近年来中国H9亚型禽流感分离株谱系分析

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H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及免疫试验

H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及免疫试验作者：许佳敏边海霞来源：《中国动物保健》2021年第01期摘要：为了更好防控H9N2亚型禽流感，且做到科学免疫，免疫减负。

本研究采集疑似感染低致病禽流感鸡群病料，将其无菌处理后接种SPF鸡胚后进行病毒分离，通过分子生物学试验对其进行病原学鉴定。

结果显示：分离鉴定出一株H9亚型禽流感病毒（AIV）；血凝试验（HA）效价在10～11，该病毒属于欧亚分支的BJ亚分支。

将病毒纯化后，制备灭活疫苗免疫SPF鸡，免疫后14d对其进行HI检测，结果显示其效价到达峰值为10Log2，免疫后28～35d其平均效价在9.6Log2，至免疫后12周平均效价在7Log2。

结果说明本研究分离的病毒制备成疫苗后具有较好的免疫效果，可以作为疫苗候选株。

关键词：H9N2亚型禽流感毒株，免疫，疫苗禽流感是禽流行性感冒（avian Influenza，AI）的简称，是由正粘病毒科（orthomyxoviridae）、流感病毒属（influenza virus）、A型流感病毒（influenza A virus）引起的禽类疾病[1]。

国际兽医局（OIE）将禽流感列为A类动物疫病，我国也将其定为一类动物传染病。

H9N2禽流感病毒是低致病性亚型，在世界各地家禽群中流行。

目前，H9N2引起的禽流感在我国呈地方流行，虽然死亡率低，但感染蛋鸡出现鸡输卵管功能异常，产褪色蛋、畸形蛋、砂皮蛋、软壳蛋，鸡群产蛋率下降30%～80%，病程持续时间长的可达月余，造成严重的经济损失[2]。

该疾病可通过免疫疫苗进行抵御但是由于低致病禽流感变异速度快，不同血清型之间交叉保护有限；所以筛选、免疫对型疫苗对养殖业具有重要意义[3]。

本研究通过分子病原学及血清学分离鉴定一株H9N2流行毒株，并进行动物试验，为进一步筛选疫苗提供理论依据。

1材料与方法1.1材料1.1.1病料来源疑似发病鸡病料，采集自宁夏平罗县某商品蛋鸡养殖场。

3株H9亚型禽流感毒株的分离鉴定和交叉攻毒保护试验比较

３株Ｈ９亚型禽流感毒株的分离鉴定和交叉攻毒保护试验比较
蔡青秀，张园园，魏波，蒋贻海，凌红丽
（青岛蔚蓝生物制品有限公司，山东青岛２６６１１４）
［收稿日期］２０１７ — ０３ — ０８［文献标识码］Ａ［文章编号］１００２ — １２８０（２０１７）０８ — ０００６ — ０８［中图分类号］￥８５２．６５
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＮＧｌｌ－ｏｎｇ— ｌｉ，Ｅ— ｍａｉｌ：ｌｉｎｇｈｌ＠ｖｌａｎｄｇｒｏｕｐ，ｔｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｆＨ９ｓｕｂｔｙｐｅａｖｉａｎｉｎｌｕｅｆｎｚａｖｉｒｕｓｉｎＳｈａｎｄｏｎｇｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｔｉｓｓｕｅｓ
学和交叉攻毒保护试验。结果显示：３株分离株之间的ＨＡ和ＮＡ基因同源性很高，分别为９７％～９７．６％和９３．５％～９４．４％．而与早期分离株和疫苗株的同源性较低，分别为７４．９％～９０．３％和８６．３％～９２．３％：遗传进化分析显示３株分离株与ＧｅｎＢａｎｋ中近年的Ｈ９Ｎ２分离株亲缘关系近，同属Ｙ２８０一ｌｉｋｅ

五例H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

·190·试验研究农业开发与装备 2022年第12期五例H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定丁小丽，李娜，陶宏卫*（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）摘要：对苏北地区某鸡场疑似H9亚型禽流感病毒的5份病料样品，通过鸡胚接种、血清学试验和RT－PCR检测等方法对样品进行分离、鉴定和分析，确定分离的 5 个毒株为H9亚型禽流感病毒，虽然受感染后，并未造成鸡群的大规模死亡，但是使鸡场产蛋率的严重下降，并引起生长缓慢，给养鸡场造成了巨大损失。

本实验对该病例进行了诊断分析、分离和鉴定，为禽流感的诊断和预防提供了一定参考。

关键词：禽流感；H9亚型；分离；鉴定0 引言禽流感（Avian Influenza，AI）是禽流行性感冒的简称，是指由A型流感病毒引起的一种家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的人兽共患传染病[1]。

禽流感病毒分为高致病性和低致病性两大类，低致病病毒感染家禽后症状不明显，容易被忽视，因此得以长期、广泛的分布，周而复始的循环及变异使其不断适应当下养殖环境，进而演化成为具有耐药性及跨种属感染的新型毒株[2]。

因此，在低致病性禽流感流行季节，对病毒的分离、鉴定能够正确诊断该病，从而有效地防控该病的发生。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品与毒株笔者在苏北地区某公司合作农户鸡场采集疑似 H9 亚型禽流感发病鸡群病料5份，分别为HF-1、HF-2、JT-1、JT-2、JT-3，采样时间为2022年春。

1.1.2 主要试剂标准抗原：H9禽流感诊断抗原，由国药集团扬州威客生物工程有限公司提供。

标准抗体：H9亚型禽流感病毒特异性血清、禽流感（ H5、H7 亚型）阳性血清、鸡新城疫阳性血清、减蛋综合征阳性血清，均有由国药集团扬州威客生物工程有限公司提供。

相关试剂：SuperScript ™ Ⅱ Reverse Transcriptase 反转录酶及其Buffer和E.Z.N.A.TM Gel Extraction Kit购自OMEGA BIO-TEK公司；DL2000 Marker购自Takara 公司。

禽流感H9亚型流行现状及控制策略

禽流感灭活疫苗（H9亚型，SD696株）鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗（La Sota 株+N28株+SD696株）（即新双流）禽流感(H5N2+H9N2)二价灭活疫苗(N28株＋SD696株)
维科生物
1、来源：ss株1994年分离
全
称
为
：
A/Chicken/Guangdong/SS/94 (H9N2)
(1)中度致病力：主要由MP AIV H9亚型在伴随有其它病原的感染时引起的，死亡率变化范围较大 (5%~97%)，高致死率主要出现在肉仔鸡、青年鸡、产蛋鸡或严重应激的鸡，蛋鸡易发生在产蛋高峰，产蛋下降明显。产蛋下降的幅度与免疫情况有关，没有注射疫苗的鸡群，产蛋下降30%，甚至更高；注射过疫苗的鸡群，产蛋下降 10~30%。损伤主要发生在呼吸道、生殖道、肾或胰腺，可能同时并发有细菌感染，细菌分泌的蛋白酶裂解了MP AIV H9亚型的HA蛋白。
90%
75%
30%
15%
低致病性流感H9N2 +大肠杆菌3 大肠杆菌3
低致病性流感H9N2 +大肠杆菌4 大肠杆菌4
100%
73%
30%
20%
95%
50%
50%
25%
要特别注意的是： HA----------HA1+HA2
类胰蛋白酶大肠杆菌葡萄球菌
加强饲养管理
建立科学的饲养管理体系，包括科学的饲养管理方式，根据禽的品种和日龄，选择合适的饲喂方式，饲喂适宜的全价饲料，给予适宜的饲喂量，避免营养不足，增强机体的抵抗力。禽群日常的管理，如饲喂、清粪、清扫、消毒、转群、免疫注射等操作要尽量减少对禽群的刺激，避免应激的发生及诱发疾病。在整个饲养过程中，要注意禽舍的通风换气和禽群的饲养密度。

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析

CHEN Lu, LIU Shou-chuan, ZHAO Jun, WANG Chuan-qing, WANG Zhe-lin
(Institute of Poultry Disease, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002)
Abstract: 【Objective】 The objective of this experiment is to investigate the characteristics of pathogenic and antigenic variation of H9N2 subtybe avian influenza viruses isolated from 1998 to 2008 in China. 【Method】 The EID50, ELD50, MDT, ICPI, IVPI and the duration of shedding virus from infected 8-week-old SPF chickens of different H9N2 avian influenza viruses isolates were determined. The HI and VN activity of monoclonal antibody 2A4 and F6 on different H9N2 avian influenza viruses isolates were assayed and the HA genes of different antigenic reactive isolates were sequenced and analyzed. 【Result】 The determined pathogenicity suggested that the virulence of different isolates were different, thereinto, 3#, 12#, and 14# isolates showed higher pathogenicity than the others and could cause the death of SPF chickens. The 8-week-old SPF chickens infected by 3# or 12# isolate shed virus earlier and last for a longer time. 3 # and 12 # isolates showed specific response properties to monoclonal antibody 2A4 and F6. Monoclonal antibody 2A4 and F6 could inhibit the hemagglutinin activity of 3 # and 12 # isolates, however it could not neutralize the virus infection on CEF cells. HA sequence analysis showed that there was a single amino acid substitution of Ser (S)-to- Asn(N) at position 145 in the HA protein of 3 # and 12 # isolates, which led to the loss of reactivity to the monoclonal antibody 2A4 and F6 and the occurrence of a new potential glycosylation site NGT. The change of reactivity to the monoclonal

我国H9亚型禽流感病毒部分流行株的抗原性差异分析

的主要抗原基因一ＨＡ基因在疫苗免
性血清购自哈尔滨维科生物技术开羽，每种疫苗免疫３０只，并分别
３．种蛋知动物。ＳＰＦ种蛋购自
疫压和自然选择的作用下，在最近发公司。几年已发生了较大的变异。ｗｕ等报
使用Ｈ９亚型禽流感病毒血清抑制试
Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒在世界范围内广泛存在，该病毒在我国首次病鸡群中分离得到，在随后的几年内，该病毒迅速传播到了我国大部分养禽地区，并呈现出地区流行的特点，持续存在。Ｈ９Ｎ２亚型的禽流感病毒虽然致死率低，但可引起蛋和青年鸡中易与其它病原体合并感染，引起死淘率升高，因此该病给
因序列的同源序列，应用ＭＥＧＡ４。０份有限公司从临床发病的鸡群中分离、鉴定并保存，毒株的具体背景
见表１。
软件进行序列的比对和遗传进化树
的绘制。
３．５株禽流感病毒灭活疫苗的制备。将本试验的５株禽流感病毒接
一
亚型禽流感的预防主要是使用Ｈ９亚型禽流感全病毒灭活疫苗对禽进
遍的免疫接种，在我国的部分鸡群中仍然有Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒的持续流行，甚至在免疫过的鸡群中也有存在。对分离自这些鸡群中的Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒的抗原性进

禽流感H9亚型流行现状及控制策略

HA基因变异是病毒发生抗原变异的主要原因。 HA上潜在的糖基化位点是影响AIV毒力的可能因素之一。近年来的研究表明，HA突变导致邻近血凝素(HA)链的裂解位点上的碱性氨基酸成为优势氨基酸，后者与毒力的增强有关，从而不可避免的演变成为高致病性的毒株。HA受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性，从而改变其对病毒与细胞的亲和力及宿主范围。这可能是H9N2 亚型禽流感病毒毒力变异和感染谱不断扩大的真正原因。
通过蛋白质生化技术和基因工程技术，证明HA 切割位点的结构是影响AIV致病性的主要因素。研究结果发现HA切割位点的结构是影响其切割性的主要原因，包括位点处插入有多个碱性氨基酸，切割位点插入细胞的多肽序列，还有切割位点附近糖基化位点的丢失等，都能使HA对蛋白酶切割的敏感性增强，从而使病毒的致病力提高 (Webster等，1972)。
(1)中度致病力：主要由MP AIV H9亚型在伴随有其它病原的感染时引起的，死亡率变化范围较大 (5%~97%)，高致死率主要出现在肉仔鸡、青年鸡、产蛋鸡或严重应激的鸡，蛋鸡易发生在产蛋高峰，产蛋下降明显。产蛋下降的幅度与免疫情况有关，没有注射疫苗的鸡群，产蛋下降30%，甚至更高；注射过疫苗的鸡群，产蛋下降 10~30%。损伤主要发生在呼吸道、生殖道、肾或胰腺，可能同时并发有细菌感染，细菌分泌的蛋白酶裂解了MP AIV H9亚型的HA蛋白。
禽流感灭活疫苗（H9亚型，SD696株）鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗（La Sota 株+N28株+SD696株）（即新双流）禽流感(H5N2+H9N2)二价灭活疫苗(N28株＋SD696株)
维科生物
1、来源：ss株1994年分离
全
称
为
：

禽流感H9 亚型毒株HI 血清交叉及HA基因同源性研究

禽流感病毒（AIV ）属于正粘病毒科流感病毒属A 型流感病毒。

禽流感又称真性鸡痘或欧洲鸡瘟，被国际兽医局（OIE ）列为A 类传染病[1-3]。

H9亚型禽流感病毒为低致病性禽流感病禽流感H9亚型毒株HI 血清交叉及HA 基因同源性研究杨沛沛，晋春霞，肖亚朋，王洋洋，赵坤坤，刘守川（洛阳中科基因检测技术有限公司业务室河南洛阳471800）来，我国养禽业经常出现H9亚型流感病毒疫苗免疫失败现象，笔者为此对近年来临床流行的H9亚型毒株变异情况进行研究。

本试验主要是通过对近两年临床分离到的H9亚型毒株HI 血清交叉试验和HA 基因同源性进行分析研究，为国内生物制品企业和科研单位疫苗的研制提供依据，对科学防控H9亚型禽流感病毒提供参考。

结果显示：同一基因分支的同一毒株血清不同分离株HI 交叉性相差甚大，即血清型与基因型之间没有相关性。

亚型；HI 血清交叉；同源性毒，主要引起禽类产蛋量下降，肉鸡和蛋鸡的复合型呼吸道疾病乃至死亡，给养禽业造成了严重的经济损失。

此外，国内外有多起人感染H9亚型流感病毒的病例报道，许多血清学调查显示我国有一定比例的人群已经感染过H9亚型流感病毒，血清阳性率高达13.7%～37.2%[4-7]。

因此，对H9亚型禽流感病毒的研究不仅为科学防控提供依据，也具有重要的公共卫生意义。

1目的通过对近两年临床分离到的H9亚型禽流感病毒毒株进行HI 血清交叉试验和基因序列分析，为筛选对当前临床主要流行毒株具有广泛保护作用的疫苗候选毒株提供依据。

2材料与方法2.1材料2.1.1H9亚型禽流感临床分离毒株共筛选7株H9亚型禽流感临床分离毒株，具体信息见表1。

2.1.2SPF 鸡和SPF 鸡胚1日龄SPF 鸡和SPF 种蛋均购自山东斯帕法斯公司。

SPF 种蛋由洛阳中科基因检测诊断中心自行孵化至10日龄，用于病毒增殖。

SPF 鸡饲养于本公司租用的普莱柯生物工程股份有限公司实验动物中心的8台隔离器中进行试验。

H9亚型禽流感国内外禽用疫苗产品现状及未来研发方向分析

南京天邦生物科技有限公司
产品名称
生产企业名称
乾元浩生物股份有限公司郑源自禽流感（ H5+H9 二价灭活疫苗
）青岛易邦生物工程有限公司
哈尔滨维科生物技术开发公
司
（三）国外相关疫苗产品统计
• 进口兽药注册信息数据库没有查到关于H9 亚型禽流感疫苗的信息。
• 禽流感疫苗具有高度变异性，抗原差异较大，一般选择地方性产品，因此国内无进口产品再注册产品。
禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）：免疫家禽后诱导产生的HI抗体较低。
亚单位疫苗
➢ 利用基因技术，提取AIV的保护性抗原成分如HA等辅以佐剂制成，可对同一H亚型不同毒株产生良好的免疫保护性。
➢ Johansson等采用杆状病毒系统表达禽流感病毒HA 和NA蛋白，纯化后制备单一成分的亚单位疫苗，接种小鼠能产生较高的抗体水平。
齐鲁动物保健品有限公司
南京天邦生物科技有限公司
青岛澳兰百特生物工程有限公司
青岛易邦生物工程有限公司
产品名称
生产企业名称
普莱柯生物工程有限公司
鸡新城疫、传染上海海利生物药品有限公司
性支气管炎、减蛋综合征、禽流
辽宁益康生物制品有限公司
感（H9亚型）四乾元浩生物股份有限公司
联灭活疫苗
青岛易邦生物工程有限公司
➢ F株是一个基因重组病毒株，其聚合酶蛋白
酶基因与可能来源鸭的H9N2病毒的相应基因发生了重组，该重组类型的病毒之后在中国国内鸡群中持续存在并作为母体病毒产生了多种类型的内部蛋白基因重组病毒。
HL株 ➢ 2001年普莱柯生物工程有限公司在在洛阳分离到
的鸡源毒株，并研制成全病毒灭活疫苗。

5株H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及HA基

１．５血凝抑制试验将分离株分别与抗Ｈ９亚型禽流感病
各组鸡胚尿囊液进行鉴定，结果见表１。
表１５份病料在鸡胚上的分离结果
Ｔａｂｌｅ１Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆ５ｓｉｃｋｍａｔｅｒｉａｌｓｏｎｃｈｉｃｋｅｎｅｍｂｒｙｏ
名称
Ｎａｍｅ
ＨＦＡ９－１ＷＦ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ，ａｎｄｔｈｅｉｒｐｅｄｉｇｒｅｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｂｙｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｈｉｃｋｅｎ
ｅｍｂｒｙｏ，ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｓｔ，ＲＴ⁃ＰＣＲａｎｄｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．［Ｒｅｓｕｌｔ］ＴｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｏｆｆｉｖｅｉｓｏｌａｔｅｓｗｉｔｈＡ／ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｇｕａｎｇｘｉ／５５／２００５（Ｈ９Ｎ２）ｗａｓ
１．３方法
１材料与方法
状的鸡，解剖采集病鸡气管、肝脏、肺脏等病变严重的部位，
通过ＲＴ－ＰＣＲ进行ＨＡ基因扩增、测序，结合查阅文献资
进行基因序列分析，进一步了解所分离的毒株变异情况。
１．１试验材料
１．１．１样品与毒株。青岛汇丰动物保健品有限公司于
进行血凝试验，在９６孔微量板上每孔加入２５ μＬ生理盐水，再
用加样器吸取２５ μＬ待检样品加入第１孔中，吹打混匀后吸取
２５ μＬ加入第２孔中依次作倍比稀释直至所需倍数孔，并吸弃
２５ μＬ，最后孔留作阴性对照。稀释完成后，每孔加入２５ μＬ１％

H9亚型禽流感病毒的分离及初步鉴定

H9亚型禽流感病毒的分离及初步鉴定朱春华;江斌;刘斌琼;林甦;陈珍;黄瑜【摘要】2011 two strains (FZ-04 and FZ-11) were isolated respectively from two broiler farms in Fujian, Hemagglutination test results showed that the isolated allantoic fluid can induce 1% chicken erythrocytes agglutination. Hemagglutination inhibition test results showed that the isolates allantoic fluids were only inhibited by avian influenza virus subtype H9 standard serum specificly. Specified and conserved M (Matrix) gene and HA (Hemagglutinin) gene of H9 subtype were amplified by RT-PCR with the segment lengths of 229bp and 732bp respectively. The results indicated that the isolated strains were H9 subtype of influenza A virus. The phylogenetic analysis of HA genes showed that isolates and representative strains CK/FJ/G9/09 have a closest relationship, belonging to the major sublineage CK/BJ/1/94 in China.%2011年从福建省2个肉鸡场分离到2株病毒,分别为FZ-04株和FZ-11株.血凝试验结果表明,分离株尿囊液可凝集1％鸡红细胞.血凝抑制试验结果表明,分离株尿囊液只被抗禽流感病毒H9亚型标准阳性血清特异性抑制.采用RT-PCR法对分离株M基因和H9亚型HA基因保守片段进行扩增,分别扩增出229 bp和732 bp特异性目的片段.结果表明,分离株为A型H9亚型禽流感病毒.HA基因遗传进化分析结果表明,分离株与代表株CK/FJ/G9/09亲缘关系最近,属于国内常见的CK/BJ/1/94群系.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2011(026)004【总页数】4页(P537-540)【关键词】禽流感病毒;肉鸡;分离【作者】朱春华;江斌;刘斌琼;林甦;陈珍;黄瑜【作者单位】福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013【正文语种】中文禽流感（AI）是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类及其他鸟类的一种感染和／或疾病综合征[1]。

一株H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物特性研究

一株H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物特性研究陈春丽;王强;李群芳;严洁珍;黄文科【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)010【摘要】2013年中国吉林某养鸡场发生疑似H9亚型禽流感疫情,采集该发病鸡场病料接种9日龄SPF鸡胚,分离得到一株病毒.经血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、测序分析,鉴定该毒株为H9亚型禽流感病毒(AIV).对本试验分离株HA基因进行测序及序列分析,结果显示分离株HA基因的裂解位点为RSSR ↓ GLF,符合低致病性AIV的基因特征;HA肽链具有9个潜在糖基化位点,与近些年H9亚型AIV分离株的潜在糖基化位点相同;具有8个受体结合位点,其中234位受体结合位点由谷氨酰胺(Q)变异成苏氨酸(T);HA基因系统进化树结果显示本试验分离株属于欧亚进化分支,与中国最早分离株A/Chicken/Beijing/1/94 (H9N2)亲缘关系较远,与2007年后中国H9亚型AIV主要流行分支的代表株A/Chicken/Guangxi/55/2005(H9N2)亲缘关系较近.将该毒株制成油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后第21天免疫鸡血清抗体高达10log2,表明本试验分离株具有很好的免疫原性.【总页数】6页(P2619-2624)【作者】陈春丽;王强;李群芳;严洁珍;黄文科【作者单位】广东大华农动物保健品股份有限公司,新兴527400;广东华农温氏畜牧股份有限公司,新兴527400;广东大华农动物保健品股份有限公司,新兴527400;广东大华农动物保健品股份有限公司,新兴527400;广东大华农动物保健品股份有限公司,新兴527400【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.一株肉鸡H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及其对肉鸡增重的影响 [J], 于可响;沙明利;史玉颖;林树乾;姜亦飞2.一株鸭源H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及HA基因序列分析 [J], 高月花;于可响;宋玲玲;宋敏训3.一株肉仔鸡H9亚型禽流感病毒的分离鉴定 [J], 朱子洁;苏霞;颜丽4.一株H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及免疫试验 [J], 许利娜;彭特;胡秀美;仇微红;苏子由;王鑫;叶贺佳5.一株猪Ⅱ型链球菌分离鉴定及生物特性研究 [J], 刘瑞雪;王鲁敏;黄倩倩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

5株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因的序列分析

ｆｕｅｚｉｕｓｓｉｌｎａｖｒｅｎＧｕａｇｉｈｅＨＡｎｎｘ，ｔａｄＮＡｅｓｏｈｓｔａｎｓｇｎｅｆｔｅｅｓｒｉ，ｗｈｉｈｗｅｅｉｏａｅｒｍａｌｓｃｌｅｔｄｉｃｒｓｌｔｄｆｏｓｍｐｅｏｌｃｅｎＧｕａｇｘｎｉｄｕｎｅｎｔｙｅｒ，ｗｅｅａｉｒｇｒｃｅａｓｒｍｐｌｆｅ，ｃｏｄａｅｅｅｈｅｓｑｎｅａａｙｉｈｏｄｔａｌｆｖｓｌｔｓｗｅｅｌｗｅｉｄｌｎｅｎｄｓｑｕｎｃｄ．Ｔｅｕｅｃｎｌｓｓｓｗｅｈｔａｌｉｅｉｏａｅｒｏｒｉ
ｉｌｕｅａｖｒｓｓｎｆｎｚｉｕｅ
ＬＵＫＱＮＬｎ，ＩＮｉＬＵＱＩｅ，Ｉｕ。ＸＯＧＹＩｉ，
（ｈｏｕｎＨｕｂｎｒｎｔｕｅＳａｇａ，ｕｎｄｎ２２，ｈｎ；２ＧｕｎｘｎｅｏｉｌｓａｅＣｏｔｌａｄ１ＳａｇａｓａｄｙＩｓｔｔ，ｈｏｕｎ Байду номын сангаас ａｇｏｇ５１０６ＣｉａａｇｉｉＣｅｔｒｒＡｎｍａｅｓｎｒｎｆＤｉｏ
酸同源性为９．％～５％，Ａ因核苷酸、基酸同源性为９．％～５８３５９．Ｎ基９氨３８９．％。分离株Ｄ／Ｘ５／５Ｃ／Ｘ５／５Ｈ基因ＫＧ／１、ＫＧ／５０Ａ０
第２６２位氨基酸由谷氨酰胺（ｉ）Ｇｎ突变为亮氨酸（ｅ）具备人类流感病毒的受体特征，Ｌｕ，而在糖基化位点方面，除了Ｃ／ＫＧ／／０ＨＡＸ６０基因的第２８１位发生变异以外，株分离株Ｈ基因上其余各糖基化位点均未发生变异；分离株Ｄ／Ｘ５／５ＡＫＧ／１

2007～2008年上海地区H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析

ｌｒｓｅｃＴ— Ｃｉ，ｉｏｕａｉｎｏ１ｄｙｏｄＳＦｃｉｋｎｅｇｎｅｔｈＤＮｏｆｏｅｃｎｅＲＰＲｋｔｎｃｌｔｎｉｔ０一ａ —ｌＰｈｃｅｇｓａｄＨＩｔｓ．ＴｅｃＡｆＨＡｅｅｗｅｅａｌｅｙｕｏｇｎｒｍｐｉｄｂｉｆ
测出的阳性样品处理后，经鸡胚尿囊腔接种分离病毒，血凝抑制试验（ａｍｇｌｉａｏｈｂｔｎＨ）ｈｅａｇｔｔｎｉｉｉｏ，Ｉ进一步确ｕｎｉｎｉ
定Ｈ亚型，过Ｒ —ＣＡ通ＴＰＲ方法分别扩增了１毒株的Ｈ１个Ａ基因并进行了序列测定。遗传发生关系分析，１这１
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈ９ｓｔｐｅａｉｎｉｆｕｎａｓｑｅｃｎａｙｉ；ｐｙｏｎｅｉｅａｉｎｈｐｕｂｙｖａｎｅｚ；ｅｕｎｅａｌｓｓｌｈｌｇｅｔｒｌｔｏｓｉｃ
２收稿日期：０１Ｕ６— Ｕ— ２１
ｌｖｕｔｙｍａｋｅｓｉｈａｇａｏｓｕｙｔｅｇｎｔｃｖｒａｉｎａｄｅｄｍｉｌｇＴｈｓｉｓｓｗｅｅｉｅｔｆｅｓＨ９ｓｂｔｐｙｉｅｐｏｌｒｒｔｎＳｎｈｉｔｔｄｈｅｅｉａｉｔｏｎｐｉｅｏｏｙ．ｅｅｖｒｅｒｄｎｉｄａｕｙｅｂｕｉ
ＬＩＪａＵｉｎ，ＧＥｅ —ｅ，ＪＨｏｂｉＦｉｆｉＵｕ— ｎ，ＺＨＡＮＧｅ— ｉＷｉｙ，ＺＨＯＵｉｐｎＪｎ— ｉｇ，ＬＩＰｅ— ｏｇＵｉｈｎ

H9亚型禽流感国内外禽用疫苗产品现状及未来研发方向分析解读

在世界上，美洲、欧洲、亚洲、非洲等许多国家和地区都发生过该病。禽流感是一种毁灭性的疾病，每一次爆发都给养禽业造成巨大
根据核衣壳（血凝素 NP）蛋白和基质（ M）蛋白的抗原性差：H5 H7 H9 (HＡ) HA1-16 异可把流感分成三种不同类型的流感（ A，B，C）。 A型神经氨酸酶(NA) NA1-10
疫苗种类
单苗二联苗
代表疫苗名称
禽流感灭活疫苗
主要疫苗毒株
SS 株、 F 株、 SD696 株、 LG1 株、SD696s株、SD697株
SS 株、 F株、 HL株、 WD 株、鸡新城疫、禽流感（ H9亚型）二联 LG1 株、 SS/94 株、 SY 株、 JY 灭活疫苗（La Sota株+ __株）株 SS 株、 HL 株、 WD 株、 HP 株、鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流 LG1 株、 SS/94 株、 HN106 株、感（ H9 亚型）三联灭活疫苗（ La NJ102 、 YBF003 株、 SS/95 株、 Sota株+M41株+__株） HZ株、L株
青岛易邦生物工程有限公司南京天邦生物科技有限公司
产品名称
生产企业名称
乾元浩生物股份有限公司郑
禽流感（ H5+H9 ）青岛易邦生物工程有限公司二价灭活疫苗
哈尔滨维科生物技术开发公司
（三）国外相关疫苗产品统计
• 进口兽药注册信息数据库没有查到关于H9 亚型禽流感疫苗的信息。 • 禽流感疫苗具有高度变异性，抗原差异较大，一般选择地方性产品，因此国内无进口产品再注册产品。
鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗
青岛易邦生物工程有限公司扬州威克生物工程有限公司普莱柯生物工程有限公司北京市兽医生物药品厂上海海利生生物药品有限公司

禽流感病毒（H9亚型）LN株的分离鉴定及生物学特性研究

禽流感病毒（H9亚型）LN株的分离鉴定及生物学特性研究作者：王志国来源：《兽医导刊》 2017年第4期禽流行性感冒( 简称禽流感，Avain Influenza,AI)是由A 型流感病毒引起的一种禽类( 包括家禽和野禽)的感染疾病综合征，主要引起禽类的全身性或呼吸系统性疾病，被世界动物卫生组织确立为A 类传染病。

根据禽流感致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。

H9N2 亚型禽流感属于低致病性禽流感，发病率高，但死亡率低。

2010 年，笔者于辽宁某市某养殖场的发病鸡群中分离到一株禽流感病毒，经鉴定为H9N2 亚型禽流感，命名为LN 株，其具有经胰酶处理后能在细胞上增殖的特性。

为了评价MDCK 细胞高适应的禽流感疫苗株LN 的生物学特性和免疫效果，我们进行了一系列的试验研究。

一、试验方法（一）病毒的分离2010 年，从辽宁省某养鸡地区的疑似H9N2 禽流感发病鸡群中，无菌采取具有典型临床症状病鸡的肺脏和肝脏等剪碎，按1∶5（W/V）加入灭菌生理盐水后，研钵研磨后-40℃到室温冻融3 次，经3 000 r/min 离心15 min 取上清液备用。

将上述病料上清液通过0.22μm 微孔滤器除菌，尿囊腔接种10 日龄非免疫鸡胚。

每份病料接种8 枚鸡胚，每枚鸡胚接种0.2 ml，同时作不接种对照，37℃孵育。

弃去24 h 内死胚，无菌收集48 h 的鸡胚尿囊液，-40℃保存备用。

病毒分离后需要在SPF 鸡胚上进行3 次终点有限稀释克隆纯化，即每一次均取最高稀释度有血凝价鸡胚尿囊液作为下一次传代纯化的种毒，如此经三次纯化后，以10-3 稀释接种9 ～11 日龄SPF 胚，48 小时后收取鸡胚尿囊液，经菌检证明无污染，分装于小管中作为种毒贮存于-70℃。

（二）血清学及RT-PCR 鉴定将无菌收集的鸡胚尿囊液以1.0% 鸡红细胞悬液采用β 微量法进行HA 试验，以HA 价≥ 3 log2 为试验阳性。

一株肉仔鸡H9亚型禽流感病毒的分离鉴定

深入开展炭疽杆菌分子生物学研究
Ｉ１１０
。
８７１肉鸡，早可发生于８最日龄，要表主现为突然减料，达１３１２饮水量可／ —／。下降，亡率较高，制不及时日死亡死控
气管、脏、脏等病料及血清采肺脾自聊城某发病肉鸡群：Ｐ鸡胚由梅里ＳＦ亚维通有限公司提供：验用８７仔实１肉鸡购自山东聊城莘县种鸡场：Ｄ、ＮＥＳ７标准阳性血清及标准抗原购Ｄ一６
５分子生物学研究近况炭疽杆菌是细菌学历史中发现和
Байду номын сангаас
２。该分离的Ｈ亚型禽流感病毒的鸡胚致死时间均在６之内，所采集血清进９９０ｈ对
行Ｈｌ测，检结果显示，Ｉ体水平明显高于未发病鸡群。Ｌ０２株病毒液静脉注Ｈ抗将Ｃ６６
酪样物质，脏出血，脏潮红肿胀。肺肾
通过鸡胚接种分离到一株病毒，对其
进行鉴定和致病性试验。
１材料与：－ｂ法１１材料、剂．试
备过程中易降解，获取质粒难度大有
关。目前，国外已开展了炭疽杆菌分子水平的研究，有关报道不详。们成但我功地构建了ｐＯ１质粒基因文库和建Ｘ立了ＤＡ针检测方法．有助于国内Ｎ探

禽流感H9目前的疫苗毒株

现在流行的禽流感H9亚型毒株种类
1.SS株。

于1994年在广东分离，并作出灭活疫苗
2.F株于1998年在上海分离并作出灭活疫苗。

3.地方毒株和变异毒株
山东的H9亚型SD696。

齐鲁动保的H9亚型LG1株。

哈兽研的H9亚型H9N2(re-2)株
07年河南的普莱柯H9亚型HL株。

10年保定瑞普的H9亚型HP株
10年优帮，哈药的H9亚型JY株
北京兽医生物H9亚型HN106株。

上海海利。

乾元浩的H9亚型WD株
南京天邦。

江苏的H9亚型NJ02株
青岛易邦的H9亚型YBF003株
青岛奥兰百特的H9亚型L株
另外还在分离的病毒毒株还很多。

这就是为什么今年的疾病特别多的原因。

疫苗那么多我们不可能都去防疫，
主要看当地流行的什么毒株的，和另一种毒株同源性是不是很高的。

至于那个疫苗效果最好，那就是商业机密了。

呵呵
还有一点就是禽流感毒株变异也很快，当两种低致病的毒株同时感染鸡体，就会发生变异重组，
例如H6N1（无毒）+H9N2（弱毒）===H5N1（强毒）说以当机体先感染无毒毒株的时候，养殖户是根本看不出来的
然后感染H9亚型以后（大家也看到了H9亚型如此之多），才有临床症状。

如不及时治疗。

就会重组成为强毒的H5N1。

给治疗和恢复带来很大的麻烦。

说以大家给鸡防疫禽流感疫苗的时候，一定要把H5(RE-4+RE-5)和H9做好。

做精。

开产前最低3遍。

现在网上还流传着H5N1RE-6也出现了。

当前H9亚型禽流感毒株最新最全统计。

禽流感病毒(H9亚型)流行毒株的分离及初步鉴定

禽流感病毒(H9亚型)流行毒株的分离及初步鉴定李凤艳【摘要】对2013～2015年从各省养鸡场采集的口腔及泄殖腔拭子进行病毒分离,用血凝及血凝抑制试验初步鉴定出含H9亚型禽流感病毒的样品,对其进行纯化得到4株H9亚型禽流感病毒,用针对H9亚型禽流感病毒HA基因的特异性引物对分离株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段后进行测序分析,结果显示4个分离株经鉴定均为H9亚型禽流感病毒.对4个分离株的生物学特性进行研究,发现4株H9亚型禽流感病毒分离株均符合低致病禽流感病毒的特点.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2017(000)008【总页数】6页(P11-16)【关键词】H9亚型禽流感病毒;分离鉴定;生物学特性【作者】李凤艳【作者单位】辽宁益康生物股份有限公司,辽宁辽阳111000【正文语种】中文【中图分类】S858.28禽流行性感冒，简称禽流感（Avian lnflucnza，AI），是由正黏病毒科（Orthomyxoviridae）、流感病毒属、A型流感病毒所引起的一种禽类传染病，OIE根据对家禽所造成的疾病程度，禽流感被分为高致病性禽流感病毒（highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）和低致病性禽流感病毒（lowlypathogenic avian influenza virus， LPAIV）。

H9亚型AIV属于LPAIV，是家禽中最常见的病毒之一。

H9N2亚型AIV最早于1966年从火鸡体内分离到[1]。

此后H9亚型的禽流感病毒也从许国国家的家禽和水禽中分离到[2]。

H9N2亚型AIV在我国广泛存在，且多呈低致病性感染，并呈逐渐蔓延之势[3]。

多数携带该病毒的野禽、水禽、家禽并不表现出临床症状或仅表现轻微临床症状，一旦出现临床症状多表现为呼吸系统症状、蛋鸡产蛋下降、肉鸡生长迟缓等，是影响我国养禽业发展的重要病原。

因此，关注H9N2亚型AIV的研究具有普遍的公共卫生意义。