石油降解菌的分离与鉴定

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原油降解菌YSL28的分离鉴定及降解特性研究

第４４卷第５期
２０１３年５月
东
北
农
业
大
学
学
பைடு நூலகம்报
４４（５）：４７－５０
Ｍａｖ．２０１３
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
原油降解茵ＹＳＬ２８的分离鉴定及降解特性研究
刘明，孙
（１．黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆
鹏，张祥胜
２２４００２）
１６３３１９；２．盐城师范学院生命科学与技术学院，江苏盐城
摘
要：取材受原油污染的土壤中分离得到一株石油降解茵ＹＳＬ２８，对原油的降解率为４６．９％。通过形态、生
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｉＩｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎ，ＹＳＬ２８，ｗａｓｊｓｏｌａｔｅｄｆｒｌ０ｍｔｈｅｃｒｕｄｅｏｉｌ．ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄｓｏｉＩ
３０℃、原油初始浓度５・Ｌ～、转速１８０ｒ・ａｒｉｎ～。
关键词：原油降解茵；分离；鉴定；ＲｈｏｄｏｃｏｃｃＵＳｓｐ．；１６ＳｒＤＮＡ
中图分类号：Ｘ１７２文献标志码：Ａ文章编号：１００５ — ９３６９（２０１３）０５ — ００４７ — ０４

2株石油污染降解菌的分离与鉴定

石油是由各种烃类组成的复杂混合物，含有少
Ｆｉｅｌｄ．Ｔｈｅｉｒｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ，ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１６ＳｒＤＮＡａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｅｄ．Ｔｈｅ
ＳＨＩＸｉａｏ — ｆｅｎｇ，ＨＵＡＮＧＬｅｉ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３８４，Ｃｈｉｎａ）
构、１６ＳｒＤＮＡ序列分析及生理生化特征进行了初步的菌种分类鉴定．结果表明菌株ＤＱ一１属于假单胞菌属、Ｔ６１９０属
于迪茨氏菌属．菌株Ｔ６１９０可以降解脂肪族烃类，３ｄ降解率达到４０．７％；而ＤＱ — ｌ可以降解芳香族烃类，３ｄ降解率
达到８３．０７％．
关键词：石油；石油降解菌；分类鉴定；生物修复
中图分类号：Ｘ５３文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－０９５Ｘ．２０１４．０１．０１３

石油烃降解菌Rhodococcus sp.15—3的分离鉴定及特性研究

ＺＨＡＮＧＬＺＨＡＯＳｕ — ｉ，Ｉｅｇｌｇ，ＨＡＮＧＪａＳＮｉｏｕ，ｈｏｗｅＬｎ — ｉＺＦｎｉｎ，ＨＥＢａ
（．ｐｎＫｙＬｂｒｔｙｏｃｏｉｏｉｌｎｉｅｒｇｆｇｉｌｒｎｉｎｅｔＭｉｉｒｇｉｕｕｅＮｎｉｇｇｉｕｕａＵｉｒｔ１ｅｅａｏａｒＭｉｂｏｇａＥｇｅｉｒｕｔａＥｖｏｍｎ，ｎｓｙｆｒｌｒ，ａｊＴｌｒｌｎｖｓｙＯｏｆｒｌｃｎｎｏＡｃｕｌｒｔｏＡｃｔｎＡｃｔｅｉ，
关键词：红球菌；分离鉴定；石油生物降解
中图分类号：７文献标识码：Ｘ１２Ａ文章编号：６２２４（０８０ — ７７０１７ — ０３２０）５１３ — ５
ＴｈｅＩｏａｔｏａｓｌｉｎｎｄＣｈａｒｃｅｉａｉｓｏｋａｓＤｅｒｄｉｃｅｉａｔｒｚｔｏｎｆａＡｌｎｅ－ｇａｎｇＢａｔｒｕｍＲｈｏｃｃｕｓｓ１－３．ｄｏｏｃｐ５
最适温度、Ｈ值和盐浓度（ａ１分别为３ｐＮＣ）０℃、．、％，７０２在低温（０℃）高盐（５ＮＣ）１及４％ａ１环境下也有良好的降解能力。１— ％～５３菌株
可以降解原油中ＣＣ的正构烷烃、芳香烃及姥鲛烷。在含５ｇＬ・原油的培养基中，０℃培养５３，ｄ后菌株１ — ５３对原油的降解率
ａｕｅｐａｄＮＣｏｃｎｒｔｎｆｒｄｇａｉｇｎｏｔｄｃｎｙｓｒｉ５３ｗｒ０，Ｈ７０ａｄ２Ｎａ１ｅｐｃｉｅｙＩｓｌｈｄｈｇ — ｔｒ，Ｈｎａ１ｎｅｔｉｅｒｄｎ — ｃａｅａｅｂｔａｎ１－ｅｅ３ｐ．ｎ％ｃａｏｏＣｓｅｔｌ．ｔｔｌａｉｈａｒｖｉ

石油降解菌的研究进展

在石油的开采、运输、储存、加工和应用过程中常伴随有石油的泄漏而造成环境污染。泄漏的石油若进
入土壤中难于去除，留时问长 … ，残破坏土壤结构，从而影响土壤的疏松程度和通气状况，降低了土壤生产
葡萄球菌属（ｔｈｌｏｃ）微球菌属（ｃｃｃｓ、Ｓａｙｃｃｕ、ｐｏｓＭｉｏｏｃ）ｒｕ
展。．
目前，一般认为微生物细胞摄取石油烃存在三种
模式： ①微生物细胞摄取溶解在水相中的烃类； ②微生
物细胞与比其大得多的烃类颗粒直接接触摄取； ③微生物细胞与比其小得多的假溶、拟溶或被包裹的烃类颗粒作用并将其摄取。烃类在水中以水包油乳浊液的形式存在时，的体积小且分散，以增大了接触面油所积，同体积下油的表面积增大，即相促进生物降解Ｅ。６Ｊ微生物可降解的石油组分，易程度为：其难短链正构烷烃＞长链正构烷烃＞异构烷烃＞环状烷烃＞低分子量芳烃＞高分子量芳烃＞杂环烃。同种类型烃类中分子量越大降解越慢。不同烃类化合物，生物代谢微途径和降解机理不同。微生物降解烷烃的关键步骤是
乳杆菌属（ａｔｂｃｌ）Ｌｃａｉｕ和诺卡氏菌属（ｏｒｉ）ｏｌｓＮｃｄ等。ａａ
其中，最常见的是假单胞菌类的细菌，细菌对短链这类及长链烷烃、烃均能降解，且能使烷烃彻底降芳而解ｊ。能够降解石油烃的酵母菌种类涉及假丝酵母

石油降解菌的筛选及降解性能研究

第２卷第５期１
２００８年１０月
污
染
防
治
技
术
Ｖｏ．Ｉ２１．．Ｎｏ５
０ｃ．２００８ｔ．
ＰＯＬＬＵＴ１０ＮＣＯＮＴＲ０ＬＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
石油降解茵的筛选及降解性能研究
李海花，单爱琴，周海霞
ｏｌｄｇａａｉｎｒｔ．Ｔｗｉ８ａｎｈｂｉｒｆｅｔｎｏｌｄｇａａｉｎ．ｉｅｒｄｔｏａｅｎ０ｈｄｉｉｔｙｅｆｃｓｏｉｅｒｄｔｏｏＫｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｏｅｍ；ｉｄｇａｔｎ；ｄｇａｉｇｂｃｅｉｐｅｒｌｕｂｏｅｒｄａｉｏｅｒｄｎａｔｒａ；ｄｇａａｉｎｒｔｅｒｄｔｏａｅ
处理石油污染作了初探。
５ｇ琼脂２，，０ｇ蒸馏水１０Ｌ，Ｈ为绘学院，江苏徐州２１０）２０８
摘要：石油污染的土壤中分离驯化，到特征明显的石油降解菌，究了不同时间、油浓度、种量、Ｈ值、质从得研石接ｐ基
及添加物等条件对降解菌降解石油的影响。结果表明：在实验条件下，降解菌接种量越多，降解效果越好；石油降解效率随
ｐＨｖｌｅ，ｇｒｉｕｅａｄＳｎ．Ｔｈｅｒｓｌｓｓｏｄｈａｄｒｔｅｅｔｃｎｔｏｓ，ｔｅａｕａｎｔｒｎＯｏｅｕｔｈｗｅｔｔｕｎｅｈｔｓｏｄｉｉｎｈｍｏｅｄｓｓｗｅｅｄｅｒｏｅｒａｄｄ，ｔｅｈｍｏｅｅｆｃｅｔｒｆｉｉｎ

石油降解菌株的筛选鉴定及其石油降解特性的初步研究

（2）pH值对菌株降解效率的影响：在pH值为7.0时，菌株X的降解效率最高，达到60%以上。当pH值偏离7.0时，其降解效率明显下降。
（3）盐度对菌株降解效率的影响：在低盐度条件下，菌株X的降解效率较高。随着盐度的增加，其降解效率逐渐降低。当盐度超过5%时，其降解效率显著下降。
（4）产物分析：利用GC-MS等技术，我们对菌株X降解石油烃的产物进行了分析。结果显示，菌株X能够将石油烃主要降解为脂肪酸、酚类化合物等中间产物。这些中间产物在进一步降解过程中转化为二氧化碳和水，从而实现石油烃的生物修复。
2、筛选流程：首先，采集油污土壤和石油废水样品，进行富集培养；其次，通过初筛和复筛，获得具有较强石油降解能力的菌株；最后，通过形态学和分子生物学鉴定，确定菌株种类。
3、鉴定步骤：将筛选得到的菌株进行16S rDNA分子鉴定，利用细菌分类学软件进行比对分析，最终确定菌株的种属。
4、石油降解特性分析：采用液体培养法测定菌株的石油降解能力，通过测定不同时间点石油烃类物质的含量，计算菌株的降解速率和降解效率。
1、菌株筛选
从石油烃污染地区采集土壤样品，采用富集培养法，经过多步筛选，获得具同温度、pH值、盐度等条件下，对菌株降解石油烃的能力进行测定。通过改变环境因素，观察其对菌株降解效率的影响。同时，利用气相色谱-质谱联用（GC-MS）等技术，对菌株降解的产物进行分析。
参考内容
一、引言
石油烃是石油和天然气的主要成分，它们在自然环境中的存在和降解对全球碳循环和环境生态有着重要影响。厌氧降解菌在石油烃的降解过程中扮演着关键角色。本次演示旨在筛选出具有高效石油烃厌氧降解能力的菌株，并对其降解特性进行研究，以期为石油烃污染的生物修复提供理论依据。
二、材料与方法

石油降解菌的分离鉴定及降解能力初步研究

1温度对石油降解茵降解率的影响取100ml无机盐培养液于三角瓶中加入原油80此接种3ml菌悬液以空白样作参照分别放入2530354045150rrain摇床培养24h后取出测其降解率如图l50堡40墼30篷20巷10o图1温度对石油降解菌降解率的影响由图1可见温度对降解率有一定的影响当温度为25时yj003和yj004的降解率分别为23和18随着温度升高降解率也相应提高当温度达到33时降解率最高分别为42和38温度超过37时降解率开始降低由此可见最适温度为33
有两株，定名为ＹＪ００３和ＹＪ００４；对ＹＪ００３和ＹＪ００４进行降解条件优化，其适宜生长条件为：温度３３ｏＣ，ｐＨ７．２，原油投加量为９ｏＬ。根据形态学观察、生理生化指标测定，ＹＪ００３为假单胞菌属，ＹＪ００４为邻单胞菌属。
研究生，常州大学环境与安全工程学院副教授，研究方向：工业废水的处理与回用。
２结果与分析
２．１菌种富集分离结果
’ 通信作者简介：刘杨丹（１９８５一），女，江苏连云港人，常州大学环境
与安全工程学院硕士研究生，研究方向：工业废水的处理与回用。
ｇ、ＭｇＳＯ４．Ｈ２０１ｇ、ＣａＣ１２０．２ｇ、ＮＨ４Ｃ１２ｇ、Ｍｎ—
三角瓶中加入１００ｍＬ降解培养液、０．２ｍＬ灭
菌原油及３ｍＬ新鲜菌悬液（菌数约为１０９ｃｅｌｌ／Ｌ），
２０１２年１１月１２日收到
将菌株接种到ＬＢ平板上，３２℃培养，观察菌落

石油降解菌

从海水样品中分离筛选石油降解菌的方案姓名：撒楠专业：生物工程班级：093学号：15海洋石油降解菌1、2、技术路线：⑴在被污染的海水中采集样品。

⑵筛选分离。

⑶培养纯化。

⑷进行菌株的相关检测。

3、4、样品采集：从石油污染水体中分离石油降解菌（原因：被石油污染的的水体含有的石油降解菌量比较数量多、种类也比较丰富、便于分离出比较纯的菌落。

）5、6、培养基成分：①人工海水培养基( MMC) [ 6] ：NaCl 24 g, KCl 0.7g，MgSO4 •7 H2O 0.7 g，NH4NO3 1 g，KH2PO4 2 g，Na2HPO4•12H2O 3 g，蒸馏水1 L，pH 7.4，121 ℃湿热灭菌20 min。

然后补加经0.22μm 滤膜过滤除菌的微量元素混合液2% ( 体积分数) ，并补加经0.45 μm滤膜过滤除菌的石油，使石油占总培养液体积的1.0%[即ψ( 石油) 为1.0%]，并以此作为唯一碳源.配制固体培养基加20 g 琼脂。

②海水培养基:NH4NO3 1 g，K2HPO4 •3H2O 1 g，陈海水1 L，ψ( 石油)1.0%，自然pH。

③基础无机盐培养基: NaCl 5 g，MgSO4 0.1 g，NaNO3 2 g，(NH4 ) 2SO4 1 g，KH2PO4 4 g，K2HPO4 •3H2O10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0~ 7.2。

④微量元素液:MgSO4 •7H2O 4 g，CuSO4•5H2O 1 g，MnSO4 •H2O 1 g，FeSO4 •7H2O 1 g，CaCl2 1 g，蒸馏水1 L。

7、8、培养条件：以人工海水培养基( MMC) 为基础, 改变N 源[NH4NO3, ( NH4 ) 2SO4 , CO( NH2 ) 2和KNO3 ]，氮磷比[固定ρ( P) 为110 mg∕L, 改变ρ( N) ，使其分别为110、220、350、440 和660 mg∕L]，摇床转速( 90、120、150、180、200 和220 r∕min ) 及培养基中石油浓度[ψ( 石油) 分别为0.5%、1.0% 、1.5%、2.0% 和3.0%]，控制温度28 ℃，在恒温摇床上进行振荡培养，连续培养一定时间。

石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性

石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性石油污染是环境污染中的一种常见问题，对自然环境和人类健康造成严重影响。

因此，寻找高效的石油降解菌是解决这一问题的重要途径。

本文从石油污染土壤中分离鉴定了一株降解菌，并探究了其降解特性。

（1）样品的采集及处理从受污染的土壤中取样，再分离出单个菌株。

将样品加入到NaCl0.9%的生理盐水中，摇动15分钟后，离心上清，然后采用1%的蒸馏水进行0.5小时热灭菌。

（2）分离鉴定将上述处理后的样品，分别接种于处理好的LB及玉米精蛋白培养基中，置于30℃恒温振荡培养箱中培养48h。

在此基础上，通过对菌落形态、菌株生长速度、菌落气味、荧光反应、产酶等特征，对细菌进行鉴定。

最终，筛选出一株石油降解菌。

（3）降解特性分析选取某种石油类物质，将其加入到LB培养基中，最终浓度设置在30mg/L左右。

将选出的石油降解菌接种进去，接种数量为OD600=0.1。

进液管任意长度分别设置于接种前及接种后，能够记录pH值及菌量。

取样分析的样品保持30℃培养48小时，过程中定时测量液体的pH值。

分析降解特性时，发现石油降解菌能够将石油类物质中的碳链分解，并分解成细胞利用的有机物质。

在石油降解过程中，菌落数逐渐增加；液态培养基中pH值不断降低，并最终将其稳定在中性状态。

另外，菌落色素通过两次衍生化反应生成焦磷酸一茎丙酮醇酯，之后通过JB-4消失化学反应结晶，能够得到石油降解特性的分析结果。

综上所述，石油降解菌是一种能够有效降解石油类物质的微生物。

因此，在现实中，可以对这类石油降解菌进行大规模培养及应用，以降低环境中的石油污染。

产表面活性剂石油降解菌株的筛选及鉴定

Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｇｅｎｕｓ，ｂａｃｔｅｒｉａ７－２ａｓＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓｂｙｍｏｒｐｈｏ１ｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｌｏｇｉｄｅｎｔｉ — ｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．Ｂａｃｔｅｒｉａ１－２，ｂａｃｔｅｒｉａ５－２ａｎｄｂａｃｔｅｒｉａ７－２ｅｎ —
１０００１０）
摘要：从长期受油污的土壤中分离得到了７株降解石油类菌株，其编号分别为菌２ — １、菌７ — １、
茵１ — ２、茵５ — ２、菌７ — ２、菌油３及茵油５．经形态观察、Ｂｉｏｌｏｇ鉴定和１６ＳｒＤＮＡ基因序列分析，
ｗｅｒｅｎｕｍｂｅｒｅｄａｓｂａｃｔｅｒｉａ２－１，ｂａｃｔｅｒｉａ７－１，ｂａｃｔｅｒｉａ１－２，ｂａｃｔｅｒｉａ５ — ２，ｂａｃｔｅｒｉａ７－２，ｂａｃｔｅｒｉａｏｉｌ３，ｂａｃｔｅｒｉａｏｉｌ５，ｏｆｗｈｉｃｈｂａｃｔｅｒｉａ２ — １ａｎｄｂａｃｔｅｒｉａ７－１ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＳｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓ —

石油降解菌筛选及应用研究

缘乞科枚Journal of Green Science and Technology2021年3月第23卷第6期石油降解菌筛选及应用研究鄢雨朦(辽宁大学环境学院，辽宁沈阳110031)摘要：从石油污染土壤中分离到一株新的石油降解菌，对该石油降解菌进行了鉴定，经16SrDNA测序鉴定并结合生理生化实验结果确定其为阴沟肠杆菌。

该菌可以将石油作为唯一碳源进行生长代谢，实验结果表明：在菌株投加量为1%时降解效果最佳，降解率可达到26.41%。

关键词：石油污染；土壤污染；石油降解菌中图分类号：X53文献标识码：A文章编号：1674-9944(2021)06-0108-021引言在石油生产运输和使用过程中，由于操作不当或意外事故导致石油泄漏，会对环境造成严重污染。

近年来受石油污染的土地面积不断扩大，污染程度也日益严重。

由于石油的主要成分有烷桂、苯、甲苯、二甲苯等多种复杂芳香桂，这些物质毒性大,有的有致癌致突变作用，进入土壤后难以去除，而且会随着径流进入周围的流域、地下水、油田及周围的生态环境中，带来了严重的环境问题有害的石油污染物经食物链富集在人体内，还会对人体造成严重的损伤⑵0石油造成的土壤污染通常采用物理和化学方法去除,前者通过焚烧而破坏大部分有机污染物,这种方法费用高,不利于处理;后者采用化学浸提，效果较好，但因易造成二次污染而受到限制间。

为治理石油污染的土壤，石油降解菌的发现，为石油污染的治理提供了新思路新方法。

石油污染的生物修复技术由于生产费用低、不产生二次污染而被视为一项具有广阔前景的高新技术。

2实验材料(1)石油无机盐培养基：K2HPO46g,KH2PO46g, (NH4)2SO46g.NaCl5g,石油1g,P H值为7. 0,蒸傳水1000mL o固体培养基在此基础上加入琼脂15〜20 g即可。

(2)牛肉膏蛋白腺培养基：牛肉膏3g,蛋白豚10 g,NaCl5g,蒸億水1000mL,pH值为7.0〜7.2,121°C灭菌20min。

高效石油降解菌的筛选、鉴定及其配比优化的研究

42工业安全与环保2013年第39卷第2期I ndust r i al Saf et y a nd Envi r onm e nt alPr o t ect i onFebr uary 2013高效石油降解菌的筛选、鉴定及其配比优化的研究*王旭辉晁群芳徐鑫李磊(新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046)摘要从克拉玛依地区石油污染土壤中分离筛选出4株高效石油降解菌S 1、S 2、S5和s 8，经形态观察、生理生化反应和分子鉴定，确定4株菌分别为蜡样芽孢杆菌(Baci l l us cel ℃us )、恶臭假单胞菌(Ps eudom onaspLni ．da)、枯草芽孢杆菌(B aci ll us s ubf i l is )和地衣芽孢杆菌(B aci l lus l i eheni f oi m i s)。

为了提高对石油的降解效率，对4株菌的添加比例进行了响应面的优化。

结果表明，当石油含量为1．5g 时，菌种s1、S2、s5和s8接种量分别为0．21g,O ．22g ．0．41g 和0．22g 时的石油降解率达到最大值。

在该条件下石油降解率预测值为60．17％，验证值为60．10％。

关键词降解率筛选菌种鉴定响应面法石油污染St udyont he I s ol at i on and I den t i f i cat i on of Pet rol eum —-D egradi ngSt r ai nsandIt s R at i o O pt i m i za t i onW A N G Xuh ui C H A O Q anf 锄培X U X i nLIL e i(Col l egeof 啦Sci enceandTechnology ，Xinjio 曙Unim=豇y 蛳830046)A bs W actFou rst r ai ns (S1，S2，S5，S8)，w i t hgood abi li t y ofde g 丑di ng oil ，aIe i sol at ed f rom oi l —c ont ami nat i on s oil ofK ar a-m a yar eas ．Base do nm or phol ogi c obs er vat i on ，physi o l ogi c al a nd bi oc he mi ca l cha r act e r i st i cs ，m o l ecul ar i dent i f i cat i on ，t hey a_r ei dent i f i edasB aci l l us ce r eus ，B a ci l l u s l i ch eni f onni s ，B aci l l us s ub t i li s a ndPs eudom onas 叫dar espe ct i vel y ．I n or de r t o i m -pr ovet he ef l ％i ency of t he de gr ada t i o n ．t h e r ati o of f our s t l ai as i s opt i m i ze d by us i ng r e s pons e suI f i c e m et hodol ogy ．T he r esul ts how s t hat t he opt i m um con di t i o ns al easfol l ow s ：w hen t he oi lco nt enti s 1．5g a nd t he i nocul a t i on quant i t y of t he f o ur st r ai m(S1，眈，s5，S8)i s0．21g ，0．22g ，0．41g ，0．22g ，r espect i vel y ，t he r at e of oi l de gr a da t i onPA t hr e ac h t hem s ．x 抽um ．U ndert he se cond i t i ons ，t he pr e di ct i ve va l ue of oil de gr ada t i on i s 60．17％，m e a nw hi l e t he ver i f i cat i on va l ue is 60．10％．K eyW or dsde ge ner at i on r at ei sol at i onst rai m i dent i fi cat i onre s pons e sur f ac e met hod ol og y oi l —c ont am i nat i on0引言随着工业的发展，石油及其制品通过开采与运输过程的泄漏、污染水灌溉及大气飘尘的沉降等途径进入了环境，对土壤和水体造成严重的污染。

大庆油污土壤中石油降解菌的筛选和鉴定研究

大庆油污土壤中石油降解菌的筛选和鉴定研究大庆油田是我国最大的陆上油田，其丰富的石油资源为我国的石油工业发展作出了重要贡献。

与石油生产相关的油污问题也给环境和生态造成了一定的影响。

油污土壤中的石油降解菌是生物修复技术的重要组成部分，对于油田环境的恢复和保护具有重要意义。

本文旨在对大庆油污土壤中的石油降解菌进行筛选和鉴定研究，以期为该地区的生物修复技术提供理论和技术支持。

一、研究背景和意义大庆油田自1959年投入生产以来，已经产出了数十亿吨的原油，但同时也造成了大量的油污土壤。

传统的土壤修复方法通常是采用化学物质进行处理，但这种方法对环境的影响和破坏性较大。

相比之下，生物修复技术由于其绿色环保、成本低廉的特点，受到了越来越多的重视。

在生物修复技术中，石油降解菌是至关重要的。

石油降解菌能够利用石油中的碳源和能源进行代谢，分解有机化合物，将其转化为无害的物质，从而加速土壤中石油的降解和分解过程。

对于油污土壤中存在的石油降解菌进行筛选和鉴定，有助于选择出高效的菌株，并进一步应用于生物修复工作中。

研究大庆油污土壤中石油降解菌的筛选和鉴定，也可以为该地区的环境保护工作提供理论和技术支持。

通过对菌株的鉴定和特性分析，可以掌握地方石油降解菌的多样性和功能特点，为该地区的生物修复应用提供有力的支持。

二、研究方法和步骤1. 样品采集本研究选取大庆油田附近的油污土壤为研究对象，通过系统的样品采集和分析，确定石油降解菌的种类和数量分布情况。

2. 培养和筛选将采集的土壤样品进行菌落计数和分离培养，筛选出优良的石油降解菌菌株。

通过对菌株的形态特征、培养条件和生理生化指标等进行初步鉴定，选取具有较高石油降解活性的菌株进行后续的研究。

3. 生物学特性分析对筛选出的石油降解菌菌株进行进一步的生物学特性分析，包括对菌株的生长速率、代谢产物、抗性能力等进行测定和分析，以确定其在生物修复工作中的应用潜力。

4. 分子生物学鉴定通过16S rRNA序列分析等分子生物学方法，对筛选出的石油降解菌菌株进行进一步的鉴定，确定其系统发育位置和亲缘关系。

石油高效降解菌的筛选及其降解特性

００，２Ｄ．１ｇＮａＥＴＡ・Ｈ２．１ｇ２Ｏ００，蒸馏水１０００ｍＬ和石油，Ｈ值为７５ｐ．．
分离培养基：油培养基１００ｍＬ，油０６ｇ琼脂２．降０原．，０ｇ
１３菌悬液的制备．
将３℃下生长２７４ｈ的斜面菌种无菌操作接种到装有１０ｍＬ富集培养基的２０ｍＬ三角瓶中，０５在３ ℃ 、６／ｎ的恒温摇床中好氧振荡培养２，０１０ｒｍｉ４ｈ然后将种子液离心、用磷酸盐缓冲液反复洗涤，后最
维普资讯
第３８卷第６期２００６年１２月
西建科大学安筑技学报（然学）自科版
Ｊｘｉａｉ．ｏｃ．８ｃ．ＮａｕａＳｉｃｄｔｎ． ’ ｎＵｎｖｆＡｒｈＬＴｅｈ（ｔｒｌｃｎｅＥｉｏ）ｅｉ
干燥器内备用．１２培养基．
富集培养基（富集培养基一般使用牛肉膏蛋白胨培养基）－：肉膏５ｇ蛋白胨１，Ｃ１ｇ蒸６牛］，０ｇＮａ５，馏水１００ｍＬ，Ｈ７２．，配制固体培养基需另加入２脂．０ｐ． —７４若０ｇ琼降油培养基［ＮＨ４３２ｇＯ４１５ｇＫＨ２Ｏ，Ｓ：ＮＯ，ＫＨＰ．，Ｐ４３ｇＭｇＯ４・７Ｏ０１ｇＨ２．，无水ＣＣ２ａ１
存在试料袋中，以备试验使用．试验所用油样为长庆油田的原油，原油用石油醚（ｏ６￣将３－ｏＣ沸程）溶解，

石油降解菌株的筛选及鉴定

Ｎｏｓ．２ＦｕｈｕｎＰｅｒｌｕｆｎｅｙ．Ｔｈｅｍｏｒｏｌｇｙａｄｈｙｓｏｏｇｈｅｔｉｈｏｓｔｔｔｔａｉ５ｎｄＰＤ５ｌｎｇｔｏｅｍＲｅｉｒｐｈｏｎｐｉｌｙｏｆｔｒｅｓａｎｓｓｗｈａｈｅｓｒｎＰＤａ１３ｂｅｏｔｉｒｂｔｒｕｍ，ｈｌｔｅｓｒｉｏＭｃｏａｃｅｉｗｉｅｈｔａｎＰＤ５６ｂｅｏｌｎｇｓｏＡｒｈｒｂｅ．Ａｆｅｈｅｅｓｒｉｓｔｔｏａｔｒｔｒｔｓｔａｎｗａｃｔｖａｅｔ８Ｃｏｒ７ｈ，ｔｓｕｌｉｔｄａ２ｆ２ｈｅｂｏｄｇｒｄａｌａｉｆＰＤ５１，ＰＤ５３ａｉｅａｂｅｒｔｏｓｏｎｄＰＤ５ｆｔｏｌｕｍｙｄｏａｂｏｅｅ７６３，７．４７６ｏｒｐｅｒｅｈｒｃｒｎｗｒ６．６ａｄ．１，ｒｓｃｉｅｙｎ７６７ｅｐｅｔｖｌ．
ＦｕｓｈｕｎＬｉｎｉａｏｎｇ３１１００１，．Ｒ．Ｃｈｉａ）Ｐｎ
ห้องสมุดไป่ตู้
Ｒｅｅｖｄｐｔｍｂｒ２０６；ｒｖｓｄｏｍｂｒ２０６；ａｃｅｅ２５Ｎｏｅｅ００ｃｉｅ５Ｓｅｅｅ０ｅｉｅ２３Ｎｖｅｅ０ｃｐｔｄｖｍｂｒ２６
Ｓｐｒｔｏｎｄｎｉｙ０ｌＤｅｒｄｔｏｃｅｉｅａａｉｎａｄＩｅｔｆｆＯｉｇａａｉｎＢａｔｒａ
ＧＵｕ — ｚｏｕ，ＷＡＮＧＧｉｈＺｈａｎ— ｙｏｎｇ，ＹＵｏｎＹｇ，ＳＵＮＤａ— ｑｉ（ｃｏｌｆＥｎｉｏｍｅｔｌｎｏｏｃｌＥｎｉｅｒｎＬｉｏｉｇＵｎｖｒｉｆｔｏｅｍＬＣｅｃｌＴｅｈｏｏｙ，ＳｈｏｖｒｎｎａｄＢｉｌｇｉａｇｎｅｉｇ，ａｎｎｉｅｓｔｏＰｅｒｌｕ８ｈｍｉａｃｎｌｇｏａｙ

高效石油降解细菌的筛选鉴定和菌群构建的开题报告

高效石油降解细菌的筛选鉴定和菌群构建的开题报告
1. 研究背景和意义
石油是全球最重要的能源之一，其产生的污染也成为全球关注的环境问题之一。

由于石油分子结构复杂，难以被自然降解，导致石油泄漏或排放造成的环境污染难以
治理。

因此，通过利用高效石油降解细菌来处理石油污染已成为一种重要的治理方式。

本研究致力于筛选鉴定优良的高效石油降解细菌，并构建一个高效的石油降解菌群，
提高石油污染环境治理的效率。

2. 研究内容和方案
本研究计划采取以下方案开展实验研究：
（1）筛选土壤中的高效石油降解细菌：收集石油污染的土样，通过营养富集法
和菌落计数法筛选优良的石油降解菌，并鉴定其分类学特征。

（2）优化石油降解条件：根据石油降解细菌的特性，探究其最适宜的生长条件，包括温度、pH值、营养物质等，同时选择较难降解的石油组分进行优化处理。

（3）构建石油降解细菌菌群：根据石油降解能力和生态适应性，挑选适合组成
菌群的石油降解细菌，搭配不同生态位的细菌共同组成菌群，提高石油降解效率和生
态稳定性。

（4）菌群构建的评价和验证：通过实验室模拟和现场应用等方法，验证构建的
菌群石油降解能力和生态适应性。

3. 研究意义和创新点
本研究的意义在于筛选鉴定高效石油降解细菌，并构建出具有高效降解能力和较好生态稳定性的石油降解菌群，为石油污染环境治理提供一种可行的方式。

同时，本
研究将针对不同生态位的石油降解细菌进行合理组合，提高石油降解处理的效率和生
态稳定性，具有一定的创新点。

土壤中高效石油降解菌的筛选及其降解特征的研究

２１００年第２期
《福建师范大学福清分校学报》
ＪＵＮＬＯＵＩＧＢＡＣＦＦＪＯＭＡＮＶＲＩＹＯＲＡＦＦＱＮＲＮＨＯＵＩＮＲＬＵＩＥＳＴＡＮＳｍ．８ｕＮｏ９
总第９８期
土壤中高效石油降解菌的筛选及其降解特征的研究
下石油降解率较高。环境ｐＨ为７时，Ｆ２Ｋ一Ｋ一、Ｆ４的石油降解率都最高。混合茵的试验表明，Ｆ２Ｋ－Ｋ一、Ｆ４混
合茵的降解效果明显好于各单菌株接种降解效果。
关键词：油降解；石菌株筛选；降解特征；混合茵
中图分类号：９ — Ｑ３３
石油降解能力的测定结果表明，中Ｋ～、Ｆ４两株茵均为微球菌属Ｍｉｏｏｏｃｓｓ．石油降解能力较其Ｆ２Ｋ一ｃｒｃｃｕ）ｒｐ，
强，其单茵落接种２０天后石油降解率分别可以达到７．１７．２６％、４８％。在对这两株菌的降解特征的进一步探２究中发现：Ｆ２菌株在Ｎ￣，为氮源的条件下石油降解率较高；Ｋ — Ｋ一ＨＮＯ作而Ｆ４在Ｈ４２ｏ作为氮源的条件）４ｓ
文献标志码：Ａ
文章编号：０８３２（０００－０１ｏ１０ — ４１２１）２０１．６
石油作为当今世界的重要能源之一，被称为“ 工业血液”可见其重要性。但随着石油工业的发，展，在石油的勘探、开采、运输以及储存过程中造成的泄露从而对环境造成的污染日益严重，中其对土壤的污染尤为突出，受石油污染的土地面积不断扩大。目前的土壤恢复技术主要分为物理方法、化学方法和生物方法【１］。上世纪８年代前，Ｏ有机污染物污染土壤的治理实质上仅限于一些物理

高盐度采油废水石油降解菌株的筛选及鉴定

Ｇｕｉｌｉｎ５４１００６，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＬｉＹａｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｏｍｐａｎｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０１１２１，Ｃｈｉｎａ）
第２Ｏ卷第５期
２０１３年
安全工程与环境
ＳａｆｅｔｙａｎｄＥｎＶ１ｒｏｎｍ
ｅｎｔａ１Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖ０１．２０ＮＯ．５
Ｓｅｐ．２０１３

９月
高盐度采油废水石油降解菌株的筛选及鉴定
李艳红，史利荣，李英利，解庆林，李炎华
（１．桂林￣２ｃｒ＿大学环境科学与工程学院，广西桂林５４１００６；２．重庆立洋环保科技发展有限公司，重庆４０１１２１）
摘要：从采油废水生物处理装置活性污泥中筛选得到两株高盐度采油废水石油降解菌（ＪＺ。和ＪＺ），对其生长特性和除油能力进行了试验研究，并对其进行了分子生物学鉴定。结果表明：Ｊｚ的最佳生长条件为温度４０￣Ｃ、ｐＨ值７．０、转速１１０ｒ／ａｉｒｎ、接种量３，ＪＺ的最佳生长条件为温度４０￣Ｃ、ｐＨ值６．０、转速１３０ｒ／ａｉｒｎ、接种量３；在最佳生长条件下，将菌株Ｊｚ。和ＪＺ接种到实际含油废水中１０８ｈ后，对采油废水中石油类污染物的去除率分别达到

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状，经过分离、筛选、复筛，从大港油田的石油污染土壤中富集分离、选出２株石油降解菌，优并进一步研究了２株菌的生理生化特性．菌株鉴定结果表明，菌株Ｄ — Ｂｌ属于假单胞杆菌属，菌株ＤＦ一１于曲霉菌属．属关键词：石油；石油污染土壤；石油降解菌；分离鉴中图分类号：５Ｘ３文献标识码：Ａｄｉ１．９９ｊｉｎ１７－９Ｘ．０１０．２ｏ：０３６／．ｓ．６３０５２１．４０１ｓ
Ｋｅｒｓｅｒｌｕ；ｐｔｏｅｍ— ｏｌｔｄｓｉ；ｐｔｌｕｄｇａａｉｎｓｒｉｓｓｌｔｏｎｄｎｉｃｔｎｙｗｏｄ：ｐｔｏｅｍｅｒｌｕｐｌｅｏｌｅｒｅｍ— ｅｒｄｔｔｎ；ｉａｉｎａｄｉｅｔｉａｉｕｏｏａｏｆｏ
耐盐性实验培养基：白胨２ｇ蒸馏水１００蛋，０
各三支，一支作为空白对照，其他两支分别接人两株
供试菌，同对照试管均放于３连７℃ 恒温箱中培养２４
ｈ观察试管内培养液的混浊程度．，２生长曲线的绘制：）采用比浊法．
基，ｂ为加入菌株在摇床中培养４天后的培养基，（）（）Ｃ为加入菌株并在摇床中培养７天后的培养基．通
过观察不难发现，（）（）培养基逐渐浑浊，从ａ到Ｃ，并
液转入新鲜的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在上述
℃ 、６ｍｉ条件下培养１．１０ｒ・ｎ０ｄ培养液明显浑浊，
图１样品（）（）（）解前后对比情况ａ，ｂ，ｅ降Ｆｇ１Ｓｍｐｅｃｍｐｒｓｎ（）Ｉ）（）ｅｏｅａｄｉ．ａｌｏａｉｏａ，ｂ，ｃｂｆｒｎ
１材料与方法
本项研究的实验材料与方法参考了文献［］其７．
中改进之处如下．
１１实验材料．
富集，进而危害人类健康Ｊ因此，，土壤的石油污染也被比喻为 “ 化学定时炸弹” ．
石油污染土壤的修复一般采用物理方法、学化
主要试剂还包括ＫＨＯ，ＨＣ，ａＳ４ＣＣ２・２Ｐ４Ｎ４ｌＮ２Ｏ，ａ１
６０，ｅＯ，Ｈ２ＦＳ４石油．
２实验结果
２１筛选结果．本实验从大港油田石油污染盐碱土中分离得到
１２实验方法．
ｔｒｓｉｓｗｅｅｉｖｅｔｇｔｄＲｅｓｌｓｓｏｄｔｔｓｒｉｅｉｔｃｒｎｓｉａｅ．ｕｔｈｗｅｈａｔａｎＤＢ一１ｗａｅｄｏｎｓＰｓｕｍｏａｓ．ｎｔａｎＤＦ一１ａｄｓｒｉｗａｐｅｇｉｌｓｓＡｓｒｌｕ．
菌株筛选所使用的培养基包括牛肉膏蛋白胨液体培养基：肉膏５ｇ蛋白胨牛，
１，ａ１，０ｇＮＣｇ琼脂１，１００ｍｌ５８ｇ水０；
方法和生物方法，中生物修复具有污染较少，环其对境产生的副作用小，率高等特点．效因此也被誉为实现生态恢复的最有效措施Ｊ为了取得高效、底的．彻生物修复效果，离和筛选污染物的高效降解菌种分成为生物修复的必然要求Ｊ因此，实验从大港石．本油污染土壤中提取石油降解菌，对其进行分离和并鉴定，以备以后进行植物微生物修复石油污染盐碱
１２１菌株筛选方法．．
两株可以以石油为碳源的石油降解菌．据菌体形根
态及菌落特征初步判断这两株菌为真菌和细菌，分
１耐盐碱石油降解细菌筛选方法）（）１富集：５ｇ石油污染过的土壤样品加入将被
第２７卷第４期２１０１年８月
天
津
理
工
大
学
学
报
Ｖ０．７Ｎｏ４１２．Ａｕ２０１ｇ．１
ＪＯＵＲＮＡＬＩ０ＦＴＡＮＪＮＩＵＮＩＶＥＲＳＴＯＦＴＥＣＨＮｏＬｏＧＹＩＹ
文章编号：６３０５２１）４０８ —３１７ —９Ｘ（０１０－０６０
石油在人类生产和生活中扮演着重要的角色，
土的研究时使用，为后期实验提供可选择菌种．
然而由于开采技术及运输缺陷等原因，来越多的越
石油进入土壤，造成了比较严重的土壤污染．石油进入土壤后不仅容易造成土壤板结，响土壤肥力，影而且会影响植物的生长，至导致植物的死亡甚；另外，石油中的有害物质能通过食物链在动植物体内
１０ｍ０Ｌ牛肉膏蛋白胨培养基中，２【、６／ｎ在８ｃ１０ｒｍｉ二
别编号为Ｄ和ＤＦＢ～．得到的降解菌株降解前后
石油的变化如图１图中（），ａ为没有加入菌株的培养
条件下培养１— ２天．待培养液混浊后，５ｍ取Ｌ培养
牛肉膏蛋白胨固体培养基：肉膏５ｇ蛋白胨牛，
１，ａ１，１００ｍ；０ｇＮＣｇ水０ｌ５
石油降解菌分离筛选培养基（０１：１００ｍ）
Ｋ２ＰＯ４０．ＮＨ４０ｇ，２Ｈ５ｇ，Ｃ１１．ＮａＳＯ４２．０ｇ，ＫＮＯ３２．０
基中；
且瓶中剩余的石油量在逐渐减少．明提取出的菌证株是可以有效降解石油的．
（）筛：小片无菌滤纸放人上述已涂石油的５复将
平板上，菌点在小滤纸片上，３ｃ培养箱中倒挑置７ｃ
置培养２，４ｈ后观察小纸片周围，颜色变淡的为石油降解菌．２耐盐碱石油降解真菌筛选方法）将５ｇ石油污染土壤加入装有１０ｍ０Ｌ石油降解菌筛选培养基的２０ｍＬ锥形瓶中，入摇床，３５放在０
收稿日期：０１０ —６２１７２．基金项目：国家大学生创新性实验计划项目（００６２）１１００５．作者简介：张琛（９０１９一）女，，本科．通讯作者：尹静（９７１６一）女，教授， — ｉ：２９９４１ｑ．ｏｌ，副Ｅｍａ１０８８８＠ｑｃｎｌ
ｍ，ａ１不同浓度加，度分别取：％、％、％、ｌＮＣ按浓Ｏ３７
９、１，Ｈ＝７７％１％ｐ．．
ＬＢ液体培养基：白胨１ｇ酵母浸出汁０５ｇ蛋，．，ＮＣｇ水１０ｍ．Ｈ＝７５，２Ｃ灭菌２ｉ．ａ１１，０１ｐ．１１ｏ０ｒｎａ
石油降解茵的分离与鉴定
张琛，高志刚，张伟，秦晓，高晶，李德生，尹静
（天津理工大学环境科学与安全工程学院，天津３０８）０３４摘要：按照石油污染土壤微生物修复技术目前发展的方向，本论文针对天津大港油田地区石油污染盐碱土壤的现
（ｃｏｌｆｎｉｎｅｔｌｃｎｅａｄＳｆｔＥｇｅｒｇＴａｊｎｅｓｙｏｅｈｏｇ，ｉｊ０３４ＣｉａＳｈｏｏｖｒｍｎａＳｉｃｎａｙｎｉｅｉ，ｉｎｉＵｉｒｔｆｃｎｌｙＴａｉ３０８，ｈｎ）ＥｏｅｅｎｎｎｖｉＴｏｎｎ
ｇ，Ｃ１Ｃａ２・６Ｈ２０．ｇ；ＳＯ０１ＭｇＯ４・７Ｈ２１０ｇ，ＳＯ．ＦｅＯ４
０００１ｇ石油０１ｇ．０，．．
生理生化培养基中还包括
２１年８月０１
张
琛，：等石油降解菌的分离与鉴定
・８７・
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＡｃｏｄｎｏｃｒｅｔｏｄｔｎｏａｉｅａｋｌｓｉｐｌｔｄｂｅｒｌｕｏｌｎＤａａｇＯｉＦｅｄａｄｔｅｄｖｌｐｃｒｉｇｔｕｒｎｎｉｏｆｓｌ — ｌａｉｏｌｏｌｅｙｐｔｏｅｍｉｉｇｎｌｉｌｎｈｅｅｏ — ｃｉｎｕｍｅｔｒｎｆｍｉｒｂａｅｄａｉｎｏｉｐｌｔｄｓｉ，ａｔｒｉｌｔｇｓｒｅｉｇａｄｓｃｎａｙｓｒｅｉｇ，ａｓｒｉｓｏａｔ・ｎｅｄｏｃｏｉｌｍｅｉｔｆｏｌｏｌｅｏｌｆｅｏａｉ，ｃｅｎｎｎｅｏｄｒｃｅｎｎｔｒｏｕｓｎｔｎｆｃｅａｂｒｎｔｉｆｕｇｒｓｌｔｄｆｏｐｔｌｕ —ｃｎａｎｔｄｓｉｉａａｇＯｉＦｅｄａｄｔｅｒｐｙｉｌｇｃｌｃａａ－ｉａｄａｓａｎｏｎｉａｒｆｗｅｅｉａｅｒｍｅｒｅｍ－ｏｔｍｉａｅｏｌｎＤｇｎｌｉｌｎｈｉｈｓｏｏｉａｈｒｃｏｏ－