生化蛋白质
生化实验报告蛋白质
生化实验报告蛋白质生化实验报告：蛋白质的奥秘引言：蛋白质是构成生命体的基本组成部分，对维持生命活动起着重要作用。
本次实验旨在通过生化方法对蛋白质进行研究，探索蛋白质的结构、功能以及其在生物体中的重要性。
一、蛋白质的结构蛋白质是由氨基酸组成的长链状分子，其结构可以分为四个层次：一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
1. 一级结构：一级结构是指蛋白质中氨基酸的线性排列顺序。
通过实验中的酸水解反应，我们成功地将蛋白质分解为氨基酸，并通过高效液相色谱法（HPLC）对氨基酸进行定量分析。
2. 二级结构：二级结构是指蛋白质中氨基酸的局部空间排列方式。
通过圆二色光谱实验，我们可以分析蛋白质的二级结构类型，如α-螺旋、β-折叠等。
实验结果显示，我们所研究的蛋白质主要以α-螺旋为主。
3. 三级结构：三级结构是指蛋白质中氨基酸的整体空间排列方式。
通过X射线晶体衍射实验，我们可以确定蛋白质的三维结构。
本次实验中，我们利用蛋白质晶体的衍射图谱，成功地解析了蛋白质的三级结构。
4. 四级结构：四级结构是指蛋白质中多个多肽链的空间排列方式。
多个多肽链之间通过非共价键（如氢键、离子键等）相互作用，形成复杂的蛋白质结构。
通过实验中的凝胶电泳技术，我们可以研究蛋白质的四级结构。
二、蛋白质的功能蛋白质在生物体中具有多种功能，下面我们将介绍蛋白质在生物体中的常见功能。
1. 结构功能：蛋白质是生物体组织和细胞的重要构成成分，能够提供机械支持和稳定细胞结构。
例如，胶原蛋白是皮肤和骨骼的主要组成成分，赋予它们强度和弹性。
2. 酶功能：蛋白质中的酶能够催化生物体内的化学反应，促进代谢过程的进行。
例如，消化酶能够帮助分解食物，使其更容易被吸收和利用。
3. 运输功能：蛋白质在生物体内能够通过血液循环将物质从一个地方运输到另一个地方。
例如，血红蛋白能够将氧气从肺部运输到组织细胞，供给细胞呼吸所需。
4. 免疫功能：蛋白质中的免疫球蛋白能够识别和抵御外来入侵物质，保护生物体免受病原体的侵害。
生化基础物质检测—蛋白质检测
参考值：1.31-2.93g/L
（八）铜蓝蛋白(CER) 急性时相反应蛋白
结构： MW=12-16 万, 1046个aa残基构成的单链多肽，含 糖约１０％，每分子铜蓝蛋白可结合６～８个铜原子。
理化性质：肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；pI 值为 4.4， 具遗传基因多态性。
临床意义：第一个认定的急性时相反应蛋白,是急性时相反 应的一个敏感指标，在ＡＭＩ、创伤、感染、外科手术时含 量迅速升高，达到正常的2000倍。
参考值：＜ 8.0mg/L （血浆）
小结
急性时反应蛋 白的种类
【 生
急性时反应蛋
化 检
白的功能
验
的
项
目
】
主要蛋白质概述
教学目标
掌握：血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆
纤维蛋白原
醋酸纤维素薄膜
+-
Ø功能分类:
小结
血浆脂蛋白的
【 主
种类
要 蛋
白
质
血浆脂蛋白的
】
功能
蛋白质（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能。
熟悉：酶促反应动力学。 了解：其他蛋白质的来源和生理功能。
血浆蛋白质检验基本知识
机体主要的
机体蛋白质： 生物大分子 体液蛋白质的检测：
含量：人体固体成分的45%
种类：10万，3000~5000种/单细胞 功能：生长，代谢、血凝、运动、免 疫、信息传递等
疾病发生
测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等
功能：具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库
临床意义： 增加感染,创伤,肿瘤; 降低--营养不良，严重肝病及肾综;协助诊断Wilson 病
生化-蛋白质思维导图脑图
蛋白质4分子组成组成元素主要元素其他元素各种蛋白质含氮量接近，平均为16%100克样品中蛋白质含量=每克样品含氮数*6.25*10020种L-α-氨基酸【除甘氨酸—无手性】非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸芳环氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸特殊氨基酸脯氨酸亚氨基酸半胱氨酸胱氨酸两分子半胱氨酸脱氢形成二硫键氨基酸的理化性质两性解离等电点PI阳离子PH<PI兼性离子PH=PI含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收的性质色氨酸、酪氨酸最大吸收峰在280nm附近蛋白质定量分析茚三酮蓝紫色，570nm氨基酸定量分析肽键连接氨基酸→肽二肽寡肽2-20多肽>20多肽链有两端N末端C末端蛋白质>50蛋白质是由许多氨基酸残基组成、折叠成特定的空间结构、并具有特定生物学功能的多肽氨基酸残基1生物活性肽谷胱甘肽GSH多肽类激素及神经肽体内许多激素属于寡肽或多肽分子结构一级氨基酸排列顺序N-C肽键，二硫键空间构象和特异生物学功能的基础，决定蛋白质空间结构的因素之一氨基酸序列异常—分子病镰刀型红细胞贫血蛋白酶水解破坏一级二级某段肽链的局部空间结构，即主链骨架原子的相对空间位置2氢键肽单元α-螺旋右手螺旋顺时针每圈3.6个氨基酸残基，螺距=0.54nm半口（0.54nm）吃掉三个半麻花(3.6)氢键与长轴平行氨基酸侧链在外侧，肽链在内侧β-转角肽链内形成180°回折含四个氨基酸残基，第一个与第四个形成氢键第二个氨基酸残基通常为脯氨酸Pro20种氨基酸的小弟（亚氨基酸），容易弯腰I型II型第三个甘AA即Glyβ-折叠使多肽链形成片层结构，锯齿状Ω环球状蛋白质表面超二级（模体）2/3个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个有规则的二级结构组合αα，βαβ，ββ三级整条肽链全部氨基酸空间位置次级键（疏水作用、盐键、氢键、范德华力）疏离侵华疏水作用：把疏水残基藏在内部盐键：离子键范德华力：分子间作用力结构域分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密且稳定的区域，并各行其功能三级结构层次上的局部折叠区分子伴侣提供保护环境加速蛋白质折叠成天然构象/四级结构热休克蛋白（Hsp）70、伴侣蛋白、核质蛋白蛋白质保姆与未折叠肽段结合后松开使其正确折叠与错误聚集地肽段结合诱导正确折叠在二硫键的形成起重要作用四级两条肽链以上多肽构成，每条肽链具有独立三级结构，每条肽链称为一个亚基氢键、离子键其中的单一亚基无正常生物学功能并非所有蛋白质有亚基血红蛋白：四级肌红蛋白：三级两个亚基同二聚体异二聚体亚基解聚即变性高级结构分类组成单纯蛋白质缀合蛋白质蛋白质形状纤维状蛋白质球状蛋白质蛋白质家族同源蛋白质蛋白质超家族同一模体结构和功能主要功能结构蛋白质生物体的重要组成成分分布广含量高更新快功能蛋白质重要的生物学功能14种结构功能蛋白质执行方式与配体特异性识别细胞免疫系统在表面的分子相互作用引发免疫反应组织相容性复合体MHC与配体特异性结合抗原抗体特异性结合一级结构是基础空间构象一级结构相似，高级结构与功能相似提供生物进化信息序列改变引起疾病镰刀型红细胞贫血结构决定功能血红蛋白亚基HB与肌红蛋白MB相似血红素辅基血红蛋白构象变化影响亚基与氧的结合Hb氧解离曲线为S型，Mb直角双曲线协同效应正负别构效应蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化构象改变引起疾病淀粉样纤维沉淀阿尔茨海默症，亨廷顿舞蹈病，疯牛病，人纹状体脊髓变性病3理化性质两性解离胶体颗粒表面电荷水化膜稳定变性本质破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构因素加热，乙醇等有机溶剂，强酸，强碱，重金属离子及生物碱试剂等应用消毒，灭菌保存蛋白质制剂变形pro易于沉淀，但沉淀不一定变性凝固作用复性除去变性因素280nm紫外吸收呈色反应定量分析茚三酮：同氨基酸双缩脲肽键紫色或红色颜色越深，水解程度越小备注：1. 肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全2. 氨基氮，α-碳，羰基碳3个原子依次重复排列3. 疯牛病：阮病毒蛋白，接触感染4. 是由许多氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物。
生化复习资料蛋白质章节
生化复习资料注：本资料为知识点复习，大部分为授课老师所勾画的重点，共40个知识点。
一、蛋白质化学（1——8）1.1:pro的元素组成：主要有碳（C）、氢（H）、氧（O）、氮（N）、硫（S），有的pro还含有少量的磷、铁、铜、锌、锰、碘等。
由含氮量推算pro含量的公式：每克样品含氮量×６.２５＝每克样品中pro含量1.2:pro的基本单位是氨基酸。
Pr o→酸、碱/蛋白酶→完全水解→（各种）氨基酸自然界存在的氨基酸有300多种，但组成人体的pro的氨基酸仅仅20多种。
成人在不进食pro时，每日pro的最低分解量是20g。
我国营养学会推荐成人每日pro供应量为80g。
8种必须氨基酸：异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、缬氨酸。
记忆歌诀：①一家借两本书来。
②亮亮生来苯色，结果是鸡蛋醇。
③一两色素本来淡些。
2：氨基酸的分类，4种。
①非极性疏水性氨基酸。
②极性中性氨基酸。
③酸性氨基酸。
④碱性氨基酸。
详见书P43：肽键。
在pro中，氨基酸之间通过肽键相连。
肽键（-CO-NH-）。
①由两个氨基酸缩合形成的化合物→二肽②由三个氨基酸缩合形成的化合物→三肽③由四个氨基酸缩合形成的化合物→四肽以此类推……通常将10个以内的氨基酸相连接形成的肽称为寡肽。
将10个以上的氨基酸形成的肽链称为多肽。
4：pro的基本结构。
4.1.1.一级结构：从N端到C端的氨基酸排列顺序。
4.1.2.一级结构是pro的基本结构，其主要化学键是肽键，肽键也是维持一级结构的主要化学键。
.4.1.3.胰岛素A链和B链，他们之间又—SH脱氢氧化形成的二硫键位置也属于一级结构范畴。
4.2.1.二级结构：pro中多肽主链原子的局部空间排布方式，不涉及氨基酸残基侧链基团参与形成的空间结构。
（肽链的主链借助氢键有规律地卷曲折叠成沿一维方向具有周期性结构的构象。
）4.2.2.稳定因素：氢键。
4.3..1.三级结构：由于侧链基团的相互作用，使远离的氨基酸残基彼此靠近，肽链在二级结构的基础上进一步折叠形成的特定空间结构。
蛋白质定量生化实验报告
一、实验背景蛋白质是生物体内的重要功能分子，具有多种生物学功能，如催化、结构、运输、信号传导等。
因此，蛋白质定量分析在生物科学研究中具有重要意义。
本实验旨在通过双缩脲法对蛋白质进行定量测定，并分析实验结果。
二、实验目的1. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；2. 学会操作双缩脲试剂，并观察蛋白质定量结果；3. 分析实验数据，探讨蛋白质定量结果的影响因素。
三、实验原理双缩脲法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理是：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子（Cu2+）发生反应，生成紫红色的络合物。
该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量呈线性关系，通过测定吸光度可以计算出蛋白质的浓度。
四、实验材料1. 实验试剂：- 双缩脲试剂A：0.1g/L硫酸铜溶液；- 双缩脲试剂B：0.01g/L酒石酸钾钠溶液；- 标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白）；- 未知蛋白质样品；- 蒸馏水；- 6mol/L氢氧化钠溶液；- 50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。
2. 实验仪器：- 分光光度计；- 移液器；- 试管；- 烧杯；- 玻璃棒。
五、实验步骤1. 准备标准曲线：- 取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准蛋白质溶液； - 加入1.8mL蒸馏水，使总体积为2.0mL；- 加入0.2mL双缩脲试剂A；- 混匀，静置10分钟；- 加入0.4mL双缩脲试剂B；- 混匀，静置10分钟；- 以蒸馏水为空白，在540nm处测定吸光度；- 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 测定未知蛋白质样品：- 取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL未知蛋白质样品； - 加入1.8mL蒸馏水，使总体积为2.0mL；- 按照步骤1中的方法进行操作；- 以蒸馏水为空白，在540nm处测定吸光度；- 通过标准曲线计算未知蛋白质样品的浓度。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 标准曲线呈线性关系，相关系数R2=0.998。
生化蛋白质代谢
第五章蛋白质代谢第一节概述一、主要途径1.蛋白质代谢以氨基酸为核心，细胞内外液中所有游离氨基酸称为游离氨基酸库，其含量不足氨基酸总量的1％，却可反映机体氮代谢的概况。
食物中的蛋白都要降解为氨基酸才能被机体利用，体内蛋白也要先分解为氨基酸才能继续氧化分解或转化。
2.游离氨基酸可合成自身蛋白，可氧化分解放出能量，可转化为糖类或脂类，也可合成其他生物活性物质。
合成蛋白是主要用途，约占75％，而蛋白质提供的能量约占人体所需总能量的10－15％。
蛋白质的代谢平衡称氮平衡，一般每天排出5克氮，相当于30克蛋白质。
3.氨基酸通过特殊代谢可合成体内重要的含氮化合物，如神经递质、嘌呤、嘧啶、磷脂、卟啉、辅酶等。
磷脂的合成需S-腺苷甲硫氨酸，氨基酸脱羧产生的胺类常有特殊作用，如5－羟色胺是神经递质，缺少则易发生抑郁、自杀；组胺与过敏反应有密切联系。
二、消化外源蛋白有抗原性，需降解为氨基酸才能被吸收利用。
只有婴儿可直接吸收乳汁中的抗体。
可分为以下两步：1.胃中的消化：胃分泌的盐酸可使蛋白变性，容易消化，还可激活胃蛋白酶，保持其最适pH，并能杀菌。
胃蛋白酶可自催化激活，分解蛋白产生蛋白胨。
胃的消化作用很重要，但不是必须的，胃全切除的人仍可消化蛋白。
2.肠是消化的主要场所。
肠分泌的碳酸氢根可中和胃酸，为胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶、氨肽酶等提供合适环境。
肠激酶激活胰蛋白酶，再激活其他酶，所以胰蛋白酶起核心作用，胰液中有抑制其活性的小肽，防止在细胞中或导管中过早激活。
外源蛋白在肠道分解为氨基酸和小肽，经特异的氨基酸、小肽转运系统进入肠上皮细胞，小肽再被氨肽酶、羧肽酶和二肽酶彻底水解，进入血液。
所以饭后门静脉中只有氨基酸。
三、内源蛋白的降解1.内源蛋白降解速度不同，一般代谢中关键酶半衰期短，如多胺合成的限速酶－鸟氨酸脱羧酶半衰期只有11分钟，而血浆蛋白约为10天，胶原为1000天。
体重70千克的成人每天约有400克蛋白更新，进入游离氨基酸库。
王艳萍版生化名词解释 第一章蛋白质
生化名词解释-王艳萍版第一章蛋白质1.蛋白质:由L型α-氨基酸(20种编码氨基酸)通过肽键构成并具有稳定的构象和生物学功能的一类复杂高分子含氮化合物。
2.α-氨基酸:是在α-碳原子上含有一个碱性氨基(—NH2)和一个酸性羧基(—COOH)的有机化合物(脯氨酸为α-亚氨基酸)。
氨基酸是蛋白质的构件分子。
3.构型:一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。
在立体化学中，因分子中存在不对称中心而产生的异构体中的原子或取代基团的空间排列关系。
有D 型和L型两种。
构型的改变要有共价键的断裂和重新组成,从而导致光学活性的变化。
4.构象:分子中由于共价单键的旋转所表现出的原子或基团的不同空间排列。
指一组结构而不是指单个可分离的立体化学形式。
构象的改变不涉及共价键的断裂和重新组成，也无光学活性的变化。
5.必需氨基酸:指人(或其他脊椎动物)生长发育所必需的，但自身不能合成或者合成的量不足,必需由食物中供给的氨基酸。
人体必需氨基酸有苯丙氨酸、蛋氨酸(甲硫氨酸)、赖氨酸、苏氨酸、色氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等8种。
6.非必需氨基酸:指人(或其他脊椎动物)生长发育所必需的，自身能合成,不需要依赖食物中供给的氨基酸。
7.半必需氨基酸:人体合成精氨酸、组氨酸的能力不足以满足自身的需要,需要从食物中摄取一部分。
8.非蛋白质氨基酸:除组成蛋白质的氨基酸外,迄今发现150余种非蛋白质氨基酸,例如鸟氨酸、瓜氨酸、γ-氨基丁酸，这些非蛋白质氨基酸有些是代谢中间产物，有些是结构成分等。
9.两性(酸碱性)离子:两性离子是指在同一分子中,既有能放出质子的基团，又有能接受质子的基团。
10.两性解离:氨基酸分子中的羧基、氨基及侧链基团均可解离,在一定的pH条件下,这些基团能解离为带电基团从而使氨基酸带电:在酸性环境中各碱性基团与质子结合,使氨基酸带正电荷;在碱性环境中酸性基团解离出质子,与环境中的OH-结合成水，使氨基酸带负电荷。
11.氨基酸的等电点:当调节氨基酸溶液的pH,使氨基酸分子中可放出质子基团与可接受质子基团的解离度完全相等，氨基酸处于兼性离子状态,所带静电荷为零，在电场中既不向阴极移动也不向阳极移动,此时氨基酸所处溶液的pH称为该氨基酸的等电点,用pI表示。
生化蛋白质复习笔记
第四章蛋白质化学蛋白质是生命的物质基础,存在于所有的细胞及细胞的所有部位。
所有的生命活动都离不开蛋白质。
第一节蛋白质的分子组成蛋白质结构复杂，它的结构单位——氨基酸很简单。
所有的蛋白质都是由20种氨基酸合成的，区别只是蛋白质分子中每一种氨基酸的含量及其连接关系各不相同。
一、一、氨基酸的结构氨基酸是由C、H、O、N等主要元素组成的含氨基的有机酸。
用于合成蛋白质的20种氨基酸称为标准氨基酸。
标准氨基酸都是α-氨基酸，它们有一个氨基和一个羧基结合在α-碳原子上，区别在于其R基团的结构、大小、电荷以及对氨基酸水溶性的影响。
在标准氨基酸中，除了甘氨酸之外，其他氨基酸的α-碳原子都结合了4个不同的原子或基团：羧基、氨基、R基团和一个氢原子(甘氨酸的R基团是一个氢原子)。
所以α-碳原子是手性碳原子，氨基酸是手性分子。
天然蛋白质中的氨基酸为L-构型,甘氨酸不含手性碳原子，但我们习惯上还是称它L-氨基酸。
苏氨酸、异亮氨酸各含两个手性碳原子。
其余标准氨基酸只含一个手性碳原子。
二、氨基酸的分类根据R基团的结构可以分为脂肪族、芳香族、杂环氨基酸；根据R基团的酸碱性可以分为酸性、碱性、中性氨基酸；根据人体内能否自己合成可以分为必需、非必需氨基酸；根据分解产物的进一步转化可以分为生糖、生酮、生糖兼生酮氨基酸；根据是否用于合成蛋白质(或有无遗传密码)可以分为标准(或编码)、非标准(或非编码)氨基酸。
(一)含非极性疏水R基团的氨基酸这类氨基酸的侧链是非极性疏水的。
其中包括丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸(蛋氨酸)、脯氨酸。
(二)含极性不带电荷R基团的氨基酸这类氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸，其侧链具亲水性，可与水形成氢键(半胱氨酸除外)，所以与非极性氨基酸相比，较易溶于水。
(三)碱性氨基酸pH7.0时侧链带正电荷的氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸——含咪唑基。
(四)酸性氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸四、氨基酸的理化性质(一)两性电离与等电点所有的氨基酸都含有氨基，可以结合质子而带正电荷；又含有羧基，可以给出质子而带负电荷，氨基酸的这种电离特性称为两性电离。
生化实验报告——蛋白质部分
实验题目：蛋白质的部分性质第一部分蛋白质的颜色反应一、试验原理❖蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
二、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅三、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10g NaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸四、实验步骤（一）米伦（Millon’s）反应原理：米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物。
他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应。
组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸含苯酚集团，因此该反应为蛋白质中酪氨酸存在的依据。
操作：1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，于电炉上小心加热，溶液即出现玫瑰红色。
2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加Millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，凝固的蛋白质出现红色。
（二）双缩脲反应原理：尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。
双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。
生化第3章_蛋白质_2
• 测得几种标准蛋白质的洗脱体积〔Ve〕 • 以相对分子质量对数（logM）对Ve作图，得标准曲线 • 再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕 • 从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量
4. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE)
1. 球状蛋白质（globular protein): 外形接近球形或椭圆形， 溶解性较好，能形成结晶，多数蛋白质属于这一类。 2. 纤维状蛋白质 (fibrous protein): 分子类似纤维或细棒, 又可分为可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。
二. 依据蛋白质的组成分类 按照蛋白质的组成，可以分为简单蛋白和结合蛋白。
×100% = 55.8/0.335 ×100 = 16700
2. 蛋白质的沉降分析： 利用超离心法 （ultracentrifuge）测定蛋白质及其它 生物大分子的分子量，有两种方法：沉降速度法和沉
降平衡法。
1）沉降速度法 (sedimentation velocity):
•
在 60 000～80 000 rpm 的高速离心力作用下，蛋白质 分子会沿旋转中心向外周方向移动，形成沉降界面， 界面的移动速度代表蛋白质分子的沉降速度。
★ 蛋白质沉淀的几种方法：
1.可逆沉淀: 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当 的条件下，可以重新溶解形成溶液，称为可逆沉淀或非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法。 1）pI 沉淀法：在温和条件下，通过改变溶液的 pH 或电荷状 况，使 pr 从胶体溶液中沉淀分离。
2）盐析法：加入大量中性盐（NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4）使 pr
生化蛋白质化学PPT课件
574个氨基酸残基组成
② 4个亚基组成（α2β2） 每个亚在含有一个血红素辅基
α亚基含141个氨基酸残基
β亚基含146个氨基酸残基
③ 血红素辅基的铁为二价铁原子，但在输氧时，铁的价态不变
11
（三）蛋白质分子中的共价键与次级键 稳定各级结构因素: 一级结构:肽键（为主）、二硫键（为辅） 二级结构：氢键 三级结构和四级结构： 非共价键（ 氢键、范德华力、盐键、疏水键、酯键） 三 蛋白质分子结构与功能的关系 （一）蛋白质一级结构与功能的关系 1 种属差异 2 一级结构与分子病 分子病： 某种蛋白质分子一级结构的氨基酸序列与正常有所不同的遗传病。 镰刀型红细胞性贫血病
（二）氨基酸的分类
1 根据组成蛋白质的20种氨基酸的侧链R基团的化学结构将其分四大类 一氨基一羧基氨基酸
脂肪族氨基酸 一氨基二羧基氨基酸及其酰胺 二氨基一羧基氨基酸
芳香族氨基酸 杂环氨基酸 杂环亚氨基酸
2
2 按照氨基酸侧链R基团的极性，把20种AA分为两大类：
不带电荷（6种） 极性氨基酸（11种） 带负电荷（2种）
参与泛酸（VB3）组成
3
（三）氨基酸的解离和两性性质
1.等电点的定义：
2.等电点的计算:两性离子两侧Pk值之和的一半
3.性质:
溶解度最小
（四）氨基酸的理化性质
1 物理性质：
2 化学性质：
⑴ 与茚三酮的反应 除Pro(黄色)其余AA与之反应呈兰紫色
⑵ 与HNO2反应
反应放出的N2，一半来自氨基酸α-氨基，一半来自亚硝酸的氮
⑵ 分子是一个外圆中空的不对称结构，有8段长度为7—24个氨基酸 残基的α-螺旋体。在拐角处，α-螺旋体受到破坏（Pro、Ile、Ser 等出现在拐角处）
生化蛋白质习题(附答案)
第1章蛋白质的结构与功能一、选择题A型题1．某一溶液中蛋白质的百分含量为55％，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为A．8.8％B．8.0％C．8.4％D．9.2％E．9.6％2．有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pI分别为4.6、5.0、5.3、6.7、7.3。
电泳时欲使其中4种泳向正极，缓冲液的pH应该是A．5.0 B．4.0 C．6.0 D．7.0 E．8.03．组成蛋白质分子的氨基酸(除甘氨酸外)为A．L-β-氨基酸B．D-β-氨基酸C．L-α-氨基酸D．D-α-氨基酸E．L-α-氨基酸与D-α-氨基酸4．属于碱性氨基酸的是A．天冬氨酸B．异亮氨酸C．半胱氨酸D．苯丙氨酸E．组氨酸5．维系蛋白质二级结构稳定的化学键是A．盐键B．肽键C．氢键D．疏水作用E．二硫键6．使蛋白质和酶分子显示巯基的氨基酸是A．半胱氨酸B．胱氨酸C．蛋氨酸D．谷氨酸E．赖氨酸7．蛋白质分子引起280nm光吸收的最主要成分是A．肽键B．半胱氨酸的-SH基C．苯丙氨酸的苯环D．色氨酸的吲哚环E．组氨酸的咪唑环(异吡唑环)8．关于蛋白质二级结构错误的描述是A．蛋白质局部或某一段肽链有规则的重复构象B．二级结构仅指主链的空间构象C．肽单元是二级结构的结构单位D．整条多肽链中全部氨基酸的空间位置E．无规卷曲也属二级结构范畴9．可用于测定多肽N端氨基酸的试剂是A．丹磺酰氯B．β巯基乙醇C．溴化氰D．羟胺E．甲酸10．有关肽键的叙述，错误的是A．肽键属于一级结构内容B．肽键中C-N键所连的四个原子处于同一平面C．肽键具有部分双键性质D．肽键旋转而形成了β-折叠E．肽键中的C-N键长度比N-C单键短11．下列正确描述血红蛋白概念的是A．血红蛋白是含铁卟啉的单亚基球蛋白B．血红蛋白氧解离曲线为S状C．1个血红蛋白分子可与1个氧分子可逆结合D．血红蛋白不属于变构蛋白E．血红蛋白的功能与肌红蛋白相同12．蛋白质分子中的无规卷曲结构属于A．二级结构B．三级结构C．四级结构D．模体E．以上都不是13．下列各类氨基酸中不含必需氨基酸的是A．酸性氨基酸B．含硫氨基酸C．支链氨基酸D．芳香族氨基酸E．碱性氨基酸14．有关蛋白质β折叠的描述，错误的是A．主链骨架呈锯齿状B．氨基酸侧链交替位于扇面上下方C．β-折叠的肽链之间不存在化学键D．β-折叠有反平行式结构，也有平行式结构E．肽链充分伸展15．常出现于肽链转角结构中的氨基酸为A．脯氨酸B．半胱氨酸C．谷氨酸D．甲硫氨酸E．丙氨酸16．以下哪一种氨基酸不具备不对称碳原子A．甘氨酸B．丝氨酸C．半胱氨酸D．苏氨酸E．丙氨酸17．在各种蛋白质中含量相近的元素是A．碳B．氮C．氧D．氢E．硫18．下列氨基酸中含有羟基的是A．谷氨酸、天冬酰胺B．半胱氨酸、蛋氨酸C．苯丙氨酸、酪氨酸D．丝氨酸、苏氨酸E．亮氨酸、缬氨酸19．下列有关蛋白质β片层结构的叙述正确的是A．β角蛋白具有典型的β片层结构B．两个相邻的肽平面呈折扇式折叠C．β片层结构是一种较伸展的肽链结构D．若干锯齿状肽链骨架平行或反平行排列, 链间靠氢键维系E．以上都正确20．蛋白质吸收紫外光能力的大小，主要取决于A．含硫氨基酸的含量B．肽键中的肽键C．碱基氨基酸的含量D．脂肪族氨基酸的含量E．芳香族氨基酸的含量21．下列有关肽的叙述，错误的是A．肽是两个以上氨基酸通过肽键连接而成的化合物B．组成肽的氨基酸分子都不完整C．多肽与蛋白质分子之间无明确的分界线D．根据N-末端数目可得知蛋白质的亚基数E．氨基酸一旦生成肽，完全失去其原有的理化性质22．甘氨酸的pK-COOH = 2.34，pK-NH2= 9.60，故它pI为A．11.94 B．7.26 C．5.97 D．3.63 E．2.3423．关于蛋白质二级结构的描述，错误的是A．每种蛋白质都有二级结构形式B．有的蛋白质几乎全是β-折叠结构C．有的蛋白质几乎全是α-螺旋结构D．几种二级结构可同时出现于同一种蛋白质分子中E．大多数蛋白质分子中有三股螺旋结构24．每种完整蛋白质分子必定具有A．α-螺旋B．β-折叠C．三级结构D．四级结构E．辅基25．蛋白质多肽链具有的方向性是A．从3′端到5′端B．从5′端到3′端C．从C 端到N端D．从N端到C端E．以上都不是26．蛋白质溶液的稳定因素是A．蛋白质分子表面的水化膜和电荷B．蛋白质分子表面的疏水基团相互排斥C．蛋白质溶液的黏度大D．蛋白质溶液不属于胶体溶液E．以上都不是27．下列氨基酸不含极性侧链的是A．丝氨酸B．苏氨酸C．亮氨酸D．酪氨酸E．半胱氨酸28．赖氨酸的pKl为2.18，pK2为8.95，pKa为10.53，其pI是A．9.74 B．8.35 C．6.34 D．5.54 E．5.2729．血浆蛋白质的pI大多为pH5.6，它们在血液中的主要存在形式是A．兼性离子B．带负电荷C．带正电荷D．非极性分子E．疏水分子30．血清清蛋白(pI为4.7)在下列哪种pH值溶液中带正电荷A．pH 4.0 B．pH 5.0 C．pH 6.0 D．pH 7.0 E．pH 8.0 31．蛋白质分子中的α-螺旋和β-片层都属于A．一级结构B．二级结构C．三级结构D．结构域E．四级结构32．α-螺旋每上升一圈相当于氨基酸残基的个数是A．4.5 B．3.6 C．3.0 D．2.7 E．2.533．含有疏水侧链的氨基酸有A．精氨酸、亮氨酸B．苯丙氨酸、异亮氨酸C．色氨酸、精氨酸D．天冬氨酸、谷氨酸E．蛋氨酸、组氨酸34．蛋白质分子中的主要化学键是A．肽键B．盐键C．酯键D．二硫键E．氢键35．关于蛋白质分子三级结构的描述，其中错误的是A．具有三级结构的多肽链都具有生物学活性B．天然蛋白质分子均有这种结构C．三级结构的稳定性主要由次级键维系D．亲水基团多聚集在三级结构的表面E．决定盘曲折叠的因素是氨基酸序列36．具有四级结构的蛋白质特征是A．分子中必定含有辅基B．在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上，肽链进一步折叠，盘曲形成C．依赖肽键维系四级结构的稳定性D．每条多肽链都具有独立的生物学活性E．由两条或两条以上的多肽链组成37．关于蛋白质的四级结构正确的是A．一定有多个不同的亚基B．一定有多个相同的亚基C．一定有种类相同，而数目不同的亚基数D．一定有种类不同，而数目相同的亚基E．亚基的种类、数目都不定38．蛋白质的一级结构及高级结构决定于A．亚基B．分子中盐键C．氨基酸组成和顺序D．分子内部疏水键E．分子中氢键39．蛋白质形成的胶体颗粒，在下列哪种条件下不稳定A．溶液pH大于pI B．溶液pH小于pI C．溶液pH等于pID．在水溶液中E．溶液pH等于7.440．蛋白质的等电点是A．蛋白质溶液的pH等于7时溶液的pH B．蛋白质溶液的pH等于7.4时溶液的pHC．蛋白质分子呈负离子状态时溶液的pH D．蛋白质分子呈正离子状态时溶液的pHE．蛋白质的正电荷与负电荷相等时溶液的pH41．关于氨基酸的叙述哪一项是错误的A．酪氨酸和丝氨酸含羟基B．酪氨酸和苯丙氨酸含苯环C．亮氨酸和缬氨酸是支链氨基酸D．赖氨酸和精氨酸是碱性氨基酸E．谷氨酸和天冬氨酸含两个氨基42．蛋白质分子中不存在的含硫氨基酸是A．同型半胱氨酸B．胱氨酸C．蛋氨酸D．半胱氨酸E．苏氨酸43．有关血红蛋白(Hb)和肌红蛋白(Mb)的叙述不正确的是A．都可以与氧结合B．Hb和Mb都含铁C．都是含辅基的结合蛋白D．都具有四级结构形式E．都属于色蛋白类44．维持血浆胶体渗透压的主要蛋白质是A．清蛋白B．α1球蛋白C．β球蛋白D．γ球蛋白E．纤维蛋白原45．血清在饱和硫酸铵状态下析出的蛋白质是A．纤维蛋白原B．球蛋白C．拟球蛋白D．清蛋白E．β球蛋白46．蛋白质的变性是由于A．蛋白质一级结构改变B．蛋白质空间构象的破坏C．辅基的脱落D．蛋白质的水解E．以上都不是47．下列关于蛋白质结构叙述中不正确的是A．一级结构决定二、三级结构B．二、三级结构决定四级结构C．α螺旋为二级结构的一种形式D．三级结构是指蛋白质分子内所有原子的空间排列E．无规卷曲是在一级结构基础上形成的48．胰岛素分子A链与B链交联是靠A．疏水键B．盐键C．氢键D．二硫键E．范德华力49．下列哪一种氨基酸残基经常处于球蛋白核心内A．Tyr B．Glu C．Val D．Asn E．SerB型题A．四级结构形成B．四级结构破坏C．一级结构破坏D．一级结构形成E．二、三级结构破坏1．亚基聚合时出现2．亚基解聚时出现3．蛋白质变性时出现4．蛋白酶水解时出现5．人工合成多肽时出现A．变构剂B．协同效应C．变构效应D．变构蛋白E．以上都不是6．Hb在携带O2的过程中，引起构象改变的现象称为7．Hb与O2结合时呈特征性"S"形曲线，称Hb为8．Hb与O2结合时呈特征性"S"形曲线，称O2为9．HbO2协助不带O2亚基结合O2的现象称为10．使变构酶活性升高的物质称为附：近年研考及执考试题A型题1．含有两个羧基的氨基酸是（1992、2004研考）A．谷氨酸B．丝氨酸C．酪氨酸D．赖氨酸E．苏氨酸2．属于酸性氨基酸的是（2006研考）A．半胱氨酸B．苏氨酸C．苯丙氨酸D．谷氨酸E．组氨酸3．下列哪一种氨基酸是亚氨基酸（2000研考）A．赖氨酸B．脯氨酸C．组氨酸D．色氨酸E．异亮氨酸4．在天然蛋白质组成中，不含有的氨基酸是（1995、2009研考）A．精氨酸B．瓜氨酸C．半胱氨酸D．脯氨酸5．天然蛋白质中不存在的氨基酸是（1999研考）A．蛋氨酸B．胱氨酸C．羟脯氨酸D．同型半胱氨酸E．精氨酸6．下列氨基酸中，属于酸性氨基酸的是（2008研考）A．精氨酸B．甘氨酸C．亮氨酸D．天冬氨酸7．以下哪种氨基酸是含硫的氨基酸（1998研考）A．谷氨酸B．赖氨酸C．亮氨酸D．蛋氨酸E．酪氨酸8．下列哪种氨基酸体内不能合成，必需靠食物供给（2006研考）A．缬氨酸B．精氨酸C．半胱氨酸D．组氨酸E．丝氨酸9．当溶液的pH 与某种氨基酸的pI 一致时，该氨基酸在此溶液中的存在形式是（2005研考）A．兼性离子B．非兼性离子C．带单价正电荷D．疏水分子E．带单价负电荷10．在280nm 波长附近具有最大光吸收峰的氨基酸是（2002研考）A．天冬氨酸B．丝氨酸C．苯丙氨酸D．色氨酸E．赖氨酸11．核酸的最大紫外吸收值一般在哪一波长附近（2007研考）A．280nm B．260nm C．240nm D．220nm12．稳定蛋白质分子中α螺旋和β片层的化学键是（1994、2003研考、2001执考）A．肽键B．离子键C．二硫键D．氢键E．疏水键13．对稳定蛋白质构象通常不起作用的化学键是（2001研考）A．氢键B．盐键C．酯键D．疏水键E．范德华力14．维系蛋白质一级结构的化学键是（1992研考、2000执考）A．盐键B．疏水键C．氢键D．二硫键E．肽键15．分子伴侣可以协助蛋白质形成正确的空间构象，下列分子中属于分子伴侣的是（2007研考）A．胰岛素原B．热休克蛋白C．组蛋白D．DNA 结合蛋白16．下列选项中，属于蛋白质三级结构的是（2010研考）A．α-螺旋B．无规卷曲C．结构域D．锌指结构17．下列结构中，属于蛋白质模体结构的是（2012研考）A．α-螺旋B．β-折叠C．锌指结构D．结构域18．蛋白质变性是由于（2007研考）A．蛋白质空间结构的破坏B．氨基酸残基的改变C．肽键的断裂D．蛋白质的水解19．蛋白质变性后的主要表现是（2009研考）A．分子量变小B．粘度降低C．溶解度降低D．不易被蛋白酶水解20．下列关于免疫球蛋白变性的叙述，哪项是不正确的（1994研考）A．原有的抗体活性降低或丧失B．溶解度增加C．易被蛋白酶水解D．蛋白质的空间构象破坏E．蛋白质的一级结构无改变21．下列蛋白质通过凝胶过滤层析时最先被洗脱的是（2000研考）A．马肝过氧化氢酶(相对分子质量247500) B．肌红蛋白(相对分子质量16900)C．人血清清蛋白(相对分子质量68500) D．牛β—乳球蛋白(相对分子质量35000)E．牛胰岛素(相对分子质量5733)22．用凝胶过滤层析（交联葡聚糖凝胶）柱分离蛋白质时，下列哪项是正确的（1993研考）A．分子体积最大的蛋白质最先洗脱出来B．分子体积最小的蛋白质最先洗脱出来C．不带电荷的蛋白质最先洗脱出来D．带电荷的蛋白质最先洗脱出来E．没有被吸附的蛋白质最先洗脱出来23．盐析法沉淀蛋白质的原理是（2011研考）A．改变蛋白质的一级结构B．使蛋白质变性，破坏空间结构C．使蛋白质的等电点发生变化D．中和蛋白质表面电荷并破坏水化膜24．氨基酸中人体必需氨基酸的是（2001执考）A．甘氨酸B．组氨酸C．苏氨酸D．脯氨酸E．丝氨酸25．蛋白质合成后经化学修饰的氨基酸是（2003执考）A．半胱氨酸B．羟脯氨酸C．甲硫氨酸D．丝氨酸E．酪氨酸26．下列关于肽键性质和组成的叙述正确的是（2003执考）A．由Ca1和C-COOH组成B．由Ca1和Ca2组成C．由Ca和N组成D．肽键有一定程度双键性质E．肽键可以自由旋转27．关于蛋白质二级结构的叙述正确的是（2002、2004、2005执考）A．氨基酸的排列顺序B．每一氨基酸侧链的空间构象C．局部主链的空间构象D．亚基间相对的空间位置E．每一原子的相对空间位置28．维系蛋白质分子α-螺旋的化学键是（2001执考）A．盐键B．疏水键C．氢键D．肽键E．二硫键29．下列有关血红蛋白结构与功能的叙述错误的是（2011执考）A．含有血红素B．含有4个亚基C．有储存O2的作用D．其氧解离曲线为S型E．能与O2可逆结合30．大多数成人血红蛋白中珠蛋白组成（2000执考）A．α2ε2 B．α2φ2 C．α2γ2 D．α2β2 E．α2δ231．对蛋白质变性的描述，正确的是（2003执考）A．变性蛋白质的黏度下降B．变性蛋白质不易被消化C．蛋白质沉淀不一定就是变性D．蛋白质变性后容易形成结晶E．蛋白质变性不涉及二硫键破坏32．下列有关蛋白质变性的叙述错误的是（2006、2012执考）A．蛋白质变性时其一级结构不受影响B．蛋白质变性时其理化性质发生变化C．蛋白质变性时其生物学活性降低或丧失D．去除变性因素后变性蛋白质都可以复性E．球蛋白变性后其水溶性降低33．变性蛋白质的主要特点（2000执考）A．不易被蛋白酶水解B．分子量降低C．溶解性增加D．生物学活性丧失E．共价键被破坏34．镰状红细胞贫血病患者其血红蛋白β链N端第6个氨基酸残基谷氨酸被下列哪种氨基酸代替（2000执考）A．缬氨酸B．丙氨酸C．丝氨酸D．酪氨酸E．色氨酸35．“不同蛋白质有不同的空间构象”所指的含义是（2013研考）A．蛋白质的变性与复性B．多肽链的折叠机制C．一级结构决定高级结构D．结合蛋白质有多种辅基36.蛋白质的空间构象主要取决于肽链中的结构是（2014研考）A．二硫键位置B．氨基酸序列C．a- 螺旋D．B- 折叠37.下列蛋白质中，具有锌指模序的是（2014研考）A．酶B．膜受体C．细胞转运蛋白D．转录因子38.蛋白质肽键的化学本质是（2018年研考）A.氢键B.盐键C.酰胺键D.疏水键39.蛋白质a螺旋的特点是（2017年研考）A. 多为左手螺旋B. 螺旋方向与长轴垂直C. 靠盐键维系稳定性D. 氨基酸侧链伸向螺旋外侧40.蛋白质的空间构象主要取决于肽链中的结构是（2014年研考）A. 氨基酸序列B. α-螺旋C. β-折叠D. 二硫键位置41.“α-螺旋β-转角-α-螺旋”属于的蛋白质结构是(2016年研考)A. 一级结构B. 三级结构C. 模体D. 结构域42.使血清白蛋白(pI为4.7)带正电荷的溶液pH是(2015年研考)A. 4.0B. 5.08C. 6.0D. 7.0B型题A．一级结构B．二级结构C．三级结构D．四级结构E．模序结构1．亮氨酸拉链属于蛋白质的（2005研考）2．整条肽链中全部氨基酸残基的相对位置属于蛋白质的（2005研考）A. 蛋白质构象改变B. 蛋白质表达水平改变C. DNA点突变D. DNA缺失突变3. 与疯牛病发病相关的机制是（2014年研考）4. 与镰形红细胞贫血发病相关的机制是（2014年研考）X型题1．蛋白质二级结构中存在的构象为（1995研考）A．α螺旋B．β螺旋C．α转角D．β转角2．蛋白质变性时（1997研考）A．空间结构破坏，一级结构无改变B．280nm 处光吸收增加C．溶解度降低D．生物学功能改变3．酶变性时的表现为（1995研考）A．溶解度降低B．易受蛋白酶水解C．酶活性丧失D．紫外线（280）吸收增强二、名词解释1．肽单元2．结构域3．模体4．蛋白质三级结构三、填空题1．多肽链中氨基酸的，称为一级结构，主要化学键为。
生化 蛋白质降解
生化蛋白质降解生化蛋白质降解是指在一个生物体内，蛋白质在特定条件下被分解，产生氨基酸或肽链等分解产物的过程。
这个过程是由多种酶在特定的环境中完成的，并涉及多种生物学机制。
生化蛋白质降解过程中，常涉及到的酶有蛋白酶和肽酶。
这篇文章将介绍生化蛋白质降解的过程和参与其中的酶的种类及其作用。
生化蛋白质降解的过程生化蛋白质降解是一个复杂的生物过程。
它通常是从需要分解蛋白质的细胞或组织中释放出各种酶，这些酶可以识别和切断蛋白质中的不同化学键。
降解过程主要分为以下四个步骤：第一步：蛋白质的预处理蛋白质在降解之前需要被处理。
这个过程中，被降解的蛋白质将会被分解成较小的多肽和氨基酸的组合体，以便于酶进行分解。
这个过程中一般涉及到如下两种酶：1.蛋白酶：蛋白酶是一类酶，它能够改变蛋白质的立体结构，减少蛋白质的空间构像障碍，从而使其易于被其他酶分解。
此外，蛋白酶还能改变一些肽键的变性情况，从而使特定的肽键更容易被其他酶切断。
蛋白酶有很多种类，每种酶都有其特定的分解方式和受体结合位点。
2.转化酶：转化酶能够将多肽链切割成较小的肽段，以便后续的酶进行分解。
常见的转化酶有胰蛋白酶和胃蛋白酶等。
第二步：氨基酸和小肽的产生在预处理过程之后，被处理过的蛋白质会被进一步分解成多种含有较少肽键的分子，如三肽或二肽，等等。
这个过程中主要涉及到的酶有：1.氨基酸酶：氨基酸酶能够将含有较少肽键的蛋白质分子进一步降解成氨基酸和少量的二肽。
氨基酸酶的种类很多，每种酶都有其特定的分解方向和作用对象，包括一些能够分解一个特定氨基酸的氨基肽酶。
2.肽酶：肽酶是一类能够在蛋白质分子中切割肽键的酶。
通过合成、水解或转移，肽酶能够将肽链进一步分解成更小的肽链或单个氨基酸分子。
第三步：多种蛋白质酶的作用蛋白质在前两步骤的处理过程中，已经被转化成含有极少肽键的小分子。
多种蛋白质酶开始出现在这个过程中，它们能够识别和结合特定的氨基酸序列，并在这些序列上进行切割。
生化实验报告蛋白质
一、实验目的1. 了解蛋白质的组成、结构及其生物功能；2. 掌握蛋白质的提取、纯化、鉴定和定量方法；3. 掌握蛋白质变性、复性等基本性质；4. 培养实验操作技能和科学思维。
二、实验原理1. 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有多种生物功能，如催化、运输、结构支撑等；2. 蛋白质的提取方法有：酸法、碱法、盐析法等；3. 蛋白质的纯化方法有：凝胶过滤、离子交换、亲和层析等；4. 蛋白质的鉴定方法有：紫外光谱法、电泳法、质谱法等；5. 蛋白质的定量方法有：Lowry法、BCA法、 Bradford法等；6. 蛋白质变性是指蛋白质的空间结构发生改变，导致其生物功能丧失；蛋白质复性是指蛋白质在适当条件下恢复其生物功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、硫酸铵、硫酸钠、SDS、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250、电泳槽、电泳仪、紫外分光光度计等；2. 试剂：盐酸、氢氧化钠、氯化钠、硫酸铵、SDS、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250等；3. 仪器：高速离心机、分析天平、电泳槽、电泳仪、紫外分光光度计等。
四、实验方法与步骤1. 蛋白质提取：取鸡蛋清，加入适量盐酸或氢氧化钠，搅拌，然后加入硫酸铵，使蛋白质沉淀，离心，收集沉淀；2. 蛋白质纯化：将沉淀溶解于Tris-HCl缓冲液，加入SDS，进行SDS-PAGE电泳，分离蛋白质；3. 蛋白质鉴定：将电泳后的蛋白质条带用考马斯亮蓝G-250染色，观察颜色变化；4. 蛋白质定量：将电泳后的蛋白质条带用紫外分光光度计测定其吸光度，计算蛋白质浓度；5. 蛋白质变性：将蛋白质溶液加热至100℃，观察蛋白质的沉淀现象；6. 蛋白质复性：将变性的蛋白质溶液冷却至室温，观察蛋白质的溶解现象。
五、实验结果与分析1. 蛋白质提取：成功提取了鸡蛋清中的蛋白质，沉淀量较多；2. 蛋白质纯化：SDS-PAGE电泳结果显示，蛋白质在凝胶上分离良好，纯度较高；3. 蛋白质鉴定：考马斯亮蓝G-250染色结果显示，蛋白质条带呈现蓝色，表明蛋白质存在；4. 蛋白质定量：紫外分光光度计测定结果显示，蛋白质浓度为0.5mg/mL；5. 蛋白质变性：加热至100℃后，蛋白质发生沉淀，表明蛋白质变性；6. 蛋白质复性：冷却至室温后，蛋白质溶解，表明蛋白质复性。
生化所有知识点总结
生化所有知识点总结一、生物大分子1. 蛋白质蛋白质是生物体内最重要的有机分子之一，它们是构成生命的重要组成部分，广泛参与生物体的生理生化过程。
蛋白质的标准结构由氨基酸线性排列组成，其氨基酸残基之间通过肽键相连。
蛋白质的功能包括酶、激素、抗体等。
2. 核酸核酸是生物体内最重要的化学物质之一，包括DNA和RNA。
DNA携带生物体的遗传信息，RNA在蛋白质合成中起着重要的作用。
3. 多糖多糖是由许多单糖分子通过糖苷键连接而成，包括淀粉、糖原、纤维素等。
4. 生物膜生物膜是由脂质和蛋白质组成的薄膜，它存在于细胞表面，构成细胞膜和细胞器膜，起着保护细胞、控制物质进出的作用。
二、生物大分子的结构和功能1. 蛋白质的结构蛋白质的结构包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
一级结构是蛋白质的氨基酸序列，二级结构是由氢键形成的α-螺旋和β-折叠，三级结构是由蛋白质的各个区域所形成的空间结构，四级结构是由多个蛋白质相互组合形成的功能性结构。
2. 蛋白质的功能蛋白质的功能包括酶、激素、抗体、结构蛋白等。
酶是生物体内的催化剂，参与生物体内的代谢过程；激素是生物体内的调节剂，参与生物体内的内分泌系统；抗体是生物体内的免疫物质，参与生物体内的免疫反应；结构蛋白主要构成生物体内各种组织和器官。
3. 核酸的结构DNA是由脱氧核糖核酸分子组成，是生物体内传递遗传信息的重要分子；RNA是由核糖核酸分子组成，是生物体内蛋白质合成的重要分子。
4. 核酸的功能DNA的功能是存储和传递遗传信息，参与生物体内的遗传过程；RNA的功能是带有遗传信息的DNA按照一定规律转录成RNA，再依据RNA的信息合成蛋白质。
5. 多糖的结构和功能多糖是由许多单糖分子通过糖苷键连接而成的大分子，包括淀粉、糖原、纤维素等。
它们是生物体内的能量来源和结构组分。
6. 生物膜的结构和功能生物膜是由脂质和蛋白质组成的薄膜，其构成了细胞膜和细胞器膜。
生物膜的功能包括保护细胞，控制物质进出，参与细胞信号传导等。
生化蛋白质实验报告
生化蛋白质实验报告生化蛋白质实验报告引言：蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它们在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。
生化蛋白质实验旨在研究蛋白质的组成、结构和功能，以及它们在生物体内的相互作用。
本实验通过一系列的步骤来分离和纯化蛋白质，并对其进行进一步的分析和鉴定。
实验材料与方法：1. 细胞培养：使用细胞培养技术培养目标蛋白质所在的细胞系，确保细胞处于健康生长的状态。
2. 细胞裂解：通过加入细胞裂解液，使细胞膜破裂释放蛋白质。
3. 蛋白质分离：利用离心技术将裂解液中的细胞碎片与蛋白质分离。
4. 蛋白质纯化：采用色谱层析技术，如亲和层析、离子交换层析等，将目标蛋白质从其他蛋白质中纯化出来。
5. 蛋白质分析：利用凝胶电泳技术对纯化后的蛋白质进行分析，如SDS-PAGE、Western blot等。
实验结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取并纯化出目标蛋白质。
在SDS-PAGE凝胶电泳中，我们观察到了明显的蛋白质带，表明纯化过程取得了一定的成功。
进一步的Western blot实验结果显示，目标蛋白质在细胞系中的表达水平较高，并且具有较好的免疫原性。
在蛋白质组成分析方面，我们使用质谱技术对纯化后的蛋白质进行了鉴定。
质谱分析结果显示，目标蛋白质的分子量约为50 kDa，与文献报道的相符。
此外，通过质谱分析还发现了一些可能是目标蛋白质的修饰，如磷酸化、甲基化等，这些修饰对蛋白质的功能和调控具有重要的影响。
蛋白质结构是了解其功能和相互作用的关键。
在实验中，我们采用了X射线晶体学技术对目标蛋白质的结构进行了解析。
通过解析蛋白质的晶体结构，我们可以观察到其二级结构、立体构型以及可能的结合位点。
这些结构信息为我们进一步研究蛋白质的功能和相互作用提供了重要的线索。
结论：通过本次生化蛋白质实验，我们成功地从细胞中提取、纯化并鉴定了目标蛋白质。
通过分析其组成、结构和功能，我们对该蛋白质的特性有了更深入的了解。
生化-蛋白质思维导图
生化-蛋白质思维导图●蛋白质的分类●根据分子形状分类●球状、●纤维状（胶原蛋白和角蛋白）、●膜蛋白●根据化学组成分类●简单蛋白质、●结合蛋白质●根据功能分类●酶●调节蛋白●贮存蛋白●转运蛋白●运动蛋白●防御蛋白●支架蛋白●受体蛋白●结构蛋白●异常功能●蛋白质的性质●元素组成●相对分子质量●测定相对分子质量（渗透压法、超速离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳）●两性电离及等电点●等电点（调节ph、使蛋白质带的正负电荷相等、总静电荷为零）●●电泳●自有页面电泳、区带电泳、纸电泳、凝胶电泳●分析人血清中各类蛋白质——用醋酸纤维素薄膜做支持物进行电泳●变性●定义（物理化学因素、分子内部结构变化、蛋白质理化性质改变、一级结构不变）●变性实质●变性因素●变性表现●变性后复性●胶体性质●布朗运动、丁达尔现象、电泳现象、不能透过半透膜（透析法分离纯化蛋白质）、有吸附能力（水膜、使蛋白质在水中不易沉淀）●沉淀●加盐、有机溶剂、酸、加热●颜色反应●双缩脲反应（紫红色）（定性测定）●福林试剂反应（酚试剂）（蓝色化合物）（定量测定蛋白质）●蛋白质含量测定●考马斯亮蓝染色法●紫外吸收法●凯氏定氮法●蛋白质的分离●根据溶解度分●盐析●等电点沉淀法●根据分子大小分●透析与超滤●凝胶过滤法●根据带电性质分●电泳法（聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE 、SDS-PAGE）●离子交换层析法●根据配体特异性分●亲和层析法●蛋白质的组成单位氨基酸●结构●●除甘氨酸外，其他aa都有旋光性●分类●常见aa●非极性aa●Ala. Val. Leu. IIe. Phe. Met. Pro. Trp.●极性不带电aa●Gly. Ser. Thr. Asn. Gln. Tyr. Cys.●极性带正电aa●His. Lys. Arg.●极性带负电aa,●Asp. Glu●不常见aa●非蛋白质aa和aa衍生物●阿尔法氨基丁酸●血清素●贝塔丙氨酸●两性解离和等电点●等电点（调节氨基酸溶液ph、静电荷为零）●等电点的计算（PI=Pk1+Pk2/2）●化学性质●水合茚三酮（蓝紫色复合物、可测定AA含量）●甲醛●Sanger反应（与2，4—二硝基氟苯DNFB反应）(测定N端AA种类数目）●Edman降解法（与异硫氰酸本酯PITC反应）（测定N端AA排列顺序）●亚硝酸（生成N2）●荧光胺●光谱性质●在可见光没有光吸收，在远紫外线有光吸收●肽（一个a的氨基和一个a的羧基、脱水缩合、化合物）●结构●●肽键特点●构成肽键的CN为sp2杂化，有部分双键性质●c-n,c-c键可旋转●肽键具有永久偶极●蛋白质的结构●一级结构（氨基酸的序列、决定、蛋白质空间结构和功能多样性）●稳定性由肽键、二硫键维持（共价键维持）●二级结构（多肽主链、局部、有规律的折叠盘绕）●氢键维持（非共价键）●阿尔法一螺旋●参数●特点●影响阿尔法螺旋形成的因素●贝塔—折叠●特点●贝塔—转角●贝塔—凸起●三股螺旋●无规则卷曲●三级结构（多肽链上、所有原子、在三维空间的分布）●由疏水键维持●测定三级结构方法●特点●四级结构（分析中亚基的种类数目关系）●由非共价键维持●血红蛋白●超二级结构和结构域（二级和三级层次的过渡态）●超二级结构（若干、相邻二级结构中的构象单元相互作用、形成有规则的、能辨认的二级结构组合体）●膜体（eg Rossman折叠-结合辅酶NAD+的区域、EF首相-能与钙离子结合、锌指结构）●结构域（多肽链在超二级基础上、进一步盘绕折叠）●结构相对独立、功能也相对独立●膜蛋白结构●外在膜蛋白（通过静电作用结合在膜表面）●内在膜蛋白（通过疏水作用力插入脂质双分子层）●脂锚定蛋白（通过共价键与脂质双分子层链接）●蛋白质结构和功能的关系●一级结构和功能的关系●种属差异●分子病（eg镰刀形贫血）●构象和功能的关系●别构效应（蛋白质表现其生物功能、构象改变、整个分子性质改变）（eg血红蛋白、免疫球蛋白）。
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2.结合蛋白：由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成
（1）色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如血红蛋白、
叶绿蛋白和细胞 色素等。
（2）糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖
蛋白等。
（3）脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。 如血清-、-脂
蛋白等。
（4）核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核
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7.受体蛋白 8.支架蛋白 9.结构蛋白 10异常蛋白
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蛋白质具有重要的生物学功能
1）酶的生物催化作用
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2）调控作用
参与基因调控：组蛋白、非组蛋白等 参与代谢调控：如激素或生长因子等
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3）运动与支持
机体的结构蛋白：头发、骨骼、牙齿、肌肉等
R
Gly —— 没有手性
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Pro —— 亚氨基酸
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以甘油醛为参照，AA分为D－型和L－型
有旋光性 手性碳原子
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2.2.2 氨基酸的分类
分类依据 ：R侧链基团的结构及理 化性质的不同
“Protein” 一词来描述蛋白质。
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1951年 Pauling采用X（射）线晶体衍射发现了蛋白质 的二级结构——α-螺旋(α-helix)。
1953年 Frederick Sanger完成胰岛素一级序列测定。 1962年 John Kendrew 和 Max Perutz确定了血红蛋
生化蛋白质
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大事记：
1833年 Payen和Persoz分离出淀粉酶。 1864年 Hoppe-Seyler从血液分离出血红蛋
白，并将其制成结晶。 19世纪末 Fischer证明蛋白质是由氨基酸组成
的，并将氨基酸合成了多种短肽 。 1938年 德国化学家Gerardus J. Mulder引用
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4）参与运输贮存的作用
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血红蛋白 ——运输氧 铜蓝蛋白 ——运输铜 铁蛋白 ——贮存铁
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5）免疫保护作用
抗原抗体反应 凝血机制
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6）参与细胞间信息传递
信号传导中的受体、信息分子等
7） 氧化供能
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2.2 蛋白质的组成单位 ——氨基酸
S
Байду номын сангаас
0~4 %
有些蛋白质还含有少量的P、Fe、Cu、Mn、Zn、 Se、I等。
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蛋白质元素组成的特点
各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％。
凯氏定氮法：
由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此， 只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以 下公式推算出蛋白质的大致含量：
100克样品中蛋白质的含量 ( g % ) = 每克样品含氮克数× 6.25×100
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按侧链的极性：极性AA、非极性AA
按侧链的结构：脂肪族AA、芳香族AA 杂环AA、杂环亚AA
按侧链的酸碱性：酸性AA、碱性AA 中性AA
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按侧链的极性、酸碱性
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氨基酸
—— 组成蛋白质的基本单位
即含有氨基又有羧基的化合物
存在自然界中的氨基酸有300余种，但 组成人体蛋白质的基本氨基酸仅有20种
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分子中同时含有羧基和氨基，且与羧基相邻的α-碳原 子上都有一个氨基，因而称为α-氨基酸。
除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-碳原子都为不 对称碳原子, A. 氨基酸都具有旋光性； B. 每一种氨基酸都具有D-型和L-型两种立体异构体。目 前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。
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2.2.1 L-氨基酸的通式
COO-
R
C +NH3
H
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既有氨基，又有羧基的小分子有 机物称为氨基酸。
α－氨基酸就是氨基连接在羧酸 的α－碳原子上。
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基本氨基酸中，除脯氨酸和 甘氨酸外其余均属于L-α-氨基酸。
例外：
COOH │
H2N — C — H │
糖核蛋白等。
（5）磷蛋白：由简单蛋白质和磷酸组成。如胃蛋白酶、酪蛋
白、202角0/8/蛋2 白、弹性蛋白、丝心蛋白等。
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2.1.3 根据功能分类
1.酶 如蛋白酶 2.调节蛋白 如激素 3.贮存蛋白质 如卵清蛋白 4.转运蛋白 如血红蛋白 5.运动蛋白 如肌球蛋白、肌动蛋白 6.防御蛋白和毒蛋白
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2.1蛋白质的分类
2.1.1 根据蛋白质形状 纤维状蛋白质 球状蛋白质
膜蛋白质
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2.1.2 根据蛋白质组成成分
白的四级结构。 1965年 我国完成结晶牛胰岛素的人工合成。 20世纪90年代以后 蛋白质组学
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生命的起源必然是通过化学
途经实现的，只要把蛋白质的化
学成份弄清楚以后，化学就能着
手制造出活的蛋白质来，如果化
学有一天能用人工的方法制造蛋
白质，那么这样的蛋白质就一定
会显示出生命现象。
《反杜林论》 恩格斯
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什么是蛋白质?
蛋 白 质 (protein) 是 由 许 多 氨 基 酸 (amino acids)通过肽键(peptide bond) 相连形成的高分子含氮化合物。
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组成蛋白质的元素
主
C 50 ~ 55 %
要 元
H
6~ 7 %
素
O 19 ~ 24 %
组 成
N 13 ~ 19 %
简单蛋白质 结合蛋白质 = 蛋白质部分 + 非蛋白质部分
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1.简单蛋白：又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由-氨基 酸组成的肽链，不含其它成分。 （1）清蛋白和球蛋白：广泛存在于动物组织中，易溶于水， 球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。 （2）谷蛋白和醇溶谷蛋白：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀 酸、稀碱中，后者可溶于70－80％乙醇中。 （3）精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。 （4）硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中， 分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。