临床常见标本微生物检验
胡方芳-临床微生物标本常见细菌培养和鉴定
三 细菌鉴定的基本依据
• 基本结构：形态与染色 • 生长特性：培养特性 • 细菌代谢产物：生化反应： • 细菌免疫学特征：血清学试验： • 遗传特征：分子生物学实验 • 其他：质谱分析技术、色谱分析技术等
四 细菌鉴定基本步骤
• （一） 挑选可疑菌落 • （二） 涂片染色 • （三） 生化反应试验 • （四） 血清学试验 • （五） 其他相关试验
• 粪便：接种血平板、SS平板和麦康凯平板 置普通温箱 35℃孵育
• 脓液及创伤感染分泌物：血平板 置普通温箱 35℃孵育
• 生殖道：接种血平板和淋球菌平板 置CO2温箱 35℃孵 育
一 常见细菌培养
• 培养特性： 1 适宜生长温度：大多数病原菌35-37℃，某些在
低温（李斯特菌属 4 ℃ 缓慢生长）或高温下生 长 2 气体环境：需氧菌、兼性厌氧、微需氧（5%O2、 10%CO2 如肺炎链球菌、淋病奈瑟氏菌等）、厌 氧菌
菌）、辣味（金黄色葡萄球菌）等
（3）菌落溶血特征 α溶血/草绿色溶血： β溶血： γ溶血/不溶血：
链球菌的溶血现象
2 液体培养基 （1）均匀浑浊生长 （2）沉淀生长 （3）表面生长（菌膜）
（二） 涂片染色
• 染色：革兰染色：革兰阳性菌、革兰阴性菌 • 形态、大小和排列：球形、杆形、螺旋形，菌体
大小，单个、成双、葡萄状等
-
迁移生长 +
洋葱 类鼻疽 巴斯特 其他
铜绿
- 靛基质
其他
沙雷 枸橼 肠杆菌 嗜麦芽 不动 沙门 其他
+
变形杆菌
大肠
革兰阴性球菌
氧化酶（+） G- Co：
脑膜炎双Co 卡他布兰汉
淋球菌
血平板 + 巧克力 + 普通平板 （除卡他）
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
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尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
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（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床微生物检验标本采集程序
临床微生物检验标本采集程序1 标本采集的基本原则：1.1 严格的无菌操作，避免污染，避免来自寄生菌的污染，应当保证每份样本代表感染过程｡1.2 选择正确的解剖部位、合适时间、合乎规程技术，采集样本。
1.3 选择合适的部位采集用于厌氧菌培养的样本。
1.4 要收集足够量的样本，量少可能导致假阴性结果。
1.5 应尽可能在病人使用抗菌药物前采集样本，如不能停用抗菌药物，应于下次抗菌药物应用前采集。
1.6 血培养样本在病人寒颤和发热初起时为最佳时机。
1.7 导尿留取样本时，不可从尿袋中采集样本。
引流液样本不能直接从引流袋放出，因引流液在袋中潴留时间太长容易滋生细菌。
1.8 各类微生物样本不宜加防腐剂1.9 盛标本的容器须先经灭菌（煮沸、高热、或高压灭菌），但不得用消毒剂或酸类处理。
1.10 有些临床标本还要注意采集的时机和部位，如伤寒沙门菌的阳性检出率，发病的第1～2 周采集血液，第3～4 周采集大便和尿液，阳性率较高。
1.11 样本的运送处理和储存规定1.11.1 样本2h之内送到实验室。
1.11.2 血培养瓶如果不能及时送检，应置室温保存（但不得超过24 小时）。
禁止将不能及时送检的血培养瓶放置冰箱保存。
1.11.3 淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌培养时，样本不能放4℃条件保存，应在30min内送检，并注意保温。
1.11.4 痰培养疑为嗜血杆菌、肺炎链球菌感染时，应立即送检，因为这些细菌在自然环境中极易死亡。
1.11.5 导管样本如不能在规定时间内送检，应在盛装导管的容器中加少量无菌生理盐水，以免导管干燥，病原微生物死亡。
1.11.6 活检组织样本和眼分泌物样本应在30min内送检，如样本较小或不能在规定时间内送检，应在盛装组织的容器中加少量无菌生理盐水，以免样本干燥，病原微生物死亡。
不可用纱布包裹组织样本。
2 常见临床微生物标本的采集方法。
2.1 血液及骨髓样本2.1.1 检验项目：血液及骨髓培养。
2.1.2 适应症病人出现以下临床表现：发热（38℃）或低温（36℃）、寒战、白细胞增多（白细胞数>10×109/L，特别有“核左移”时）、皮肤粘膜出血、昏迷、多器官衰竭、血压降低、C反应蛋白升高及呼吸加快、血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少等临床可疑血流感染时应采集血液样本进行血培养及骨髓培养。
微生物检验在临床上有哪些用途？
微生物检验在临床上有哪些用途？大家都知道，微生物具有分布广泛、生长繁殖能力强、种类繁多、易培养、易变异及代谢能力、适应能力强等特点，在临床疾病监测中也有着广泛的应用：一、常见的检测方法1、重量检测法重量检测法也就是通过称重的方式来进行，利用离心或过滤法测定。
一般情况下，干重是湿重的百分之十五左右，这种方式比较繁琐。
若是微生物为菌体，大部分都会采取这种方式，如活性干酵母这种，以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
2、体积测量法体积测量法也就是平时所说的测菌丝浓度法，这种检测方法是通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况，这种类型的检测方式比较简单、快捷、粗放，由于离心沉淀物中会夹杂各种固体营养物，在检测之前需要设定一致的处理条件，不然会导致结果有很大的偏差，该检测方式目前已成为大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
二、临床应用1、重视显微镜检查对于留取标本进行革兰染色，一方面可以掌握标本质量以确定进行培养或重新留取标本;另一方面通过镜检对某些细菌可以作出初步分类。
对于脓性分泌物或穿刺液进行革兰染色镜检亦可作出大致分类或初步诊断。
对泌尿系男性尿道和女性分泌物涂片革兰染色镜检，查到白细胞内或外有革兰阴性双球菌，是诊断淋病的重要依据。
脑脊液墨汁染色检查新型隐球菌，对于临床诊断隐球菌性脑膜炎有重要价值。
痰、胸水涂片抗酸染色查抗酸杆菌，对于诊断肺结核有重要意义。
粪便球杆菌比例检查，对于肠道菌群失调的诊断有重要帮助。
粪便暗视野检测弧菌的运动情况，对于霍乱的诊断有意义。
2、用显色培养基对微生物快速鉴定在分离培养基中加入检测某些细菌特异性酶的底物（由产色基团和微生物代谢物如糖苷类，氨基酸或肽类两部分组成，通常为无色），在特异性酶作用下游离出产色基团并产生荧光或显示一定颜色，用紫外灯观察菌落产生的荧光或直接观察菌落颜色即可对细菌做出鉴定。
如CHRO真菌培养基:白色念珠菌（绿色），热带念珠菌（蓝色），克柔念珠菌（粉红色）。
检验微生物学 临床体液及排泄物标本
金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂， 37℃培养 18-24小时
副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培 养基。
粪便标本检验
11
检测方法3
定量接种环涂抹法：使用 1ul的定量接种环沾满 尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘 以 1000，等于每毫升尿中的菌数。
尿液标本检验
6
检测方法和报告
• 阳性 革兰阴性菌>105cfu/ml， 革兰阳性菌>104cfu/ml有临床意义
• 阴性 报告为“48h培养无菌生长”
尿液标本检验
7
粪便标本检验
五官科标本检验
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二.眼分泌物检验与报告
1.涂片镜检 淋病、沙眼衣原体、真菌……
2.分离培养 需氧菌 真菌
五官科标本检验
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三. 临床意义
新生儿眼炎-葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌…… 结膜炎-细菌、病毒、衣原体、葡萄球菌、链球菌….. 角膜炎-金黄色葡萄球菌……
五官科标本检验
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一.耳及乳突标本采集
直接镜检 离心沉淀涂片革兰染色 淋球菌镜检 假丝酵母镜检 结核分枝杆菌镜检
尿液标本检验4来自检测方法和报告分离培养 普通培养 淋球菌培养 厌氧菌培养 真菌培养
尿液标本检验
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检测方法和报告
• 菌落计数
倾注平皿法： 尿液稀释成1：10、1：100、1： 1000，取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同 时加入已熔化并冷至50℃的培养基与尿混合，待 凝固后置35 ℃培养 。
12
常见标本的采集及相应标本的微生物分布情况
生殖道标本采集
注意事项 生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格
遵循无菌操作以减少杂菌污染
生殖道标本采集
粪便标本采集及常见病原菌
采集方法
1、自然排便采集法：自然排便后，挑取有脓血 或粘液部位的粪便，液状粪便取絮状物盛于 无菌容器中及时送检
2、直肠拭子采集法：适用于排便困难患者或婴 幼儿。用肥皂水清洗肝门周围，用无菌盐水、 保存液润湿肝门采集拭子插入肝门（成人约 4~5cm,婴幼儿约2~3cm）轻轻旋转，采集后 及时送检
标本采集的一般原则
早期采集 采集标本最好是在病程早期、急性
期，且必须在使用抗菌素药物之前
严格无菌操作 尽量减少或避免与病灶周围正常
菌群和外源性细菌污染标本（如中段尿标本及阴道 分泌物的采集）
采集适量标本 标本量过少可能导致假阴性结果 盛放标本容器 无菌容器
血液及骨髓标本采集及常见病原菌
2、闭锁性脓肿：闭锁性脓肿标本指有完整脓壁 与体腔，与外界不相通的脓肿，如淋巴结脓 肿、乳腺脓肿、胸腔脓肿、腹腔积液、关节 腔积液及各器官脓肿等标本。之类标本应采 集渗出物和脓肿壁标本，一般不主张用拭子 采集标本，采集此类标本前应对病灶局部皮 肤或粘膜表面进行消毒，用无菌注射器将脓 肿内容物抽出，然后切开脓肿、引流，采集 脓液标本（大于1ml）送检。
3、如标本注入无菌试管时，试管应用先加入灭菌肝 素后在注入标本，防止标本凝固；另一方面是由于 标本在接种时发生二次污染的机会较大，本人建议 少用。
穿刺液标本采集及常见病原菌
注意事项 1、标本采集过程严格无菌操作，防止污染。 2、为了防止标本凝固，最好在无菌试管中预先
加入灭菌肝素抗凝剂，抗凝剂：标本=1：10 或可以直接注入血培养瓶送检 3、标本送检过程中必须保证其安全，防止溢出， 避免环境污染。 4、此类培养时最好同时做血培养
临床微生物学检验理论课：03常见类型标本病原体检测
导管相关性血流感染不保留导管
从独立的外周静脉无菌采集2套血培养， 无菌状态下取出导管并剪下5cm导管尖端或近心
端，进行Maki半定量平板滚动培养或者定量培养。
采血后在2h内送到检验科，立即放入血液培养仪，自动培养 并实时检测。如不能及时运送，则室温保存，不要放冰箱， 以免嗜血杆菌、奈瑟菌、链球菌冻死。
洋葱伯克霍尔德菌
6% 8%
9%
嗜麦芽寡养单胞菌 近平滑念珠菌
腐生葡萄球菌
白色念珠菌
热带念珠菌
产酸克雷伯菌
血液标本分离菌株种类及构成嗜 液水 化比气 沙单 雷%胞 菌菌
无乳链球菌
二、尿液标本病原菌检验
目的和意义
检测泌尿系统感染； 一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏； 离心后对沉渣涂片检查，革兰染色或抗酸染色； 也可用于淋球菌培养和涂片检查。
为细菌提供生长中心，提高生长 速度，提高检出率，一个BACTEC 血培养瓶的树脂作用表面积=5个 标准足球场的面积。
厌氧瓶，提高兼性厌氧菌检出率 帽子和标签纸左上方为黄色， “Standard Anaerobic/F”， 血液量3-10ml，8-10ml最佳， 不仅用于厌氧菌培养，由于营
养丰富，还可以大大提高兼性 厌氧菌的检出率； 穿刺液或中段尿等厌氧菌培养 也可用厌氧血培养瓶。
厌氧瓶提高血培养阳性率20%以上
7072份标本，同时需氧瓶和厌氧瓶血培养； 640份阳性，阳性率9%； 需氧瓶和厌氧瓶同时阳性，352份，占55%； 仅需氧瓶阳性，而厌氧瓶阴性，166份，占26%； 如仅用单瓶需氧瓶，阳性合计，518份，占81%； 仅厌氧瓶阳性，而需氧瓶阴性，122份，占19%； 所以强调每次采血“双瓶”（需氧瓶和厌氧瓶）。
为避免皮肤污染，采集时须严格消毒
临床常见微生物标本采集手册
规范化标本采集是微生物检验分析前质量控制的重要内容微生物标本采集的基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.收集真正感染的病灶处之样本，且不受邻近区域微生物的污染；3.收集样本时应执行严格的无菌操作技术，将污染情形降至最低；4.尽量在抗菌药物使用前采集标本5.采样后立即送检以保持微生物的生物活性，床旁接种可提高病原菌检出率6.使用无菌、密闭容器，但不得含有消毒剂、防腐剂7.送检标本应注明来源和检验目的一、血培养标本的采集1.血培养的临床指征：患者出现以下一种或同时具备几种临床表现时可作为血培养的重要指征：①发热（≥38 ℃）或低温（≤36 ℃），以间歇驰张型多见，革兰阴性杆菌，如大肠埃希菌引起的感染可见双峰热；②寒战；③白细胞增多（>10.0×109/ L，特别是有“核左移”时）；④粒细胞减少（<1.0 ×109/ L）；⑤血小板减少；⑥皮肤、黏膜出血，常见于溶血性链球菌感染的菌血症，伤寒病人第4-10天可出现玫瑰疹，斑疹伤寒第4-6天可出现暗红色斑丘血疹；⑦昏迷；⑧多器官衰竭；⑨血压降低；⑩呼吸加快（呼吸率>20/分或CO2分压<32mmHg）；以及肝脾肿大；关节疼痛；C反应蛋白、内毒素、降钙素原升高等；2.血培养的采集时间①对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。
②研究表明细菌通常在寒战或发热前1h入血，此时为采血的最佳时机。
③发热后细菌很快会从血液中清除，超过发热峰值后，病原菌的检出率会随之降低。
3.血培养的采集部位①对怀疑菌血症、真菌血症的患者，应同时或短时间间隔（10分钟内）从不同部位（如双臂）采集2～3套血培养标本，做到“双瓶双侧”。
②推荐从外周静脉采集血液标本。
③不推荐动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大。
④不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。
如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以助于对比和结果解释。
初级检验士考试(微生物学检验)讲义第二十九章临床标本微生物检验概述
临床标本微生物检验概述● 考点临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤）（1）常见病原菌（2）标本采集及运送（3）检验方法（4）临床意义一、临床标本细菌检验的基本程序二、血液感染◆正常人的血液是无菌的。
◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。
◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。
◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。
（一）常见病原菌（二）标本采集1.采血时间和频率◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。
但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。
2.采血量◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。
3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。
4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。
（三）微生物分离培养和鉴定1.培养基的选择◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。
2.分离和鉴定当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。
（四）报告方式阴性结果：◆7d报告无细菌生长。
◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
阳性结果——三级报告方式：◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。
（五）临床意义◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。
临床常见标本的微生物检验ppt课件
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
临床微生物学检验技术
二、染色标本
· 细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、 排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因 此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起 着非常重要的作用。
· （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 · （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、
荧光染色。
革兰染色
三、生化反应
（一）碳水化合物的代谢试验 1.糖（醇、苷）类发酵试验
原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶， 因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分 解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌 对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力， 可用以鉴定细菌种类。
方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中， 35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示 剂，立即观察结果。
结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔 红色为弱阳性。
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠 埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠 杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌 属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
3
革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结
晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革
兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形
成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
2. 染色方法
1 标本涂片、干燥和固定。 2 染色：在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴， 室温作用1min，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。再滴 加碘液数滴，室温作用1min，冲洗。滴加95%酒精数滴， 轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片， 使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的 酒精无色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。 再滴加稀释石炭酸复红液复染约30s后用细流水冲洗。 3 标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后 用油镜观察。
常见临床标本的微生物检验程序
常见临床标本的微生物检验程序摘要：目的：探讨常见临床标本的微生物检验程序。
方法：以白色念珠菌为例，建立白色念珠菌临床标本的检验方法与检验程序。
结果：白色念珠菌在沙氏葡萄糖培养基中，35℃时生长状态较好；显色培养基上25℃时生长较慢，菌落为乳白色，35℃时生长良好，菌落为浅绿色；在吐温80-玉米粉培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基上生长较为缓慢。
白色念珠菌蔗糖发酵试验阴性，葡萄糖、麦芽糖发酵试验阳性，尿素分解试验阴性。
结论：尽管各微生物的生化特性千差万别，但对其进行的检验程序大致是相同的，都必须进行标本分离、菌种鉴定、药敏试验三个步骤。
关键词：临床标本白色念珠菌微生物检验程序【中图分类号】r4【文献标识码】a【文章编号】1008-1879（2012）10-0006-01临床微生物检验程序主要包括三个步骤，即标本分离、菌种鉴定、药敏试验，其中，菌种鉴定过程的速度是决定微生物检验过程快慢的决定因素1。
建立合理的微生物检验方法与检验程序对提高检验结果的准确性与检验速度具有重要的作用。
白色念珠菌是临床标本中常见的酵母样真菌。
本文以白色念珠菌为例，探讨常见临床标本的微生物检验程序。
1材料与方法1.1材料。
菌株为白色念珠菌标准株（atcc 10231）、热带念珠菌。
培养基有沙氏葡萄糖琼脂/液体培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基、乳糖/蔗糖/麦芽糖/葡萄糖发酵培养基、血培养基、吐温80-玉米粉培养基。
1.2方法。
首先制备菌液，挑取斜面培养基培养的新鲜培养物接种至液体沙氏葡萄糖培养基中，置于25℃培养24或48小时后，将菌液稀释成30～100cfu/ml。
取1ml菌液分别置于沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基和吐温80-玉米粉培养基，在不同的温度25℃、35℃、38℃下，培养1、2、3、4、5天后，计数活菌数并进行比较。
挑取沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基和吐温80-玉米粉培养基中的菌落接种于显示培养基中，于25℃培养24小时后，观察显色情况并用显微镜观察菌落形态。
临床微生物标本规范化采集和送检
规范血培养的标本采集
血标本采集方法
（一）静脉血标本（最常用） （二）动脉血标本(血气分析) （三）毛细血管标本（血常规）
静脉血标本分类及目的
全血标本
血清标本 血培养标本
血沉、血常规、
凝血机制检测等
血清酶、脂类、 电解质、肝功能
血中的致病 菌
注意事项
（1）严禁在输液、输血的针头处 抽取标本，以免影响检验结果。 （最好在对侧采集）
血培养标本采集与送检要求—２
血培养标本采集的数量：
研究结果 ➢一套血培养的阳性率为65％ ➢二套血培养的阳性率为80％ ➢三套血培养的阳性率为96％
1套血培养定义：从一个静脉穿刺部位或静脉导管 所获血液的培养，不论被接种在1个还是多个血培 养瓶内只能算是1套
血培养标本采集与送检要求--3
1. 留置深静脉导管且怀疑导管相 关血流感染：
b. 男性：先用肥皂水清洗尿道口，后用清水 冲洗，留取中段尿
c. 儿童、婴儿：先以无菌生理盐水清洗外阴 部或外生殖器，将无菌试管对准尿道口， 待尿排出后送检
采集方法
➢ 中段尿采集方法 （最常用） ➢ 集尿法 结核分枝杆菌检查时，可用一清洁容器，
留24小时尿取其沉渣10-15ml送检 ➢ 未留置导尿管的患者：导尿法 ➢ 留置导尿管的患者：应在导尿管远端接口处用无菌
注射器抽取尿液。 ➢ 肾盂尿采集法 ➢ 膀胱穿刺采集法
中段尿采集方法
a. 女性：成年女性外阴部先以肥皂水清洗， 再以无菌水冲洗，然后排尿弃去前段尿， 留取中段尿10ml左右于无菌试管内送检
菌操作同时采集2套血培养。 （2）当任何部位感染怀疑合并菌血症时，在抗菌药物使用
前从不同外周静脉穿刺部位同时采集2套血培养。 （3）对不明原因的发热、亚急性心内膜炎，建议抽取3套
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临床常见标本微生物检验
双相培养瓶
临床常见标本微生物检验
二.导管相关性血流感染的标本培养
➢ 导管相关性血流感染：
➢ 最常见的为血管内导管相关性血流感染（CRBSI），发生率与导管种 类、导管相关医疗操作的频率、患者病情等因素有关。
在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，
很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。
对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之 前，应及时采集血培养。
骨髓炎或长期使用临抗床常见菌标本微药生物检物验 者骨髓培养阳性率高于 血培养。
（二）血培养检测消毒程序
1.皮肤消毒程序：严格执行三步法（防止皮肤寄生菌污染） （1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上； （2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒， 从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上； （3）最后用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。 新生儿及对碘过敏的患者，只能用75%酒精消毒60s， 待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。
➢ （2）血液感染有原发性和继发性之分，多次采血培养有助 于循环外感染部位的诊断；
➢ （3）菌血症患者多数为间歇性，病原菌周期性出现在血液 中，在无菌时期不管临床症状经历的严重程度，患者血液 中的病原菌浓度水平相当低，因此要求多次采血，但24h 内一般不超过3次。
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4.采血量 要求： 成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每
3.采集次数 要求：
对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐 同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
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为什么要求多次采血？
➢ （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可提高 阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果 相同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
（三）血培养标本采集和运送 1.采集时间
患者出现寒战、体温升高前； 使用抗菌药物前； 患者已使用抗菌药物的情况下，若出现明显的发热前期症状，可在 寒战前或寒战后1h内采血；若无明显的寒战阶段，应在第二次服抗菌药 物前采血； 对于无明显感染病灶或未找到发热原因的发热患者，先在不同部位 采集2-3份血标本，间隔大于或等于1h，24h-36h后再次采集2份以上； 疑似沙门菌感染的患者在病程第1-2周采集静脉血；
2.培养瓶消毒程序： （1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。 （2）用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面剩余的酒 精，然后注入血液。
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。 无论采用何种采血方法，血培养可接受的污染率
通常是≤3%。 1.严格无菌操作，避免被体表或腔道正常菌群污染； 2.不要和血气、血沉的取血同时进行； 3.穿刺点消毒不使用低效消毒剂，切勿在静滴的静脉
建议 ：
同时采集2-3瓶（不同部位）； 需氧菌、厌氧菌各一份，采集后同时送检； 在采血后的2-5天无需重复采血培养；
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2.采集部位 要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。至 少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做第三套血 培养。
不建议采集
（1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大； （2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。
临床常见标本的微生物学检验
临床常见标本微生物检验
主要内容
➢ 1.临床常见标本的微生物检验
一、血、骨髓、静脉导管标本 二、痰及下呼吸道标本 三、尿液标本 四、大便标本 五、生殖道系统标本 六、化脓和创伤标本 七、穿刺液标本 八、眼、耳、鼻、咽拭子标本 九、组织标本
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一、血、骨髓、侧”，是指从一个部位采血接种一套 培养瓶，再从另一部位采血接种另一套培养瓶。 （通常是双臂）
✓ 所谓“双侧双瓶”，是指从一个部位采血接种一个 需氧瓶，再从另一部位采血接种另一个厌氧瓶。
✓ 一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血 培养。
临床常见标本微生物检验
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5.血培养标本的运送 要求：（1）采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实
验室。 （2）血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏
和冷冻。
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血液标本的处理
➢ 1.自动化血培养系统： ➢ 立即放入仪器内，直到仪器报警提示阳性瓶后进行下一步操作。 ➢ 2.传统血培养瓶： ➢ 放入35 ℃温箱孵育，每日观察，若有生长情况立即转种，若第7天仍
瓶不少于5ml。 婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于2ml。
说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人
血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正 比例增长。每增加1ml的血液，病原菌的检出率增加3.2%。 儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于 成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿 童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。
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（一）血培养检测采血指征
临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的 患者
1. 发热（≥38℃）或低温（≤36℃） 2. 寒战 3. 白细胞增多（>10×109/L，特别有“核左移”未成熟的或杆 状核白细胞增多） 4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×109/L） 5. 血小板减少 6．皮肤粘膜出血 7．昏迷，休克、多器官衰竭 8 CRP升高
处取血； 4.不宜从静脉导管或静脉留置口取血，若从该部位取
血，应在申请单上注明；最好同时静脉取血，以求 进行比对； 5.不推荐静脉血直接入瓶，以免血量控制不好或对患 者不利； 6.不主张换针头入瓶，以免增加污染的机会。 7.采血前把血培养瓶从冰箱拿出后，待恢复至室温后 采集，采集后切勿放回冰箱。
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