无菌检查原始记录薄膜过滤法xh

06微生物限度检查记录(薄膜过滤法)

微生物限度检查记录（薄膜过滤法）文件编码：SOP-JHJY00301-06样品名称批号检验编号规格检验日期报告日期检验目的培养时间结束时间检验依据《中国药典》年版部供试液制备取供试品10g、10ml、100cm2、瓶，加胰酪大豆胨液体培养基至 ml，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，制成1：10供试液，必要时，稀释成1：100等适宜稀释级，按薄膜过滤方法检测。

一、需氧菌（30~35℃，3-5天）；胰酪大豆胨琼脂，批号，温度：℃二、霉菌和酵母菌（20~25℃，5-7天）；沙氏葡萄糖琼脂，批号，温度：℃培养时间1：10 1：100 1：1000阴性对照原液1：10 1：100阴性对照皿1 皿2 皿1 皿2 皿1 皿2 皿1 皿2 皿1 皿2 皿1 皿21天2天3天4天5天6天/ / / / / / /7天/ / / / / / /平均值结果计数： cfu/g；（规定：≦cfu/g）计数： cfu/g；（规定：≦cfu/g）三、大肠埃希菌培养内容胰酪大豆胨液体（30-35℃；18-24h）温度：℃，培养时间：h麦康凯液体（42-44℃；24-48h）温度：℃，培养时间：h麦康凯琼脂培（30-35℃；18-72h）温度：℃，培养时间：h供试品阳性对照阴性对照结果□检出□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出cfu/g）四、耐胆盐革兰阴性菌培养内容肠道菌增菌液体培养基（30-35℃；24-48h）温度：℃，培养时间：h紫红胆盐葡萄糖琼脂（30-35℃；24-48h）温度：℃，培养时间：h供试品1：10 1：100 1：1000阳性对照阴性对照结果每1g为cfu （规定：≦ cfu/g）五、沙门菌检查培养内容胰酪大豆胨液体（30-35℃；18-24h）温度：℃，时间：hRV沙门菌增菌液体（30-35℃；18-24h）温度：℃，时间：h木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（30-35℃；18-48h）温度：℃，时间：h三糖铁琼脂斜面（30-35℃；18-24h）温度：℃，时间：h供试品阳性对照阴性对照结果□检出□未检出沙门菌（规定：不得检出10g）结论本品按《中国药典》年版部检验，结果。

无菌检验原始记录

改良马丁培养基:将白色念株菌和黑曲霉各2支接种置改良马丁培养基,同时做空白对照1支,置23~28℃培养5天,观察结果。
3.供试品:细菌检测管;将5个供试品在无菌操作环境下，每个包装用50-100ml无菌0.9%生理盐水分别冲洗样品的内壁和外表，收集冲洗液于无菌容器中，用放有无菌过滤膜的无油真空泵过滤抽取冲洗液，然后将过滤膜取出接种置硫乙醇酸盐流体培养基。
5.阴性对照管:空白硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。
6.将接种好后硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃,改良马丁马丁培养基置23~28℃,培养14天观察结果。
结果记录
培养基灵敏度:

空白对照
无菌检查:
日期
供试管
阳性对照管
阴性对照管
备注:
成品检验报告：
结论:
（盖章）
检验人：复核人：
无菌检验原始记录
样品名称
样品批号
检验数量
样品数量
检验日期
灭菌批号
检验项目
无菌
方法（薄膜过滤法)
1.培养基的制备:硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基完全溶解后置于高压蒸汽锅121℃,30min灭菌。将灭菌后培养基做灵敏度检查。
2.培养基的灵敏度检查:硫乙醇酸盐流体培养基;将生孢梭菌、枯草芽孢杆菌各2支接种置硫乙醇酸盐流体培养基同时做空白对照1支,置30~35℃培养3天,观察结果。
真菌检测管;将5个供试品在无菌操作环境下,每个包装用50-100ml无菌0.9%生理盐水分别冲洗样品的内壁和外表，收集冲洗液于无菌容器中，用放有无菌过滤膜的无油真空泵过滤抽取冲洗液，然后将过滤膜取出接种置改良马丁培养基。
4.阳性对照管:在阳性间的无菌操作环境下,将对应的阳性菌5个接种置硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。

无菌检查原始记录薄膜过滤法xh

HTY-Ⅲ智能集菌器仪器编号：
一次性全封闭集菌培养器型号：
批号：
实验环境
无菌室室温：℃ 相对湿度： %
沉降菌落数：无菌室：左中右，净化台：左中右
供试液制备
□常规法供试品瓶（支） %无菌氯化钠溶液毫升
□非水溶性供试品瓶（支）加乳化剂（克或毫升）
□其它制备法瓶（支）
培养基批号
硫乙醇酸盐培养基真菌培养基
灭菌生理盐水或其它稀释液营养琼脂平板
滤膜冲洗液用量毫升
阳性对照：阴性对照：本底对照：
培养时间（天）
1
2
3、厌气菌培养基
真菌培养基
其它检验方法
备注
结论
□(均)符合规定 □(均)不符合规定
查验者：校对者：审核者：
日期：日期：日期：
上海市徐汇药品检验所
无菌检查原始记录
（薄膜过滤法）
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温度(℃)：相对湿度(%)：
样品编号
样品名称
批号
规格
生产国及
厂家名称
供样单位
检验依据
□中国药典2000年版部附录
□进口药品质量复核标准
□其他
仪器型号及编号
超净工作台仪器编号：
细菌培养（35℃）仪器编号：
霉菌培养（25℃）仪器编号：

无菌检查(薄膜过滤法)SOP

无菌检查SOP（薄膜过滤法）1.目的为规范无菌检查方法及无菌检查全过程的操作，最大限度防止试验操作过程造成的污染，确保结果准确。

2.范围本SOP适用于生物制品的中间产品（包括原液、纯化产物、半成品、生产中的液体、辅料等）、成品的无菌检查。

只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。

3.定义无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6.材料6.1.无菌检查用物品、物料要求：所有物品、物料进入无菌室前，均应经过高压蒸汽灭菌（121℃40分钟，放灭菌指示卡）或180℃干烤2小时或其它经过验证的方法消毒后传入无菌室；如不能用前者消毒方式消毒的物品，须经消毒液浸泡、擦拭后传入无菌室。

6.2.无菌检查环境要求：应在环境洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

6.3.仪器、设备与设施集菌仪、显微镜、台式灭菌器、无菌试验室（万级）、超净工作台（万级背景下的局部百级）：每月环境检测（沉降菌、浮游菌、尘埃粒子）合格后，方可使用。

20-25℃培养房或培养箱、30-35℃培养房或培养箱。

6.4.试验用具：洁净工作服（洁净底服、十万级工作服、万级工作服、鞋套）、工作鞋、口罩及帽子；无菌医用手套或一次性乳胶医用手套：试验前及试验过程中用消毒液浸泡消毒；封闭式集菌培养器（双针头、三联及单针头、三联）：薄膜孔径不大于0.45μm，直径约为 50mm。

根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。

滤膜法测定原始记录

f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录
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项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：检测地点：环境温度与湿度：
分析方法：仪器设备（管理编号）：
培养条件：
样品编号Байду номын сангаас
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
C1-滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000-将过滤体积的单位由ml转换为L
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录表（续表）
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：
样品编号
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；

《无菌检验原始记录》资料

无菌检验原始记录资料1. 引言无菌检验是医药行业中一项非常重要的检测项目，用于评估药品或医疗器械是否符合无菌要求。

本文档将记录无菌检验的原始数据，包括实验设计、样品准备、实验过程、结果分析等内容。

2. 实验设计在进行无菌检验前，需要制定合理的实验设计，明确实验目的、方法和操作流程。

以下是本次无菌检验的实验设计：•实验目的：评估药品A的无菌性能，判断是否达到临床使用的要求。

•样品准备：从批次A中随机抽取10个单位作为样品。

•实验方法：采用膜过滤法进行无菌检验。

•实验流程：样品制备、膜过滤、培养基接种、培养、读取结果。

3. 样品准备样品准备是无菌检验中的重要环节，确保样品的真实性和可再现性。

在本次无菌检验中，我们从药品A批次中随机抽取了10个单位作为样品。

样品准备步骤如下：1.检查药品A批次的包装是否完好。

2.选择10个单位的药品，注意不要接触到外部环境。

3.将药品放入灭菌环境中，准备进行后续的膜过滤操作。

4. 实验过程本次无菌检验采用膜过滤法进行。

实验过程如下：1.准备所需材料和设备：膜过滤器、采样器、移液器、灭菌培养基等。

2.将膜过滤器装入采样器，并进行预灭菌处理。

3.使用移液器将样品精确地转移至采样器中。

4.将采样器连接至真空泵，启动泵抽取样品。

5.将膜过滤器转移到灭菌培养基板上，确保膜迅速接触到培养基。

6.将培养基板置于恒温培养箱中，设定合适的温度和时间。

7.培养结束后，观察培养基板上是否有细菌生长。

5. 结果分析根据观察结果，我们对实验结果进行分析和解读。

以下是对本次无菌检验结果的分析：•样品1-10：观察结果显示，所有样品在培养基板上均未发现细菌生长。

•正、负对照：正对照（已知含有细菌）显示细菌生长，而负对照（未接触到样品）未发现细菌生长。

•结论：根据实验结果，可以得出结论，药品A批次显示出良好的无菌性能，符合临床使用的要求。

6. 总结本文档记录了一次无菌检验的原始数据，包括实验设计、样品准备、实验过程、结果分析等内容。

无菌检查方法验证

无菌检查方法验证：取本品，分别加灭菌注射用水 1ml 溶解，采用薄膜过滤法依法检查(中国药典 2022 年版二部附录Ⅺ H )，应符合规定。

菌液制备： 10 倍稀释法培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂斜面培养基菌悬液制备计数结果菌种代数稀释级菌落数(cfu/ml )枯草芽孢杆菌 4 10-6 61金黄色葡萄球菌 4 10-7 89大肠埃希菌 4 10-6 78生孢梭菌 4 10-6 67白色念珠菌 4 10-7 83黑曲霉菌 4 10-4 401、供试品处理将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注入 1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。

2、检查阳性对照：将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管中，在相应的温度下培养。

液体硫乙醇酸盐培养基管在 30-35℃下培菌种枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌 CMCC(B)44102生孢梭菌 CMCC(B)64941白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉菌 CMCC(F)98003菌悬液制备用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌少于 100cfu (菌落行程单位)的菌悬液加入 5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，再同上制成每 ml 含菌小于 100cfu 的菌悬液养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。

观察记录。

阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。

液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。

观察记录。

样品 (薄膜过滤法)：每种实验菌取10 支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3 等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。

无菌检测薄膜过滤法的操作流程

无菌检测薄膜过滤法的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!1. 准备工作：检查实验设备和材料，确保无菌过滤器、滤膜、培养基等完好无损。

无菌检验记录

20〜25
30〜35
改良马丁
20〜25
硫乙醇酸盐
20〜25
30〜35
改良马丁
20〜25
硫乙醉酸盐
20〜25
30〜35
改良马丁
20〜25
硫乙醇酸盐
20〜25
30〜35
改良马丁
20〜25
硫乙醇酸盐
20〜25
30〜35
结论：判定日期：年月日
判定人：复核人：
批号
检测日期
送检日期
试验类型
口初试口复试□重试
重（复）试原因
□初试不合格,口初试不成立，口稳定性检验
检定依据：《中华人民共和国药典》三部2010版
检定方法：薄膜过滤法。
第一部分设备/用具
一、材料和设备准备
用具名称
数量
生产日期/批号
有效期（至）
一次性使用全封闭集菌培养器
一次性使用无菌帽子
一次性使用无菌口罩
一次性使用无菌手套
剪刀、止血钳、
不锈钢放置槽
设备名称
编号
是否运行良好
确认人
集菌仪
是口否口
烤箱
是口否口
培养箱20-25βC
是口否口
培养箱30-35βC
是口否口
辅助用品名称
批号
有效期（至）
75%酒精棉
84消毒液
第二部分培养基
培养基
批号
配置日期
培养时间
有效期至
硫乙醇酸盐培养基
改良马丁Байду номын сангаас养基
第三部份（A项）：检验步骤
(B)项：结果观察
第3天：观察人员：第6天：观察人员：第9天：观察人员：第12天：观察人员：

无菌检查方法(薄膜过滤法)中常见问题

无菌检查方法（薄膜过滤法）中常见问题按照2020年版《中华人民共和国药典》规定，只要供试品性状允许，包括能直接过滤或者经过处理后能过滤的供试品，应采用薄膜过滤法进行无菌检查。

采用薄膜过滤法，可将药物抗菌成分去除，细菌等其他微生物则会遗留在过滤器，对其培养促使生长和繁殖，以此定性或定量检测微生物。

1常见问题及分析1.1供试品溶解不彻底固体注射剂（如密封瓶粉针剂）无菌检查时需要溶解、转移、稀释后再采用薄膜过滤法过渡，在溶解稀释的过程中，溶剂和稀释液的种类、比例和振荡器的使用等因素都会直接影响到供试品的溶解过滤效果。

2020年版中国药典四部无菌检查法中收载的稀释液有0.1%无菌蛋白陈水溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液、0.9%的无菌氯化钠溶液，试验研究结果表明，用前两种溶液做稀释剂，其微生物的回收率远高于0∙9%的无菌氯化钠溶液。

如果供试品溶解不彻底，过滤时滤膜会吸附大量供试品，被滤膜吸附的供试品虽经反复冲洗仍不能去除干净，残留在滤膜上的供试品会导致阳性菌不能在规定的条件下生长。

1.2集菌培养器选择不当为了避免操作过程带来的人为污染和人为偏差，大部分实验室会优先选择用一次性全封闭集菌培养器对供试品溶液进行过滤。

全封闭集菌培养器的滤膜材质、孔径及其与检品的相容性是影响试验结果的关键因素。

选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分截留效果，即部分注射剂具有抑菌性，在过滤时易被滤膜吸附，须采用疏水性边缘及低吸附的滤膜，如可选用尼龙膜材质的集菌器。

无菌检查用的薄膜过滤器的淀膜孔径应不大于0.45 μm,该孔径流膜能有效截留微生物。

每片淀膜的总过滤量不宜过大，以避免淀膜上的微生物受损。

目前市面上销售的一次性全封闭集菌培养器的品牌、型号、规格众多，适用的产品类型也不相同。

如某企业生产的集菌培养器：安甑瓶装药液可选用加长型取样针，无需将样品额外转移，可快速转移检品；西林瓶装粉剂可选用双针座设计，提供全封闭溶解方案，实现溶解、过滤、冲洗一体化操作，避免转移操作；需稀释的西林瓶装抑菌性粉剂可选用三针座设计，溶解、稀释、过滤、冲洗一体化操作，降低抑菌成分浓度，减少吸附。

无菌检查方法验证表和检查记录表

无菌方法验证品名：规格：批号：检查时间：1.培养基：硫乙醇酸盐流体培养基，批号：由：提供；营养肉汤，批号：由：提供；改良马丁培养基批号：由：提供。

2.验证试验用菌种：(1) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]；(2) 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]；(3) 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102]；(4) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104](5) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]；(6) 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]；(7) 黑曲霉菌(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。

3. 仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，STV3封闭式/开放式无菌检查薄膜过滤器，浙江宁海白石药检仪器厂。

4.方法：中国药典2005版二部附录。

5.操作方法：5.1 菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, ℃培养小时。

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌肉汤培养物，加生理盐水，10倍递增稀释至约10-5~10-8之间，其中金黄色葡萄球菌取稀释级，铜绿假单孢菌取稀释级，大肠埃希菌取稀释级，枯草芽孢杆菌取稀释级，生孢梭菌取稀释级。

白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中, ℃培养小时。

再取白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐水洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，取加生理盐水，10倍递增稀释至，取加生理盐水，混匀备用。

将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁培养基上，℃培养，使大量的孢子成熟。

XIH无菌检查法

附录Ⅺ H 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基培养基的制备培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。

配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基应保存在 2 ℃～ 25 ℃、避光的环境。

培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）酪胨 (胰酶水解) 5.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0 ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g (或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 水 1000 ml 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为 7.1 ± 0.2 。

分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2 。

灭菌。

在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5 ，否则，须经 100 ℃水浴加热至粉红色消失（不超过 20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。

无菌检查记录(薄膜过滤法)

品名：生产单位：批号：亚批号：规格：剂型：1.检验依据：《中华人民共和国药典》2015年版三部□本企业注册标准□其它：□2.检验方法：薄膜过滤法3.操作规程：SOP-04-13-4501《无菌检查SOP》4.判定标准：4.1 试验成立条件：阳性对照应生长良好，阴性对照不得有菌生长。

否则，试验无效。

4.2 供试品应澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。

5.检验操作5.1供试品无菌检查5.1.1 材料及设施仪器5.1.1.1培养基及稀释液5.1.1.2设施品名：批号：5.1.1.3仪器5.1.1.4耗材5.1.2实验步骤5.1.2.1试验前环境检查5.1.2.1.1洁净室试验条件：温度18℃～26℃，湿度45％～65％，压差≥10Pa 是□否□5.1.2.1.2操作间工作台面是否有与本次操作无关的物品是□否□确认人：确认日期：5.1.2.2操作步骤品名：批号：5.1.2.3试验后清场5.1.2.4环境监测结果5.1.2.5 培养及观察：“-”表示无菌生长，“+”表示有菌生长无菌检查记录（薄膜过滤法）品名：批号：5.1.2.6结果：品名：批号：5.2阳性菌试验5.2.1 材料及设施仪器5.2.1.1 菌株5.2.1.2设施5.2.1.3 仪器5.2.2实验步骤5.2.2.1试验前环境检查5.2.2.1.1洁净室试验条件：温度18℃～26℃，湿度45％～65％，压差≥10Pa是□否□5.2.2.1.2 操作间内工作台面是否清除与本次操作无关的物品是□否□确认人：确认日期：品名：批号：5.2.2.2 操作步骤操作间：微生物限度区阳性菌室操作间编号：27145.2.2.3试验后清场品名：批号：5.2.2.4培养及观察：“-”表示无菌生长，“+”表示阳性菌生长。

5.2.2.5 结果：6.结论：结果符合规定□结果不符合规定□检验人：检验日期：复核人：复核日期：。

微生物限度检查记录版

表：2.1-024微生物限度检查记录（通用）1. 常规法：取供试品10為1,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。

2. 薄膜过滤法：取供试品10mi ,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。

吸取1:10的供试液10ml ,过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液 300ml 分三次冲洗，每次100ml ;冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上，每种培养基平行制备 2个平皿。

按平皿法测定其菌数。

胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）、麦康凯液体培养基（配制批）麦康凯琼脂培养基（配制批号: ）供试液制备微生物限度检查记录、需氧菌总数检查30〜353〜5）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C,5〜7天）三糖铁琼脂斜面穿刺接种（18〜24h ）三、控制菌检查（30-35 C ）检验者:表：2.1-024号:结论本品经按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物限度检查法”进行检验，结果审核者:微生物限度检查记录（丸剂）供试液制备供试液。

胰酪大豆胨增菌（18〜24h ）RV 沙门选择培养木糖赖氨酸脱氧胆酸分离培养（18〜48h ）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）麦康凯琼脂培养基（配制批号:）四、沙门菌检查（30 °C 〜35C ）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号：）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号:）、三糖铁琼脂（配制批号：五、耐胆盐革兰阴性菌检杳胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：审核者：检验者: 表：2.1-024阴性对照阳性对照三、大肠埃希菌检查）、麦康凯液体培养基（配制批结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出/g）四、沙门菌检查（30°C〜35C）胰酪大豆东液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：、表: 2.1-024 微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）审核者：检验者:表：2.1-024 微生物限度检查记录（30〜353〜5天）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C, 5〜7天）1、口服液体药用聚酯瓶：取数个试瓶，加入1/2标示容量的氯化钠注射液，将盖旋紧，振摇1分钟，即得供试液。

3无菌检查法(薄膜过滤法)操作程序

贵州明湖药业股份有限公司GMP文件目的建立无菌检查法。

依据国家药品监督局《药品生产质量管理规范》(2010年修订)第七十五条范围本标准适用于抗菌药物注射液。

责任人试剂配制人及QA负责人、化验员对本标准实施负责。

内容1 概述无菌检查是检查药品是否染有活菌的一种方法。

2仪器、设备和用具2.1 恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。

2.2 显微镜、蒸汽灭菌器、标准pH比色器(0.02％酚磺酞指示液和澳钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。

2．3 三角瓶、刻度吸管(1、5、10m1)、玻璃器皿、移液管、试管。

2．3．1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管衙内或牛皮纸袋内盖严，灭菌备用。

2.3.2 试管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2／3处，用皮纸格管口(包括塞子)包扎严,灭菌备用。

2.3.3 将注射器、针头(8—9号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。

2.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。

2.5 真空泵。

2.6 用具的灭菌将包扎妥的用具(除另有规定外)，在(121土0．5)℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。

适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。

3 试液3.1 75％乙醇溶液配制酒精棉球用。

3.2 碘配溶液配制碘酒棉球用。

3.3 新洁尔灭(1：1000)溶液。

3.4 3-5％甲酚溶液或其他适宜消毒溶液。

3.5 0.02％酚磺酞指示液pH6.8-8.4系列比色液管3.6 溴甲酚蓝指示液pH6.0-7.6系列比色液管。

3.7 2mol/L盐酸溶液。

3.8 2mol/L氢氧化钠溶液。

4 培养基4.1 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。

无菌检测-薄膜过滤法

无菌检测（薄膜过滤法）
1、用到的设备和仪器：
集菌仪，一次性集菌器，酒精灯，电子打火消毒喷枪，不锈钢镊子、无菌均质袋(无菌锥形瓶）、不锈钢剪刀、电子天平、玻璃注射液瓶
2、环境要求：检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、供试液制备:根据样品要求稀释。

4、过滤：先把集菌器硅胶管有挡头的一头放在集菌仪泵头外面，然后把硅胶管压在泵头上。

（注意这里容易把硅胶管压破），针头和瓶口每次使用前都要用电子打火消毒枪灼烧消毒。

过滤供试液和冲洗液时按上集菌器上面的帽。

供试液和冲洗液过滤完后，拿下上面的帽，按上下面的堵头，用止血钳夹住两个集菌器的硅胶管，向一个菌菌器中泵入100ml胰酪大豆胨液体培养基。

打开止血钳，夹住已注入培养基的集菌器硅胶管，向两个集菌器中各泵入100ml硫乙醇酸盐流体培养基。

放下装培养基的瓶子，打开集菌仪的泵头，距集菌器上口近端加上夹子，从硅胶管分开处夹断，然后把断口按在集菌器上面有过滤膜的口上。

5、接种:其中一个硫乙醇酸盐培养基接入小于100cfu的阳性菌1ml，做为阳性对照。

33摄氏度培养72小时。

6、培养：硫乙醇酸盐流体培养基，33℃培养14天。

胰酪大豆胨液体培养基，23℃培养14天。

注：此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，样品加入量要根据产品特性和批量来决定。

培养基加入量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。

无菌检测薄膜过滤法

精选文档
1.
无菌检测（薄膜过滤法）
1、用到的设施和仪器：
集菌仪，一次性集菌器，酒精灯，电子打火消毒喷枪，不锈钢镊子、无菌均
质袋(无菌锥形瓶）、不锈钢剪刀、电子天平、玻璃注射液瓶
2、环境要求：查验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、供试液制备:依据样品要求稀释。

4、过滤：先把集菌器硅胶管有挡头的一头放在集菌仪泵头外面，而后把硅胶管
压在泵头上。

（注意这里简单把硅胶管压破），针头和瓶口每次使用前都要用电子打火消毒枪灼烧消毒。

过滤供试液和冲刷液时按上集菌器上边的帽。

供试液和冲刷液过滤完后，拿下上边的帽，按上下边的堵头，用止血钳夹住两个集菌器的硅胶管，向一个菌菌器中泵入100ml胰酪大豆胨液体培育基。

翻开止血钳，夹住已注入培育基的集菌器硅胶管，向两个集菌器中各泵入100ml硫乙醇酸盐流体培育基。

放下装培育基的瓶子，翻开集菌仪的泵头，距集菌器上口近端加上夹子，从硅胶管分开处夹断，而后把断口按在集菌器上边有过滤膜的口上。

5、接种:此中一个硫乙醇酸盐培育基接入小于 100cfu的阳性菌1ml，做为阳性对照。

33摄氏度培育72小时。

6、培育：硫乙醇酸盐流体培育基，33℃培育14天。

胰酪大豆胨液体培育基，23℃培育14天。

注：此操作没有详细到品种，假如要详细到品种，样品加入量要依据产品特征和批量来决定。

培育基加入量要在切合药典和法例要求的同时经过方法考证来获得。

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