【医学课件大全】商业化产品中常见的化学发光系统 (87p)
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化学发光ppt课件
47
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
6
2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
25
酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
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2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
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酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
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酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
化学发光介绍-PPT
26
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
27
肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
22
肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
15
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
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肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
22
肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
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感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
化学发光PPT课件
A+B → C*, C* → C+hv 该发光反应的化学发光强度取决于反应速度dp/dt和反应 的化学发光量子效率（ ΦCL ）
ICL（T）= ΦCLdp/dt
常用化学发光试剂
A 鲁米诺（luminol）及其衍生物
（3—氨基—邻苯甲酰肼）
在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发 出蓝色光，量子产率介于0.01~0.05之间是一个研究最早，最多，
适用范围广
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底 适用范围广
酶的活性、受体-配体反应、低亲和力的反应、第二信使 水平、DNA、RNA、蛋白质、多肽、碳水化合物、小分 子、大分子
易使用 高通量
光激发化学发光
特点：
2. 低本底 第一，天然荧光寿命小，而发光微粒的稳定发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采 集光信号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 第二，由于LiCA采用680nm红光激发，而红光的能级几乎不可能激发生物样品或微孔 板中的荧光物质，故本底很低。 第三，LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用荧 光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有效降低 本底。
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
ICL（T）= ΦCLdp/dt
常用化学发光试剂
A 鲁米诺（luminol）及其衍生物
（3—氨基—邻苯甲酰肼）
在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发 出蓝色光，量子产率介于0.01~0.05之间是一个研究最早，最多，
适用范围广
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底 适用范围广
酶的活性、受体-配体反应、低亲和力的反应、第二信使 水平、DNA、RNA、蛋白质、多肽、碳水化合物、小分 子、大分子
易使用 高通量
光激发化学发光
特点：
2. 低本底 第一，天然荧光寿命小，而发光微粒的稳定发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采 集光信号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 第二，由于LiCA采用680nm红光激发，而红光的能级几乎不可能激发生物样品或微孔 板中的荧光物质，故本底很低。 第三，LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用荧 光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有效降低 本底。
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
检验技术化学发光和荧光免疫技术及仪器授课PPT
PART 03
荧光免疫技术详解
荧光免疫技术原理
或抗体结合，形成荧光标记 的抗原或抗体。
激发与发射荧光
在特定波长的光激发下，荧光标记物发出特定波长的荧光，通过检 测荧光信号实现对抗原或抗体的定量或定性分析。
信号放大
荧光免疫技术常采用信号放大方法，以提高检测灵敏度。常见的信 号放大方法包括酶标记、化学发光标记和量子点等。
对化学发光与荧光免疫技术进行比较，分 析各自的优缺点，并展望未来发展趋势和 挑战。
PART 02
化学发光技术基础
化学发光原理
化学发光是指物质在化学反应过程中吸收反应释放的能量，并以光子的形式释放出 来。这个过程不需要外部光源激发，因此被称为化学发光。
化学发光反应通常可以分为两类：一类是直接化学发光，反应过程中直接产生光子 ；另一类是能量转移化学发光，涉及两个或多个反应物之间的能量转移。
，为临床诊断和治疗提供有力支持。
荧光免疫技术在病毒与细菌检测中的应用
总结词
高分辨率、可视化结果、快速检测
详细描述
荧光免疫技术利用荧光物质标记抗体或抗原 ，通过荧光信号的强弱判断目标物质的含量 。该技术具有高分辨率和可视化结果的特点 ，能够快速检测病毒和细菌等微生物，为感 染性疾病的诊断和治疗提供重要依据。
课程内容概述
化学发光技术及其仪器
荧光免疫技术及其仪器
介绍化学发光技术的基本原理、发光标记 物、发光反应体系以及常见的化学发光分 析仪器。
探讨荧光免疫技术的基本原理、荧光标记 物、荧光反应体系以及常见的荧光免疫分 析仪器。
临床应用实例
技术比较与展望
通过实际案例分析，介绍化学发光与荧光 免疫技术在临床检验中的应用，包括传染 病检测、肿瘤标志物检测、激素检测等。
常见化学发光技术PPT课件
02
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
常见化学发光体系简述
常见的化学发光体系
吖啶酯化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
吖啶酯化学发光机制
常见的化学发光体系
AMPPD化学发光体系 welcome to use-1,2these PowerPoint templates, New ☆ （金刚烷） 二氧环乙烷及其衍生物的发光 体系是目前最重要、最灵敏的一类发光体系，主 Content design, 10 years experience 要代表：ALP-AMPPD发光体系。
直接化学发光免疫分析
直接化学发光的机制
夹心法
化学发光酶免疫分析
Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA
•用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物 酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体 ，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应 后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合 物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解 底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将 光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
☆ 该体系中溶液的pH增高会增强发光强度,实验 证明最佳pH为9.0，在该体系中加入水溶性的大分 子物质牛血清白蛋白(BSA)或十四烷酰氨基荧光 素与十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)构成的水溶性 胶粒,可使发光强度增强400倍。
常见的化学发光体系
AMPPD化学发光体系
☆ 3-（2-螺旋金刚烷）-4-（3-磷氧酰）苯基-1,2welcome to use these PowerPoint templates, New 二氧环乙烷（ AMPPD ）。 Content design, 10 years experience ☆ AMPPD是一种超敏感的AP底物,它首先在AP 的特异催化下迅速脱磷酸基生成AMPD-阴离子中 间体(半衰期2～30 min), 此不稳定的中间体经分子 内电子转移裂解为一分子的金钢烷酮和一分子处 于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当回到基态 时发出发出λ max为477 nm的光，并可持续几十分 钟。
化学发光原理及检测项目.完美版PPT资料
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
The Brain Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
促性腺激素（GTH） 垂体分泌的促性腺激素（GTH）有黄体生成素
（ Luteinizing hormone,LH）和卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH），均为糖蛋白，含有α和β亚单位， 独立的α和 β 亚单位无生物学活性，两者结合才有促性腺激素作用。
[生理效应] 1、女性：FSH主要生理功能是刺激 卵泡的生长和卵巢颗粒细胞的增生， 在卵泡期LH和FSH共同促进卵泡的 成熟，刺激卵巢分泌雌激素和孕酮， 在月经中期 LH急剧升高，排卵后持 续的LH分泌刺激黄体生成孕酮。
发光仪控制模块
化学发光的分类
按化学反应类型
酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统
非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统
按发光持续时间
闪光（Flash）:
发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样(In Situ Injector) 和时间积 分法测量
→TSH↗ （2）随访的有效性：FT4 >TSH > TT4 >FT3 > TT3 （3） TSH的改变滞后于FT4（特别病程长、药控差者） （4）治疗药物过量：
a. 临床：低代谢症候：畏寒、心缓、嗜睡、便干、 浮肿、甲状腺肿大
b. FT4↓/TSH↑
甲功检测的干扰因素
新生儿：TSH↑（≤20mU/L） FT4 ↑;TT4 ↑ 避孕药： TT4 ↑ 肝炎： TT4 ↑ 肝硬化： TT4↓ 妊娠： TSH↓； TT4 ↑ 抗癫痫药（卡马西平，苯巴比妥，苯妥英）： TT4↓ 胺碘酮： TT4 ↑(严重者可致碘甲亢) 重症患者： TT3↓
The Brain Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
促性腺激素（GTH） 垂体分泌的促性腺激素（GTH）有黄体生成素
（ Luteinizing hormone,LH）和卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH），均为糖蛋白，含有α和β亚单位， 独立的α和 β 亚单位无生物学活性，两者结合才有促性腺激素作用。
[生理效应] 1、女性：FSH主要生理功能是刺激 卵泡的生长和卵巢颗粒细胞的增生， 在卵泡期LH和FSH共同促进卵泡的 成熟，刺激卵巢分泌雌激素和孕酮， 在月经中期 LH急剧升高，排卵后持 续的LH分泌刺激黄体生成孕酮。
发光仪控制模块
化学发光的分类
按化学反应类型
酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统
非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统
按发光持续时间
闪光（Flash）:
发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样(In Situ Injector) 和时间积 分法测量
→TSH↗ （2）随访的有效性：FT4 >TSH > TT4 >FT3 > TT3 （3） TSH的改变滞后于FT4（特别病程长、药控差者） （4）治疗药物过量：
a. 临床：低代谢症候：畏寒、心缓、嗜睡、便干、 浮肿、甲状腺肿大
b. FT4↓/TSH↑
甲功检测的干扰因素
新生儿：TSH↑（≤20mU/L） FT4 ↑;TT4 ↑ 避孕药： TT4 ↑ 肝炎： TT4 ↑ 肝硬化： TT4↓ 妊娠： TSH↓； TT4 ↑ 抗癫痫药（卡马西平，苯巴比妥，苯妥英）： TT4↓ 胺碘酮： TT4 ↑(严重者可致碘甲亢) 重症患者： TT3↓
化学发光PPT课件
第2页/共56页
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
第3页/共56页
第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第41页/共56页
电化学发光免疫分析示意图
第42页/共56页
电化学发光免疫测定示意图
第43页/共56页
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
第44页/共56页
第45页/共56页
第46页/共56页
第47页/共56页
第48页/共56页
第49页/共56页
第50页/共56页
第51页/共56页
四、临床应用
第9页/共56页
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
第17页/共56页
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
第18页/共56页
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
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第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
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电化学发光免疫分析示意图
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电化学发光免疫测定示意图
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标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
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四、临床应用
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光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
第17页/共56页
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
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1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
化学发光介绍ppt课件
9
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
6
免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
14
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
7
免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
6
免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
14
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
7
免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
化学发光介绍ppt课件
3
免疫比浊技术：在免疫反应沉淀检测法的 基础上建立起来的，是用透射比浊仪或散 射比浊仪检测可溶性抗原抗体复合物在液 相中形成的浊度从而测定抗原（抗体）的 含量 优点：快速简便 缺点：受“前带现象”影响较大，灵敏度 和特异性较差 放射免疫分析技术：用同位素标记纯化的 抗原（抗体）与待测的抗体（抗原）结合，
•化学发光免疫检 测介绍
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
主要内容
免疫学检测方法介绍 筛查 感染性疾病检测 管及心肌标志物 肿瘤标志物检测 压辅助诊断 甲状腺及甲状旁腺功能检测 谢 肝纤维化检测 谢
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
2
免疫学检测方法介绍
免疫学检测是基于抗原和抗体的特 异性反应进行检测的一种手段；
免疫标记技术是将一些既易测定又 具有高度敏感性的物质标记到特异 性抗原或抗体分子上，通过这些标 记物的增强放大效应来显示反应系 统中抗原或抗体的性质与含量。
5
金标记免疫（胶体金）分析技术：简便、 快速、不需要特殊仪器，适用于单人份操 作，可用于较紧急和实验条件较差场合。 但是灵敏度、特异性较差，无法实现自动 化，结果判断主观，受环境影响较大，成 本高。 免疫荧光技术：先将已知的抗原（抗体） 标记上荧光素，再用这种荧光抗原（抗体） 作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗 原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现 anti-HAV-IgM,于发病后2～3周达峰值， 1～2月后迅速下降，3个月后基本消失。因 此，anti-HAV-IgM是诊断甲型肝炎早期感 染的指标。 HAV-IgG Anti-HAV-IgM一般在急性感染 后3～12周出现，滴度缓慢上升，6个月后 达到峰值，然后逐渐下降，但维持时间较
化学发光介绍.ppt
分析诊断试剂发光类型为辉光型。
4
化学发光免疫分析的优势
▪ 灵敏度高
▪ 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度 可达 10-22 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光 免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法 无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意 义。
化学发光介绍
二零零九年元月
1
▪ 化学发光免疫分析方法简介
▪ 化学发光免疫分析
▪ （Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）
▪
是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它
具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无
污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分
这些情况的发生，为正确判断病情提供依据。并且目前病毒性肝炎和其他
病因所致的肝病甚多，而且临床症状、体征及肝功能无特殊改变差异，故
只有依靠高灵敏度的病原学鉴别诊断。
10
▪ 1．缩短急性乙肝HBsAg 测定“窗口期” ▪ 2．如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而化
学发光免疫分析定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能同时测定 出HBsAg和HBsAb。 ▪ 3. 可发现低浓度HBsAg携带者。特别是一些群体如医护工作者、病人 家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血传播感染成急性乙肝， 而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感 染，特别应当引起人们的足够重视，密切关注并采取措施防止发展成 乙肝或慢性携带者。
9
▪ 一、化学发光极大地提高了检测灵ห้องสมุดไป่ตู้度
▪
HBsAg是HBV感染的特异标志，HBsAg的出现就可作为乙肝的早期诊
4
化学发光免疫分析的优势
▪ 灵敏度高
▪ 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度 可达 10-22 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光 免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法 无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意 义。
化学发光介绍
二零零九年元月
1
▪ 化学发光免疫分析方法简介
▪ 化学发光免疫分析
▪ （Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）
▪
是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它
具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无
污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分
这些情况的发生，为正确判断病情提供依据。并且目前病毒性肝炎和其他
病因所致的肝病甚多，而且临床症状、体征及肝功能无特殊改变差异，故
只有依靠高灵敏度的病原学鉴别诊断。
10
▪ 1．缩短急性乙肝HBsAg 测定“窗口期” ▪ 2．如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而化
学发光免疫分析定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能同时测定 出HBsAg和HBsAb。 ▪ 3. 可发现低浓度HBsAg携带者。特别是一些群体如医护工作者、病人 家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血传播感染成急性乙肝， 而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感 染，特别应当引起人们的足够重视，密切关注并采取措施防止发展成 乙肝或慢性携带者。
9
▪ 一、化学发光极大地提高了检测灵ห้องสมุดไป่ตู้度
▪
HBsAg是HBV感染的特异标志，HBsAg的出现就可作为乙肝的早期诊
化学发光介绍 ppt课件
2、定量测定HBeAg和HBeAb浓度的变化，可以反映病情变化和治疗效果。明确测定 HbeAg向抗-Hbe转换的时期，即表现为HbeAg浓度下降和抗-Hbe浓度升高的过程。高浓 度的HbeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的抗-Hbe一方 面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有 关。
缺点
化学发光 放射免疫 酶联免疫 时间分辨 电化学发光
操作简单，成本较低，灵 进口试剂成本较高，国产 敏度较高，试剂较稳定 试剂合理
试剂成本低，灵敏度较高 操作复杂操作简单
灵敏度低，适用于定性和 半定量
灵敏度较高，试剂较稳定 操作复杂，反应时间长， 试剂成本较高
灵敏度较高，试剂较稳定 试剂成本高，仪器维护费 用较高，有本底干扰
收费标准 每月标本量 每年毛收入 每年成本
(元)
(万元)
(万元)
乙肝两对半
180
15*22天
71.28
化学发光免疫仅乙肝五项年净收入总计47.52万元
23.76 每人份60元
年净收入/ 万元(保守
估计)
47.52
乙肝两对半
25
15*22天
9.90
1.19
8.71
每人份3元
酶法试剂乙肝五项年净收入总计 8.71万元
3、性激素系列
（LH,FSH,TSH,E2,PRO,PRL,TES,HC G,B-HCG…）
8、优生优育类
（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）
4、甲状腺功能
9、其他类
（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO…） （ALB,一些药物测试等）
5、糖尿病系列
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放免
试剂盒 特殊防护
仪器 治理污染
酶标
发光
三种免三种疫免测疫测定定技技术术的的成本成及本费用及费用
免疫分析技术基本原理
利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法
抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。 抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物
质的球蛋白。
均相法（Homogeneous）
Hook(前滞)效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值
功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度
线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度
相关系数≥0.99的曲线范围
电压或电流信号
放大
主要特点
结构简单、性能稳定 但灵敏度低、线性范围较窄。
单光子计数式发光检测仪
单光子计数器
样品运动/定位装置 原位注射泵
计数/贮存器 打 印 机
程控高压
计
算
控制器
机
程控自动门锁及检测装置 发光仪执行模块
发光仪控制模块
光生物学技术的应用范围
军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测技术线性范围的比较
线性范围
105 104 103 102
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18 15 12 9 6 3 0
酶标
荧光
放免
发光
人人民民币币
100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0
商业化产品中常见的化学发光系统
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2O2+
NH HRP NHOH- N2
NH2 O
CO2+Photon (425nm)
CO2NH2
增强剂（Enhancer）
OH
N
R
BR
OH
OH
OH
R
S
发光信号检测
光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD） 原理
光信号
光电转换器件
……
已成为现代生物技术最活跃的领 域之一
光生物学检测技术的优越性
彻底消除了放射性危害
无半衰期限制，试剂稳定 性和有效期大大延长
容易实现连续、动态、重 复测定
适合于复合标记系统进行多指 标并行测定
操作简单，反应速度快，容易 实现自动化
灵敏度和线性范围超过以往技 术
几种标记/检测技术灵敏度的比较
洗涤去除未结合的反应物
仪器检测
反应0-5分钟
发光免疫分析技术 的现状及应注意的问题
目前已商品化的光生物学标 记检测技术整体性能比较
技术类型 标记、反应体系
主要优点
主要不足
酶 促 化 学 发 光 非 酶 促米 诺、氧化剂、增强 剂等
螺旋金刚烷环氧化 物、碱性磷酸酶
吖啶酯、过氧化氢
测量方式简单（速率 法）成本较低、灵敏 度较高
测量方式简单（速率 法）灵敏度较高
灵敏度较高
铕（Eu）、镝(Dy)、 灵敏度较高、试剂较
钐（Sm）、铽
稳定
（Tb）、等络合物
脉冲光源激发
钌(Ru)的络合物脉 冲电场激发
工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移
试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积 分法）需原位进样(In Situ Injector)仪器成 本及维护费用较高试剂成本较高 测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流 动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中 同类元素可导致本底干扰
免疫凝集法： 自然凝集：血型测定 肥达氏反应； 敏化凝集：血球凝集法 凝胶（微粒）比浊法
免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法， 酶--辅酶（亚基）配位法 荧光偏振法，荧光共振法 吖啶酯水解法，生物传感器
非均相法（Heterogeneous）
免疫印迹（Western-blot）：基因表达分析、HIV感染确认实验 免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析 纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测 放射免疫法（RIA）：沉降法（放免）、固相法（免放，IRMA） 荧光免疫法（FIA）；酶联免疫法（EIA，ELISA） 酶联荧光法（FEIA）、化学发光法（LIA） 酶联化学发光法（ELIA）、时间分辨荧光法（DELFIA）、电化
线性范围
待测物浓度（ X ）
发光免疫分析基本操作步骤（一步法）
待测样品
标记抗体或抗原
包被抗体或抗原的反应管 反应30-60分钟
洗涤去除未结合的反应物
发光底物
仪器检测
反应0-5分钟
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
待测样品 标记抗体或抗原
发光底物
包被抗体或抗原的反应管 反应30-60分钟
洗涤去除未结合的反应物 反应30-60分钟
学发光法（ECLIA）；……
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：
S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。
功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。
线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度
相关系数≥0.99的曲线范围
这些发光检测技术的灵敏度及线性范 围都已经接近了免疫反应的极限。
片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强 弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。
灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰 免疫反应的因素，而不是检测技术。
筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理 水平和技术服务是试剂生产的关键
例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L 第四代化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L 原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。
发光技术—— 临床免疫分析划时代的进步
普通放免 功能灵敏度1-2mIU/L
基本无法测到 正常值下限以下 的血清TSH浓度 对甲亢的诊断意义不大
固相放免 功能灵敏度 0.1-0.2mIU/L 在甲亢的诊断中 开始发挥作用
时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：Time Resolved Fluorescence （Time Delayed Photoluminescence）解离增强荧光免疫分析（DEFIA）
电化学发光（也称场致发光）：Electrochemiluminescence（Electroluminescence） 化学发光：Chemiluminescence
试剂盒 特殊防护
仪器 治理污染
酶标
发光
三种免三种疫免测疫测定定技技术术的的成本成及本费用及费用
免疫分析技术基本原理
利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法
抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。 抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物
质的球蛋白。
均相法（Homogeneous）
Hook(前滞)效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值
功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度
线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度
相关系数≥0.99的曲线范围
电压或电流信号
放大
主要特点
结构简单、性能稳定 但灵敏度低、线性范围较窄。
单光子计数式发光检测仪
单光子计数器
样品运动/定位装置 原位注射泵
计数/贮存器 打 印 机
程控高压
计
算
控制器
机
程控自动门锁及检测装置 发光仪执行模块
发光仪控制模块
光生物学技术的应用范围
军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测技术线性范围的比较
线性范围
105 104 103 102
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18 15 12 9 6 3 0
酶标
荧光
放免
发光
人人民民币币
100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0
商业化产品中常见的化学发光系统
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2O2+
NH HRP NHOH- N2
NH2 O
CO2+Photon (425nm)
CO2NH2
增强剂（Enhancer）
OH
N
R
BR
OH
OH
OH
R
S
发光信号检测
光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD） 原理
光信号
光电转换器件
……
已成为现代生物技术最活跃的领 域之一
光生物学检测技术的优越性
彻底消除了放射性危害
无半衰期限制，试剂稳定 性和有效期大大延长
容易实现连续、动态、重 复测定
适合于复合标记系统进行多指 标并行测定
操作简单，反应速度快，容易 实现自动化
灵敏度和线性范围超过以往技 术
几种标记/检测技术灵敏度的比较
洗涤去除未结合的反应物
仪器检测
反应0-5分钟
发光免疫分析技术 的现状及应注意的问题
目前已商品化的光生物学标 记检测技术整体性能比较
技术类型 标记、反应体系
主要优点
主要不足
酶 促 化 学 发 光 非 酶 促米 诺、氧化剂、增强 剂等
螺旋金刚烷环氧化 物、碱性磷酸酶
吖啶酯、过氧化氢
测量方式简单（速率 法）成本较低、灵敏 度较高
测量方式简单（速率 法）灵敏度较高
灵敏度较高
铕（Eu）、镝(Dy)、 灵敏度较高、试剂较
钐（Sm）、铽
稳定
（Tb）、等络合物
脉冲光源激发
钌(Ru)的络合物脉 冲电场激发
工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移
试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积 分法）需原位进样(In Situ Injector)仪器成 本及维护费用较高试剂成本较高 测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流 动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中 同类元素可导致本底干扰
免疫凝集法： 自然凝集：血型测定 肥达氏反应； 敏化凝集：血球凝集法 凝胶（微粒）比浊法
免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法， 酶--辅酶（亚基）配位法 荧光偏振法，荧光共振法 吖啶酯水解法，生物传感器
非均相法（Heterogeneous）
免疫印迹（Western-blot）：基因表达分析、HIV感染确认实验 免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析 纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测 放射免疫法（RIA）：沉降法（放免）、固相法（免放，IRMA） 荧光免疫法（FIA）；酶联免疫法（EIA，ELISA） 酶联荧光法（FEIA）、化学发光法（LIA） 酶联化学发光法（ELIA）、时间分辨荧光法（DELFIA）、电化
线性范围
待测物浓度（ X ）
发光免疫分析基本操作步骤（一步法）
待测样品
标记抗体或抗原
包被抗体或抗原的反应管 反应30-60分钟
洗涤去除未结合的反应物
发光底物
仪器检测
反应0-5分钟
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
待测样品 标记抗体或抗原
发光底物
包被抗体或抗原的反应管 反应30-60分钟
洗涤去除未结合的反应物 反应30-60分钟
学发光法（ECLIA）；……
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：
S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。
功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。
线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度
相关系数≥0.99的曲线范围
这些发光检测技术的灵敏度及线性范 围都已经接近了免疫反应的极限。
片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强 弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。
灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰 免疫反应的因素，而不是检测技术。
筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理 水平和技术服务是试剂生产的关键
例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L 第四代化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L 原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。
发光技术—— 临床免疫分析划时代的进步
普通放免 功能灵敏度1-2mIU/L
基本无法测到 正常值下限以下 的血清TSH浓度 对甲亢的诊断意义不大
固相放免 功能灵敏度 0.1-0.2mIU/L 在甲亢的诊断中 开始发挥作用
时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：Time Resolved Fluorescence （Time Delayed Photoluminescence）解离增强荧光免疫分析（DEFIA）
电化学发光（也称场致发光）：Electrochemiluminescence（Electroluminescence） 化学发光：Chemiluminescence