喉鳞状细胞癌组织中YPEL3基因启动子甲基化及其临床意义

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喉鳞状细胞癌组织中YPEL3基因启动子甲基化及其临床意义曹炳;沈志森;林乐希;郝文娟;周重昌

【摘要】目的探讨YPEL3在喉鳞状细胞癌中甲基化状况及其临床意义.方法应用

实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应(qMSP)分别检测91例LSCC患者癌组

织及其配对的癌旁正常组织中YPEL3启动子甲基化水平,并分析其与临床病理特征之间的关系,构建受试者工作特征曲线(ROC)评估其诊断价值.结果喉鳞状细胞癌组织中YPEL3基因启动子甲基化率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),男性、有吸烟史、低分化的喉鳞状细胞癌患者的甲基化水平分别高于女性、无吸烟史及高中分化,差

异均有统计学意义(均P< 0.05).ROC曲线下面积(AUC)高达0.697(95%

CI=0.620~0.774,P<0.01).结论 YPEL3基因启动子异常甲基化与喉鳞状细胞癌的发生和发展有紧密的联系,可作为喉鳞状细胞癌患者诊断的潜在生物标记物.

【期刊名称】《现代实用医学》

【年(卷),期】2018(030)003

【总页数】4页(P302-304,封2)

【关键词】喉癌;YPEL3基因;DNA甲基化;生物标记物

【作者】曹炳;沈志森;林乐希;郝文娟;周重昌

【作者单位】315211 宁波大学医学院;宁波大学附属李惠利医院;315211 宁波大

学医学院;315211 宁波大学医学院;宁波大学附属李惠利医院

【正文语种】中文

【中图分类】R739.65

喉癌是常见的头颈部恶性肿瘤,90%以上喉癌的病理类型是鳞状细胞癌。尽管近

几十年来,喉癌的预防、诊断和治疗取得了很大进步,但5年生存率仍然很差[1]。手术辅助放化疗是目前最常见的治疗方法,然而治疗后患者易出现言语障碍和呼吸困难,降低了患者生活质量[2]。喉癌的发病机制复杂,涉及遗传、表观遗传和环

境因素。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰。大量研究证实,DNA异常甲

基化引起表达抑制或沉默,从而促进了肿瘤的发生和发展[3]。

人类YPEL3定位于16p11.2,是一个p53信号通路中受p53调控的肿瘤抑制因子,其编码的蛋白质能够诱导人类肿瘤细胞的老化而引起其生长停滞[4]。有研究

表明,YPEL3表达下调可以增加肿瘤细胞迁移和侵袭性,从而促进了癌症的发生

和进展[5]。另外,YPEL3的表达在卵巢癌中由于启动子高甲基化而下调[6]。然而,YPEL3启动子甲基化与喉癌相关性的研究尚无报道。因此,笔者研究YPEL3基因

在喉癌中的甲基化状态,并分析YPEL3启动子甲基化水平与临床病理特征的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2011年1月至2016年1月宁波大学附属李惠利医院收治的喉癌患者的癌组织及对应的癌旁正常组织91例,并收集患者基本临床病理资料,所有患者均排除术前放化疗史和癌症史。其中男87例,女4例;年龄40~86岁;73例既往有吸烟史。分期参照国际抗癌协会(UICC)TNM分类标准(2002):I/II期44例,III/IV期47例。此外,高中分化鳞癌78例,低分化鳞癌13例;有淋巴结转移的32例,无淋巴结转移的59例。组织切除后立即投入液氮,然后转

存-80℃冰箱冷冻保存。所有参与者签署了知情同意书,并获得本院伦理委员会

的批准。

1.2 DNA提取和亚硫酸氢盐修饰根据制造商的说明书,使用 QIAamp DNA Mini

Kit(Qiagen,Hilden,Germany)从 91对组织标本中提取基因组DNA。使用NanoDrop 1000分光光度计(Thermo Fisher Scientific Co.Ltd.,Wilmington,USA)评估DNA质量和数量。严格按照制造商的说明书(Zymo Research,Orange,CA,USA),使用具有ZYMOEZDNA Methylation-Gold Kit的Methylamp DNA修饰试剂盒进行亚硫酸氢盐修饰。

1.3 实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应(qMSP)采用qMSP检测YPEL3

基因启动子甲基化状态。操作步骤按照LightCycler 480(德国Roche Diagnostics公司)进行扩增。qMSP所需引物:YPEL3-正义5’-TTAGGTGATTTTTAATTTTTACGGC-3’,YPEL3- 反义5’-CTAAACTATCAATTCCCAATTTCGA-3’。内参为 -actin基因(ACTB),ACTB-正义5’-TGGTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGT-3’,ACTB-反义5’-AACCAATAAAACCTACTCCTCCCTTAA-3’。PCR反应的体系为20l,包括

ddH2O 6l,模板 DNA 2 l,PCR Buffer 10l,上下游引物各1l。PCR反应条件为:95 ℃预变性 10 min,95 ℃ 20 s,60 ℃ 30 s,72℃30 s,共50个循环。采用

亚硫酸氢盐转化通用甲基化人类DNA标准(ZYMO研究公司)作为阳性对照。ACTB被用作内部控制。qMSP可以通过甲基化指数(PMR)进行指标量化。PMR代表基因甲基化阳性的模板DNA在其中所占的比例。PMR=2-Ct×100%,其中 Ct=(Ct样本-Ct内参)-(Ct阳参-Ct内参)。

1.4 统计方法采用SPSS18.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差表示。<0.05为差异有统计学意义。

表1 喉鳞状细胞癌患者YPEL3甲基化与临床病理参数的关系临床指标变量例数

参数值值性别女性4 0.122±0.128 4.43 <0.05男性87 4.368±1.905年龄<60岁46 0.154±0.220 1.51 >0.05≥60岁45 0.230±0.258吸烟史无 18

0.060±0.052 2.66 <0.05有73 0.224±0.259组织学类型高中分化 78

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