化学发光常见问题集锦_107问1

AMPPD 是一种金刚基二螺[4，4]二氧己烷的磷酸酯。经 ALP 水解生成一种不稳定的阴离子， 该阴离子分解时持续发光。发光强度稳定，与 ALP 量成比例。
化学式是 4-甲氧基-4-（3-苯磷酸盐）螺-（1，2-二螺[4，4]二氧己烷-3，2’-金刚烷
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试剂盒中有哪几种试剂，作用都是什么？
有五个仓，以 FRT4 为例： R1a: 包被着链霉亲和素的Dynabeads** 顺磁性微粒溶于TRIS 缓冲液[含有蛋 白质( 鸟类)、表面活性剂、0.125% NaN3和0.125% ProClin*** 300]。 R1b: 含蛋白质( 鸟类)、表面活性剂、< 0.1% NaN3和0.1% ProClin 300 的 TRIS 缓冲盐水。 R1c: 含蛋白质( 鸟类)、表面活性剂、0.125% NaN3和0.125% ProClin 300 的 TRIS 缓冲盐水。 R1d: 三碘甲状腺原氨酸- 碱性磷酸酶( 牛) 结合物溶于TRIS 缓冲液 [含蛋白 质( 鸟类)、表面活性剂、< 0.1% NaN3和0.1% ProClin 300]。 R1e: 结合了生物素的小鼠单克隆抗甲状腺素(T4) 溶于TRIS 缓冲液[含蛋白质 ( 鸟类和鼠类)、表面活性剂、0.125% NaN3和0.125% ProClin 300]。 以该测试项目反应原理说明： Access Free T4 测定是两步酶免法测定。将结合了生物素的单克隆抗甲状腺素(T4)抗体、样本、 缓冲蛋白溶液以及包被着链霉亲和素的固相加至反应管中。在这首次温育过程中，结合了生物 素的抗T4 抗体与固相及样本内的游离T4 相结合。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物 质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质被冲洗除去。然后，将缓冲蛋白溶液及三碘甲状 腺原氨酸(T3)- 碱性磷酸酶结合物添加至反应管中。T3- 碱性磷酸酶结合物与空缺的抗T4 抗体 结合位点结合。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未 结合的物质被冲洗除去。然后，将化学发光底物Lumi-Phos* 530 添加到反应管内，由照度计对 反应中所产生的光进行测量。所产生光的量与样本内游离T4 的浓度成反比。样本内分析物的量 由所储存的多点校准曲线来确定。 11 如何看待说明书中的方法局限性？ 此章节的内容极为重要，实验室工作人员必须对其进行理解，因为它关系到实验室能否对 样本分析结果进行正确的解释。在解释结果时， 需参照该病人的整体临床情况，包括：症状、 临床病史以及其它测试所得的数据和其它相应的信息。
ACCESS 化学发光常见问题
Beckman
Coulter
ACCESS
系列全自动微粒子化学发光 免疫分析系统
常见问题及答疑
ACCESS 化学发光常见问题
目录
第一部分：化学发光基础知识 第 1--17 问
第二部分：仪器应用部分
第 18--76 问
第三部分：项目应用部分
第77—109问
ACCESS 化学发光常见问题
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什么是功能灵敏度？ 功能灵敏度(Functional sensitivity)为<20%CV 时所能检测到的最低极限浓度，它反映在
实际样品检测时所能达到精确定量的检测极限。 16 如何理解说明书中的稀释回收率？ 稀释回收率与稀释线性不不完全是一回事，但是二者可用同一个研究方式来检验，要进行 稀释回收率测定首先用户需要选取一个已知浓度的病人样本，在分析项目的线性范围内对 其进行多点稀释后进行检测，如果所测得结果与最初的样本稀释系数结果相匹配，那么就 验证了稀释回收率与检测线性范围。稀释线性与回收率的区别在于，将一组分析物校准品 当未知样品进行分析，来对其检测线性范围进行验证。
ACCESS 化学发光常见问题
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如何理解最高可报告值？ 当样品浓度高时，可以报告大于最高校准品值的结果，有些试剂生产商的的测定系统通常 用亮点调整来代替完全校准，这样的话他们可报告范围是一个拟合而出的最高水平（而非 实际测定值） 。而在 ACCESS 检测系统中，用户自己创建了标准曲线，当该标准曲线意境通 过并且质控检测被接受时，就可以证实其可报告的上限。当样本分析所得的 RLU 值高于最 高校准品时，以样本结果大于最高校准品值的形式报告，多数实验室对大多数测定项目的 分析结果使用这种直接报告模式，如果需要获得确切的测定值，则需要进行机外人工稀释 并重新分析样本。
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什么是基质效应？
基质是指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著
的干扰，并影响分析结果的准确性。目前最常用的去除基质效应的方法是，通过已知分
析物浓度的标准样品，同时尽可能保持样品中基质不变，建立一个校正曲线（ calibration curve） 。
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稀释样品时稀释物不对为何有基质效应？
为抗原提高发光强度、快速达到稳定、持续发光。
6 什么是嗜异性抗体？
病人样品中可能自然产生一些针对动物免疫球蛋白的抗体(通常是鼠或羊)，一般来源于暴露 于这些动物或接受过动物血清的治疗， 分析的干扰： 可以在双单克隆夹心法分析模式中引起假阳 性，可以在单克隆/多克隆分析模式中出现假阴性。
厂家在试剂生产中会加入封闭剂，封闭剂可以加在反应基质中或整合在试剂盒内：鼠 (鼠科 类), 鸟 (鸟科类) 和羊蛋白，各个厂家生产的分析试剂都有可能会不同程度的受到任何一个病 人血清的影分：仪器应用部分
18 我想开展一个新项目如 IL-6，详细程序是什么？ 试剂 定标液 质控品 稀释液* A16369 A16370 A16371 S0 或样品稀释液 A（81909） 首先在发光项目速查手册（或说明书）中查到该项目订货信息：
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激活 IL-6：主菜单下按[F8]-系统设置； 按[F2]-项目； 在项目列表中找到 IL-6（210） 在 Enabled 打上对勾选择打开 按[F2]-单位选择； 将光标点到所需设置样本类型处，按下拉框后出现单位列表； 选择所需单位，按 F1 确认； 将光标右移到有效位数处，可输入“1” 、 “2” 、 “3” 表示小数点后的位数； 按 Back-主菜单 注意：在仪器和中文电脑上选择的项目单位必须一致，才能保证结果准确
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如何理解最低可报告值？ 所有的定量测定在曲线的下端通常都有一个零标准，该标准允许计算结果低至零，当测定 结果越接近零时，测定结果就越不那么精确。在说明书中给出了项目的检测最低下限，建 议以低于该下限来报告结果。
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什么是分析灵敏度？ 分析零敏度通常是对标准曲线上的零点校准品距零值的 2SD 值范围来进行测定计算的（而 SD 值是将零校准品作为未知浓度样品经多管检测后计算均值所得）

在主菜单按 F5 定标 再按 F5 定标设置 按 F1 增加定标液 当出现对话框后，扫描定标液的条形码（或手工输字符） 按 OK 确认。

然后加载试剂，定标即可。
19 反应管最多加入多少？ 在 ACCESS 与 ACCESS2 上一次最多加入 3 盒，共 294 只试管，切记放 RV 管架之前要检查是否 有松动的 RV 管。DXI800 一次最多可加入 2 袋（2000 只） ，注意将管均匀分散。 20 装载基质液注意什么，有何影响？ 提前 18 小时将需更换的新基质置室温预温， 否则会造成光量子值偏低， 进而影响有些结果 （夹 心法）值偏低而有些结果（竞争法）偏高。 21 装载试剂注意什么,有何影响？ 装载试剂前须将试剂轻轻倒转混匀， 使灰色仓均匀浑浊后 （尤其注意粘附在壁上的试剂） 装载， 否则使结果偏低，但一旦开瓶使用后不可再混匀 22 试剂可以在运行中装载吗？ 试剂可以在仪器运行中加载， 选择试剂加载申请后， 仪器会有提示剩余多长时间可进行加载， 这时仪器会将正做测试的试剂处理完后允许加载。 23 仪器在运行的时候，为什么有些试剂盒上面有一个小锁的标志？ 这表明仪器正在使用这盒试剂，不能更换该盒试剂 24 我想知道某个项目在不同单位之间的换算系数，如何查找？ 更换该项目的单位后， 定标曲线里面的浓度值相应会发生变化， 可以记录不同单位下高浓度 定标点（如 S4,S5 点）的数值进行换算。 25 主探针上的超声发射装置有什么作用？ 超声装置的作用：混匀试剂、混匀 RV 内容物、检测样本液面、清洁主探针 26 为什么在装载新试剂包前需上下颠倒混匀？ 在装载新的试剂包前应轻轻地上下颠倒混匀，这样可去除试剂包顶部粘附的磁性粒子。 27 基质液更换的注意事项？ 注意避免污染基质液 - 不要让基质液瓶中的管道及基质液瓶盖的内表面接触到任何物体 的表面 避免使用有滑石粉的手套 基质液装上机器前，必须放置在室温平衡 18 个小时. 基质液开瓶后效期为 14 天 28 为什么在打开 ACCESS2 的仪器外盖前需要先关闭效用检测功能？
分析方法及过程 ACCESS 系统采用磁性微粒作为固相载体，以 AMPPD 作为发光剂，固相载体的应用扩大了测 定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有 5 个小室分别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。 ⑴、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的 抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体-抗 原-酶标记抗体复合物。 ⑵、洗涤、分离：在电磁场中进行 3 次洗涤，很快将未结合的多余抗原和酶标记抗体洗去。 ⑶、加入底物 AMPPD 发光剂：AMPPD 被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去 磷酸基因，生成不稳定的中介体 AMPD。AMPD 很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同 时发射出光子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过 光量子阅读系统记录发光强 度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。
ACCESS 化学发光常见问题
我们在稀释样品时要考虑到基质效应的影响，稀释必须在适当的基质中进行，对于 大多数测定而言，适当的基质就是零校准品，如果分析物稀释基质效应中所含成分浓度不正 确，稀释回收率就不能对它们进行准确的测定，因为它们稀释后会与 Bing agent 形成新的平衡。
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什么是 AMPDD，化学结构，如何发光？
ACCESS 化学发光常见问题
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什么是钩状效应（hook effect），如何判断及解决？ 免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中
时，形成的免疫反应最强烈，形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗 原或抗体其中一者过量时，免疫反应将减弱，测定值呈现假性低值。 在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应， 对于一步夹心法项目说明书中都提到了 产生钩状效应的上限如人绒毛膜促性腺激素的钩状效应值是 100 万 mIU/ml.在实际工作中如遇到 测定值与临床严重不符的结果要考虑到钩状效应，解决办法是稀释此样本。磁性微相载体，
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现在 ACCESS 检测系统在市场上有哪几种机型？ 化学发光仪系列：ACCESS、ACCESS2、DXI600（速度 200 速，50 试剂位） 、DXI800（速度最 快达 400 速） 生化免疫一体机系列：DXC00i（DXC600+CTA+ACCESS2） 、DXC880i(DXC800+UCTA+DXI800)
第一部分：化学发光基础知识
1 什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？ 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光与免疫反应相 结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点， 易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床 实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 （1）与放免（RIA）产品比较 与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害， 大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （2）与酶免（ELISA）产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具 ELISA 法简便的操作方法与较短的反应时间。 2 什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？ 将 Ag 或 Ab 用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物质等)进行标记，在与标本 中的相应 Ab 或 Ag 反应后，可以不必测定 Ag-Ab 复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标 记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。 三要素：通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）的物质,常标记在抗体上 通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前 需要去仔细关注一下分析的模式（format） 3 标记免疫技术主要有哪几种？ 主要经历了四种标记免疫技术的发展：荧光素(Fluorophores) – FIA 放射性同位素(Radioisotopes) – RIA 酶(Enzymes) – EIA 化学发光物质 - CLIA 4 ACCESS 化学发光原理？