生化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二：萌发麦苗淀粉酶活性的测定一、实验目的本实验旨在测定萌发麦苗中淀粉酶的活性，了解其在萌发过程中的变化规律，为进一步研究萌发麦苗的生理生化特性提供参考。
二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉为葡萄糖的酶，其在萌发麦苗中发挥着重要的作用。
本实验采用碘化钾法测定淀粉酶的活性，通过测定反应液在一定时间内生成碘化钾的量，计算出淀粉酶的活性。
三、实验步骤1.准备实验材料：选取健康萌发的小麦种子，用蒸馏水冲洗干净，放入无菌培养皿中，加入适量蒸馏水，于25℃恒温培养箱中培养。
每天观察种子的萌发情况，适时补充水分。
2.制备样品：从培养箱中取出一定量的萌发麦苗，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分。
称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，放入研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转入离心管中，于4℃下离心10分钟（转速为10000 r/min），收集上清液备用。
3.测定淀粉酶活性：取两个试管，分别加入1.0 mL 0.5%的可溶性淀粉溶液和1.0 mL 0.02 M的磷酸缓冲液（pH 6.9），摇匀。
再分别加入1.0 mL上清液和1.0 mL 0.5 M的氢氧化钠溶液，混匀。
将试管置于40℃恒温水浴中保温10分钟。
取出试管，加入1.0 mL 0.5 M的硫酸溶液终止反应。
最后加入2.0 mL碘化钾溶液，摇匀后静置1分钟，用紫外分光光度计在660 nm波长下测定吸光度。
4.计算淀粉酶活性：根据实验结果，计算淀粉酶的活性。
公式如下：淀粉酶活性（U/gprot）= (ΔA660 × V × t) / (W × 1000 × 0.01 × ΔT)其中，ΔA660为吸光度变化值，V为反应体系总体积（mL），t为反应时间（min），W为样品质量（g），ΔT为温度差（℃）。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录实验过程中各步骤的数据，包括种子萌发情况、样品制备过程中的质量变化、淀粉酶活性测定中的吸光度变化等。
生化实验淀粉的实验报告
一、实验目的1. 学习淀粉的提取和鉴定方法。
2. 掌握淀粉酶的活性测定方法。
3. 了解淀粉在生物体内的作用。
二、实验原理1. 淀粉是一种由葡萄糖分子组成的多糖，广泛存在于植物中，是植物储存能量的主要形式。
2. 淀粉酶是一种能够催化淀粉水解的酶，根据其作用方式可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶。
3. 淀粉酶活性可以通过测定在一定时间内淀粉水解的量来衡量。
三、实验材料与仪器1. 材料：马铃薯、淀粉酶、碘液、蒸馏水、盐酸、氢氧化钠、酚酞指示剂等。
2. 仪器：天平、烧杯、试管、滴管、移液管、恒温水浴锅、分光光度计等。
四、实验步骤1. 淀粉的提取（1）称取一定量的马铃薯，去皮，切成小块。
（2）将马铃薯块放入烧杯中，加入适量的蒸馏水，用研钵捣碎。
（3）将捣碎后的马铃薯浆液过滤，收集滤液。
（4）向滤液中加入适量的盐酸，调节pH值为4.5。
（5）将调好pH值的滤液加热至60℃，保持30分钟。
（6）将加热后的滤液冷却，用蒸馏水定容至100mL。
2. 淀粉的鉴定（1）取少量提取的淀粉溶液，加入碘液，观察颜色变化。
（2）将淀粉溶液滴在载玻片上，用显微镜观察淀粉颗粒的形态。
3. 淀粉酶的活性测定（1）取一定量的淀粉酶溶液，加入适量的淀粉溶液，混合均匀。
（2）将混合液置于恒温水浴锅中，设定温度为37℃。
（3）每隔一定时间，取出少量混合液，加入碘液，观察颜色变化。
（4）根据颜色变化，计算出淀粉酶的活性。
五、实验结果与分析1. 淀粉的鉴定：提取的淀粉溶液加入碘液后，溶液呈蓝色，证明提取的淀粉成功。
2. 淀粉酶的活性测定：根据颜色变化，计算出淀粉酶的活性为X单位。
六、实验讨论1. 淀粉的提取过程中，盐酸的作用是调节pH值，使淀粉酶活性适宜。
2. 淀粉酶的活性受温度、pH值等因素的影响，本实验中选取了适宜的温度和pH值进行测定。
3. 实验过程中，要注意操作规范，避免误差的产生。
七、实验总结通过本次实验，我们学习了淀粉的提取和鉴定方法，掌握了淀粉酶的活性测定方法，了解了淀粉在生物体内的作用。
酶的生化实验报告
实验名称：酶的催化活性及其影响因素实验日期：2023年X月X日实验目的：1. 了解酶的催化作用及其特性。
2. 探究温度、pH值、抑制剂对酶活性的影响。
3. 比较不同酶的催化效率。
实验原理：酶是一种生物催化剂，能够显著提高化学反应速率，而自身的化学性质和数量在反应过程中不发生变化。
本实验通过观察不同条件下酶的催化活性，探究影响酶活性的因素。
实验材料：1. 酶制剂：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
2. 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
3. pH缓冲液：pH 3、5、7、9、11。
4. 温度控制装置：恒温水浴箱。
5. 抑制剂：氟化钠、碘化物等。
实验方法：1. 酶活性测定：采用比色法，通过测量底物消耗量或产物生成量来判断酶的催化活性。
2. 温度对酶活性的影响：在pH 7条件下，分别在不同温度（0℃、25℃、37℃、50℃、75℃）下测定酶活性。
3. pH值对酶活性的影响：在25℃条件下，分别在不同pH值下测定酶活性。
4. 抑制剂对酶活性的影响：在25℃、pH 7条件下，分别加入不同浓度的抑制剂测定酶活性。
5. 不同酶的催化效率比较：在相同条件下，分别测定淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶的催化活性。
实验步骤：1. 准备实验材料，包括酶制剂、底物、pH缓冲液、温度控制装置、抑制剂等。
2. 设置实验条件，包括温度、pH值、抑制剂浓度等。
3. 按照实验步骤进行酶活性测定，记录实验数据。
4. 分析实验数据，绘制酶活性与温度、pH值、抑制剂浓度的关系曲线。
5. 比较不同酶的催化效率。
实验结果：1. 温度对酶活性的影响：酶活性随温度升高而增加，在适宜温度范围内达到最大值，过高或过低的温度会导致酶活性下降。
2. pH值对酶活性的影响：酶活性随pH值变化而变化，在适宜pH值范围内达到最大值，过高或过低的pH值会导致酶活性下降。
3. 抑制剂对酶活性的影响：抑制剂浓度增加，酶活性下降，在一定范围内呈负相关。
4. 不同酶的催化效率比较：淀粉酶的催化效率最高，其次是蛋白酶，脂肪酶的催化效率最低。
实验二 萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定一．研究背景及目的1.即便是同一种酶，在体外测定酶活性时在不同的测定方法和不同的材料、时期中，实验测定的具体细节设计却大不相同，体外酶活性的测定实验在生化实验中更是经典的实验案例。
本次实验是淀粉酶活性的测定，通过实验进一步体会实验的细节设计。
2.利用酶促反应测定萌发的小麦种子种淀粉酶的活力以及水溶性蛋白质的含量。
二．原理1.淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总成，可以分成α-淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种。
实验中测定萌发的小麦种子的酶活力，因为材料中两种酶都含有，所以要采取一定方法分别测定两种酶活性。
利用两种酶不同的特性，α-淀粉酶不耐酸，pH3.6以下钝化，而β-淀粉酶则不耐高温，高温下易钝化，将β-淀粉酶钝化测得α-淀粉酶活性，再测总酶活性，相减即得到β-淀粉酶活性。
（C6H10O5）n + 0.5nH2O 淀粉酶，40℃0.5nC12H22O11C12H22O11 + 3,5-二硝基水杨酸3-氨基-5-硝基水杨酸淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
2.利用Folin-酚法测定萌发小麦种子中水溶性蛋白的含量。
在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
[1]三．仪器与试剂1.仪器：离心机（飞鸽牌系列离心机，TDL-40B），722-型分光光度仪（上海分析仪器总厂），DK-SR四型电热恒温水浴锅（上海精密实验设备有限公司），双列八孔电热恒温水浴锅（天津市中环实验电炉有限公司），冰浴微量可调手动移液器（大龙牌），研钵，容量瓶天平（上海精密科学仪器邮箱公司，双杰牌JP-100架盘药物天平）2．试剂萌发的小麦种子，3，5—二硝基水杨酸溶液，1%淀粉溶液，柠檬酸缓冲液0.4MNaOH溶液，麦芽糖标准液,A液，B液，试剂甲，试剂乙四．操作步骤1.制备酶液：2g萌发小麦种子研磨，用蒸馏水浸提，稀释成50ml，一部分3500转/分离心20min，取上清液备用，另一部分过滤，取滤液备用。
3_唾液淀粉酶活性的观察
11
四、操作步骤
3. 酶反应的特异性 取2支试管，按下表编号后进行实验。
试剂
1
0.5% 淀粉
2
0.5% 蔗糖
—
稀释唾液
1
单位：mL
2 — 2 1
12
将各管摇匀后，一起放入37℃水浴中保温10min。 取出试管，分别加入斑氏试剂 1 mL，混匀。 将各管置于沸水浴中煮沸2-5 min。观察并解释结果。
酶活性的测定方法：1）定底物 2）定时间
影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH, 激活剂和抑制剂 等都会影响 酶的催化活性。
3
二、实验原理
pH值的影响: 能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适
pH。
温度的影响: 在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速
度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高
淀粉酶
淀粉酶
淀粉——————→糊精—————→ 麦芽糖+少量葡萄糖
加碘后；（兰色） （紫红色、暗褐色或红色等） （棕黄色，碘本身颜色）
5
实验原理
影响酶活性的因素
1）温度 2）pH 3）激活剂和抑制剂
酶的特性（专一性）
还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理
C6H12O6 + 2Cu(OH)2
值日：5-6组
麦芽糖分子结构（葡萄糖α-1,4-葡萄糖苷）
三、试剂及器材
1. 试剂
• （1）0.5% (w/v) 淀粉溶液 • （2）稀碘溶液 • （3）不同pH缓冲液 (pH5.0 、6.8、8.0) • （4）1% (w/v) NaCl溶液 • （5）1% (w/v) CuSO4溶液
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇An experimental report on salivary amylase activity唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。
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本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1：唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2、篇章2：唾液淀粉酶活性的测定文档3、篇章3：淀粉酶活性测定实验报告文档篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性；2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催化作用，但其效率远低于酶。
2.酶的活性受温度的影响。
在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。
当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。
3.酶的活性受PH值的影响。
酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。
4.酶活性常受到某些物质的影响。
有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。
5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化：淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色三、试剂与器材篇章2:唾液淀粉酶活性的测定文档【按住Ctrl键点此返回目录】影响唾液淀粉酶活性的研究摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文.doc
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文篇一：唾液淀粉酶活性观察实验报告2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性；2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催化作用，但其效率远低于酶。
2.酶的活性受温度的影响。
在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。
当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。
3.酶的活性受PH值的影响。
酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。
4.酶活性常受到某些物质的影响。
有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。
5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化：淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色三、试剂与器材篇二：唾液淀粉酶活性的测定影响唾液淀粉酶活性的研究摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。
关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性2影响唾液淀粉酶的活性的因素（一）实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
（二）实验原理人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。
在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下：淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
生化实验04-淀粉酶活性的测定
管号 Ⅱ-1
0
Ⅱ-2 0
置70。C水浴中15min，取出后流水冷却 0 0 1.0 2.0 1.0 0
40。C恒温水浴中保温10min 1.0 1.0 1.0 1.0
40。C恒温水浴中保温5min 2.0 0 2.0
摇匀，沸水浴中5min，取出流水冷却，加蒸馏水至20mL。 摇匀，540nm比色测定。
七、分析讨论
注意事项： 1、三个水浴温度的不同，不能混淆。
2、实验步骤较复杂，理解之后动手操作。
四、实验步骤
1、麦芽糖标准曲线的制作 A540=0.264x-0.052 (x为mg麦芽糖） 2、酶液制备
称取1g萌发的小麦种子 加少量蒸馏水 研磨 转入100 mL容量瓶 定容 放置15min 过滤 淀粉酶原液（酶液Ⅰ） 取酶液Ⅰ 10 mL于50 mL容量瓶，用蒸馏水定容 至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液（净的具塞刻度试管，编号，按下表操作：
操作项目
Ⅰ-1 淀粉酶原液（酶液Ⅰ）/mL 钝化β-淀粉酶 淀粉酶稀释液（酶液Ⅱ）/mL 3，5-二硝基水杨酸/ mL 预保温 1%淀粉溶液/ mL（ 40。C ） 保温 3，5-二硝基水杨酸/ mL 0 0 2.0 1.0 Ⅰ-2 1.0
空白管：
2 mL蒸馏水 + 2 mL3，5-二硝基水杨酸，沸水浴 5min，定容至20 mL
五、实验数据
VT= AⅠ-1= AⅡ-1= VS = AⅠ-2 = AⅡ-2 = W= △A1 = AⅠ-2 - AⅠ-1 △A2 = AⅡ-2 - AⅡ-1 x1= x2=
六、结果计算
X1 × VT α-淀粉酶活力[mg/(g.min)]= W ×VS ×t X2 × VT × N (α+β )-淀粉酶活力[mg/(g.min)]= W ×VS ×t β -淀粉酶活力=(α+β )-淀粉酶活力- α-淀粉酶活力
淀粉酶
首页> 实验> 植物实验> 淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定2005-12-05 00:00:00 来源：评论：0一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端…一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。
淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。
几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，主要是α－和β－淀粉酶酶不。
Α－淀粉耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。
根据它们的这种特性，在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。
本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；4.具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶。
（三）试剂（均为分析纯）：1. 标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2. 3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
生化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告
⽣化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告实验⼆：酶活⼒测定⽅法的研究⼀．研究背景及⽬的酶是⾼效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋⽩，⼏乎所有的⽣化反应都离不开酶的催化，所以酶在⽣物体内扮演着极其重要的⾓⾊，因此对酶的研究有着⾮常重要的意义。
酶的活⼒是酶的重要参数，反映的是酶的催化能⼒，因此测定酶活⼒是研究酶的基础。
酶活⼒由酶活⼒单位表征，通过计算适宜条件下⼀定时间内⼀定量的酶催化⽣成产物的量得到。
本实验选取萌发的⽲⾕类种⼦为材料，通过对其所含两种淀粉酶活⼒的测定来研究酶活⼒测定的⽅法。
⼆．实验原理萌发的种⼦中存在两种淀粉酶，分别是α淀粉酶和β淀粉酶，β淀粉酶不耐热，在⾼温下易钝化，⽽α淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发⽣钝化[1]。
本实验的设计利⽤β淀粉酶不耐热的特性，在⾼温下（70℃）下处理使得β淀粉酶钝化⽽测定α淀粉酶的酶活性[1]。
酶活性的测定是通过测定⼀定量的酶在⼀定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，麦芽糖的浓度利⽤⽐⾊法可以很容易测得。
然后利⽤同样的原理测得两种淀粉酶的总活性，拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性，再做进⼀步分析。
实验中为了消除⾮酶促反应引起的麦芽糖的⽣成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
三．材料、试剂与仪器材料：萌发的⼩麦种⼦试剂：①1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加⼊80ml蒸馏⽔，加热熔解，冷却后定容⾄100ml）；②pH5.6的柠檬缓冲液：A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容⾄1L）B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容⾄1L）取A液5.5ml、B液14.5ml 混匀即可；③3，5-⼆硝基⽔杨酸溶液（称取3，5-⼆硝基⽔杨酸1.00克，溶于20ml 1M 氢氧化钠中，加⼊50ml蒸馏⽔，再加⼊30克酒⽯酸钠，待溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100ml，盖紧瓶盖保存）；④麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馏⽔中，⼩⼼移⼊100ml 容量瓶中定容）；⑤0.4M NaOH仪器：722光栅分光光度计(编号990695)DK-S24型电热恒温⽔浴锅(编号L-304056)离⼼机(TDL-40B) 配平天平药物天平电热锅100ml容量瓶50ml容量瓶移液管试管研钵烧杯洗瓶四．实验⽅法本实验按照下列表格的中的操作步骤进⾏：五．数据整理上表中前4⾏数据为实验的原始数据。
生化实验课件-尿液淀粉酶活力测定
三.操作步驟
1. 尿液等梯度稀釋
取8支試管，按次序記上號碼，各加0.9% NaCl 1 mL。 用1mL移液管加尿液1mL於第一管，使其與0.9%NaC1混合
1mL 尿液 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
4.顯色
各管中加稀碘液2滴
搖勻。觀察各管的顏色
四.實驗結果與分析
1.酶活力單位的計算：
選擇無色管中尿液稀釋倍數最大的一管來計算。假設第5管為無色 （從第6管起仍有紅色或藍色）。已知第5管內含尿液為1/32mL。 即1/32mL尿液能在37℃，30分鐘水解0.1%澱粉1 mL。所以，1 mL尿液在同樣條件下可水解0.1%澱粉32 mL。即每1 mL尿液中 所含澱粉酶的活性為32個活力單位。
棄之
1mLNaCl 稀釋度 1/2 1/4 1/8 1/32 1/64 1/128 1/256 對照
從第1管吸出1mL到第2管中，再從第2管吸出1mL到第3管……依次類推。 第7管吸出1mL棄之。可得分別含有尿液1/2、1/4，1/8…1/256 mL的 不同濃度的尿稀釋液，第8管不加尿液作為對照管。
2.對實驗結果進行分析
五.實驗注意事項
1.尿液取樣要準確 2.稀釋時取樣要準確 3.移液管反復沖洗 4.Fra bibliotek液不能加的太多
附：試劑與器材
1.0.9%NaC1； 2.0.1%澱粉； 3.碘化鉀一碘溶液（20gKI和10g碘溶於100mL水中，使用前稀釋10倍） 4.移液管； 5.試管； 6.恒溫水浴鍋。
2.加底物
各管加入0.1%澱粉液1mL
测定α-淀粉酶活力方法
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH 值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、M曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。
测定α-淀粉酶活力的方法
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
For personal use only in study and research; not for commercial use能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
酶 生化试验报告
生物大分子·酶——相关生化实验报告小组成员：王书洋张斌贾官斐杨翀左天宇单位：武警后勤学院临床医学系四队四班邮编：300162关键词淀粉酶; 活性; 温度; 抑制剂; 激活剂; 专一性【前言】目前临床主要以检测指标作为依据对疾病的诊断作出较为准确的判断。
其中，酶学上的应用占了相当一部分。
所以，从临床疾病诊断以及治疗的角度去对酶学知识的具体化了解和应用深化是十分有必要的。
酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化。
因此，一切对蛋白质活性有影响的因素都影响酶的活性。
酶与底物作用的活性，受温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响。
对酶活性的测定对临床诊断以及基础医学的研究都有着重要意义。
很多酶其实包含几种具有同样催化效用的蛋白质，但它们的分子组成、理化性质与免疫学特性却有明显差异，这类蛋白质统称为该酶的同工酶。
同工酶在组织和器官中的分布不同，通过测定不同同工酶的含量与活性的变化，可以推算出改组织和器官的变化。
本综述旨在对后文的三次实验作为基础医学和临床医学的一次应用上的联系。
实验一影响酶促反应速度的因素【实验原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。
淀粉溶液与碘反应呈蓝色；糊精根据分子大小，与碘反应分别呈蓝、紫、红、无色等不同的颜色；麦芽糖不与碘呈色。
唾液淀粉酶的活性受温度、酸碱度、抑制剂与激活剂等的影响。
温度：温度降低，酶促反应减弱或停止；温度升高，反应速度加快。
当上升至某一温度时，酶促反应速度达最大值，此温度称为酶的最适温度。
由于酶的化学本质是蛋白质，温度过高会导致蛋白质构象的改变，因此如果温度继续升高，反应速度反而会迅速下降甚至完全丧失。
酸碱度：唾液淀粉酶最适pH为pH6.9，高于或低于酶的最适pH值，都将引起酶活性的降低，过酸或过碱的反应条件可使酶活性丧失。
抑制剂与激活剂：酶的活性常受某些物质的影响，能增加酶的活性称为酶的激活剂：降低酶活性且不使酶蛋白变性的称为酶的抑制剂。
生化实验04-淀粉酶活性的测定
生化实验04-淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定是一种重要的生物化学检测，其基本原理是用淀粉作为底物，利用酶介导的过程，将淀粉水解成低聚糖，并通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测定反应，形成羟基苯并联二肽，从而可以准确测定淀粉酶活性。
该检测方法的特别之处在于无需半乳糖基转化，能直接检测细胞内活性淀粉酶。
本实验采用淀粉酶活性的测定来反映样品内活性淀粉酶的含量和性质。
实验原理淀粉酶活性的测定主要是利用酶促反应，将淀粉水解成支链水解物，此过程会改变样品中反应物的形态和特性，从而通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测得淀粉酶的活性。
该反应是将样品与Folin－Ciocalteu反应液混合，使反应液中的苯二酚与水解后的淀粉低聚糖发生反应，形成羟基苯并联二肽，这些二肽经过光度测定能独立出来，最后得到淀粉酶活性的测定结果。
实验步骤1. 准备试剂a) 苯二酚 Folin-Ciocalteu反应液：将250毫升2.5mol/L碳酸钠溶液加入50毫升10mol/L硫酸钠溶液，搅混，然后加入90毫升1mol/L硫酸钾溶液，苯二酚Folin-Ciocalteu反应液准备完毕。
b) 反应系统：放入1.0 ml淀粉溶液，0.2 ml苯二酚Folin-Ciocalteu反应液，0.8 ml缓冲液，搅拌均匀即可。
2.淀粉酶活性的测定:a) 将反应系统中放入多余的样品添加到实验管中，转移到光度仪中进行测定，观察测定结果。
b) 计算淀粉酶活性指数：以质量发射率550nm处的发射峰值为参考标准，按照公式计算淀粉酶活性指数。
应用淀粉酶活性的测定在非植物细胞（如固氮细菌、氨基酸分解的细菌）中也广泛应用。
淀粉水解系统有助于研究和控制细胞内的淀粉合成与消耗，从而洞察活动的工程机制，帮助揭示物质的重要功能以及研究物质之间的相互作用。
由于其易处理，快速，稳定，准确，淀粉酶活性测定技术，广泛应用于药物研究和药物质量控制，生物燃料，环境污染检测，食品检测，生物技术，等等。
影响淀粉酶活性的因素的实验报告
影响淀粉酶活性的因素的实验报告实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1. 了解酶的专一性。
2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。
二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。
酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。
酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。
根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。
2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。
如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。
如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。
3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。
如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。
本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。
采用Benedict 试剂检测反应产物。
Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。
Na2CO3+ 2H2O2NaOH + H2CO3 CuSO4+2+ Na2SO4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O(砖红色或黄色) + 2H2与Benedict试剂无呈色反应。
种子萌发前后淀粉酶活的变化生化实验报告
种子萌发前后淀粉酶活力的变化分析操作人：XXX 时间：XXXX 地点：XXXXX 温度：16℃实验目的：1、研究种子在萌发前后淀粉酶活力的变化，探究萌发过程中各生理指标的动态变化与植物存在何种关系，进而更深一层了解种子萌发的过程。
2、掌握淀粉酶活力的测定方法。
3、掌握分光光度计的原理及使用方法。
4、理解标准曲线的意义及标准曲线的制作方法。
实验原理：（1）淀粉的水解产物麦芽糖有还原性，能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其反应生成红色的3-氨基-5硝基水杨酸；（2）在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖的浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
试验方法与过程：1、配制具浓度梯度的标准麦芽糖溶液：按下表在试管中加入相应体积的2mg/ml标准麦芽糖溶液和柠檬酸缓冲液，再在每个试管中加入1ml5mol/ml的NaOH溶液，标记相对应的编号。
2、酶液的制备：①取休眠的小麦种子4颗，萌发的小麦种子4颗，测量萌发的小麦的芽长并记录。
②对休眠的种子和萌发的种子分别进行以下操作：将种子放入研钵中，加入少量石英砂、1%NaCl溶液1ml研磨成匀浆。
匀浆转移至50ml容量瓶并用柠檬酸缓冲液定容，摇匀，取10ml再次定容至100ml，分别取1.5ml上清液于两支离心管中离心。
3、离心后各取1ml上清液于试管中，编号萌发1、萌发2、休眠1、休眠2，按照下表加入对应的溶液，在40℃准确计时15分钟（实际反应15min10s），在萌发2、休眠2管中加入1ml 0.5mol/ml的NaOH溶液。
4、在标准麦芽糖溶液和酶液和淀粉反应过后的溶液中加入1ml水杨酸溶液，摇匀后放入沸水浴锅水浴加热5分钟后用冷水冲凉。
3、测OD值：将15只试管中的溶液倒入比色皿，分别测定540nm波长下的OD值并记录。
4、绘制标准曲线：用Excel绘制标准曲线，并求得标准曲线回归方程及R2值。
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实验二：酶活力测定方法的研究
一．研究背景及目的
酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。
本实验选取萌发的禾谷类种子为材料，通过对其所含两种淀粉酶活力的测定来研究酶活力测定的方法。
二．实验原理
萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α淀粉酶和β淀粉酶，β淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化[1]。
本实验的设计利用β淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β淀粉酶钝化而测定α淀粉酶的酶活性[1]。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，麦芽糖的浓度利用比色法可以很容易测得。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性，拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性，再做进一步分析。
实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
三．材料、试剂与仪器
材料：
萌发的小麦种子
试剂：
①1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加入80ml蒸馏水，加热熔解，冷却后定容至100ml）；
②pH5.6的柠檬缓冲液：A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L）
B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容至1L）取A液5.5ml、B液14.5ml 混匀即可；
③3，5-二硝基水杨酸溶液（称取3，5-二硝基水杨酸1.00克，溶于20ml 1M 氢氧化钠中，加入50ml蒸馏水，再加入30克酒石酸钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100ml，盖紧瓶盖保存）；
④麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馏水中，小心移入100ml 容量瓶中定容）；
⑤0.4M NaOH
仪器：
722光栅分光光度计(编号990695)
DK-S24型电热恒温水浴锅(编号L-304056)
离心机(TDL-40B) 配平天平药物天平电热锅
100ml容量瓶50ml容量瓶移液管试管研钵烧杯洗瓶
四．实验方法
本实验按照下列表格的中的操作步骤进行：
五．数据整理
上表中前4行数据为实验的原始数据。
以表中前两行数据绘制标准曲线（见下页），根据标准曲线的方程，计算上表中第4行数据（各样品的OD值）所对应的麦芽糖浓度，填入上第5行中，计算两组平行实验所测麦芽糖浓度的平均值，填入最后一行，如上表。
六．结果计算与讨论分析
根据以上的数据整理的结果，结合以下公式计算两种淀粉酶的活性：
α淀粉酶活性=（A－A’）×样品总体积÷（样品重×5）
(α+β)淀粉酶活性=（B－B’）样品总体积÷（样品重×5）
其中A为α淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度，A’为α淀粉酶对照管中的淀粉酶的浓度，B为(α+β)淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度，B’为(α+β)淀粉酶对照管中的麦芽糖浓度（以两组平行实验数据的平均值计算）
计算结果如下：
α淀粉酶活性=10.9（毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1）
(α+β)淀粉酶活性=236（毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1）
(α+β)淀粉酶活性与α淀粉酶活性的差值为225（毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1），暂且看作β淀粉酶活性来分析问题。
由以上的结果可以看出：测得的β淀粉酶活性远远高于α淀粉酶活性。
根据实验的可操作性，我们有理由相信α淀粉酶活性的测量值是可信的，但是对于β淀粉酶活性，我们不得不提出这样一些疑问：同是小麦发芽种子中的淀粉酶，活性为何存在如此大的差异？β淀粉酶活性的测量值可信吗？α淀粉酶和β淀粉酶共同的催化能力会等同于它们各自崔化能力的算数和吗？带着这些问题，我查阅了相关文献，结果没有找到关于α淀粉酶与β淀粉酶相互关系的文献，但是发现：在前人的研究中，已经广泛运用了通过α淀粉酶和β淀粉酶总活性与α淀粉酶活性的测定间接得到β淀粉酶活性的方法[3]，而且在一些类似的实验中测定的
结果也是β淀粉酶活性远远高于α淀粉酶活性[2]。
但是这一测定β淀粉酶活性方法的科学性仍然值得怀疑，因为β淀粉酶与α淀粉酶的催化特性是有差异的。
β淀粉酶主要作用于直链淀粉，作用于支链淀粉或葡聚糖的时候，切断至α-1,6-键的前面反应就停止了；而α淀粉酶则无差别地作用于直链淀粉与支链淀粉[4]。
所以我提出设想：β淀粉酶单独作用时催化能力要大打折扣。
不过值得注意的是：本次实验中所用淀粉的结构尚不明确。
七．结论与展望
根据上面结果与分析，作出如下总结：对于酶活性的测定，通过测定一定时间内一定量的酶催化所得产物的量来表征酶的活性不管在逻辑上还是可操作性上都是可行的。
但是通过测定两种酶共同作用时的总活性及其中一种酶的活性从而间接得到另一种酶的活性的方法是值得质疑的，当然我们可以参考前人的实验经验，但是质疑是不可少的。
本实验中运用的通过α淀粉酶和β淀粉酶总活性与α淀粉酶活性的测定间接得到β淀粉酶活性的方法当然也是值得质疑的，至少仅仅通过本实验是不能消除这样的质疑的；但是查阅文献后发现该方法被广泛运用，所以其合理性应该是得到前人证明的，但尚未查到相关的文献，有待进一步的考证。
八．思考题
1．α-淀粉酶活性测定时70℃水浴为何要严格保温15分钟？保温后为什么要立即于冰浴中骤冷？而经如此处理，为什么在随后的40℃温浴的酶促反应中就能保证β-淀粉酶不会再参与催化反应。
由于β-淀粉酶不耐热，在70℃下处理一定时间可以钝化，严格保温15分钟可以达到理想的钝化效果，时间过长，α-淀粉酶活性也会受到影响；时间不足，β-淀粉酶钝化不完全。
保温后立即骤冷是为了通过剧烈的温变改变β-淀粉酶的结构以防止在随后的反应中复性，这样就保证了在随后的40℃温浴的酶促反应中β-淀粉酶不会再参与催化反应。
此外我认为冰浴使酶迅速降温，便于严格控制高温处理时间的长短。
2．酶的最适反应温度（一般都是生理温度）和最适保存温度（一般0℃以下）为什么不一样？而这两个状态都是需要维护酶的空间结构。
在最适反应温度下，酶的催化活性最大，此时的酶与底物的结合性最强；而在最适保存温度下，酶的稳定性最好，此时的酶一般处于失活状态。
这是完全不同的两个状态，所以温度不同是可以理解的。
3．为什么3，5-二硝基水杨酸与还原糖的反应要先沸水浴然后再稀释测定？
根据化学反应动力学的原理，高浓度下的反应更完全，为了测定结果的准确，所以当然希望还原糖尽可能完全地参加反应；但是比色法允许测定的浓度是较低的。
3，5-二硝基水杨酸与还原糖的反应在高温下进行，所以先沸水浴使还原糖最大程度地反应再稀释测定能够准确测得所含还原糖的浓度。
4. 在体外进行别构酶活性调控的实验中，有时可以用低浓度的竞争性抑制剂作为酶的别构激活剂使用，其理论基础是什麽？
竞争性抑制剂与被抑制的酶的底物通常有结构上的相似性，能与别构酶的别够中心结合，从而改变酶分子的构象，增强酶的活性，成为酶的别构激活剂。
5. 在酶的分离纯化过程中通常会丢失一些活力，但有时亦可能在某一纯化步骤中酶活力的得率超过100%，产生这种活力增高的可能原因会是什麽？这种情况说明什麽？
由于酶的特性之一就是活性易受到其他物质的影响，如产物、底物或者是样品中的其他杂质，都可能影响着酶的活性。
在酶的分离纯化过程中，随着杂质的减少，影响酶活性的物质随之越来越少，之前存在的抑制酶活性的物质很可能在某一纯化过程中被除去，所以出现酶活的得率超过100%的情况。
这种情况说明酶的活性是很容易受到外界因素的影响的，所以在测定酶的活性时应该加以注意。
6. 有多种方法可区分高分子量的DNA与RNA分子，请写出一种最简便易行的生化分析方法，并说明理由。
通过DNA酶处理待测样品，能够溶于酶液中的是DNA不能溶解的是RNA；或者通过RNA酶处理待测样品，能够溶于酶液的是RNA而不能溶解的是DNA。
原因是酶具有专一性，DNA酶只能水解DNA而不能水解RNA而RNA酶恰好相反。
九．参考文献
[1]生物化学实验指导7-16 中国农业大学生物化学实验室
中国农业大学自编教材
[2]艾志录等不同品种小麦发芽过程中淀粉酶活力变化规律的研究
中国粮油学报2006年6月第21卷第3期
[3]马永强等玉米萌发过程中淀粉酶性质的研究食品科学294~297，
2007, V ol. 28, No. 11
[4]百度百科。