特定基因表达水平的检测
基因表达的检测技术
基因表达的检测技术
基因表达的检测技术是用来研究和识别一个细胞或组织中的基因在特定条件下是否被转录成RNA，并进一步翻译成蛋白质的过程。
以下是几种常见的基因表达检测技术。
1. RNA测序（RNA-Sequencing）：这是一种高通量的技术，用于确定细胞或组织中所有转录的RNA序列。
通过分析RNA测序数据，我们可以了解到哪些基因在特定条件下被表达，并可以比较不同条件下基因表达的变化。
2. 实时定量聚合酶链反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction，qPCR）：qPCR是一种常用的基因表达检测方法，它能够快速、准确地测量特定基因的转录水平。
这种技术利用特定引物和荧光探针，通过PCR扩增基因的RNA或DNA，并实时监测荧光信号的累积量来定量目标基因的表达水平。
3. 原位杂交（In situ hybridization）：原位杂交是一种用来检测特定RNA序列在组织或细胞中的位置的技术。
它使用标记有特定序列的探针与目标RNA序列结合，然后通过可见或荧光标记来显示目标RNA的位置。
这种技术可以帮助研究者确定特定基因在组织中的表达模式和水平。
4. Northern印迹（Northern blotting）：这是一种传统的技术，用于检测和定
量RNA的表达水平。
它使用电泳将RNA分离，然后将其转移到膜上，并使用特定的探针与目标RNA结合，最后通过探针的放射性或非放射性标记来检测目标RNA的存在与数量。
这些技术在研究基因表达调控、细胞分化、疾病发展等领域起着重要作用。
通过这些技术，我们可以更深入地了解基因的功能和调控机制。
细胞和分子免疫学实验技术
细胞和分子免疫学实验技术细胞和分子免疫学是研究免疫系统的重要领域，它涉及到细胞和分子水平上的免疫反应和免疫调节机制。
在这个领域中，实验技术是非常重要的工具，通过这些技术可以深入了解免疫系统的功能和调控。
本文将介绍一些常用的细胞和分子免疫学实验技术。
1. 细胞培养技术细胞培养是研究细胞生物学和免疫学的基础。
通过细胞培养技术，可以获得大量特定类型的细胞，用于研究其生物学特性和免疫功能。
常用的细胞培养技术包括细胞传代、细胞培养基的配制和细胞培养条件的优化等。
2. 免疫细胞分离技术免疫细胞分离技术是将不同类型的免疫细胞从混合细胞群中分离出来，以便进行单个细胞的研究。
常用的免疫细胞分离技术包括磁珠分离法、流式细胞术和细胞排序术等。
3. 免疫组化技术免疫组化技术是通过使用特异性抗体标记目标蛋白质，以观察其在细胞或组织中的分布和表达水平。
该技术可以用于检测免疫细胞表面标记物、细胞内信号通路蛋白质和炎症标记物等。
常用的免疫组化技术包括免疫荧光染色和免疫组织化学染色等。
4. 免疫印迹技术免疫印迹技术是通过使用特异性抗体检测目标蛋白质在细胞或组织中的表达水平。
该技术可以用于检测特定蛋白质的表达变化，从而研究其在免疫反应中的功能。
常用的免疫印迹技术包括Western blot和ELISA等。
5. 免疫荧光技术免疫荧光技术是利用特异性抗体与目标蛋白质结合，并使用荧光标记的二抗进行检测。
该技术可以用于检测细胞表面标记物、蛋白质相互作用和免疫细胞的分布等。
常用的免疫荧光技术包括免疫荧光染色和流式细胞术等。
6. 免疫PCR技术免疫PCR技术是将PCR技术与免疫学相结合，用于检测特定基因的表达水平。
该技术可以用于研究免疫相关基因的表达变化和免疫调节机制。
常用的免疫PCR技术包括RT-PCR、实时荧光定量PCR等。
7. 细胞因子检测技术细胞因子是免疫反应和炎症过程中的重要调节因子。
通过检测细胞因子的表达水平，可以了解免疫反应的活性和炎症程度。
鼠源细胞系相关基因表达水平
鼠源细胞系相关基因表达水平
1. RNA测序（RNA-Seq），RNA测序是一种常用的方法，可以检测细胞中所有转录的RNA分子。
通过对鼠源细胞系样本进行RNA测序，可以获得基因表达水平的全面信息。
这种方法可以提供基因的表达量、差异表达基因、可变剪接和新转录本等信息。
2. 基因芯片，基因芯片是一种高通量的技术，可以同时检测上千个基因的表达水平。
通过将鼠源细胞系样本提取的RNA杂交到基因芯片上，可以得到基因表达水平的信息。
这种方法可以用于筛选差异表达基因或进行基因表达谱的分析。
3. 实时定量PCR（qPCR），qPCR是一种常用的方法，可以精确测量特定基因的表达水平。
通过设计特异性引物，可以选择性地扩增鼠源细胞系中感兴趣的基因。
这种方法可以提供基因表达水平的定量信息，并且具有高灵敏度和高特异性。
4. 蛋白质组学，蛋白质组学是研究蛋白质组成和功能的方法。
通过质谱技术，可以分析鼠源细胞系中蛋白质的表达水平和修饰情况。
这种方法可以揭示基因表达水平与蛋白质水平之间的关系，进一步了解细胞的功能和代谢状态。
5. 免疫组化染色，免疫组化染色是一种常用的细胞和组织分析方法，可以检测特定蛋白在细胞中的表达水平。
通过使用特异性抗体，可以将目标蛋白可视化，并定量分析其表达水平。
这种方法可以用于研究鼠源细胞系中特定基因的表达情况。
综上所述，通过RNA测序、基因芯片、实时定量PCR、蛋白质组学和免疫组化染色等方法，可以全面了解鼠源细胞系中基因的表达水平。
这些方法的选择取决于研究的目的、预算和实验条件等因素。
检测基因表达的方法
检测基因表达的方法基因表达检测是一个生物学检测方法。
背景知识荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR 产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。
随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。
每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。
实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。
服务项目1．相对定量包括RNA提取、反转录和扩增，采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式，一般采用2- ΔΔ Ct 法进行计算。
每个样本重复三次，一般情况我公司提供内参基因引物。
2．绝对定量需要制备标准品并建立标准曲线，然后检测目的样本中的基因，比对标准曲线得到基因准确拷贝数。
送样要求细胞（≥106 ）、组织（≥300mg）、血液（≥1ml）、叶片（≥100mg）等样品材料，基因组DNA或总RNA（体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl）。
提供结果引物和探针及序列，反转录胶图，原始数据（包括扩增曲线和熔解曲线）、数据分析结果及实验报告。
检测基因表达的方法有哪些主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)一、外源基因转录水平的鉴定基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
所以基因表达检测分为两个水平。
即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。
转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA 为探针，检测RNA链。
和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。
检测基因表达变化的方法
检测基因表达变化的方法基因表达变化是指基因在特定条件下转录和翻译水平的变化。
检测基因表达变化的方法有很多种，以下是几种常用的方法：1. 转录组测序（RNA-seq）转录组测序是一种基于高通量测序技术的方法，可以检测基因在不同条件下的转录水平。
该方法首先从细胞中提取总RNA，然后通过建库、测序和分析得到每个基因的转录本序列。
通过比较不同条件下的转录本序列，可以发现基因表达的变化。
RNA-seq具有高灵敏度、高分辨率和高通量等优点，适用于研究基因表达的复杂性和动态性。
2. 定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）qRT-PCR是一种基于PCR技术的方法，可以检测特定基因的表达水平。
该方法首先从细胞中提取总RNA，然后通过反转录得到cDNA，再通过PCR扩增得到目的片段。
通过比较不同条件下的目的片段拷贝数，可以发现基因表达的变化。
qRT-PCR具有高灵敏度、高特异性和可重复性好等优点，适用于验证RNA-seq等高通量测序方法的结果。
3. 微阵列分析微阵列分析是一种基于芯片技术的方法，可以同时检测多个基因的表达水平。
该方法将已知序列的探针集成在芯片上，然后将待测的cDNA或RNA与探针进行杂交。
通过检测杂交信号的强度，可以发现基因表达的变化。
微阵列分析具有高通量、高效率和高灵敏度等优点，适用于大规模的基因表达谱研究。
4. 原位杂交原位杂交是一种将探针与组织切片上的目标基因进行杂交的方法，可以检测目标基因在组织中的表达位置和表达水平。
该方法将探针与组织切片上的目标基因进行杂交，然后通过荧光或免疫组化等方法显色标记杂交信号。
通过观察杂交信号的数量和分布，可以发现基因表达的变化。
原位杂交具有高特异性、高灵敏度和定位准确等优点，适用于研究基因表达的组织特异性。
5. 免疫组织化学免疫组织化学是一种利用抗体与目标蛋白进行特异性结合的方法，可以检测目标蛋白在组织中的表达位置和表达水平。
该方法将抗体与目标蛋白进行特异性结合，然后通过显色标记抗体结合的位置。
基因表达水平检测方法
基因表达水平检测方法基因表达水平检测方法是解决生物学中一系列实验问题的重要手段之一。
从基因转录到翻译，功能蛋白的表达需要多个步骤的参与，因此需要详细检测各个节点的表达水平才能全面理解生物系统的工作原理。
本文将介绍10种不同的基因表达水平检测方法，并详细讨论其优缺点及应用范围。
1. 实时荧光定量PCR（qPCR）实时荧光定量PCR（qPCR）是测量DNA片段数量的常用方法之一，可用于定量分析RNA 和DNA的含量及检测异质核糖体。
该方法利用荧光标记的探针结合特定反应体系，通过放大和检测PCR产物的荧光信号来定量目标序列的数量。
相较于传统定量PCR方法，qPCR具有高灵敏度、高特异性和高重现性等优点，可以为基因表达量的精确定量提供可靠的实验数据。
2. RNA测序（RNA-seq）RNA测序（RNA-seq）是一种全转录组测序技术，可以检测不同组织、细胞或条件下mRNA 的表达水平。
该技术通过将RNA逐个转录成cDNA，然后对cDNA进行二代测序，并通过比对与基因组或转录组的比对，确定基因在不同组织或条件下的表达情况，并可以鉴定新的基因或异构体。
RNA-seq可以检测出非编码RNA、剪接异构体等多种信息，成为研究基因抑制、基因启动等事件的有力工具。
3. 微阵列技术微阵列技术是一种古老的基因表达测量方法，可用于同步检测数千个基因。
该技术利用特殊制备的阵列，识别和定量检测小分子或生物大分子（如基因或蛋白质）相互作用的过程。
与RNA-seq相比，微阵列技术成本相对较低，但检测范围较小，并且需要预先设计探针和矩阵。
微阵列技术也可以检测mRNA的异构体、SNP等信息，对于高通量、大规模分析有一定的优势。
4. 蛋白质质谱分析蛋白质质谱分析技术（protein mass spectrometry）可用于评估蛋白质在组织、细胞或条件下的表达量和修饰情况。
该方法将蛋白质分离和检测结合到一起，先通过酶解纯化和分离蛋白质产物，然后利用质谱技术进行检测。
基因检测的方法
基因检测的方法
基因检测是一种通过检测个体基因组中的特定DNA序列来获取有关个体遗传信息的技术。
它可以帮助人们了解自己的遗传特征，预测遗传疾病的风险，指导个性化治疗等。
目前，基因检测方法主要包括PCR、基因芯片和测序技术。
首先，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的基因检测方法。
它通过不断重复DNA的变性、连接和扩增过程，从微量DNA样本中扩增出特定的基因片段，以便进一步进行检测和分析。
PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高效率的优点，广泛应用于基因诊断、疾病筛查和法医学等领域。
其次，基因芯片技术是一种高通量的基因检测方法。
它利用微阵列芯片上固定的数千至数百万个核酸探针，可以同时检测大量基因的表达水平、基因型和单核苷酸多态性等信息。
基因芯片技术在癌症早期诊断、药物疗效预测和个体化治疗方面有着重要的应用价值。
最后，测序技术是一种逐个确定DNA序列的方法，可以全面地分析个体基因组的信息。
随着高通量测序技术的发展，基因检测成本不断降低，检测速度和准确性也得到了显著提高。
测序技术在罕见遗传病的诊断、个体基因组的比较分析和新基因的发现等方面具有重要意义。
综上所述，基因检测是一种重要的遗传学技术，可以为个体健康管理和疾病预防提供重要信息。
随着技术的不断进步和成本的不断下降，基因检测将在医学、生物学和生命科学研究中发挥越来越重要的作用。
希望本文所介绍的基因检测方法对您有所帮助，谢谢阅读！。
基因表达的检测的几种方法
基因表达检测的最终技术目标是能确定所关注的任何组织、细胞的RNA的绝对表达量。
可以先从样本中抽提RNA，再标记RNA，然后将这些标记物作探针与芯片杂交，就可得出原始样本中不同RNA的量。
然而用于杂交的某个特定基因的RNA的量与在一个相应杂交反应中的信号强度之间的关系十分复杂，它取决于多种因素，包括标记方法、杂交条件、目的基因的特征和序列。
所以芯片的方法最好用于检验两个或多个样本中的某种RNA的相对表达量。
样本之间某个基因表达的差异性〔包括表达的时间、空间特性及受干扰时的改变〕是基因表达最重要的，而了解RNA 的绝对表达丰度只为进一步的应用或多或少地起一些作用。
基因表达的检测有几种方法。
经典的方法〔仍然重要〕是根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。
随着大分子别离技术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和别离成为可能。
随着重组DNA技术的运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。
目前有好几种方法广泛应用于于研究特定RNA分子。
这些方法包括原位杂交．NORTHERN凝胶分析．打点或印迹打点．S－1核酸酶分析和RNA酶保护研究。
这里描述RT-PCR从RNA水平上检查基因表达的应用。
8 f3 f- |2 L) K) b7 ]- ~- |RT-PCR检测基因表达的问题讨论关于RT-PCR技术方法的描述参见PCR技术应用进展，在此主要讨论它在应用中的问题。
理论上1μL细胞质总RNA对稀有mRNA扩增是足够了〔每个细胞有1个或几个拷贝〕。
1μL差不多相当于50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。
该方法所能检测的最低靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同；例如它能检测出单个RNA分子。
当已知量的转录RNA〔用T7RNA聚合酶体外合成〕经一系列稀释，实验结果说明通过PCR的方法可检测出10个分子或低于10个分子，这是反映其灵敏度的一个实例。
基因表达量的检测方法
基因表达量的检测方法
基因表达量是指在细胞中特定基因的转录和翻译产物的数量。
它是细胞功能和生物学过程的重要指标。
因此，准确测量基因表达量对于研究生物学和医学领域具有重要意义。
目前，有多种方法可用于测量基因表达量，包括实时荧光定量PCR、RNA测序、微阵列技术等。
实时荧光定量PCR是一种常用的测量基因表达量的方法。
它利用荧光探针或染料来检测PCR反应过程中的DNA合成。
在PCR反应中，荧光探针或染料与PCR产物结合，产生荧光信号。
荧光信号的强度与PCR产物的数量成正比，因此可以用来测量基因表达量。
实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高特异性和高准确性等优点，因此被广泛应用于基因表达量的测量。
RNA测序是一种高通量的测量基因表达量的方法。
它利用高通量测序技术对RNA样本进行测序，从而得到RNA序列信息。
通过比较不同样本的RNA序列信息，可以确定基因的表达量。
RNA测序具有高灵敏度、高分辨率和高可靠性等优点，因此被广泛应用于基因表达量的测量和基因功能研究。
微阵列技术是一种基于杂交原理的测量基因表达量的方法。
它利用DNA微阵列芯片上的探针与RNA样本进行杂交反应，从而测量基因的表达量。
微阵列技术具有高通量、高灵敏度和高可重复性等优
点，因此被广泛应用于基因表达量的测量和基因功能研究。
基因表达量的测量是生物学和医学研究中的重要内容。
实时荧光定量PCR、RNA测序和微阵列技术是目前常用的测量基因表达量的方法，它们各具优缺点，应根据实际需要选择合适的方法进行测量。
病理免疫组化分型,基因检测的医学检测方法
病理免疫组化分型,基因检测的医学检测方法病理免疫组化是一种用于疾病诊断和治疗的重要医学检测方法。
它结合了病理学和免疫学的原理，通过观察和分析组织和细胞中的特定蛋白质的表达情况，来了解疾病的类型、分型和预后。
而基因检测则是一种通过分析个体的基因组信息，来了解其患病风险、遗传特征以及药物反应性的方法。
病理免疫组化分型是基于病理免疫组化的结果，对疾病进行分类和分型的方法。
病理免疫组化分型可以根据不同的疾病类型和临床特征，选择合适的免疫组化标志物进行检测。
例如，在乳腺癌的病理免疫组化分型中，可以通过检测ER、PR和HER2等标志物来确定乳腺癌的分子亚型和预后。
基因检测是一种通过分析个体的基因组信息，来了解其患病风险、遗传特征以及药物反应性的方法。
基因检测可以通过检测特定基因的突变、多态性以及基因表达水平的变化，来判断个体是否患有某种疾病的风险。
同时，基因检测还可以用于预测个体对某些药物的反应性，以个体化的方式选择合适的药物治疗方案。
病理免疫组化分型和基因检测在临床中有着重要的应用价值。
通过病理免疫组化分型，可以对不同类型的肿瘤进行分类和分型，进而指导临床医生制定个体化的治疗方案。
例如，在肺癌中，通过检测EGFR和ALK等基因的突变情况，可以选择合适的靶向治疗药物，提高治疗效果和生存率。
基因检测则可以帮助医生了解个体的遗传特征和患病风险。
例如，在乳腺癌的基因检测中，可以检测BRCA1和BRCA2等基因的突变情况，来判断患者是否具有乳腺癌的遗传易感性。
对于高风险人群，可以采取预防性措施，如定期筛查和预防性手术，以降低患病风险。
病理免疫组化分型和基因检测还可以在肿瘤治疗过程中起到监测和预测的作用。
通过定期进行病理免疫组化分型和基因检测，可以监测肿瘤的进展和治疗效果，并及时调整治疗方案。
例如，在慢性髓性白血病的治疗中，可以通过检测BCR-ABL融合基因的表达水平，来判断患者对靶向治疗药物的反应性，以及预测疗效和预后。
如何检测基因治疗中的基因表达水平
如何检测基因治疗中的基因表达水平基因治疗是一种潜在的治疗方法，可以通过修改人体细胞中的基因来治疗遗传性疾病。
然而，要确保基因治疗的有效性和安全性，需要对治疗过程中的基因表达水平进行准确检测。
本文将介绍一些常用的方法来检测基因治疗中的基因表达水平，以确保治疗效果的评估。
一、荧光素酶报告基因检测法荧光素酶（luciferase）是一种常用的报告基因，它可以发出荧光信号，从而反映基因的表达水平。
在基因治疗中，可以将荧光素酶基因与治疗基因进行连接，并将其导入到目标细胞中。
通过测量荧光素酶产生的荧光信号强度，就可以评估基因的表达水平。
这种方法简单、灵敏、实时性强，可以用于监测基因治疗的疗效及持续时间。
二、实时荧光定量PCR检测法实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）是一种广泛应用的检测技术，可以测量基因在RNA水平的表达量。
在基因治疗中，可以提取目标细胞中的RNA，并利用逆转录酶将其转化为cDNA。
通过PCR反应，可以监测基因治疗过程中目标基因的表达水平。
此方法具有高度特异性和灵敏度，可以实时检测基因表达的变化。
三、蛋白质表达水平检测法基因治疗中的基因表达不仅可以通过检测RNA水平来研究，还可以通过检测蛋白质水平来评估治疗效果。
常用的方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫组织化学染色法（IHC）和蛋白质印迹法（Western blotting）。
这些方法可以通过检测目标蛋白质在细胞或组织中的表达水平来确定基因治疗的效果。
四、细胞荧光显微镜检测法细胞荧光显微镜检测法可以直接观察基因治疗中目标基因在细胞中的表达情况。
该方法通过将荧光素酶等基因或荧光标记的抗体导入到细胞中，并利用荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。
这种方法能够提供细胞级别的基因表达信息，对于评估治疗效果和基因传递效率非常有帮助。
五、组织切片染色法组织切片染色法是对基因治疗中的基因表达水平进行检测的常用方法之一。
荧光素酶报告实验原理
荧光素酶报告实验原理引言荧光素酶（Luciferase）报告实验是一种常用的生物学研究技术，它利用荧光素酶催化活性产生可见荧光信号，从而实现对特定基因表达水平的定量检测。
本文将介绍荧光素酶报告实验的原理及其在基因表达分析、药物筛选和疾病研究中的应用。
一、荧光素酶的基本原理荧光素酶是一种天然的生物发光酶，最早从发光昆虫中分离得到。
该酶能够将氧化的荧光素底物（D-luciferin）与氧气催化反应，产生CO2、AMP、光子和一些其他产物。
光子释放产生的荧光信号可以通过荧光仪进行定量测量，并用于确定荧光素酶活性。
二、荧光素酶报告基因构建为了实现对特定基因表达水平的检测，常将荧光素酶基因与目标基因的启动子片段融合构建成荧光素酶报告基因。
当目标基因启动子活性增加时，荧光素酶报告基因的转录水平也会相应增加，从而导致荧光素酶活性的增强。
三、荧光素酶报告实验流程1. 细胞培养与转染：将需要研究的细胞系培养至适当的数目，并转染荧光素酶报告基因。
2. 荧光素底物处理：在细胞培养基中添加荧光素底物，并在一定的温度和pH条件下孵育。
3. 荧光检测：使用荧光仪检测培养基中荧光素酶活性产生的荧光信号。
4. 数据分析：通过比较样品之间的荧光信号强度，可以进行定量分析，并得出目标基因的表达水平。
四、荧光素酶报告实验的应用1. 基因表达分析：荧光素酶报告实验可以定量测定特定基因在不同条件下的表达水平，帮助研究人员理解基因调控机制。
2. 药物筛选：荧光素酶报告实验可用于筛选药物对目标基因的影响，从而加速新药的研发过程。
3. 疾病研究：荧光素酶报告实验可以用于研究与疾病发展相关的基因表达变化，为疾病的诊断和治疗提供新的线索。
五、荧光素酶报告实验的优缺点1. 优点：荧光素酶报告实验灵敏度高，动态范围广，可用于定量分析基因表达水平；操作简便，成本低廉；无需破坏样本，可进行实时监测。
2. 缺点：荧光素酶报告实验对荧光素底物的要求较高，需要添加供应商提供的特定底物；背景荧光较高，可能会造成误差；某些细胞系对荧光素酶基因的表达不敏感。
qpcr检测目的基因表达原理
qpcr检测目的基因表达原理qPCR检测目的基因表达原理qPCR是一种高效、快速、准确的检测方法，被广泛应用于基因表达分析、病原体检测、药物筛选等领域。
其中，基因表达分析是qPCR最常见的应用之一。
本文将介绍qPCR检测目的基因表达的原理。
qPCR是一种基于荧光信号的PCR技术，它可以定量检测PCR反应中的DNA分子量。
qPCR的原理是通过荧光染料标记的探针或SYBR Green染料来检测PCR反应中的DNA分子量。
其中，探针法是一种更为准确的方法，它可以检测到特定的DNA序列，而SYBR Green染料则可以检测到所有PCR产物。
在qPCR反应中，首先需要设计引物和探针。
引物是一对短的DNA序列，它们分别位于待检测基因的上下游，用于扩增目的基因的DNA序列。
探针是一种特殊的DNA序列，它包含一个荧光染料和一个荧光猝灭剂。
当探针与PCR产物结合时，荧光染料会被激活，发出荧光信号。
荧光猝灭剂则可以防止荧光信号的干扰。
qPCR反应分为两个阶段：扩增阶段和检测阶段。
在扩增阶段，引物和探针将PCR反应体系中的DNA序列扩增。
在检测阶段，荧光信号会随着PCR产物的增加而增加。
通过检测荧光信号的强度，可以确定PCR反应中的DNA分子量。
在qPCR反应中，需要设置一个对照组和一个实验组。
对照组是一组不含待检测基因的样本，它可以用来检测PCR反应的背景信号。
实验组是一组含有待检测基因的样本，它可以用来检测PCR反应中的目的基因表达水平。
qPCR检测目的基因表达的原理是通过比较对照组和实验组的荧光信号强度来确定目的基因的表达水平。
通常，会将实验组的荧光信号强度与对照组的荧光信号强度进行比较，得到一个相对表达量。
相对表达量越高，说明目的基因的表达水平越高。
总之，qPCR是一种高效、快速、准确的检测方法，可以用于检测目的基因的表达水平。
通过设计合适的引物和探针，以及设置对照组和实验组，可以得到准确的基因表达数据，为基因功能研究提供有力的支持。
rt-pcr检测基因表达水平的原理
rt-pcr检测基因表达水平的原理一、 rt-pcr检测基因表达水平的基本原理1. rt-pcr技术是一种用来检测基因表达水平的常用方法，其中rt代表逆转录（reverse transcription），pcr代表聚合酶链式反应（polymerase ch本人n reaction）。
2. rt-pcr技术通过将RNA转录成cDNA，然后进行聚合酶链式反应来扩增特定基因的片段，从而检测基因的表达水平。
3. rt-pcr检测基因表达水平的原理可以分为逆转录和聚合酶链式反应两个步骤。
4. 逆转录是将RNA转录成cDNA的过程，通过逆转录酶（reverse transcriptase）的作用，RNA可以被转录成cDNA。
5. 聚合酶链式反应是将cDNA扩增的过程，通过聚合酶和引物（primer）的作用，cDNA可以被扩增成大量的目标片段。
二、 rt-pcr检测基因表达水平的具体步骤1. 提取RNA：首先需要从待检测的组织或细胞中提取总RNA，保证RNA的完整性和纯度对后续实验非常重要。
2. 逆转录：将提取的RNA进行逆转录反应，将RNA转录成cDNA。
逆转录反应需要逆转录酶和随机引物或特异性引物。
3. pcr扩增：将逆转录后得到的cDNA进行聚合酶链式反应，使用特异性引物对目标基因进行扩增。
聚合酶链式反应的过程需要聚合酶、引物和dNTP。
4. 分析结果：最后通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR等方法对扩增产物进行定量和分析，得到基因表达水平的信息。
三、 rt-pcr检测基因表达水平的优缺点1. 优点：rt-pcr检测基因表达水平的灵敏度高，可以检测低表达基因；检测结果定量化准确，能够得到基因的具体表达量；方法简单、快速、高效，适用于大规模的基因表达分析。
2. 缺点：需要严格控制反应条件和引物设计，以避免假阳性结果；受到RNA的完整性和纯度的影响，需谨慎处理RNA样本；无法区分剪接异构体，对于复杂基因的表达分析存在局限性。
mrna表达检测方法
mrna表达检测方法mRNA表达检测方法是一种用于检测细胞中mRNA水平的技术。
mRNA是一种转录后的RNA分子，它是蛋白质合成的模板。
因此，mRNA的表达水平可以反映出细胞中特定基因的活性水平。
在研究基因功能、疾病诊断和治疗等领域，mRNA表达检测方法具有重要的应用价值。
常用的mRNA表达检测方法包括定量PCR、Northern blotting、RNA in situ hybridization、microarray和RNA-Seq等。
其中，定量PCR是最常用的方法之一。
它利用荧光探针或SYBR Green等染料，通过PCR扩增mRNA，然后测量荧光信号的强度来定量mRNA的表达水平。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优点，适用于检测单个基因的表达水平。
Northern blotting是一种传统的mRNA表达检测方法。
它利用RNA电泳分离mRNA，然后将mRNA转移到膜上，再用探针进行杂交检测。
这种方法具有高特异性和高灵敏度，但需要大量RNA样品和较长的实验时间。
RNA in situ hybridization是一种直接检测mRNA在细胞中的位置和表达水平的方法。
它利用探针与mRNA互补杂交，然后用显微镜观察探针的信号。
这种方法可以在组织和细胞水平上检测mRNA的表达，但需要较长的实验时间和较高的技术要求。
microarray是一种高通量的mRNA表达检测方法。
它利用DNA探针阵列检测大量基因的表达水平。
这种方法具有高通量、高灵敏度和高特异性等优点，但需要大量的RNA样品和较高的实验成本。
RNA-Seq是一种新兴的mRNA表达检测方法。
它利用高通量测序技术直接测量RNA的序列和表达水平。
这种方法具有高通量、高灵敏度和高特异性等优点，可以检测全基因组的表达水平和剪接变异等信息。
mRNA表达检测方法具有多种选择，可以根据实验目的和样品特点选择合适的方法。
随着技术的不断发展，mRNA表达检测方法将在基因功能研究、疾病诊断和治疗等领域发挥越来越重要的作用。
基因表达检测技术
基因表达检测技术基因表达检测技术是研究基因在生物体发育、分化、代谢等过程中表达模式的研究方法。
这些技术对于理解基因的功能、疾病发生机制以及药物研发等方面具有重要意义。
以下是几种常见的基因表达检测技术：1. 转录组学技术：转录组学技术是研究细胞在特定生理或病理状态下转录产物的变化规律的技术。
通过该技术，可以检测基因在不同条件下的表达水平，了解基因表达的动态变化。
常见的转录组学技术包括高通量测序和微阵列技术等。
2. 微阵列技术：微阵列技术是一种高通量技术，通过将大量探针固定在硅片或玻璃片上，与标记的样品进行杂交，检测基因的表达水平。
该技术可同时检测成千上万个基因的表达情况，具有高效、灵敏的优点。
3. qPCR技术：qPCR即实时荧光定量PCR技术，是一种用于检测特定基因表达水平的定量分析方法。
该技术通过荧光染料或探针，实时监测PCR反应过程中产物的增加，实现对基因表达的定量分析。
4. Northern blot技术：Northern blot是一种用于检测总RNA中特定基因的表达水平的技术。
通过将总RNA转移到尼龙膜上，然后与标记的探针进行杂交，检测目标基因的表达水平。
该技术具有较高的灵敏度和特异性。
5. Western blot技术：Western blot是用于检测蛋白质在细胞或组织中表达水平的技术。
通过将细胞或组织中的蛋白质转移到膜上，然后与特异性抗体进行反应，最后通过显色反应检测目标蛋白质的表达水平。
该技术可用于分析蛋白质的修饰、翻译后修饰等。
6. 免疫组化技术：免疫组化技术是一种利用抗原-抗体反应检测细胞或组织中特定蛋白质表达水平的染色技术。
通过标记的抗体与目标蛋白质结合，实现对其表达水平的可视化分析。
该技术在病理诊断和基础研究中广泛应用。
7. 酶联免疫吸附试验：酶联免疫吸附试验是一种利用酶标记的抗体或抗原进行抗原-抗体反应的检测方法。
通过酶催化底物显色，实现对目标蛋白质的定量分析。
该技术具有灵敏度高、特异性强等优点。
基因表达的定量检测分析
前15个循环信号作为荧光本底信号（baseline） 荧光阈值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍 手动设置：大于荧光背景和阴性对照的荧光最高值；进入指数期的 最初阶段
绝对定量分析： Log模板起始浓度 与Ct值呈线性关系
质粒提取，OD值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用
相对定量分析必须用内对照基因（管家基 因）进行校正，进行相对表达量分析。
qPCR可能出现的问题及解决方法
阴性对有信号
2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离
3. 将RNA 转移到固相支持物（尼龙膜）上，在转移的过程中， 要保持RNA 在凝胶中的相对分布 4. 将RNA固定到支持物上（UV交联） 5. 固相RNA与探针分子（DNA或RNA）杂交 6. 除去非特异结合到固相支持物上的探针分子 7. 对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析
2. mRNA表达水平检测：
1）半定量RT-PCR 2）Northern blot
3）实时荧光定量PCR（Realtime PCR）
Northern blot 杂交
是用来检测真核生物RNA的表达量和大小，以估计其丰度的实 验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。
其基本步骤包括： 1. 完整mRNA的分离
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段： 荧光背景信号阶段, 荧光信号指数扩增阶段和平台期。
在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，我们 无法判断产物量的变化。 而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加。 PCR 的终产物量与 起始模板量之间没有线性关系，所以根据最终的 PCR 产物量不能计算出 起始 DNA 拷贝数。 只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR 产物量的对数值与起始模板量 之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量 和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念： 荧光阈值和 CT 值。 荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧 光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般我们将荧光域值的缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。每个反应管内的荧光信号 到达设定的域值时所经历的循环数被称为 CT 值（ threshold value ）
基因表达分析技术
28S
2604
3kb
18S
623
0.4 kb
RNA琼脂糖凝胶电泳 Northern blot hybridization
分子杂交实验
放 射 自 显 影 照 片
目录
2．核糖核酸酶保护实验
ribonuclease protection assay,RPA
➢ 是灵敏度和特异性很高的mRNA定量分析方法
酶联免疫吸附分析
特点：
1、具有特异性； 2、灵敏度很高； 3、稳定、操作简便,标本用量少,适于大规模筛查,
尤 其适用于检测体液中微量的特异性抗体或抗原； 4、既可以做定性试验也可以做定量分析.
三免疫组化实验对组织/细胞 表达的蛋白质进行原位检测
免 疫 组 织 化 学 immunohistochemistry 是 利 用 标 记 的特异性抗体通过抗原-抗体反应和显色反应,在组织或 细胞原位检测特定抗原即目标蛋白质的方法,简称为免 疫组化实验.近年来由于荧光标记抗体的广泛应用,这两 种方法又被统称为免疫荧光法.
3、原位PCR技术
原位ＰＣＲ
原位聚合酶链式反应In Still PCR,Is－PCR是 由Haase等于1990年首创.它是利用完整的细胞作为 一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段,在 不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来 检测细胞内的扩增产物.
直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在单个细
目录
非特异性的嵌入荧光染料评价
• 优点：与特异性的荧光探针相比价格便宜 只需要设计PCR引物
• 缺点：由于它和模板的结合是非特异性 的,它可以和所有的双链DNA包括引物和非 特异性扩增产物结合,不能真实反映目 的基 因的扩增情况.
TaqMan探针 评价
基因诊断的原理
基因诊断的原理
基因诊断是一种利用分子生物学技术来检测人类遗传疾病的方法。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 检测基因突变：基因突变是导致遗传疾病的主要原因之一。
基因诊断可以通过PCR、DNA芯片等技术检测基因序列中的突变，从而确定是否存在遗传疾病。
2. 检测基因拷贝数变异：有些遗传疾病是由基因拷贝数变异引起的，例如某些遗传性失聪症。
基因诊断可以通过MLPA、CGH等技术检测基因拷贝数变异，从而确定是否存在遗传疾病。
3. 检测基因表达水平：有些遗传疾病是由基因表达异常引起的，例如某些癌症。
基因诊断可以通过RT-PCR、Western blot等技术检测基因表达水平，从而确定是否存在遗传疾病。
4. 检测基因组结构变异：有些遗传疾病是由基因组结构变异引起的，例如染色体异常。
基因诊断可以通过FISH、SNP芯片等技术检测基因组结构变异，从而确定是否存在遗传疾病。
基因诊断的准确性和可靠性取决于所采用的技术和样本的质量。
因此，在进行基因诊断之前，需要对样本进行充分的质量控制和验证。
此外，基因诊断还需要结
合临床表现和家族史等信息，综合分析来确定是否存在遗传疾病。
凋亡 qpcr rna 指标
凋亡qpcr rna 指标全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：凋亡是细胞在生物体内的一种自我毁灭性方式，是维持生物体内细胞平衡的重要机制之一。
在细胞的生命周期中，细胞凋亡通过一系列复杂的信号通路调控，最终导致细胞死亡和清除。
凋亡的正常调控对于维持生物体内细胞数量和功能的平衡非常重要，如果凋亡失去平衡，就会导致一系列疾病的发生，比如癌症、自身免疫病等。
在研究细胞凋亡的机制以及相关疾病的发生过程中，一项重要的技术工具就是实时定量聚合酶链反应（qPCR）。
qPCR是一种用于检测RNA拷贝数量的技术，通过检测特定基因在RNA水平上的表达水平，可以快速、灵敏地了解该基因在细胞凋亡过程中的参与情况。
qPCR在研究凋亡信号通路、筛选潜在的治疗靶点以及监测药物治疗效果等方面具有重要的应用价值。
近年来，越来越多的研究者开始关注利用qPCR技术来探索和发现与凋亡相关的RNA指标。
这些RNA指标不仅可以作为凋亡通路的活性标志，还可以作为诊断、预后和治疗靶点的重要指标。
在此，我们将着重介绍几个与凋亡相关的RNA指标及其在疾病研究中的应用。
第一个RNA指标是Bcl-2家族中的成员。
Bcl-2家族是一类在调控细胞凋亡中扮演关键角色的蛋白家族，包括抑制凋亡的Bcl-2和促进凋亡的Bax等成员。
通过检测Bcl-2和Bax在RNA水平上的表达量，可以快速判断细胞凋亡通路的活性。
一些研究还发现，Bcl-2家族成员的表达水平与一些疾病的发病和发展密切相关，比如癌症和神经退行性疾病等。
利用qPCR技术监测Bcl-2家族成员的表达变化，可以为相关疾病的研究和治疗提供重要参考。
第二个RNA指标是microRNA（miRNA）。
miRNA是一类短小的非编码RNA，通过靶向调控mRNA的翻译和降解，参与调控细胞的生存、增殖和凋亡等过程。
近年来的研究发现，miRNA在调控细胞凋亡中发挥着重要作用，某些miRNA的异常表达与疾病的发生和发展密切相关。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
特定基因表达水平的检测（试剂制备、操作步骤和注意事项）2010-01-10 23:19:59 来源：易生物实验浏览次数：192 网友评论0 条
Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA 分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA 或RNA 探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA 所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则可提示目标RNA 在所测样品中的相对含量（即目标RNA 的丰度）。
关键词：基因表达
RNA -gel blot analysis 或Northern Blot
继分析DNA 的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA 或含poly A尾的RNA 样品中特定mRNA 分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。
这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA 最为常用的经典方法。
与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA 分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA 或RNA 探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA 所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则可提示目标RN A 在所测样品中的相对含量（即目标RNA 的丰度）。
但与Southern杂交不同的是，总R NA 不需要进行酶切，即是以各个RNA 分子的形式存在，可直接应用于电泳；此外，由于碱性溶液可使RNA 水解，因此不进行碱变性，而是采用甲醛等进行变性电泳。
虽然North ern也可检测目标mRNA 分子的大小，但更多的是用于检测目的基因在组织细胞中有无表达及表达的水平如何。
一、试剂准备（易生物试剂购销平台/yp/product-list-43.html）
1、0.5M EDTA: EDTA16.61g加ddH2O至80ml, 调pH至8.0, 定容至100ml。
2、50mM NaAc: NaAc 3.4g 加ddH2O至500ml, 加DEPC 0.5ml, 振荡, 37℃过夜，高压灭菌。
3、5×甲醛凝胶电泳缓冲液: MOPS[3-(N-玛琳代)丙磺酸] 10.3g加50mM NaAc 400ml, 用2N NaOH调pH至7.0, 再加入0.5M EDTA 10ml, 加DEPC H2O至500ml。
无菌抽滤，室温避光保存。
4、20×SSC: NaCl 175.3g、柠檬酸三钠88.2g，加ddH2O至800ml，用2N NaOH调pH 至7.0，再用ddH2O定容至1000ml。
DEPC处理、高压灭菌。
5、6×SSC: 20×SSC 300ml加ddH2O至1000ml。
DEPC处理,高压灭菌。
6、50×Denhardt : 聚蔗糖0.5g、聚乙烯吡咯烷酮0.5g、牛血清白蛋白(BSA)0.5g加dd H2 O至50ml,无菌抽滤、分装。
7、1M Na2HPO4: Na2HPO4•12H2O 35.81g, 加dd H2O至100ml。
8、1M NaH2PO4: NaH2PO4•2H2O 15.6g, 加dd H2O至100ml。
9、0.1M 磷酸钠缓冲液(pH 6.6): Na2HPO435.2ml加NaH2PO464.8ml 。
10、STE缓冲液: 1M Tris-HCl(pH 8.0) 2.5ml,0.5M EDTA, 0.5ml,5M NaCl 5ml，加dd H2O至250ml。
11、预杂交液: 20×SSC 5ml,甲酰胺10ml,50×Denhardt 4ml,1M磷酸钠缓冲液0.2ml（pH 6.6）,10%SDS1ml, 总体积20ml。
临用前加入变性鲑鱼精DNA（10mg/ml）,使终浓度为4μl/ml。
12、DEPC H2O: 1000mldd H2O中加入DEPC 1ml，充分振荡，37℃过夜，高压灭菌。
二、操作步骤
1、总RNA 提取：见相关内容。
2、变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，于保温状态下加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液4.0ml、37%甲醛3.6ml，混匀、制胶。
待胶凝固后，置1×甲醛凝胶电泳缓冲液中预电泳5min。
3、样品制备：取总RNA 4.5μl(约20-30μg) ，加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液4.0μl、37%甲醛3.6μl、甲酰胺10μl，65℃温育15min、冰浴5min。
加入EB（1μg/μl）1μl、上样缓冲液2μl。
4、电泳：上样，50V电泳（电泳时间约2hr左右）。
电泳结束后将胶块置紫外灯下，观察RNA 的完整性，记录18S、28S条带的位置（离加样孔的距离）。
特定基因表达水平的检测（试剂制备、操作步骤和注意事项）2010-01-10 23:19:59 来源：易生物实验浏览次数：193 网友评论0 条
Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA 分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA 或RNA 探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA 所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则可提示目标RNA 在所测样品中的相对含量（即目标RNA 的丰度）。
关键词：基因表达
5、将RNA 从变性胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜：
（1）用长和宽均大于凝胶的一块有机玻璃板作为平台，将其放入大的干烤皿上，上面放一张Whatman 3MM滤纸，倒入20×SSC使液面略低于平台表面，当平台上方的3MM滤纸湿透后，用玻棒赶出所有气泡。
（2）将凝胶翻转后置于平台上湿润的3MM滤纸中央，3MM滤纸和凝胶之间不能滞留气泡。
（3）用Parafilm膜围绕凝胶四周，以此作为屏障，阻止液体自液池直接流至胶上方的纸巾。
（4）在凝胶上方放置预先已浸湿的尼龙膜，排除膜与凝胶之间的气泡。
（5）将二张已湿润的、与凝胶大小相同的3MM滤纸置于膜的上方，排除滤纸与滤膜之间的气泡。
（6）将一叠（5-8cm厚）略小于3MM滤纸的纸巾置于3MM滤纸的上方，并在纸巾上方放一块玻璃，然后用一个重约500克的重物压在玻璃板上。
其目的是建立液体自液池经凝胶向膜上行流路，以洗脱凝胶中的RNA 并使其聚集在膜上。
6、使上述RNA 转移持续进行15hr左右。
在转膜过程中，当纸巾浸湿后，应更换新的纸巾。
7、转移结束后，揭去凝胶上方的纸巾和3MM滤纸。
将膜在6×SSC中浸泡5min，以去除膜上残留的凝胶。
8、将凝胶置紫外灯下，观察胶块上有无残留的RNA 。
9、膜置80℃，真空干烤1-2hr。
烤干后的膜用塑料袋密封，4℃保存备用。
10、探针标记(Prime-a-Gene Labeling System, Promega公司)：
（1）取模板DNA 25ng于0.5ml离心管中，95-100℃变性5min，冰浴5min。
（2）dNTPmix的制备: 取dGTP 1μl、dATP 1μl、dTTP 1μl混匀。
（3）将下列反应成份混合，加入上述微量离心管中：
dNTPmix 2.0μl
BSA(10mg/ml ) 2.0μl
5×buffer 10.0μl
Klenow 酶(5u/μl) 1.0μl
α-32P-dCTP 5.0μl
加入适量dd H2O使反应总体积达50μl，轻轻混匀。
室温下反应1hr。
11、预杂交：将膜的反面紧贴杂交瓶，加入预杂交液5ml，42℃预杂交3hr。
12、杂交：将变性的探针（95-100℃变性5min，冰浴5min）加入到预杂交液中，42℃杂交16hr。
13、洗膜：
（1）倾去杂交液。
（2）2×SSC/0.1%SDS室温洗15min。
（3）0.2×SSC/0.1%SDS，55℃洗15min×2次。
14、压片：将膜用dd H2O漂洗片刻，用滤纸吸去膜上水份。
用薄型塑料纸将膜包好，置于暗盒中，在暗室中压上X光片。
暗盒置-70℃放射自显影3～7天左右。
三、注意事项
1、操作时必须仔细、小心，严格按同位素操作规程进行，以防止同位素污染。
2、必要时，可采用Sephades G-50柱层析法纯化标记的探针（见本节附录），以去除标记反应中未结合的（游离的）核苷酸。
3、膜的重复使用：结合了待测RNA 的膜与探针杂交后，可经碱或热变性方法将探针洗脱，膜可反复使用与其它探针杂交。
方法如下：杂交的膜（注意：杂交过的膜在保存过程中不能干燥，否则探针将会与膜形成不可逆的结合）置100℃0.5% SDS中煮沸3min，自然冷却至室温后，将膜放入双蒸水中漂洗2-3遍。
取出膜，用滤纸吸去膜表面的水份。
将膜直接进行另一种探针的杂交或用保鲜膜包好，室温下真空保存。
易生物实验技术频道- 生物实验技术资料库！。