂量与供试品下剂量之比，普遍为1；I：下矮剂量之比的对于数，即log2大概log4.（3）供出Pr ：Pr = Ar×θ(式4)式中：Pr：供试品本质单位数；Ar：供试品标示量大概预计单位.【真验资料战仪器】（1）菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），菌液浓度约为106个/mL.菌株保存的时间过暂，效率其对于抗死素的敏感度，引导抑菌圈变大、朦胧大概者出现单圈.如若菌株不杂，也会制成那样的截止.果此，菌液正在使用一段时间后，不妨重新配制杂化大概者减小本去菌液正在使用中的稀释倍数.（2）抗死素尺度品战供试品：头孢推定尺度品战供试品.（3）培植基：效价检定用培植基1号.（4）无菌缓冲液：称与磷酸氢二钾 5.59g，磷酸二氢钾0.41g，加火1000mL，即为的磷酸盐缓冲液.制备缓冲液的试剂应为分解杂，配制后的缓冲液应澄浑，分拆于玻璃容器内，经121℃蒸气灭菌30 min备用.2. 真验仪器无菌室、培植皿（曲径9 cm）、陶瓦盖、钢管、钢管搁置器、恒温培植室、灭菌刻度吸管、玻璃容器、称量管、毛细滴管、天仄、曲尺大概游标卡尺、超洁处事台等.【真验步调】1. 称量称量前，将抗死素尺度品战供试品从冰箱与出，使与室温仄稳，供试品应搁于搞燥器内起码30 min圆可称与.供试品与尺度品应用共一天仄；吸干性较强的抗死素正在称量前1~2小时调换天仄内搞燥剂.尺度品称量不可少于20mg，与样后坐将要称量瓶大概相宜的容器及被称物盖佳，免得吸火.称样量的预计：W=V*C/P(式4)式中：W：需称与尺度品大概供试品的重量（mg）V：溶解尺度品大概供试品制成浓溶液时用容量瓶的体积量（mL）C：尺度品大概供试品下剂量的浓度（U/mL，μg/mL）P：尺度品的杂度大概供试品的预计效价（U/mg，μg/mg）2. 稀释从冰箱中与出的尺度品溶液，必须先正在室温搁置，使其温度达到室温后，圆可量与.尺度品大概供试品溶液的稀释应采与容量瓶，每步稀释，与样量不得少于2mL，稀释步调普遍不超出3步.屡屡吸与溶液用肥肚吸管大概稀刻度玻璃吸管，量与溶液前要用被量液流洗吸管2~3次，吸与样品溶液后，用滤纸将中壁多余液体揩去，从起初刻度开初搁溶液.稀释尺度品与供试品用的缓冲液应共一批战共瓶，（预计不敷时，应预先与另一瓶混匀后再用），免得果pH大概浓度分歧效率预约截止.稀释时，屡屡加液至容量瓶近刻度前，稍搁置片刻，待瓶壁的液体真足流下，再准确补加至刻度.尺度品与供试品下矮浓度之比为2:1大概4:1，但是所采用的浓度必须正在剂量反应曲线范畴内.3. 单碟制备正在超洁处事台上，用灭菌大心吸管（20mL），吸与已融化的培植基20mL注进单碟内，动做培植基的下层，等凝固后调换搞燥的陶瓦盖覆盖，搁置20~30 min，备用.与出考查用菌悬液，按已考查适合的菌量（下浓度所致的抑菌圈曲径18~22mm），用灭菌吸管吸与菌悬液加进已融化并保温正在火浴中（普遍细菌48~50℃，芽孢可至60℃）的培植基内，摇匀动做菌层用.用灭菌大心5mL吸管，吸与菌层培植基5mL，使匀称摊布正在下层培植基上，置火仄台上待凝固，用陶瓦盖覆盖，搁置20~30 min，备用.4. 搁置钢管用钢管搁置器，大概其余要领将钢管普遍、稳固天搁进培植基上，钢管搁妥后，应使单碟静置5~10 min，使钢管正在琼脂内稍下重宁静后，再开初滴加抗死素溶液.5. 滴加抗死素溶液每批供试品与5~10个单碟，滴加溶液用毛细滴管大概定量加样器，正在滴加之前须用滴加液洗2~3次.正在单碟的4个钢管中以对于角线滴加尺度品与供试品溶液的下、矮二种浓度的溶液，滴加程序为SH→TH→SL→TL，也可用SL→TL→TH→SH.（S代表尺度品，T代表供试品，H代表下浓度，L代表矮浓度），滴加溶液至钢管心仄谦，注意滴加溶液隔断不可过少，果溶液的扩集时间分歧效率测定截止.滴加完成，用陶瓦盖覆盖单碟，稳固置于单碟托盘内，单碟叠搁不可超出3个，预防受热不均，效率抑菌圈大小，以火仄位子稳固移进35~37℃恒温培植室，培植至所需时间.6. 抑菌圈丈量用曲尺大概游标卡尺丈量抑菌圈的曲径，.【截止与预计】根据真验丈量的抑菌圈大小，预计抗死素供试品的效价单位.【注意事项】1. 玻璃仪器战其余器具需用博用洗液大概其余荡涤液中浸泡过夜，浑洗，沥搞，置150～160℃搞热灭菌2小时大概下压121℃蒸气灭菌30分钟，备用.2. 真验中样品的称量、稀释、培植基倒仄板等支配要庄重的无菌支配.3. 制备仄板时，搁置培植皿的超洁台的台里必须火仄.不妨将培植皿搁正在台里上，下垫一弛黑纸，皿内加火2～3 浅蓝朱火，瞅察蓝色深浅是可普遍.4. 为包管单碟搁置天区的仄坦，可正在单碟底部预先标记表记标帜样品的下矮浓度天区，正在加注培植基下层的时间，有程序天依照普遍目标排列.交下去加注培植基菌层的时间，仍旧依照本去的位子与目标排列.那样，纵然桌里不敷火仄，仍旧不妨包管培植基菌层是正在火仄的培植基下层上铺开，达到与消缺面的手段.5. 正在滴加抗死素到小钢管的时间，由于毛细管内抗死素溶液往往会有气泡大概者毛细管开心端有液体残留，继承滴加简单制成气泡伸展破裂，使溶液溅降正在琼脂培植基表面制成破圈.果此一朝毛细管中出现气泡大概者残留，便重新吸与抗死素溶液举止滴加，毛细管心应预防太细，滴加的时间离开小钢管心距离不要太下.滴加中若有溅出，可用滤纸片沉沉吸去，不致制成破圈.正在滴加中另有大概出现抗死素溶液滴进小钢管后，不与琼脂培植基菌层交触，有一段气氛被压正在溶液与培植基之间，那样是不会爆收抑菌圈的.此时不妨留神的用滴管吸出小钢管内的抗死素溶液，弃去.换滴管重新滴加.6. 正在称量抗死素样品历程中，支配者的处事服上有大概会沾染抗死素粉终，正在配培植基、加下层培植基、加菌层培植基大概滴加抗死素溶液时，会随衣袖的抖动降进培植基，制成破圈大概者无抑菌圈.所以配制抗死素溶液应单独使用一套处事服.7. 滴加了抗死素溶液后的单碟忌振动，要沉拿沉搁.正在搬运到培植箱的历程中，不妨预先正在培植箱中垫上报纸铺仄，再把单碟连共垫于桌上的玻璃板留神运至培植箱，缓缓推进箱内.8. 单碟正在37℃下培植约16h.时间太短会制成抑菌圈朦胧，太少则会使菌株对于抗死素的敏感性低重，正在抑菌圈边沿的菌继承死少，使得抑菌圈变小.9. 正在培植历程中，如果温度不匀称（过于交近热源），会制成共一单碟上细菌死少速率不等，使抑菌圈变小大概者不圆.所以把单碟搁进培植箱时，要与箱壁脆持一定的距离，单碟叠搁也不克不迭超出3个.培植中，箱门不得随意开开，免得效率温度.应时常注意温度，预防不料过热过热.10. 用游标卡尺丈量抑菌圈曲径，不妨正在单碟底部垫一弛乌纸，正在灯光下丈量.不宜与去小钢管再丈量，果为小钢管中残存的抗死素溶液会流出扩集，使抑菌圈变得朦胧.不克不迭把单碟翻转过去丈量抑菌圈曲径，果为底里玻璃合射会效率抑菌圈丈量的准确度.【思索题】1. 为什么要用二步稀释，而不曲交从1000U/mL稀释到10、20U/mL？2. 死物效价测定真验室被抗死素粉尘传染会引导什么成果？。
抗生素生物效价测定之欧阳文创编
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.lmm，外径8.0±0.lmm，高10±0.lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL） (式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式 2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式 2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
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中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
• 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
• 双碟的制备：
•
•
取内径90mm、高16—17mm的平底双碟；
•
注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均
匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
•
另取培养基适量加热融化后，放冷至48－
50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液
效 价 （ ｐ otency ） ， 指 检 品 的 实 际 单位数与其标示量的比值。常表示为效价 的百分数。
单位（unit,u）单位是衡量抗生素有 效成分的具体尺度。
• １、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
• １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重 量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐 酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克 （ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。 这是根据国际使用习惯而来的。
适量（能得清晰的抑菌圈为度。）
• 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记
th
sl
• 将不锈钢小管(俗称为牛
uh
津杯)放置在含敏感试验
菌的琼脂培养基上。
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外
• 求出θ=D· log（IV/W）
• θ供试品和标准品的效价比 • D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般
为1 • I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 • Pr = Ar×θ • Pr供试品实际单位数
• Ar供试品标示量或估计单位
管碟法的材料
一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌
的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。
通过琼脂培养基，可观 察并测量出抑菌圈的 大小。
管碟法测定抗生素效价 原理和方法
一 原理 在一定的抗生素浓
度范围内，对数剂量(浓 度)与抑菌圈的表面积或 直径成正比，可以得出 一条曲线。
抗生素浓度换算成对 数，则抑菌圈直径与抗 生素对数成直线关系
抗生素效价微生物检定法
赵永成 生工1001 4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。
2 供试品及标准品的配制
• 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量
最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取， 取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。
•
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，
样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平
３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为 单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位
４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。
微生物发的分类
• 稀释法 • 浊培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
• 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；
• 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
计算检品的效价
• 求出W和V • W=（SH+TH）-（SL+TL） • V=（TH+TL）-（SH+SL） • TH供试品高剂量的抑菌圈 • TL供试品低剂量的抑菌圈 • SH标准品高剂量的抑菌圈 • SL标准品低剂量的抑菌圈