常见细菌理化性质鉴定试验
常见细菌理化性质鉴定试验
常见细菌理化性质鉴定试验淀粉水解：淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精(淀粉不完全水解的产物)，糊精继续水解生成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖。
培养基：将细菌接种在平板上，置37度温箱中培养24h，加革兰氏碘液于菌落上，观察颜色变化，呈蓝色者为阴性，无蓝色为阳性。
甲基红试验：是根据肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红这个原理进行的测验。
产氨实验（乙酰胺肉汤）原理：铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物。
操作：将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃下培养20h～24h。
然后向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。
吲哚试验：是指有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则为吲哚试验阳性。
过氧化氢酶试验（又名：接触酶试验）一、原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
二、试剂3%过氧化氢溶液：临用时配制。
三、试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。
四、结果于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。
脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。
微生物学检验细菌的生物化学实验
所致疾病
侵袭性疾病 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、 脑膜炎、败血症等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎等
免疫性
有一定天然免疫力 病后获得的免疫力作用不强、不持久
微生物学检验
细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
结果报告
标本采集
根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便
抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性 结合，应用于协同凝集试验 抵抗吞噬细胞的吞噬
★多糖抗原 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊 断
分类和分型
葡萄球菌包括32种及亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类
检验方法—分离培养
血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分 离培养（血平板） 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血
金葡菌的鉴定依据
血平板上金黄色色素、β-溶血环 血浆凝固酶 + 发酵甘露醇 + 耐热核酸酶 +
凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
条件致病菌 医院内感染的重要病原菌 对多种抗生素耐药
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 （MRCNS）是院内感染的重要病原菌之 一，MRSA、MRCNS对多种抗生素耐药， MRSA不仅对青霉素类、头孢菌素类等β－ 内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、
红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素等
常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐 药率也达30％，但通常对万古霉素敏感。 MRSA、MRCNS常常引起院内感染与播散， 且难于治疗和控制，病死率高。
腐烂苹果中的细菌分离以及理化性质的检测
腐烂苹果中的细菌分离以及理化性质的检测腐烂苹果中的细菌分离以及理化性质的检测摘要：从腐烂苹果中取样培养细菌，用平板直线划线法分离纯化细菌，经扩大培养后进行镜检和革兰氏染色实验，最后对分离出的纯种细菌进行理化性质检测：细菌水解淀粉实验以及探究pH对细菌生长的影响实验。
实验结果显示，腐烂苹果中的细菌形状小而圆，是革兰氏阳性菌；水解淀粉实验说明该细菌中没有水解淀粉的酶；分光光度法所得的数据显示该细菌的生长环境偏中碱性。
关键词：腐烂苹果、细菌、平板直线划线法、革兰氏染色、水解淀粉、分光光度法Study the Bacteria of Rotten Apples in the Separation andPhysical & Chemical PropertiesLin jia-wan(College of life science,South China Normal University,Guangzhou 510631,China )Abstract: Sample training bacteria from the rotten apples, and purify bacteria with flat linear crossed method; After expanding the bacteria, they are tested by Microscopic examination and Gram staining, and finally, test physical and chemical properties of the isolated pure bacteria withBacteria hydrolysis starch experiment and exploring the pH of the growth of the bacteria influence experiment.The experimental results show that the bacteria in rotten apples are small, round in shape,and are gram-positive;The experiment of the bacteria hydrolysis starch indicated that those bacteria don’t have enzyme that can hydrolyze amylum;Spectrophotometry income datas showed that those bacteria like to grow in the environment of alkaline slant.Key words:rotten apples; bacteria;Flat linear crossed method; Gram faerbung; hydrolyze amylum; Spectrophotometry引言：现今，市场的水果摊位仍会出售腐烂的水果，而有些人不清楚腐烂水果会滋生很多细菌，即使把腐烂的部分挖去，细菌也会蔓延到其它部分。
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌的生理生化鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌的生理生化鉴定篇一：细菌生理生化鉴定实验九细菌的生理生化试验[日期：20XX-5-30]来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1目的1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3材料3.1菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（bacillussubtilis）的斜面菌种3.2培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3试剂40％naoh溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4流程糖发酵试验→V-p试验→甲基红试验→吲哚试验5步骤(一)糖类发酵试验1目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即b.c.p指示剂，其ph在5.2以下呈黄色，ph在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3材料3.2菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5步骤5.1试管标记图9-1糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
细菌分析鉴定实验报告
一、实验目的1. 学习细菌分离与培养的基本操作方法。
2. 掌握细菌形态观察、生理生化反应等方法在细菌鉴定中的应用。
3. 提高实验操作技能和微生物学基础知识。
二、实验原理细菌是微生物的一种，具有独特的形态、生理生化特性。
通过观察细菌的形态、生理生化反应等特征，可以鉴定细菌的种类。
本实验主要采用以下方法进行细菌分析鉴定：1. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态、大小、排列等特征。
2. 生理生化反应：通过测定细菌对特定底物的代谢产物、颜色变化等，判断细菌的生理生化特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株；土壤、水、食品等样品。
2. 仪器：显微镜、细菌培养箱、无菌操作台、酒精灯、接种环、培养皿、试管等。
四、实验方法与步骤1. 细菌分离与培养（1）将样品进行无菌处理，制成悬浊液。
（2）取适量悬浊液，分别接种于不同类型的培养基上，如营养琼脂培养基、伊红美蓝培养基等。
（3）将接种后的培养基放入细菌培养箱中，培养适宜时间。
2. 细菌形态观察（1）取适量培养好的细菌，制成悬浊液。
（2）在显微镜下观察细菌的形态、大小、排列等特征。
（3）记录观察结果。
3. 细菌生理生化反应（1）将培养好的细菌接种于不同类型的生理生化试剂中，如糖发酵试剂、吲哚试剂、甲基红试剂等。
（2）观察试剂颜色变化、沉淀形成等反应现象。
（3）记录观察结果。
五、实验结果与分析1. 细菌分离与培养实验结果显示，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株在相应培养基上生长良好，形成典型的菌落。
2. 细菌形态观察显微镜下观察，金黄色葡萄球菌呈球形，单个或成对排列；大肠杆菌呈杆状，单个或成链排列；肺炎克雷伯菌呈球形，单个或成对排列。
3. 细菌生理生化反应金黄色葡萄球菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性；大肠杆菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性；肺炎克雷伯菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性。
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。
这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。
以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。
结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。
2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。
营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。
3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。
5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。
淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。
蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。
6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。
7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。
8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。
细菌鉴定及检测方法
细菌鉴定及检测方法细菌是一类微生物，其病原性和耐药性等特性对人类健康和环境安全有着重要影响。
因此，准确的细菌鉴定和检测方法对于疾病诊断、食品安全、环境监测以及抗生素治疗等领域至关重要。
本文将详细介绍常用的细菌鉴定和检测方法。
一、细菌鉴定方法1.形态学鉴定：通过观察细菌的形态特征，如细胞形状、大小、颜色等，可以初步判断其属于哪一类菌。
这种方法主要适用于形态特征非常典型的细菌。
2.染色法鉴定：常用的细菌染色方法有革兰氏染色、抗酸染色等。
革兰氏染色可以根据细菌的细胞壁特性将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
抗酸染色适用于检测酸忍受性细菌，如结核分枝杆菌等。
3.生理生化特性鉴定：这是一种常用的鉴定细菌的方法，通过观察细菌对特定物质的代谢反应，例如对糖、气体等的发酵、氧要求等，可以初步确定细菌的鉴定组。
4.分子生物学鉴定：分子生物学方法可以通过提取细菌基因组DNA或RNA，利用PCR扩增、序列分析、16SrRNA测序等技术，从而精确确定细菌的鉴定种属。
分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，广泛应用于细菌鉴定中。
二、细菌检测方法1.培养法：这是一种常用的细菌检测方法，通过在富含营养物的培养基上培养细菌，并根据菌落形态、色素、气体产生等进行初步鉴定。
培养法可以用于检测食品、水源、空气中的细菌等。
然而，一些特殊的细菌可能无法在常规培养条件下生长，所以培养法在一些情况下可能会有限制。
2.免疫学方法：包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术。
这些方法利用细菌表面特异的抗原与特定抗体的结合反应来检测细菌，并通过检测结果的颜色或荧光信号来判断细菌是否存在。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，适用于检测特定细菌的存在或细菌相关的抗体等。
3.分子生物学方法：分子生物学方法在细菌检测中也起着重要作用。
PCR和实时荧光PCR是常用的检测细菌DNA的方法，可以通过特定引物和探针分别扩增和检测目标细菌的DNA。
此外，基于DNA测序技术的全基因组测序也可用于快速鉴定和检测细菌。
微生物细菌鉴定试验汇总
精选课件
9
CAMP试验
原理：
B群链球菌能产生一种胞外因子—— CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β-溶
血毒素的活性，因此，在两菌交界处 出现箭头样的溶血增强区。
精选课件
10
CAMP试验方法
方法：
取血平板一块，用产生β-溶血毒素 的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此 线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养， 观察结果。
精选课件
8
胆汁溶菌试验方法
方法：
➢ 平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的 菌落上，35℃30min观察结果。
➢ 试管法：于0.9ml培养了18～24小时的菌 液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆 盐0.2ml混匀，37℃水浴10～30min，观察 结果。
应用：
主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。
金葡
表葡、腐生
S
素新 生 霉R
精选课件
－
链球菌 肠球菌
表葡
腐生
13 13
链球菌属鉴定流程
触酶试验：阴性
观察血平板上溶血环
β-溶血环
杆菌肽 、CAMP、 胆七 、高盐
非β-溶血环
Optochin、杆菌肽、
胆七 、高盐
精选课件
14 14
非β溶血链球菌鉴定
菌种 肺炎链球菌 草绿色链球菌 牛链球菌
Optochin 敏感试验
精选课件
35
7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示 剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加 入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌 能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细 菌沿穿刺线扩散生长。
菌体理化性质鉴定试验
菌体理化性质鉴定试验1 V-P试验原理：菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
培养基配制方法：蛋白胨5g；葡萄糖5g；NaCl(K2PO4):5g；蒸馏水：1000mL；PH:7.0～7.2，分装试管，毎管装约4～5cm，115℃灭菌20min。
试剂：40%NaOH(或KOH)，a-萘酚。
试验方法：将试验菌接种于上述培养基，于36±1°C培养4天、培养液 2.5ml先加入a萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2～5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
结果记录：阳性：+，阴性：- 。
2甲基红（Methyl Red）试验原理：有些细菌能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
培养基配制方法：与V-P试验培养基一致。
试剂：甲基红:0.1g，95%乙醇：300mL，蒸馏水：200mL。
试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3～5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1～2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。
迄至发现阳性或至第5天仍为阳性、即可判定结果。
结果记录：阳性：+，阴性：- 。
3 糖、醇发酵试验原理：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为紫（蓝）色。
微生物生化鉴定
常用生化试验一．糖、醇发酵试验1.糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。
有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。
有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气,有的仅产酸，而不产气。
根据这些特点，可鉴别细菌。
培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。
可根据试验的要求和细菌的特性来选择。
2.乙酰甲基甲醇试验（V—P试验）原理：某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下,被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物.故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。
试验中加入的α—萘酚为催化剂,可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的敏感性。
大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V—P试验呈阴性。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基3.甲基红试验（MR试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH降至4.5以下。
这时加入甲基红指示剂呈红色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等)，则培养基的酸度仍在PH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基MUG葡萄糖醛酸苷酶试验原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4—甲基伞形酮—β—D葡萄糖醛酸甘(4—Methylumbelliferyl-β-D—glucuronide简称MUG）的β葡萄糖醛酸甘键，使其水解,释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。
培养基：MUG培养基4.β-半乳糖苷酶试验原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚—β-D半乳糖苷(O-nitrophenyl—β-D-galactopyranoside,ONPG），而释放出黄色的邻硝酸酚。
常见的细菌生化反应操作和结果判断
一．糖发酵试验1.原理由于各种细菌所含酶类的不同，故对糖（醇）的分解能力不同，其代谢产物也不一样。
有的细菌能分解某些糖而产酸和产气，有些细菌能分解某些糖只能产酸，还有一些细菌因缺乏某些糖分分解酶则不能分解某些糖类。
细菌对糖的不同分解能力可用来鉴别细菌。
2.方法将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，35℃培养18～24小时观察结果。
3.结果观察结果时，首先确定细菌是否生长，细菌生长则培养基呈混浊状态，再确定细菌对糖的分解情况。
(1)不分解糖：培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“-”表示。
(2)分解糖只产酸不产气：培养基中所含的指示剂（溴甲酚紫）由紫色变为黄色，液体培养基的倒置管中未发现气泡。
若为半固体培养基，则培养基内未见气泡或琼脂断裂，记录是以“+”表示。
(3)分解糖既产酸又产气：除培养基中的指示剂颜色改变外，在液体培养基的倒置小管中出现气泡，若为半固体培养基，则培养基内可见气泡或琼脂断裂，记录时以“⊕”表示。
本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气“⊕”，伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“+”，不分解乳糖“-”。
二．甲基红试验（MR试验）1.原理某些细菌发酵葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，使培养基的PH下降至4.4以下，此时加入甲基红指示剂后培养基呈现红色反应（阳性）。
有些细菌分解葡萄糖产生酸进一步转化为醇、醛、酮等非酸物质，使培养基的PH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈黄色（阴性）。
2.方法将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，经35℃培养24小时，观察结果。
3.结果在培养物中加入甲基红指示剂2～3滴，立即观察，呈现红色为阳性，黄色为阴性。
本实验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
三.V-P试验1.原理有些细菌在发酵葡萄糖产生丙酮酸后，使丙酮酸脱羧，形成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境中被空气中的氧气氧化为二乙酰。
二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应，生成红色反应物。
微生物理化性质实验
微生物理化性质实验生命学院生科四班张行润200900140177 摘要通过不同菌种的代谢方式和产物的不同，在一定的培养基下，对照实验，以简单方便的观察出不同鉴定菌种之间的差异。
比如铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌可以分解使用淀粉，而金黄色葡萄球菌和大肠杆菌却是不行。
乳糖发酵实验中，大肠杆菌产气产酸，但是普通变形杆菌却无法产酸产气。
通过与对照组的对照，我们便可以轻松区分，以达到鉴定区别菌种的目的。
关键词糖酵解（glycolysis）大分子水解吲哚试验甲基红试验前言用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝。
这些都可以作为鉴定菌种的指标性特征。
一、实验材料1.1.菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）大肠杆菌（Escherichia coli）铜绿假单胞杆菌（P.Aeruginosa）金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）普通变形杆菌（P. vulgaris）产气肠杆菌（Enterobacter amnigenus）等。
1.2.试剂及药品：卢戈式碘液、溴甲酚紫指示剂、甲基红指示剂、吲哚试剂、蛋白胨、牛肉膏、NaCl、1.6%花生油中性红水溶液、琼脂、蒸馏水、可溶性淀粉、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液、葡萄糖、乳糖、蔗糖等。
1.3.器材：培养皿、锥形瓶、试管、烧杯、接种环、试管架、酒精灯等。
二、实验原理微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接被利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输到细胞内。
常用细菌生化反应试验
不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
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检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
细菌的理化性质实验报告
一、实验目的通过本实验，了解细菌的理化性质，包括细菌的化学组成、物理性质、生长条件以及生理生化反应等方面，为进一步研究细菌的生物学特性打下基础。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有复杂的化学组成和生物学特性。
本实验主要观察细菌的化学组成、物理性质、生长条件以及生理生化反应等方面的内容。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、糖发酵培养基等。
3. 试剂：孔雀绿、碱性品红、番红、甲基红、吲哚试剂等。
4. 仪器：显微镜、高压灭菌锅、酒精灯、接种环、试管、移液枪、滴管等。
四、实验方法1. 细菌的化学组成（1）称取一定量细菌，加入适量的蒸馏水，充分振荡，制成菌悬液。
（2）用滤纸过滤，收集滤液。
（3）用适当的方法测定滤液中的蛋白质、糖类、脂肪、核酸等成分。
2. 细菌的物理性质（1）观察细菌的形态、大小、颜色等。
（2）观察细菌的鞭毛、荚膜、芽孢等特殊结构。
（3）测定细菌的相对表面积、带电现象、半透性、渗透压等物理性质。
3. 细菌的生长条件（1）观察细菌在不同酸碱度、温度、营养物质、氧气等条件下的生长情况。
（2）通过实验验证细菌的最适生长条件。
4. 细菌的生理生化反应（1）观察细菌的色氨酸酶、吲哚酶、甲基红反应等生理生化反应。
（2）观察细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖等糖类的发酵情况。
五、实验结果与分析1. 细菌的化学组成实验结果显示，细菌主要由水、无机盐、蛋白质、糖类、脂肪、核酸等组成。
其中，蛋白质含量最高，约占细菌总重量的50%以上。
2. 细菌的物理性质（1）细菌的形态、大小、颜色等：实验观察到细菌具有不同的形态，如球状、杆状、螺旋状等；大小差异较大，一般在0.5-5.0μm之间；颜色为无色、淡黄、绿色等。
（2）细菌的特殊结构：实验观察到细菌具有鞭毛、荚膜、芽孢等特殊结构。
（3）细菌的物理性质：实验结果显示，细菌的相对表面积较大，有利于同外界进行物质交换；细菌具有带电现象、半透性、渗透压等物理性质。
实验6细菌鉴定中常用的理化
2)甲基红实验，比较大肠杆菌和产气杆菌的甲基
红反应结果。 3)伏-普实验（V-P实验），比较大肠杆菌和产气 杆菌的V-P反应结果。
蛋白质、氨基酸及大分子物质代谢实验 1）吲哚实验，比较大肠杆菌和产气杆菌的吲哚反应 结果
2）硫化氢实验，比较大肠杆菌和变形杆菌硫化氢反
应结果 3）明胶液化实验，比较大肠杆菌和枯草杆菌明胶液 化结果 4）淀粉水解实验，比较大肠杆菌和枯草杆菌淀粉水
靛基质(吲哚)实验
大肠杆菌等能分解 蛋白质中的色氨酸, 产生靛基质(吲哚), 靛基质与对二甲基 氨基苯甲醛结合形 成玫瑰色靛基质 (红色化合物).
硫化氢实验
某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸\半胱氨酸 等),产生硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐,形成黑
色沉淀硫化铅或硫化铁.为硫化氢实验
明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶,使明胶被分解,失去凝固 能力,呈现液体状态,为明胶实验阳性.
注意:
1.实验时,同时以未接种细菌的培养基作对照.因为亚硝酸 盐在自然界分布很广,容易污染试剂.另外,硝酸盐不纯或 保管不妥,也可能含有亚硝酸盐. 2.繁殖迅速而还原硝酸盐能力强的细菌,如果培养时间过 久,可能将亚硝酸盐全部分解成为氨气和氮气,这样可出现 假阳性反应,故须每天进行实验.
结果与讨论
（七）淀粉水解实验
1.将冷却到50℃的淀粉培养基以无菌操作制成平板.
2.用接种环取少许枯草杆菌划线接种在平板的一边,再取 少许大肠杆菌划线接种在平板的另一边.
3.置37℃温箱培养24h. 4.打开平皿, 将少量卢戈氏碘液滴加于平板上，轻轻摇 动,使碘液均匀铺满整个平板.如菌苔有透明圈出现,表 明淀粉已被水解.透明圈的大小,说明该菌水解淀粉能 力的大小.
糖发酵实验 验
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常见细菌理化性质鉴定试验
淀粉水解：淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精(淀粉不完全水解的产物)，糊精继续水解生成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖。
培养基：将细菌接种在平板上，置37度温箱中培养24h，加革兰氏碘液于菌落上，观察颜色变化，呈蓝色者为阴性，无蓝色为阳性。
甲基红试验：是根据肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红这个原理进行的测验。
产氨实验（乙酰胺肉汤）原理：铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物。
操作：将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃下培养20h～24h。
然后向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。
吲哚试验：是指有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则为吲哚试验阳性。
过氧化氢酶试验（又名：接触酶试验）
一、原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
二、试剂3%过氧化氢溶液：临用时配制。
三、试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。
四、结果于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验
常用于革兰阳性球菌的初步分群。
脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。
脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法是测定生成的氨量。
VP (voges proskauer)试验：某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
大肠埃希菌v-p试验阴性，产气肠杆菌v-p试验阳性。
明胶液化试验：是利用某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体这样的原理进行的试验方法。
石炭酸复红染色液与改良苯酚品红染色液不同。
石炭酸复红染色液主要由石碳酸、碱性品红等组成，主要用于痰涂片或拭子结核杆菌染色和革兰氏染色，较少单独使用。
改良苯酚品红染色液又称卡宝品红(Carbol fuchsin)染色液，主要由苯酚、碱性品红、山梨醇、氧化剂等组成，常用于细胞核染色、染色体的固定和染色。
石炭酸复红染色液主要用于抗酸杆菌染色和革兰氏染色中，亦可单独使用。
革兰氏染色：该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，
再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。