蛋白纯化AKTA操作说明#(优选.)
AKTAexplorer标准操作及维护保养规程
1 目的阐明和规范运用AKTAexplorer蛋白纯化系统。
2 范围本操作规程适用于AKTAexplorer蛋白纯化系统的操作使用及维护保养。
3 职责仪器操作人员负责仪器的正确使用,清洁及基本维护。
仪器负责人负责监督和培训其他人员对仪器的正确使用,同时仪器负责人对仪器进行定期维护和保养。
4 引用4.1 AKTA_Purifier操作手册4.2 AKTA_explorer 英文操作手册5 内容5.1 准备工作5.1.1 将预先配置好的缓冲液,用0.45微米滤膜过滤,然后进行超声脱气。
5.1.2 将待分离样品用0.45微米滤膜进行过滤。
5.1.3 将对应的管路放入对应的缓冲液。
5.2 启动层析系统5.2.1 连接好电源打开AKTAexplorer蛋白纯化系统电源,打开电脑点击操作软件。
5. 2.2 排出缓冲液管路气泡检查进液管路有无气泡,少量气泡可进行泵洗排气,首先将管路滤头放入超纯水中,点击操作软件“system control”中“manual”操作菜单,然后在“pump”中点击“pump wash explorer”同时选择待要排气的管路,选择完成点击“execute”,泵洗结束点击“end”。
当管路中气泡仍未排除时,“manual”操作菜单中点击“flowpath”选择未排尽气泡管路,点击“execute”,用注射器在对应的泵头上方阀门处抽出气泡,点击“end”。
5. 2.3 排除样品泵管路气泡将进样管路放进超纯水中,“manual”操作菜单中点击“sample flow”设定流速10-20mL/min,“flowpath”中选择管路,“Alarms”设定样品泵压力0.3MPa,点击“execute”排气结束后点击“end”。
当管路中气泡仍未排除时,用注射器连接在injection valve V1的2号位抽气。
“direct load”设定流速样品才过柱子,在“sample flow”改变流速样品不过柱子。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备,自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置,可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起(Fig 1)。
它们是:FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa(泵名为P-901)。
在AKTA explore10,流速范围0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa(泵名为P-903)。
• Monitor UV-900,同时监控190-700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见(UV-Vis)监测器。
(针对部分AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,安装滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换。
)• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示(Fig 2)。
组成部件,如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备,自动化程度很高.AKTA系统依据不同的配置,可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统.该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起(Fig 1)。
它们是:FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump—900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa(泵名为P—901).在AKTA explore10,流速范围0。
001-10 ml/min,压力高达25 Mpa(泵名为P—903)。
• Monitor UV-900,同时监控190-700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外—可见(UV-Vis)监测器。
(针对部分AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,安装滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换。
)• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示(Fig 2)。
组成部件,如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源.待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明(二)引言概述:本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一,能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统,本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项,帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文:一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源,并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足,并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒,准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料,并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝,将填料注入色谱柱中,确保填料均匀。
3. 同时,注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封,以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面,并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中,设定蛋白纯化的各个步骤,如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求,选择合适的梯度洗脱方案,并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理,如离心、过滤等,以去除杂质。
2. 根据纯化需求,可进行某些特定试剂的添加,如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置,将样品装入进样器中,并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法,确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统,开始实验运行,并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据,并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结:通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明,用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作,将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时,用户还需根据实际操作中的具体情况,进一步优化实验参数,以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的:为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性,保证实验结果的可靠性,制定本操作规程。
二、适用范围:本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程:1.准备工作:(1)预热:打开系统电源,预热至设定温度(一般为室温)。
(2)洗涤缓冲液:根据实验要求,制备所需的洗涤缓冲液,确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液:根据实验要求,制备所需的净化缓冲液,确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品:根据实验要求,制备所需的样品。
2.系统配置:(1)连接仪器:将系统中的各个模块连接好,包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数:根据实验要求,在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理:(1)样品加载:将样品注入到加载注射器中,通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱:根据实验要求,设置梯度洗脱条件,将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗:(1)注射器清洗:每次实验结束后,将注射器从系统中取出,用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗:每次实验结束后,将色谱柱从系统中取出,用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭:(1)关闭电源:关闭系统电源,断开电源线连接。
(2)清洗系统:将系统中的各个模块用水冲洗干净,保持干燥。
(3)整理工作台:将使用过的耗材整理归位,清理工作台。
四、操作注意事项:1.操作前应仔细阅读操作手册,了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品,避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中,要严格按照实验要求进行,避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态,保证系统正常工作。
5.操作完成后,要及时清洗和整理仪器,保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施:1.使用过程中,注意避免溶液飞溅引起的伤害,避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤:1. 开机:打开AKTA pure开关,看指示灯,泵同步(泵内有注入液体的声音)。
2. 打开系统:打开电脑:双击 Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面,用户名默认为Default,输入密码:default,点ok键,出现提示对话框,继续点确定,进入系统。
注意:进入系统时会弹出三个界面:System Control 界面, Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口,所有的设置选项都是在该界面下完成:Manual---Execute Manual instructions---......; Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口;Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵:把A1泵头从20%乙醇中取出,用去离子水冲洗,放入分子筛缓冲液中,在SystemControl界面下,点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet,选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数:设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute;设流速:Pumps---System flow ---设置system flow(1mL/min)---Execute。
注意:流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”,不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下):接柱子的上面:拧下连接进样阀和检测器之间的线,等进样阀出口有液体流出时,拧开柱上面线头的螺帽,将它连到进样阀出口;接柱子的下面:去掉柱下端连接的注射器,连上接头,连上一段线,待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里,滴满,将接头连到检测器的连接口里。
蛋白纯化AKTA操作说明(一)2024
蛋白纯化AKTA操作说明(一)引言概述:蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段,通过纯化目标蛋白,可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备,本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点:设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文:一、设备准备:1. 查看设备状况:检查AKTA设备的各个组件是否齐全,并确保设备正常工作。
2. 设备消毒:使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒,确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料:1. 缓冲液:根据实验需要选择不同的缓冲液,并准备足够的量。
2. 标记抗体:根据实验需要选择适当的标记抗体,并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂:根据实验需要选择适当的标记亲和树脂,并准备足够的量。
4. 标准品:准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备:1. 细胞裂解:采用适当的方法对细胞进行裂解,获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理:根据裂解液的性质,进行适当的预处理,如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载:将预处理后的样品加载到纯化系统中,确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤:1. 初始化设备:打开AKTA软件,选择纯化方法,并设置相关参数。
2. 样品加载:将样品加载到设备中,并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱:使用缓冲液进行洗脱,去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收:使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白,并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备:使用适当的缓冲液对设备进行清洗,防止交叉污染。
五、数据处理和总结:1. 数据记录:记录纯化过程中的各项数据,如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析:对纯化结果进行分析和比较,评估纯化效果。
3. 总结经验:根据纯化结果总结操作经验,以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结:本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理,可以获得高纯度的蛋白样品,为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器主电源,打开电脑电源。
待仪器自检完成(CU950上面3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品全部工作溶液和样品必需经过0.45µm滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液,binding buffer中,将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer,在system control窗口点击工具栏内manual,选择 pump→pump wash basic,选中A1,B1管道为ON, execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate,输入流速1ml/ml,insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm(输入填料耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。
待InjectionValve1号位管道流出水后接入柱子柱头,稍微拧紧后将柱下端堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化:1)等候柱子平衡好了(观察电导COND,pH数值和改变趋势)就准备上样了。
此时将紫外调零,选择Alarm&mon→autozero,exectue。
2)用样品环上:将样品吸进注射器,推掉气泡,从injectionValve3号位推入(进样量不得低于样品环体积2倍)推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject,execute。
3)用泵上样:点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一个方法4)洗脱:上样后用缓冲液尽可能将穿透峰洗回基线。
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤:1. 开机:打开AKTA pure开关,看指示灯,泵同步(泵内有注入液体的声音)。
2. 打开系统:打开电脑:双击Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面,用户名默认为Default,输入密码:default,点ok键,出现提示对话框,继续点确定,进入系统。
注意:进入系统时会弹出三个界面:System Control界面,Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口,所有的设置选项都是在该界面下完成:Manual---Execute Manual instructions---......;Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口;Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵:把A1泵头从20%乙醇中取出,用去离子水冲洗,放入分子筛缓冲液中,在SystemControl界面下,点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet,选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数:设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute;设流速:Pumps---System flow ---设置system flow(1mL/min)---Execute。
注意:流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”,不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下):接柱子的上面:拧下连接进样阀和检测器之间的线,等进样阀出口有液体流出时,拧开柱上面线头的螺帽,将它连到进样阀出口;接柱子的下面:去掉柱下端连接的注射器,连上接头,连上一段线,待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里,滴满,将接头连到检测器的连接口里。
akta 操作规程
akta 操作规程操作规程是指为了规范化、标准化工作流程,确保工作的安全和高效进行而制定的一系列规范和步骤。
以下是关于akta操作规程的一份示例,总字数为1200字。
一、引言akta操作规程旨在确保在akta工作流程中的每个步骤都按照标准程序和最佳实践进行操作,以保证最佳的实验结果和避免任何潜在的风险和错误。
二、适用范围本操作规程适用于所有参与akta工作流程的工作人员,包括实验室技术人员、研究人员等。
三、定义1. akta:一种用于蛋白质纯化的仪器。
2. 标本:指待处理的蛋白质溶液。
四、工作准备1. 检查akta设备是否正常运作,并进行必要的维护和保养。
2. 准备所需的试剂和耗材。
3. 检查仪器和试剂的质量和有效期。
五、样品处理1. 按照相关的实验方案和标准操作程序将标本添加到akta设备中。
2. 设置合适的参数,如流速、压力等,以确保蛋白质纯化的效果最佳。
3. 监测纯化过程中的各项参数,如pH值、溶液浓度等,及时进行调整。
4. 在工作过程中严格遵守个人防护要求,如戴手套、穿实验服,并避免直接暴露于有害化学物质中。
5. 严格按照规定的时间和步骤进行样品处理,避免任何错误。
六、数据记录与分析1. 在整个纯化过程中,准确记录关键步骤和操作参数。
2. 在操作过程中及时记录实验结果,包括纯化效果、产率等。
3. 对结果进行合理的分析和解释,并进行必要的调整和改进。
七、安全措施1. 在操作过程中,严格遵守实验室的安全规定,使用个人防护设备。
2. 防止刺激性、致敏性和有毒性物质的接触,并妥善处理废弃物。
3. 在有害气体、溶液或物质存在的情况下,确保有良好的通风条件。
八、仪器维护与清洁1. 在每次使用后及时进行仪器的维护和保养,检查仪器的功能是否正常。
2. 仪器清洁要求按照实验室的相关规定进行,保持工作区域的干净整洁。
九、问题解决1. 在操作过程中遇到任何问题,应立即与相关人员进行沟通和协调,确保问题及时解决。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤:1. 开机:打开AKTA pure开关,看指示灯,泵同步(泵内有注入液体的声音)。
2. 打开系统:打开电脑:双击Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面,用户名默认为Default,输入密码:default,点ok键,出现提示对话框,继续点确定,进入系统。
注意:进入系统时会弹出三个界面:System Control界面,Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口,所有的设置选项都是在该界面下完成:Manual---Execute Manual instructions---......;Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口;Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵:把A1泵头从20%乙醇中取出,用去离子水冲洗,放入分子筛缓冲液中,在SystemControl界面下,点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet,选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数:设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute;设流速:Pumps---System flow ---设置system flow(1mL/min)---Execute。
注意:流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”,不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下):接柱子的上面:拧下连接进样阀和检测器之间的线,等进样阀出口有液体流出时,拧开柱上面线头的螺帽,将它连到进样阀出口;接柱子的下面:去掉柱下端连接的注射器,连上接头,连上一段线,待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里,滴满,将接头连到检测器的连接口里。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备,自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置,可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起(Fig 1)。
它们是:FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa(泵名为P-901)。
在AKTA explore10,流速范围0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa(泵名为P-903)。
• Monitor UV-900,同时监控190-700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见(UV-Vis)监测器。
(针对部分AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,安装滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换。
)• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示(Fig 2)。
组成部件,如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
最新AKTA蛋白纯化系统操作(精品课件)
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备,自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置,可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER 为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起(Fig 1).它们是:FIG 1、AKTAEXPLORER主机•Pump—900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa(泵名为P-901).在AKTA explore10,流速范围0。
001-10 ml/min,压力高达25Mpa(泵名为P—903)。
• Monitor UV—900,同时监控190-700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外—可见(UV-Vis)监测器。
(针对部分AKTAPURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,安装滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换。
)• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示(Fig 2)。
组成部件,如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2。
1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程1、开机长按仪器主电源至环形绿灯常亮,打开电脑电源,待仪器自检完毕,双击桌面上UNICORN 7.4图标,进入操作界面,待仪器显示屏显示Ready ,系统连接完毕。
2、准备工作液和样品所有工作溶液的样品必须经过0.45μm的滤膜过滤,少量样品也可高速离心后取上清使用。
缓冲液使用前用过超声脱气10min;3、清洗及管道准备(1)将需要用到的泵头(一般为A、B、sample)从蓝盖瓶中取出,插入到超纯水中,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump --- pump wash --- A、B、sample 选on --- insert --- Execute ,用纯水洗泵,洗完自动停止。
(2)将A泵管插入到平衡缓冲液中,B泵插入到洗脱缓冲液中,sample 泵插入到平衡缓冲液中,按照上一步骤洗泵,洗完自动停止。
(3)检查管路中是否还有气泡,如果有气泡需要手动排气,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions ---Flow path--- inlet,依次选择泵,进行手动注射器抽液,两个泵都抽出连续的液体。
(4)将sample 管道插入待上样的样品中;4、安装层析柱(1)在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump--- Flow 输入一个慢流速1或者0.5m L/min,insert;(2)选择Alarm---Alarm pressure (输入柱子的耐受压力,可在说明书中查看);点击execute;(3)待Injecttion Valve 5号管位流出液体后,将管路接入柱子的上端,稍微拧紧后将柱子下端的堵头卸掉接入管道。
蛋白质纯化系统AKTAPurifer10操作规程
仪器操作规程-蛋白质纯化系统 AKTA Purifer 10
一、标准操作规程
1.检查各部件连接是否正常(电源开关,仪器部件,流动相,色谱柱等)。
2.打开AKTA purifierTM10蛋白层析仪和计算机电源。
3.双击UNICON 5.11图标,进入实时方法编辑、实时运行、结果分析界面。
4.编辑新方法:
1)编辑方法:点击文件,点击新建方法,编辑方法(运行时间,流动相选择,流速,
检测波长等)。
2)保存方法:点击文件,点击另存方法为(输入文件名)。
3)运行方法:选择文件,点击右键,点击RUN,进行方法运行。
4)平衡色谱柱,一般约1—2个柱体积。
5)手动单针进样:在Load状态,将样品注入进样环,完毕后,点击Inject状态。
6)批处理进样:编辑方法,选择A—905自动进样器,进入scouting界面,利用向
导进行批处理编辑,保存批处理文件,点击批处理运行图标。
7)数据处理:点击第四个谱图分析图标,进入数据处理界面,打开要处理的文件,
点击积分向导图标进行数据处理(还可点击界面顶部的手动积分进行手动处理)。
保存数据处理方法。
5.运行已有方法:在实时分析界面点击文件,打开方法文件,点击RUN即可。
6.清洗色谱柱,在方法文件中调出自动清洗方法,点击RUN即可。
二、注意事项
1.流动相的溶剂须使用色谱纯,水为超纯水,缓冲盐需用0.45um的滤膜过滤。
2.清洗泵后的保护液为20%乙醇,一周更换一次。
3.如经常使用仪器,在线过滤器中的滤芯需每周超声清洗一次。
三、送样要求
初级纯化过滤后的样品。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作1.设定纯化方法:首先,根据目标蛋白质的特性和要求,选择合适的纯化方法。
一般而言,常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶层析和离子交换层析等。
在AKTA蛋白纯化系统上,可以预设不同的纯化方法并保存为方案。
2.准备蛋白样品:准备待纯化的蛋白样品。
在纯化前,需要将样品进行预处理,例如,去除杂质、去盐、浓缩等。
此外,一些特殊的样品也需要添加辅助试剂,如DTT、EDTA等。
3.配置层析柱:根据之前设定的纯化方法,选择合适的柱子。
AKTA系统支持多种柱径和材质的柱子,可以根据需要更换。
4.连接管路:将柱子与系统的蛋白吸附和洗脱缓冲液的管路相连接,确保连接处无泄漏。
5.调整流速:设置蛋白吸附和洗脱缓冲液的流速。
一般而言,根据柱子的大小和纯化方法的要求,设置合适的流速可以提高纯化效果。
6.均衡柱子:在进行纯化前,需要将柱子进行均衡操作。
均衡柱子可以提高吸附剂(如亲和树脂)和蛋白样品之间的接触效果,提高纯化效率。
7.加样和洗脱:将经过均衡的柱子连接到AKTA系统,将样品通过自动加样器加入。
在加样后,可以通过设定的方法进行洗脱和冲洗,以去除非目标蛋白质和杂质。
8.收集纯化的目标蛋白:通过设置最终洗脱步骤,将目标蛋白质从纯化方法中洗脱出来。
同时,系统可以将纯化的目标蛋白自动收集到相应的管子或容器中。
9.检测纯化后的蛋白质:对纯化后的蛋白质进行检测,如SDS-、Western blot等方法,以验证纯化效果。
10.清洗设备:在纯化完成后,要对设备进行清洗。
根据实验室的规范和设备说明书,进行相应的操作,以确保设备的使用寿命和实验结果的准确性。
总之,AKTA蛋白纯化系统是一种功能强大、操作灵活的蛋白质纯化设备。
通过合理的设定纯化方法、处理样品和操作设备,可以高效地纯化目标蛋白质,并得到高质量的纯化产物。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源,打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液,binding buffer中,将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择 pump→pump wash basic,选中A1,B1管道为ON, execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate,输入流速1ml/ml,insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm(输入填料的耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化:1)等待柱子平衡好了(观察电导COND,pH的数值和变化趋势)就准备上样了。
此时将紫外调零,选择Alarm&mon→autozero,exectue。
2)用样品环上:将样品吸进注射器,推掉气泡,从injectionValve的3号位推入(进样量不得低于样品环的体积的2倍)推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject,execute。
3)用泵上样:点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4)洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
ATKA 蛋白质纯化系统操作规程
Esc按Esc一次返回一级菜单,或重复地回到主菜单。
5.主菜单概要(Main menu overview)
反复按Esc键可从任何子菜单进入主菜单平面。
Templates.该菜单出现在自检后启动时,用于运行应用模板和方法模板。Program Method用于编辑用户专用方法。
SetParameters用于对检测紫外(UV)、电导、PH、温度、和运转泵及混合器设置参数。
Check用于检测系统内部参数,例如序列号、泵运行时间、和灯亮度。
Manual Run用于手工运行系统。
关机步骤
结束运行(Finishing the run)
在Method Complete即时按OK结束运行。
Method Complete
Press OK to continue
在结束前中断运行,按End,用选择yes来确认后面的信息,并按OK。
5.当使用危险化学品时,在维护和维修前应确保整个系统已用蒸馏水彻底冲洗过。
ATKA prime蛋白质纯化系统
型号:AKTAprime
厂家:GE
价格:13万元
主要功能:用于蛋白质的分离纯化
操作规程
开机骤
启动系统并进行系统自检如下:(Selftest自检)
1.打开系统后面板的主电源开关。系统开始进行自检。
2.首先将显示系统名称和软件版本号。然后在自检期间显示AKTA prime信息。如果检测到错误,则在显示器上显示出错误信息。
3.自检约需30-40秒钟。当启动无误地完成时,显示屏显示模板菜单Template模版并准备好使用。系统可以立即使用。但是直到使用一小时后才能达到全部技术指标。
4.操作用户界面(Operation the user interface)
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AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤:1. 开机:打开AKTA pure开关,看指示灯,泵同步(泵内有注入液体的声音)。
2. 打开系统:打开电脑:双击Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面,用户名默认为Default,输入密码:default,点ok键,出现提示对话框,继续点确定,进入系统。
注意:进入系统时会弹出三个界面:System Control界面,Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口,所有的设置选项都是在该界面下完成:Manual---Execute Manual instructions---......;Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口;Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵:把A1泵头从20%乙醇中取出,用去离子水冲洗,放入分子筛缓冲液中,在SystemControl界面下,点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet,选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数:设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute;设流速:Pumps---System flow ---设置system flow(1mL/min)---Execute。
注意:流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”,不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下):接柱子的上面:拧下连接进样阀和检测器之间的线,等进样阀出口有液体流出时,拧开柱上面线头的螺帽,将它连到进样阀出口;接柱子的下面:去掉柱下端连接的注射器,连上接头,连上一段线,待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里,滴满,将接头连到检测器的连接口里。
6.平衡柱子:分子筛buffer平衡柱子,一般要两个小时左右,盐离子浓度达到5.5%左右。
7.设置系统及收集参数:命名:先end---Manual instructions,点击browse,弹出select result name&location 界面,点开文件夹“defaultHome”,找到文件夹“labdata”,点开,选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建),在界面下方“name”指令框进行命名。
注意:命名时要标明日期,柱子型号,样品名称。
设流速:Pumps---System flow---设流速(1 mL/min)---Execute;设柱压:Alams--- alam systerm pressure---high alam---设置柱压---点击Execute;洗A泵:Pumps---Pump A wash---点开inlet,选择A1---Excuse;紫外调零:Monitors---Auto zero UV---Execute;设置收集体积:Fracton collection---peak fractionation---fraction size---设置收集体积---Execute;一般设为1 mL(可根据实际情况调整)。
设置收集水平:Fracton collection---peak fractionation parameters---Start level---设置起始收集水平--- Execute。
注意:对于初次纯化的蛋白,由于蛋白含量未知,起始水平可设低些,如10 mAU,避免损失蛋白。
8.上样:冲洗Loop环:取5mL注射器,吸取5 mL分子筛(不能有气泡),从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop环;蛋白样品处理:取出蛋白样品(< 2 mL),12000 rpm离心3 min,把上清转移至新的离心管管,重复一次,以去除沉淀,避免堵塞系统;手动蛋白上样:把蛋白样品转移至注射器内,从进样口把样品注射入Loop环内;注意:上样时应小心操作,首先弹出注射器内的气泡,随后稍推注射器,使注射器出口处悬挂一样品液滴(别太用力,导致液滴滴落),然后把注射器插入进样口,把蛋白样品推入Loop环中。
Inject:点击Flow path---injection valve---点开position选项---inject---Execute---走2倍Loop 体积的分子筛缓冲液;Load:点击Flow path---injection valve---点开position选项---manual load---Execute,调回Load状态。
9.收集目标蛋白:参照标准蛋白曲线,估计样品出峰位置,收集蛋白样品,做好标记,过完后,peak fracstop 900 停止收集。
10. 20%乙醇平衡柱子:等精氨酸峰出来,离子浓度平衡后,点击pause,进分子筛的buffer的泵头用去离子水洗,放入20%的乙醇中,continue---洗泵(A1泵),平衡柱子。
20%的乙醇平衡柱子,一般要两小时左右,盐离子浓度达到0%。
11.收柱子(先下后上):调节流速至0.5 mL/min,拧下柱下面的接头,连上注射器,再调流速至1 mL/min,注射器内吸入3-5 mL 20%乙醇,取下柱上面的接头看是不是往外流液体,因为注射器内有压力,液体会倒流,盖子内滴满液体,立即拧上盖子,防止进气泡,将进样阀的线接到检测器上。
12.关闭系统:点击End 关闭系统界面,关闭AKTA pure电源,关电脑。
2018-09-01AKTA pure操作说明离子交换蛋白纯化步骤(RESOURCE Q/S)1. 开机:打开AKTA pure开关,看指示灯,泵同步(泵内有注入液体的声音)。
2. 打开系统:打开电脑:双击Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面,用户名默认为Default,输入密码:default,点ok键,出现提示对话框,继续点确定,进入系统。
注意:进入系统时会弹出三个界面:System Control界面, Evaluation界面和Administration 界面。
其中system Control界面为主操作窗口,所有的设置选项都是在该界面下完成:Manual---Execute Manual instructions---......;Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口;Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵:点击pause暂停系统---去离子水冲洗A1,B1进液泵头---分别放入A,B液中;洗B泵:选择System Control界面manual---Execute Manual instructions---Pumps---PumpA wash---点开inlet,选择B1---Excuse;洗A泵:选择System Control界面manual---Execute Manual instructions---Pumps---PumpA wash---点开inlet,选择A1---Excuse,洗泵结束后调B至100%,0min---Execute。
4. 设置系统参数:设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置最高柱压---Execute。
设流速:Pumps---System flow---设置system flow(1 mL/min)---execute;注意:流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”,不要超出最高限制。
5. 安装RESOURCE柱(先上后下):装离子柱时先拧开离子柱上面,连上来自进样阀的线,边拧紧上面边拧松柱下面,在离子柱子下端出口连上转接头,接上一根较短的先并连到检测器上(流出液体,滴满检测器上的连接口的洞里,再拧紧)。
6. 平衡RESOURCE 柱:等B液平衡后,点击Pumps---gradient---Target---调B至0%,0min---Execute。
等平衡后,记录最高和最低盐离子浓度:离子交换B液盐离子浓度约为84%,离子交换A液盐离子浓度约为1.7%。
7.设置系统及收集参数:命名:先end---Manual instructions,点击browse,弹出select result name&location界面,点开文件夹“defaultHome”,找到文件夹“labdata”,点开,选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建),在界面下方“name”指令框进行命名。
注意:命名时要标明日期,柱子型号,样品名称。
设流速:Pumps---System flow---设流速(1 mL/min)---Execute;设柱压:Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---点击Execute;紫外调零:Monitors---Auto zero UV---Execute;设置收集体积:Fracton collection---peak fractionation-fraction size---设置收集体积---Execute;一般设为1 mL (可根据实际情况调整) 。
设置收集水平:Fracton collection---peak fractionation parameters---Start level---设置起始收集水平--- Execute。
注意:对于初次纯化的蛋白,由于蛋白含量未知,起始水平可设低些,如10 mAU,避免损失蛋白。
8.上样:冲洗Loop环:取5 mL注射器,吸取5 mL分子筛(不能有气泡),从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop环;蛋白样品处理:取出蛋白样品(< 2 mL),12000 rpm离心3 min,把上清转移至新的离心管管,重复一次,以去除沉淀,避免堵塞系统;手动蛋白上样:把蛋白样品转移至注射器内,从进样口把样品注射入Loop环内;注意:上样时应小心操作,首先弹出注射器内的气泡,随后稍推注射器,使注射器出口处悬挂一样品液滴(别太用力,导致液滴滴落),然后把注射器插入进样口,把蛋白样品推入Loop环中。
Inject: 点击Flow path---injection valve---点开position选项---inject---execute---走2倍Loop体积的分子筛缓冲液;Load: 等流穿峰出来后,点击Flow path---injection valve---点开position选项---manual load---Execute,调回Load状态。