生物技术及生物化工专业综合技能培训手册正文

第一篇：菌种相关技能

技能一显微技术实验操作

一、显微技术的应用：1.鉴定菌种形态，初步鉴定菌种种类；

2.在微生物生产、科研工作中对操作的可靠性进行检测，如是否染菌。

二、实验目的：

掌握实验室显微镜的使用方法，能够根据实验需要运用各种染色方法进行鉴定。

三、学习重点：

观测样品的制备

光学显微镜的使用

常用染液的制备

单染色法和革兰氏染色

四、使用仪器

超净工作台、载玻片（若干），去离子水，移液枪，灭菌枪头，接种环

五、试剂

结晶紫、酒精、草酸铵、蒸馏水（或去离子水）、碘、碘化钾、番红

六、染色液配制

结晶紫染色液：

溶液A 结晶紫2.5g、酒精（95%）25.0ml

溶液B 草酸铵1.0g、蒸馏水100.0ml

将结晶紫研细后，加入95%乙醇使之溶解，配成A液；将草酸铵溶于蒸馏水配成B液，两液混合后即成。

卢哥氏碘液：

碘1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300.0g。

先将碘化钾溶解在一小部分的蒸馏水中，再将碘溶解在碘化钾溶液中，然后加入其余的蒸馏水即成。

番红染液：

番红2.0g、蒸馏水100.0ml。

七、染色步骤：

（1）革兰氏染色法：

涂片——干燥——固定（不能在火焰上烤）——染色（结晶紫1min）——水洗——镜检如果省去固定步骤，菌体的芽孢、荚膜一般都能看到

（2）细菌的单染色法

涂片——干燥——固定

初染（结晶紫1滴，约1min）——水洗

媒染（滴加碘液，覆盖1min）——水洗

脱色（用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止）——水洗

复染（用番红液染1-2min）——水洗

镜检（干燥后，置油镜观察）

阴性呈红色，阳性呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

技能二PH计的使用

一、实验目的:

掌握PH计的标定方法(一点标定法、两点标定法)并学会不同PH标准缓冲液溶液的配制。

二、实验原理:

PH计是利用PH复合电极对被测溶液中不同的PH值产生的直流电位,通过PH前置放大器和测温传感器对被测溶液的温度测量信号叠加,并进行自动运算后输入到转换器,以达到PH 值的数字显示。

PH计经过标准缓冲液校准后，即可测量溶液的PH值。

三、仪器

PHS-3B精密级数字式酸度计100ml小烧杯三只玻璃棒洗瓶

250ml容量瓶三只温度计一只

四、试剂

邻苯二甲酸氢钾、混合磷酸盐、四硼酸钠、去离子水

标准PH缓冲液的配制

1、PH 4.0邻苯二甲酸盐缓冲液

取邻苯二甲酸氢钾一小袋，溶解后用250ml容量瓶定溶到250ml即可

2、PH 6.86混合磷酸盐

取混合磷酸盐一小袋，溶解定容到250ml即可

3、PH 9.18四硼酸钠

取四硼酸钠一小袋，溶解定容到250ml即可

五、实验步骤

仪器的预热

〈1〉接通电源，把开关置于“开”的位置，预热10分钟。

〈2〉温度补偿方法

自动温度补偿法将仪器后侧的“选择开关”置于自动，把仪器的“PH-T-mV”置于“T”，数字显示即为测温传感器测得的温度，同时仪器将温度信号送入PH-T混合电路进行运算，从而起到PH自动补偿的目的。

手动温度补偿法拔去温度传感器，将仪器后侧的“选择开关”置于手动。把仪器的“PH-T-mV”置于“T”，调节温度调节旋钮，使数字显示值与温度计显示数值相同，仪器将该温度信号送入PH-T混合电路进行运算，从而起到PH自动补偿的目的。

仪器的标定

<1>一点标定法：以手动温度补偿为例

用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入标准缓冲液中（PH=4.00或PH=9.18），将“PH-T-mV”旋钮置于“T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。将“PH-T-mV”旋钮置于“PH”，“斜率”旋钮顺时针旋足，调节“定位器”旋钮，使显示器数值和标准缓冲液在该温度下PH值（PH=4.00或PH=9.18）

注：仪器一点标定结束后，此时“定位”旋钮不再变动。

〈2〉两点标定法：以手动温度补偿为例

用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入PH=6.86标准缓冲液中，将“PH-T-mV”旋钮置于“T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。将“PH-T-mV”旋钮置于“PH”，数字显示值为PH=7.0的标准缓冲溶液标准值。

a)如果测量的缓冲溶液为酸性，将电极从PH=6.86缓冲溶液中取出，用去离子水清洗，再用滤纸吸干，然后插入PH=4.00标准缓冲液中，调节“斜率”旋钮，使数字显示值为该温

度下PH=4.00缓冲液标准值。

b) 如果测量的缓冲溶液为碱性，将电极从PH=6.86缓冲溶液中取出，用去离子水清洗，再用滤纸吸干，然后插入PH=9.18标准缓冲液中，调节“斜率”旋钮，使数字显示值为该温度下PH=9.18缓冲液标准值。

注：经校准“定位”旋钮和“斜率”旋钮的仪器，即可用来测量溶液PH值。此时“定位”旋钮和“斜率”旋钮不再变动。

如果连续使用时，每天标定一次就可以了。常规测量可采用一点标定法，精确测量采用两点标定法。

技能三培养基的配制

一、实验目的

1 掌握不同培养基的配制方法

2 了解不同培养基的性能、应用范围

二、实验试剂

蛋白胨酵母膏酵母粉NaCl MgSO4 (NH4)2SO4 KH2PO4 甘油脱脂奶粉（光明）琼脂1mol/L NaOH 1mol/L HCl

三、实验仪器

PH计烧杯玻璃棒胶头滴管

四、实验步骤

MLB培养基（g/L）

蛋白胨10.0 酵母膏 5.0 NaCl 5.0 MgSO4 0.4 PH=7.0

1/2MLB培养基（g/L）

蛋白胨10.0 酵母膏 5.0 NaCl 5.0 MgSO4 0.4 PH=7.0

准确称取各种药品，用1000ml 自来水溶解，然后用1mol/L NaOH 在PH计的测量下进行PH的调整。

如果需要配制固体培养基，在上述调好PH基础上按18g/L量加入琼脂混合均匀即可。SMA培养基（g/L）

蛋白胨 5.0 酵母粉 3.0 脱脂奶粉12 琼脂18 PH=7.5

准确称取各种药品，把蛋白胨、酵母粉用500ml水溶解，脱脂奶粉也用500ml水溶解，