附植前胚胎发育的影响

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WY14643对附植前小鼠胚胎体外发育及活性氧的影响

WY14643对附植前小鼠胚胎体外发育及活性氧的影响

WY14643对附植前小鼠胚胎体外发育及活性氧的影响胡德宝;庄利利;张日欣;张也;李钟淑;方南洙【摘要】为研究人工合成的过氧化物酶体增值物激活受体α特异性受体激活剂(WY14643)对附植前小鼠胚胎体外发育的影响,以及WY14643对附植前小鼠胚胎内部活性氧的影响,通过H2O2诱导建立胚胎氧化损伤模型,添加不同浓度WY14643对胚胎进行体外培养,利用2'7’二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)测定胚胎内部H2O2含量.结果表明:不同浓度WY14643处理2h后,0.1μmol/LWY14643处理组4-细胞发育率、囊胚率显著高于其他各组(P<0.05);经0.1μmol/L WY14643和H2O2联合处理后,其胚胎发育率显著高于单独H2O2处理组和对照组(P<0.05);DCHFDA荧光检测发现,WY14643添加组胚胎内部各时期H2O2水平显著低于其他各组(P<0.05),并且胚胎内部H2O2呈一定的变化规律.说明适宜浓度的WY14643能够增加体外发育胚胎的发育率,减少胚胎内部活性氧水平,并且胚胎内部H2O2水平在4-细胞时期达到最高,囊胚时期显著下降.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2014(030)001【总页数】5页(P167-171)【关键词】WY14643;H2O2;早期胚胎;发育能力【作者】胡德宝;庄利利;张日欣;张也;李钟淑;方南洙【作者单位】延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002;延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002;延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002;延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002;延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002;延边大学农学院,动物遗传育种与繁殖实验室,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】S634.3随着体细胞克隆以及转基因技术等生物工程的不断发展,对体外发育的卵母细胞以及早期胚胎的需求逐渐增多。

氨基酸对哺乳动物胚胎体外发育的影响

氨基酸对哺乳动物胚胎体外发育的影响
的研 究结 果 显示 , 牛胚 胎 发 育 早 期 ( 裂 4 ) 露 于 分 8 暴 h
氨环境 下可抑 制其 发育 , 在桑 椹胚 阶段 有 促进 作用 , 而
如果 持续处 于高浓 度氨 环境 中则 对 胚 胎发育 不 利 。其
具 有 维 持 胚 胎 发 育 中 细胞 间渗 透 压 的作 用 。尽 管 附 植 前 胚 胎 能 在 无 氨 基 酸 条件 下 培 养 ,但 是 在 受精 卵 的 培养 液 中添 加 氨基 酸 可 提 高胚 胎 发 育 率 ,增 加 小 鼠 、 、 和 鼠等囊 胚 的 细胞 数 。氨 基 酸 的 生 理作 用 牛 人
氨基 酸是 胚 胎培 养 液 的重要 成 分 , 在培养 液 中添
及 造 血过 程 中具 有 重要 作 用 ,但 其 浓 度 超 过 4m I m/ 时可使胚 胎致 畸 、 育迟 缓 。 发
在 胚胎培 养液 中添 加混 合氨 基酸 可减 少 培养 导 致
加 氨 基 酸 可促 进 胚 胎发 育 , 高 囊 胚 率 、 化 率 和 胚 提 孵
正负效应与环境氨浓度 、胚胎发育阶段和持续时间有
关。
2 生殖道 及胚 胎氨 基酸含 量 兔生殖 道及胚 胎 中各 种氨 基 酸成 分及 浓度 随 发育 阶段 不 同而不 同 。卵母 细 胞 、 桑椹 胚 、 囊胚 腔 总氨基 酸 存在 差异 ,其 中甘氨 酸在 生殖 道 和胚 胎氨 基 酸 中 占有 重 要地 位 , 除卵 母 细胞 外 , 子 宫 液 、 椹 胚 和 囊 胚 腔 在 桑 中甘氨酸 的含量 都是 最高 的 , 其次 是谷 氨 酸 和丙 氨酸
啮齿类动物胚胎发育早期的物质转运 、 消化吸收合成
收 稿 日期 :0 5 1- 7 20 — 0 2

简述胚胎附植过程

简述胚胎附植过程

简述胚胎附植过程胚胎附植是指在体外受精后,将受精卵(胚胎)植入到子宫内壁的过程。

这是人类繁衍的关键步骤之一,也是辅助生殖技术中的重要环节。

胚胎附植过程涉及到胚胎的发育、子宫内膜的准备和植入操作等多个方面。

胚胎附植的第一步是胚胎发育。

在受精卵形成后,经过数天的发育,胚胎逐渐分化成不同的细胞群,形成胚胎球。

胚胎球的外层细胞形成胎盘,并与母体形成连接。

内层细胞则发育为胚胎的各个器官和组织。

胚胎球发育到适当的阶段后,即可进行附植。

胚胎附植的第二步是子宫内膜的准备。

子宫内膜是子宫腔内的一层组织,它在月经周期中会经历不同的变化。

在受精卵附植前,子宫内膜需要达到一定的发育程度,以提供适宜的环境来支持胚胎的生长。

在月经周期的第一阶段,子宫内膜会逐渐增厚,细胞会分泌黏液,为胚胎提供滋养物质。

在受精卵附植前的几天,子宫内膜会变得更加丰富血液供应,形成紧密的连接结构,以便胚胎可以牢固地附着在上面。

胚胎附植的第三步是植入操作。

植入操作通常在医院或诊所进行,由专业的医生或护士完成。

在操作前,医生会使用超声波等技术来确认子宫的位置和形态。

然后,医生会使用一根细长的导管,将胚胎轻轻地植入子宫内膜中。

这是一个微创的过程,通常不需要麻醉。

植入后,胚胎会自行附着在子宫内膜上,并继续发育。

胚胎附植后,医生会对患者进行一段时间的观察和护理。

在这段时间内,医生可能会建议患者避免剧烈运动和性生活,以减少对胚胎的干扰。

同时,医生也会监测胚胎的发育情况,以确保胚胎正常生长。

在一定的时间后,医生会进行妊娠检测,确认是否成功孕育。

总结起来,胚胎附植是一项复杂而精细的过程,需要胚胎的发育、子宫内膜的准备和植入操作的配合。

这个过程在辅助生殖技术中起着重要作用,为那些不能自然怀孕的夫妇提供了一种希望。

胚胎附植的成功与否取决于多种因素,包括胚胎的质量、子宫内膜的状态以及患者的个人因素。

通过科学的操作和医学监测,胚胎附植可以为许多夫妇带来幸福和喜悦。

氧分压_培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响

氧分压_培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响
关键词:猪;体细胞核移植;氧分压;生长因子;培养基
Effect of Oxygen Tension, Culture Media and Growth Factors on in vitro Development of Porcine Somatic Cloned Embryos
PAN Deng-ke, LIU Ji, FENG Shu-tang, MU Yu-lian, ZHANG Li
Key words: Pig; Somatic cell nuclear transfer; Oxygen tension; Growth factor; Culture medium
收稿日期:2006-11-22;接受日期:2007-02-14 基金项目:国家“十五”科技攻关项目(2004BA717B) 作者简介:潘登科(1972-),男,吉林九台人,博士,研究方向为猪转基因克隆和干细胞。Tel:010-62815893;Fax:010-62899982;E-mail:pand@
。通讯作者冯书堂(1945-),男,河北大名人,研究员,研究方向为小型猪培育和生物技术。E-mail:fst508@
4期
பைடு நூலகம்
潘登科等:氧分压、培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响
1187
0 引言
【研究意义】目前,体细胞克隆猪效率较低,克 隆胚胎的囊胚发育率在 10%左右,囊胚细胞数约 25~ 35,而体内囊胚的细胞数约为 200。Machaty 等[1]研究 发现体外培养的囊胚总细胞数低于体内胚,Koo 等[2] 发现猪的体细胞克隆胚胎(NTEs)以及体外受精胚胎 (IVFEs)的细胞数,均明显低于体内胚胎,这反映 了猪的体外培养体系还不理想。因此,胚胎体外培养 体系的改进将推动猪胚胎体外生产技术的发展,提高 体细胞克隆猪的效率。【前人研究进展】近年来猪孤 雌激活以及体细胞核移植胚胎的培养方面已经取得了 较大进展,但与体内生产的胚胎相比,体外培养胚胎 的早期发育率还很低,发育环境不理想[3]。胚胎培养 基是影响胚胎发育的一个重要因素。目前,用于猪早 期胚胎体外培养比较成功的培养基有 NCSU-23、 PZM-3 和 G2[4]等,其中 NCSU-23 是最常用的[5]。然 而该培养基尚有不足,如胚胎发育延迟,细胞数较少。 用 Yoshioka 研究出的 PZM-3 培养猪的体内受精胚, 囊胚率和细胞数都得到了提高[6]。氧浓度影响胚胎体 外培养是近期研究的一个热点[7~11]。胚胎体外培养通 常采用 5% CO2,95%空气(20% O2)的气相环境;另 一种培养气相是 5% CO2﹕5%~7% O2﹕88%~90% N2,接近生殖道的氧浓度[12]。理论上,低氧可减少培 养中自由基和活性氧(ROS)的形成,而活性氧对细 胞有毒害作用,易造成 DNA 损伤和脂质过氧化反应[13]。 由于猪的卵黄富含脂滴,猪胚胎对脂质过氧化反应特 别敏感,因此低氧可能有利于胚胎的发育。目前,两 种气相究竟哪种更好还有争议,研究表明有的培养基 在低氧环境下更有利于胚胎发育,而有些培养基在普 通气相较好。胚胎在体内发育过程中,母畜生殖道分 泌的生长因子对附植前的胚胎发育起着重要的作用[14], 如胰岛素、胰岛素样生长因子、表皮生长因子(EGF) 以及碱性成纤维因子(bFGF)等。在体外培养胚胎过 程中,向培养液内添加生长因子是否对胚胎的发育具 有促进作用,研究表明各种类型胚胎在不同阶段的添 加效果并不统一[15~17],对胚胎囊胚发育率和总细胞数 的影响也不一致。【本研究切入点】目前,猪的胚胎 体外培养的系统仍还不够理想,胚胎体外发育能力较 差。【拟解决的关键问题】研究对不同氧分压、几种 培养基及添加生长因子(EGF 和 bFGF)对体细胞核 移植克隆胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响,优 化猪体细胞克隆胚胎体外培养条件,提高克隆胚胎的

小鼠的生殖生理学特点

小鼠的生殖生理学特点

小鼠的生殖生理学特点(一)性成熟和体成熟动物生长发育到一定程度,即达到性成熟期。

性成熟的表现是生殖器官发育完全,出现第二性征。

这时雄性动物有产生精子、雌性动物有产生卵子的能力,并出现性的要求。

小鼠性成熟时期的标志是:雌性小鼠阴道口张开,出现求偶周期,有交配的欲望,愿意接近公鼠;公鼠睾丸下降,精子生成。

雌鼠一般在20日龄以前阴道口由皮肤闭合,之后阴道口皮肤逐渐变薄,阴道开口,其开口与卵巢机能活动相一致,所以阴道开口是雌鼠性成熟的主要标志。

雄鼠在25日龄左右,睾丸自腹腔落入阴囊,35日龄后睾丸形成精子,40日龄后的精子可受精,同时体重增加较快。

小鼠性成熟日龄因品系及饲养管理条件的不同而有所差异,一般雌性小鼠为35~50日龄,雄性小鼠为45~60日龄。

小鼠的体成熟一般在60~90日龄,此时小鼠体重增长较缓慢,是小鼠的适宜配种年龄。

(二)性周期小鼠为多周期发情动物。

雌性小鼠除妊娠期,通常进行周期性排卵。

性周期为4~5天,一般在发情后2~3小时即可排卵,其性活动一般可分为发情前期、发情期、发情后期和休情期。

产后12~14小时内有一次产后性周期。

自此以后,由于给仔鼠哺乳,性周期暂时停止。

离公鼠独居生产的母鼠,在仔鼠断乳2~6天后可出现下一个性周期。

(三)排卵和交配雌性小鼠排卵期为3~4天,但在排卵期仅有数小时允许公鼠交配。

小鼠属于自发排卵的动物,排卵一般发生在发情期末的半夜至凌晨4:30左右,交配一般发生在排卵前的22:00至次日凌晨1:00,即交配早于排卵2小时左右。

交配后精子到达输卵管受精部位的时间为20~60分钟,等待新鲜的卵子。

小鼠的排卵数因品系、个体及饲养管理等环境因素的不同而有所差异,我们在实验中常选用的昆白系小鼠排卵较多,但个体差异较大。

小鼠自然繁殖交配或超排发情交配后,如要知道是否已经交配以及体内的卵母细胞是否受精,一般是在交配的次日晨8:00时以前检查雌鼠的阴门,如见有阴门栓(小块稠桨糊样物质),则认为已经交配,并表明卵母细胞可能受精。

环境热休克对附植前早期牛胚胎发育的影响

环境热休克对附植前早期牛胚胎发育的影响

物遗 传育种 软件 因此 .国 内从 事 动 物遗 传 育种 的 教 学、 科研 、 产 和 管理 人 员 利用 S S的机 会很 多 , 大 生 A 绝 多数 仅用 于资 料 的 统计 分 析 .用 于 亲缘 性 资 料 B U LP 育 种值估 计 的却末 见报 道 现实 中 . 些从 事遗 传育 种 有
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维普资讯
中国奶牛 ・0 6年第 5期 20
・ 3- 2 ຫໍສະໝຸດ 环境热休克对附植前早期牛胚胎发育 的影响
杜立银 田文儒 ,
(. 1 内蒙古民族大学动物科技学院, 通辽 084 ;. 20 22莱阳农学院动物科技学院, 岛 26 0 ) 青 6 19
中图分类 号 :8 32 . 6 文献 标识 码 : 文章 编号 :0 4 4 6 (0 6 0 — 0 3 0 ¥ 2 .1 + 3 B 10 — 2 4 2 0 ) 5 0 2 — 1
母体内发育的胚胎 ,其存活能力在很大程度上依
赖于母体环境。在输 卵管和子宫功能的生理调节受到 破坏的情况下 , 就可能发牛胚胎的丢失或死亡。 所谓的
破坏因素 ,丁 日能是母体生理方面 的内在错误 , 或是强加
1 输卵管 内产生了胚胎有害因子 . 2 热休克会使母体生理机能发生改变 ,同时产生各 种有害因子。 其中, 输卵管 内产生的诸如一氧化氮 自『 } j 基 、 自由基等吲 它可通过脂 质氧化对生物膜的液态 氧 , 性 、流动I和通透性产牛影响 ,并与细胞 内各种分子 生 ( 质脂 、 白质或核酸等 ) 蛋 发生作用引起细胞损伤 。 研究 表明, 期卵裂阶段的胚胎对氧化应激非常敏感 , 易引 起胚胎发育抑制 、 细胞破碎和恶化 。

妊娠母猪的生产管理

妊娠母猪的生产管理

妊娠母猪的生产管理一、猪胚胎生长发育规律及影响因素:1、猪胚胎生长发育规律:精子与卵子在输卵管上1/3壶腹部完成受精后形成合子。

一般情况下,猪胚胎在输卵管内停留2d左右,然后移行到子宫角内,此时猪胚胎已发育到4细胞阶段,在子宫角内游离生活5~6 d ,胚胎已达到16~32细胞(桑葚胚),受精后第10天,胚胎直径可达2~6 mm 。

第13~14天胚胎开始与子宫壁疏松附着(着床),第18天左右着床完成。

着床以前胚胎营养来源是在输卵管内靠卵子本身,在子宫角内靠子宫乳供养。

第4周左右胚胎具备与母体胎盘进行物质交换的能力,而胚胎在没有利用胎盘与母体建立交换物质的联系之前是很危险的时期,此时胚胎死亡率占受精合子的30%~40%。

胚胎前40 d 主要是组织器官的形成和发育,生长速度很慢,此时胚胎重量只有初生重的1%左右。

妊娠41~90 d ,胚胎生长速度比前40d要快一些,90 d 时胚胎重量可达550 g 左右,91 d 到出生,生长速度达到高峰。

仔猪初生重的60%~70%在此期间内生长完成。

可见妊娠后期是个关键时期,母猪的饲养管理将直接影响仔猪初生重见表3-4。

胚胎所处的时期不同,其化学成分也有所不同。

42日龄胚胎与112日龄胚胎比较,干物质增长2.1倍,粗蛋白质1.6倍,脂肪1.8倍,矿物质2.8倍,钙6.2倍,磷3.8倍,铁12.9倍。

详细资料见表3-5。

表3-4不同日龄胚胎的生长情况(李立山,2006.养猪与猪病防治)表3-5不同日龄胚胎体内化学成分(李立山,2006.养猪与猪病防治)2、影响猪胚胎生长发育因素:母猪每次发情排卵为20~30枚,而完成受精形成合子,乃至成为胚胎的仅有17~18个,但真正形成胎儿出生的却仅有10~15头。

造成这种情况的原因,主要是胚胎各时期的死亡。

统计资料表明,胚胎死亡在胎盘形成以前占受精合子的25%左右,胎盘形成以后胚胎死亡数占受精合子的12%~15%,见表3-6。

妊娠36d以内死亡的胚胎被子宫吸收了,因此见不到任何痕迹。

动物繁殖学名词解释2016最全版

动物繁殖学名词解释2016最全版

A安静发情:又称隐形发情、安静排卵,是指发情时缺乏发情的外表征象,但卵巢上有卵泡的发育、成熟并排卵。

B白体:随着微血管退化,供血减少,黄体体积逐渐变小,黄体细胞的数量也显著减少,颗粒层细胞逐渐被纤维细胞所代替,黄体细胞间结缔组织侵入、增殖,最后整个黄体细胞被结缔组织所代替,形成一个斑痂,颜色变白,残留在卵巢上不返情率(non-return rate):指配种后一定时间内,不再表现发情的母畜头数占配种母畜总头数的百分比,反映配种质量和母畜数生殖能力哺乳动物胚胎干细胞(mammalian embryonic stem cell):又称ES细胞或EK细胞,它是从早期胚胎或胎儿中分离出来的具有发育全能性的细胞系不孕:是指母畜没有先天性的生殖机能异常而在应当生殖的时间内未能产出活的后代。

(不孕的发生原因可能来自雌雄性任何一方。

不孕可能是暂时的,经过正确地治疗可以恢复生育力)不育:泛指公母畜繁殖能力的永久性丧失【不育是无法治愈的】C次要生殖激素:与生殖活动无直接关系,但可影响机体的生长和发育及代谢机能而间接影响生殖机能,如生长激素GH、促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、甲状腺激素、皮质醇、醛固酮、胰岛素、甲状旁腺激素等持久黄体:妊娠或周期黄体超过正常时限而继续保持功能(分泌孕酮)初乳:母畜分娩后最初几天(4-7天内)的乳汁,以后分泌的为常乳初情期(puberty):公畜初次释放有受精能力的精子,并表现出完整性行为序列的年龄,即为公畜初情期;母畜初次发情和排卵的时期采精频率:是指每周内对公畜的采精次数成活率(survival rate):一般指断奶成活率,即断奶时成活仔猪数占出生时活仔畜总数的百分率,反映母畜的泌乳力和护仔性及饲养管理成绩超数排卵(MOET):在母畜(供体)发情周期的某一时期,用外源性的促性腺激素处理,从而促使其卵巢上较正常有更多个卵泡同时发育,并且能够同时或准同时排出多个具有受精能力的卵子的技术,筒称“超排”山羊和牛常用促性腺激素:FSH产力:将胎儿从子宫中排出的力量,是由子宫肌和腹肌有节律的收缩共同形成的产道:包括硬产道和软产道,是分娩时胎儿由子宫内排出所经过的通道产后发情(estrus after parturition):是指母畜分娩后出现的第一次发情产后期:胎衣排出到母体生殖器官恢复原状的持续时间产仔窝数(littles per year):一般指猪、兔等多胎动物在一年之内产仔的窝数产羔率(lambing rate):主要用于评定羊的繁殖力,即产活羔羊总数与分娩母羊数之比产仔间隔:母畜两次产仔间隔的平均天数。

兽医产科学-妊娠-胚胎发育及胚泡附植

兽医产科学-妊娠-胚胎发育及胚泡附植

一、受精卵的发育
(四)胚胎定位及间距
二、胚胎附植(1,2)
(一)概念
胚胎进入子宫,在子宫的一定位置固定,并于子宫形成组 织上和机能上联系的过程。
(二)意义
胚胎附植过程是胎盘形成过程,在附植之前,胚胎所需要 的营养物质来源于卵细胞质及输卵管和子宫腺体的分 泌物,但是这样营养不能够支持胚胎的完全发育,如 果胚泡没有及时附植,就会很快死亡。
1、胚胎前期
从合子到囊胚期-细胞团的总体积增大并不明显;
2、胚胎期(器官形成期)
从分化成三个胚层开始进入胚胎期 外胚层:分化成表皮和毛发;
中胚层:分化成骨骼、肌肉、呼吸系统、血液系 统、泌尿生殖系统等;
内胚层:分化成消化系统;
三、胚胎生长发育
3、胎儿期
从胚胎附植到子宫内膜上开始进入胎儿期,直到分 娩排出(形成胎盘后就称为胎儿期)
兽医产科学
教学课件
妊娠
胚胎发育及胚泡附植
一、受精卵的发育
(一)卵裂 (二)囊胚形成 (三)胚胎从透明带中孵出 (四)胚胎定位及间距
一、受卵的发育
(一)卵裂
卵裂概念
受精后单细胞合子的分裂;
桑葚胚概念
受精卵不断分裂形成一个实体的细胞团(16-32个),呈游 离状态,浸泡在子宫腺分泌的子宫乳而漂浮在子宫腔内。
二、胚胎附植
(二)意义
附植后,就能形成胎盘,胚胎就能从母体血液中获得生长 发育所需要的各种足够的营养物质,建立胎盘血液循环 ,并且使代谢产物通过母体排出体外。
二、胚胎附植
(三)附植时间
胚胎附植的完成时间在动物间差异较大,而且大多数与怀 孕的长短无关;
牛-30天;马-100天;羊-40天;
三、胚胎生长发育

植物胚胎培养的意义

植物胚胎培养的意义

植物胚胎培养的意义
植物胚胎培养是指在无菌条件下,将植物的胚胎(如幼胚、成熟胚、胚珠等)接种到培养基上,使其在人工控制的环境下生长和发育的技术。

植物胚胎培养具有以下重要意义:
1. 加快育种进程:通过植物胚胎培养,可以在较短的时间内获得大量的后代,从而加快育种进程。

2. 拯救珍稀濒危植物:对于一些珍稀濒危植物,可以通过胚胎培养来拯救和保护它们。

3. 提高育种效率:通过胚胎培养,可以在较小的空间内进行大量的育种试验,从而提高育种效率。

4. 研究植物发育机制:植物胚胎培养可以为研究植物发育机制提供重要的实验材料。

5. 生产无病毒植株:通过胚胎培养,可以获得无病毒植株,从而提高植株的品质和产量。

6. 保存种质资源:通过胚胎培养,可以保存植物的种质资源,以备将来使用。

植物胚胎培养是一种重要的植物生物技术,具有广泛的应用前景和重要的意义。

胚胎附植机理

胚胎附植机理

胚胎附植机理一、胚胎附植的定义和意义胚胎附植是指受精卵从输卵管移行至子宫内膜并依附于其上的过程。

这个过程是人类繁殖的第一个关键步骤,对于正常妊娠的发生和维持至关重要。

二、受精卵进入子宫内膜的过程1. 输卵管中的受精卵在受精后,受精卵会从输卵管进入子宫。

这个过程通常需要3-4天。

2. 受精卵与子宫内膜接触当受精卵到达子宫时,它必须与子宫内膜接触才能开始着床。

这个过程被称为“识别”或“黏附”,通常发生在第5-7天。

3. 受精卵依附于子宫内膜上一旦受精卵与子宫内膜接触,就会开始着床。

这个过程需要大约48小时完成。

三、胚胎附植机理1. 识别阶段在识别阶段,受精卵通过表面分泌物(如糖蛋白)与子宫内膜表面细胞(如上皮细胞和内皮细胞)进行互作。

糖蛋白是一种糖基化的蛋白质,可以在受精卵表面形成亲和力,从而与子宫内膜表面的黏附分子结合。

2. 黏附阶段在黏附阶段,受精卵通过表面分泌物与子宫内膜上的黏附分子结合。

这些黏附分子包括整合素和黏着素等。

整合素是一种跨膜受体,可以与子宫内膜上的纤维连接素结合,从而使受精卵与子宫内膜之间形成牢固的连接。

黏着素则是一种糖基化的蛋白质,可以增强整合素的作用。

3. 侵入阶段在侵入阶段,受精卵通过释放酶来侵入到子宫内膜中。

这些酶包括金属酶和丝氨酸酶等。

金属酶可以分解基底膜和细胞外基质中的纤维连接素等物质,从而使受精卵可以穿过子宫内膜。

丝氨酸酶则可以分解子宫内膜上的细胞间隙,从而使受精卵可以侵入到子宫内膜深处。

四、影响胚胎附植的因素1. 子宫内膜的状态子宫内膜的状态对胚胎附植至关重要。

如果子宫内膜过于厚或过于薄,都会影响胚胎附植。

此外,如果子宫内膜存在炎症或其他异常情况,也会影响胚胎附植。

2. 受精卵质量受精卵质量也是影响胚胎附植的一个重要因素。

如果受精卵发育不良或出现染色体异常等问题,都会影响其在子宫内膜上的黏附和侵入能力。

3. 激素水平女性体内激素水平的变化也会影响胚胎附着。

例如,在排卵期和月经周期不同阶段时,女性体内雌激素和孕激素水平都会发生变化,这些变化可能会影响子宫内膜的状态,从而影响胚胎附着。

兽医产科学-答案

兽医产科学-答案

兽医产科学作业题参考答案作业题一参考答案一、解释名词概念(20分,每个名词概念2分)胎向:即胎儿的方向,也就是胎儿纵轴与母体纵轴的关系,胎向有三种:纵向、横向、竖向。

安静发情:卵巢上卵泡发育正常,生殖器官也已达到发情期状态,但发情表现不明显或微弱,不易察觉,多发生在产后第一次发情或发情季节的第一次发情。

附植:当胚胎固定在子宫的一定位置,并与子宫形成组织上和机能上的联系时称为附植。

发情周期:以卵泡、性欲、性兴奋和生殖道功能变化的消长为主导的周而复始、顺序循环的母畜性活动现象,以一次发情到下一次发情为一次性周期。

激素:人和动物体内的特殊物质,由一定的腺体或神经细胞产生,直接或间接的输送到体液,在机体的另一部分发挥出特异的、为机体功能所必须的作用。

产力:指分娩时把胎儿从子宫中排出的力量,包括阵缩和努责。

精子获能:哺乳动物精子在刚进入雌性生殖道时不具备受精的能力,只有在雌性生殖道内运行过程中发生进一步的形态和生理生化变化,才能获得受精能力。

此生理现象称为精子的获能。

骨盆轴:是通过骨盆入口竖径、骨盆腔垂直径及骨盆出口竖径3条经线的中点而形成的连线,是通过骨盆腔中心的一条假象线。

它代表胎儿通过骨盆腔时所走的路线。

子宫乳:由子宫腺的分泌物、分解的上皮细胞和渗出的血细胞所构成的组织营养物质称为子宫乳,为胎盘形成前的胚胎提供营养。

前置:指胎儿某一部分与产道的关系,那一部分先进入产道就叫那一部分前置。

二、填空(10分,每空0.5分)1、母牛正常发情周期平均为( 21天),发情期长( 1~1.5天),中国荷斯坦奶牛怀孕天数平均为( 280天),正常胎衣排出时间与恶露排出时间分别为( 12小时内)和( 3周内)。

2、胚胎周围由内而外被(羊膜)囊和(绒毛)囊包着,在这二囊之间,根据胚胎发育阶段的不同,存在有(卵黄)囊和(尿)囊。

3、对于母畜来说,(孕)激素在妊娠过程中起维持妊娠的作用,(雌)激素在妊娠末期分泌增加而引发分娩。

胚胎移植

胚胎移植

胚胎移植2003-12-01胚胎移植又称受精卵移植,就是将1头母畜(供体)的受精卵移植到另一头母畜(受体)的子宫内,使之正常发育,俗称“借腹怀胎”。

(一)胚胎移植的意义1.充分发挥优良母牛的繁殖潜力一般情况下,1头优良成年母牛一年只能繁殖1头犊牛,应用胚胎移植技术,一年可得到几头至几十头优良母牛的后代,大大加速了良种牛群的建立和扩大。

2.诱发肉牛产双胎对发情的母牛配种后再移植一个胚胎到排卵对侧子宫角内。

这样配种后未受孕的母牛可能因接受移植的胚胎而妊娠,而配种后受母牛则由于增加了一个移植的胚胎而怀双胎。

另外,也可对未配种的母牛在两侧子宫角各移植一个胚胎而怀双胎,从而提高生产效率。

3.应用胚胎移植还可以减少肉用繁殖母牛的饲养头数,可以代替种畜的引进和保存品种资源等。

(二)胚胎移植的生理基础1.母牛发情后生殖器官的孕向发育在发情后的最初一段时期(周期性黄体期),不论是否已受精,母牛生殖系统均处于受精后的生理状态之下,在生理现象上,妊娠与未孕并无区别。

所以,发情后的母牛生殖器官的孕向变化,是进行胚胎移植时使不配种的受体母牛可以接受胚胎,并为胚胎发育提供各种条件的主要生理学依据。

2.早期胚胎的游离状态胚胎在发育早期有相当一段时间(附植之前)是独立存在的,它的发育基本上靠本身贮存的养分,还未和子宫建立实质性联系。

所以,在离开活体情况下,在短时间内可以存活。

当放回与供体相同的环境中,即可继续发育。

3.胚胎移植不存在免疫问题受体母畜的生殖道(子宫和输卵管)对于具有外来抗原物质的胚胎和胎膜组织,一般来说,在同一物种之内,并没有免疫排斥现象,这一点对胚胎由一个体移植给另一个体后而继续发育极为有利。

4.胚胎和受体的联系移植的胚胎,在一定时期会和受体子宫内膜建立生理上和组织上的联系,从而保证了以后的正常发育。

此外,受体并不会对胚胎产生遗传上的影响,不会影响胚胎固有的优良性状。

(三)胚胎移植的操作原则1.胚胎移植前后所处环境的一致性即胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应。

研究哺乳动物滋养外胚层的发育、滋养外胚层的关系-动物学论文-生物学论文

研究哺乳动物滋养外胚层的发育、滋养外胚层的关系-动物学论文-生物学论文

研究哺乳动物滋养外胚层的发育、滋养外胚层的关系-动物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要:囊胚形成过程中, 胚胎卵裂球分化为滋养外胚层和内细胞团细胞。

囊胚孵出后, 滋养外胚层又分化为极滋养层和壁滋养层。

滋养外胚层的分化对哺乳动物早期胚胎发育至关重要。

研究表明, 影响滋养外胚层发育的关键基因主要为Tead4、Cdx2和Eomes, 敲除或突变这些基因将导致滋养外胚层细胞分化错误, 而滋养外胚层的完整性、渗透性和液体转运功能受损也将导致囊胚形成失败。

本文主要综述了哺乳动物滋养外胚层的发育、滋养外胚层发育需要的关键基因、调控滋养外胚层完整性和功能相关的蛋白, 以及这些蛋白与滋养外胚层发育关键基因之间可能存在的关系, 为进一步研究哺乳动物早期胚胎滋养外胚层的调控机制提供参考。

关键词:滋养外胚层; 完整性; 功能; 早期胚胎发育; 哺乳动物;Research Progress of Trophectoderm Development of Early Embryo in MammalsZHANG Yan-yan PENG Hui XIAO Tian-fangCollege of Animal Science, Fujian Agriculture and Forestry UniversityAbstract:During the blastocyst development, embryonic blastomeres were differentiated into trophectoderm and inner cell mass.After the blastocyst hatching, trophectoderm was differentiated into polar trophoblast and mural trophoblast.The differentiation of trophectoderm was very important for early embryonic development in mammals.Tead4, Cdx2 and Eomes are primary genes affecting trophectodermdevelopment and knockout or mutation of these genes result in incorrect differentiation of trophectoderm.While the integrality, permeability and fluid transport function of trophectoderm were disfigured, which further led to the failure of blastocyst formation.We comprehensively discussed the development process of trophectoderm, pivotal genes for its formation, key proteins related to its integrality and function as well as underlying potential relationship between these key proteins and pivotal genes, which may provide information for further understanding the molecular mechanisms regulating embryonic trophectoderm development in mammals.Keyword:trophectoderm; integrality; function; early embryonic development; mammals;滋养外胚层的形成对早期胚胎的发育至关重要。

电大《动物繁殖基础》期末复习

电大《动物繁殖基础》期末复习

电大《动物繁殖基础》期末复习《动物繁殖基础》复习参考题型:名词解释、填空、单项选择题、问答题一、名词解释(每小题5分)1.精细管上皮周期:在精子发生过程中,在精细管同一部位连续出现两次相同类型细胞组合的间隔时间,称为精细管上皮周期。

2.诱发性排卵:母畜通过交配或子宫颈受到刺激才能排卵为诱发性排卵。

3.人工授精:人工授精是以人为的方法,使用器械采集雄性动物的精液,再用器械把经特定处理后的精液输入到雌性动物生殖道的特定部位,以代替雌、雄动物的自然交配而繁殖后代的一种繁殖操作技术。

4.情期受胎率:情期受胎率表示妊娠母畜头数占配种情期数的百分率。

5.激素:激素是由动物机体产生、经体液循环或空气传播等作用于靶器官或靶细胞、具有调节机体生理机能的一系列微量生物活性物质。

6.精子发生:精子发生是指精子在睾丸精细管内形成的全过程。

7.辅助受精:辅助受精技术是体外受精的延伸,它是通过人为方法克服在某些情况下精子不能穿过透明带和卵黄膜的缺陷,使精子和卵子完成受精过程。

8.母畜的性成熟:母畜的性成熟是指家畜初情期以后的一段时期,此时生殖器官已发育成熟,具备了正常的繁殖能力,则称为性成熟。

9.发情周期:母畜自第一次发情后,如果没有配种或配种后没有受胎,则每间隔一定时期便开始下一次发情,如此周而复始地进行,直到性机能停止活动的年龄为止。

这种周期性的活动,称为发情周期。

10.情期受胎率:情期受胎率表示妊娠母畜头数占配种情期数的百分率。

11.人工授精:人工授精是以人为的方法,使用器械采集雄性动物的精液,再用器械把经特定处理后的精液输入到雌性动物生殖道的特定部位,以代替雌、雄动物的自然交配而繁殖后代的一种繁殖操作技术。

12.供体:提供胚胎的母畜称为供体。

13.受体:接受胚胎的母畜称为受体。

14.非手术冲卵法:对于牛、马等大家畜可采用特殊的装置从**插入子宫角直接冲洗,避免腹部开刀进行胚胎的收集,称为非手术冲卵法。

15.胚胎分割:是运用显微操作系统将哺乳动物附植前胚胎分成若干个具有继续发育潜力部分的生物技术。

家畜早期胚胎实验报告

家畜早期胚胎实验报告

实验目的:1. 观察家畜早期胚胎的发育过程。

2. 理解受精、卵裂、囊胚、附植等发育阶段的基本特征。

3. 掌握胚胎学实验的基本操作方法。

实验时间:2023年X月X日实验地点:动物胚胎学实验室实验材料:1. 家畜新鲜卵母细胞。

2. 精子悬液。

3. 胚胎培养液。

4. 显微镜及配套设备。

5. 胚胎操作工具(如针筒、注射器等)。

实验方法:1. 受精实验:- 将卵母细胞与精子悬液在37℃水浴中混合,观察受精现象。

- 使用显微镜观察合子的形成和原核的形成。

2. 卵裂实验:- 将受精后的卵子置于37℃水浴中,定时观察卵裂过程。

- 记录卵裂球的数目,观察其形态变化。

3. 囊胚实验:- 观察卵裂到囊胚阶段的形态变化。

- 识别囊胚腔的形成和滋养层细胞的出现。

4. 附植实验:- 将囊胚置于适宜的培养液中,观察附植过程。

- 记录附植的位置和时间。

5. 胚胎操作实验:- 进行胚胎分割实验,观察分割后胚胎的发育情况。

- 使用显微镜观察分割后胚胎的形态和生长状态。

实验结果:1. 受精实验:- 观察到卵子与精子混合后,约20分钟内出现合子,随后形成原核。

2. 卵裂实验:- 合子形成后约24小时,开始出现卵裂现象。

- 48小时后,卵裂球数量达到16个左右。

- 72小时后,卵裂球数量达到32个左右,形成桑葚胚。

3. 囊胚实验:- 96小时后,观察到囊胚的形成,囊胚腔明显。

- 滋养层细胞开始出现。

4. 附植实验:- 120小时后,观察到囊胚与培养皿接触,开始附植。

5. 胚胎操作实验:- 进行胚胎分割实验,分割后的胚胎在适宜的培养条件下继续发育。

- 观察到分割后的胚胎形态正常,生长状态良好。

实验讨论:1. 家畜早期胚胎发育过程复杂,受精、卵裂、囊胚、附植等阶段均具有明显的形态特征。

2. 胚胎学实验操作需要严格遵循无菌原则,以确保实验结果的准确性。

3. 胚胎分割技术在家畜繁殖中具有广泛的应用前景,可以提高繁殖率。

实验结论:本次实验成功观察了家畜早期胚胎的发育过程,掌握了胚胎学实验的基本操作方法。

动物繁殖学名词解释

动物繁殖学名词解释

动物繁殖学:研究动物繁殖现象、本质和规律,并在此基础上开发相应的技术,调整和控制繁殖的过程,以充分发挥动物的繁殖潜力,提高繁殖力的学科。

Sertoli cell支持细胞或足细胞:是曲精细管上的体细胞。

分泌抗缪勒氏管激素。

Leydig cell间质细胞:由睾丸间充质细胞分化而来。

分泌睾丸激素。

激素(hormone):由内分泌腺分泌的通过血液循环系统作用于靶细胞,并对靶细胞有兴奋或抑制的生理作用的一类高蛋白物质生殖激素:对生物生殖有直接作用的激素睾丸下降(descent of testicle):胎儿期的睾丸位于腹腔内,大多数雄性家畜或动物在出生前或出生后不久,睾丸才由腹腔通过腹股沟管进入位于腹壁的阴囊内,这一过程叫睾丸下降。

初情期(puberty):公畜初次释放有受精能力的精子,并表现出完整性行为序列的年龄,即为公畜初情期;母畜初次发情和排卵的时期。

性成熟(sexual maturity):是继初情期之后,青年公畜的躯体和生殖器官进一步发育,具备正常生育能力的生理状态。

指母畜初情期后的一段时间,生殖器官发育成熟,但其他组织器官仍在发育。

通常公畜性成熟比母畜晚。

性成熟是生殖成熟的标志。

适配年龄(age that suitable for mating):是根据公畜自身发育状况和使用目的,人为确定的公畜适宜配种的年龄阶段。

性行为(sexual behavior):是指在初情期以后,公畜和母畜接触中,在激素作用下,通过神经刺激(嗅觉、听觉、视觉和触觉)所表现出来的特殊行为。

性行为序列(sexual behavior chain):性唤醒 求偶 勃起 爬跨 插入 射精 下爬 不应精子发生(spermatogenesis):从精原细胞分裂到形成精子的全过程称为精子发生,包括生精细胞分裂、增殖、演变和向管腔释放等过程,同时也存在着时间和空间变化规律。

精子的形成:生精细胞中的精原细胞经数次分裂形成初级精母细胞(primary spermatocyte),再经减数分裂(meiosis)变为单倍体的精子细胞,精子细胞经变形过程形成精子,这一过程称为精子的形成。

胚泡延迟附植名词解释

胚泡延迟附植名词解释

胚泡延迟附植名词解释胚泡延迟附植是一种性染色体缺失,也称为胚绒毛素(PMP),它可能导致生殖细胞不能正常分化而无法正常发育。

胚泡延迟附植是病毒性感染中最常见的性染色体异常。

胚泡延迟附植是指胚泡在末梢血液中,在精子或卵子与受精卵相结合之后,仍然处在受精卵表面,而不是进入受精卵内部以化合形成抗体的状态。

胚泡延迟附植也可能是抗精子抗体、抗卵子抗体,以及/或抗复制的细胞抗体的产物。

这些抗体产生的原因尚不清楚,但是认为可能是由于过去的感染、抗病毒治疗和抗生素治疗所引起的。

此外,胚泡延迟附植有时也可以被血清类固醇或其他抗病毒药物引起。

患有胚泡延迟附植的人多半患有一种称为胚泡延迟附植的状态,即在配子和卵子的交叉过程中,出现了异常的延迟附着。

这种情况可以通过抗胚泡素(PAP)和抗胚泡素抗体(PAPS)的检测来检测。

胚泡延迟附植的治疗有两个主要的途径,即药物治疗和手术治疗。

药物治疗可以通过服用抗病毒药物、抗炎药物和激素,以及其他、改善卵子受精和受精卵发育能力的药物来改善抗体的产生和附着。

手术治疗通常是指在复发性胚泡延迟附植病例中,将抗病毒抗体附着到受精卵上的细胞切除。

胚泡延迟附植的影响也不容忽视,其中比较严重的影响就是胚泡延迟附植可能会对受精卵的正常发育带来一定的抑制作用,导致胚胎发育不良,最后造成胎儿发育迟缓或畸形等问题。

胚泡延迟附植也可能会引起胚胎流产,即妊娠后的怀孕期间死亡的胚胎。

此外,胚泡延迟附植可能会与某些先天疾病有关,如先天性川崎病等。

川崎病是由受精卵表面抗体细胞附着而产生的一种致病性表观遗传性疾病,包括脊髓性瘫痪及全身性神经系统发育缺陷。

总之,胚泡延迟附植可能会影响胚胎的发育,并且可能与先天疾病有关,因此应将胚泡延迟附植作为必要的诊断抗体之一。

在受精卵形成过程中,胚泡延迟附植会对性细胞正常分化过程产生抑制作用,而无法产生正常的生殖细胞,进而影响胚胎的发育和孕妇的妊娠期。

因此,当发现胚泡延迟附植时,应尽快积极治疗,以缓解患者的症状,同时尽快恢复怀孕及孩子的身体健康。

胚胎附植名词解释

胚胎附植名词解释

胚胎附植名词解释
胚胎附植(胚胎植入)是指动物或植物在发育过程中将成熟的胚胎植入到适当的生殖器官中,以实现其生殖或生长功能的过程。

在哺乳动物中,胚胎附植通常是在动物卵受精后,卵黄囊内的物质将胚胎移植到子宫中,使其在适当的时间发育成胎儿。

这种过程被称为移植(recipientization),因为胎儿是在另一个生物体内生长和发育的。

在植物中,胚胎附植通常在种子的发芽过程中进行。

在种子的发芽过程中,先形成一些称为“胚芽”的器官,这些器官逐渐发育成植物的主要器官,如根、茎和叶。

在这个过程中,一些种子的胚芽会移植到另一个植物体内,使其继续发育成新的植物。

胚胎附植是一种复杂的生物过程,涉及到许多生理和生化机制。

在动物中,移植过程涉及到卵黄囊内的物质和子宫内壁的受体细胞。

在植物中,移植过程涉及到胚芽和种子内的基因传递。

胚胎附植不仅对于动物的生长和繁殖起着关键作用,也对于植物的生殖和生长具有重要意义。

因此,研究胚胎附植的机制和过程,对于了解生物进化、探索新的生殖技术以及促进植物生长发育等方面都具有重要意义。

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融合条件进行探索 # 影响电融合的因素主要包括: 融合液的成分,脉冲强度,脉冲时程 # 我们的实验 比较了克隆牛过程中改变电融合条件对附植前胚胎
"$$&($%("" 收稿,"$$&(!!(") 收修改稿 (批准号:&*%&$"%$) 和新疆金牛生物股份有限公司资助项目 " 国家自然科学基金 联系人, : +(,-./ 0123456 7-34-# .89# -0# 03 " "
第#期
表$
电融合 液类型 甘露醇 山梨醇
$%%" 年 # 月
+10
不同融液对体细胞融合率及重组胚发育的影响
操作卵 子数量 ")# 4B 融合数 , . >) (+4 ! 1) +B (6# ! )) 3B 死亡卵数 量 , . @) ( + 1 ! +) ( + ") ! #) 囊胚数量 #’细胞 数量 , . @) , . @) (++ ! B) "" ("1 ! 6) 00 (6" ! #) 0) ( B "1 ! 0)
第 !" 卷 于培养箱中培养 ! 使用前 "# $,将细胞培养液换成 胚胎培养液 %&"’((,培养箱中平衡待用 ! ! "# " $ 重构胚的体外培养 活化后的重构胚放入 %&"’(( 培养液中,") * "+ 枚 , "))! -,在 +. %/# , 01 ! +2 ,饱和湿度的培养箱中培养 ! 31 $ 后,选择 分裂的胚胎移入含贴壁 %+45- , 6 鼠胎儿成纤维细胞 的液滴中共培养 ! 每隔 31 $ 将培养液更换一半 ! 体 外培养第 + 天,培养液中加入葡萄糖,使其终浓度 达到 " 78 , 7-! 培养第 4 和第 1 天分别记录囊胚的数 量! ! ! # ! % 胚胎移植 于重构胚发育的第4或第1天,将 形态良好的囊胚装入胚胎移植管中,每管装入 " * # 枚胚胎 ! 选择自然发情第 4 天的荷斯坦奶牛和西门 牛进行子宫移植 ! 塔尔 ( 9:7;<=>?)
张利生! 毕春明! 李劲松! 吴昱琪! 寇朝辉! 姜 岩! " 吕自力" 王小宁" 孙青原! 陈大元!"
! # 中国科学院动物学研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,北京 !$$$%$; " # 新疆金牛生物股份有限公司,生物科学研究院,乌鲁木齐 %&$$"’
蒋满喜!
摘要
实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附植前胚胎发育的影响 # 电融合强度为
>)操作卵子总数的百分比, @)融合总数的百分比,同列中有不 同字母上标者表示差异显著( ! E ) ! )+) ! 9F99 软件进行统计分析
$"%
重构胚的移植和出生情况
本实验共移植 "4# 头受体牛 ! 其中,荷斯坦奶 牛 4B 头,西门塔尔牛 B0 头 ! 移植 3 个月后获得妊 娠 #+ 头 ! 4 个月时,妊娠 "+ 头 ! 自 #))0 年 + 月份出 生首只 克 隆 母 牛 犊 截 止 到 发 稿 为 止,共 有 3 头 存 活!
! # & # ! 用于核移植的体细胞的培养 所用供核细胞 来源于新疆金牛生物 股 份 有 限 公 司 的 高 产 荷 斯 坦 (/("5E.D) 奶牛 $ 耳朵皮肤组织用无菌生理盐水洗 9 次 后充分剪碎,用 ,$ #?< 胰蛋白酶 2@ 冷消化 3# A 后, [2] 描述方法经原代、传 94@ 热消化 9, ’CD,根据文献 代培养后,得到耳皮肤成纤维细胞,用于核移植 $ !#&#& 取出妊娠 32 F 的雌性 !?47* ) % 小鼠胎儿,用剪刀和镊子钝性分离胎鼠皮 共培养细胞的准备
的 =# 操作液中 $ 用持卵针固定卵母细胞,使其第一 极体位于时钟 3# 点的位置 $ 去核针插入透明带下, 吸出第一极体及其下的部分胞质,然后用注射针吸 取一体细胞注入透明带下 $ ! # " # " 融合 完成核移植的卵在 9&$ ?@ 预热的 =3>> 中洗 # 遍,分别放入 9&$ ?@ 预热的 6J山梨醇电融合
上第一批克隆牛的制作过程中,体细胞的融合率接 近 ’$> ,但是电刺激后保持形态完好从而能够进入 培养液进行培养的只占到融合总数的 %$> 左右,相 当一部分重构卵都在电融合后死掉或者发生形态异
[!] 常 ,这和它的融合条件不无关系,所以有必要对
! # ! # ! 获取卵巢 从屠宰场收集性成熟的新疆“土 牛” (当地的一种乳肉兼用型牛) 的卵巢,放入含 !> 青、链霉素的 &JK 生理盐水中,在 ) 1 内运至实验 室 # 用同样生理盐水清洗 & L ) 次 # ! # ! # # 卵丘卵母细胞复合体的抽取 用 !% 号注射针 抽取直径为 " L !$ ,, 大的卵泡中的卵泡液,以获取 卵丘卵母细胞复合体 (ADA<) # 收集包裹 & 层以上卵丘 细胞的卵母细胞,放入 MIN? (含有 !&’# *% ,,8/ ; C H-(
克隆效率的提高与多种因素有关 ! 电融合是体细胞 核移植生产克隆动物中一个关键环节 ! 电融合是一 个较为复杂的生物物理学变化过程,其原理是:细 胞膜的通透性在外加直流电脉冲方波的作用下发生 改变,形成许多小孔洞,这些孔洞保留一定时间融 合成为大的穿孔 ! 如果两个紧密接触的细胞膜发生 穿孔和融合,则导致细胞质交流,最终合为一体 ! 细胞核移植技术根据这一原理完成供受体细胞的重 建过程 !
%
讨论
克隆效率一直是动物克隆中首先考虑的问题 !
$ 结果
$ "! 不同的电场强度及电脉冲时程对体细胞融合 率及重组胚发育的影响 表 " 示 3 种融合方案对融合率和囊胚发育率都 无显著差异,但是囊胚发育率以方案 % 最高 ! 融合 后重构胚的死亡率以方案 ( 最高,比较可见到显著 差异 !
表!
融合 方案 ( 5 % D
胰酶消化贴壁细胞,并将消化下来的细胞反复吹打 成单个细胞的悬液,保存于 6=H= ) ;3# ( GI7!1) 中 待用 $ [ 2] :将 ! #" # & 核 的 移 植 核 移 植 的 方 法 见 文 献 ( !7) ="期卵母细胞置于含4 $ ?! : ) ’*细胞松弛素 7
!#$# !
!?47* ) % 鼠胎儿成纤维细胞消化下来,吹散成细胞 悬液,在平皿中做成 3,,! * 的液滴,覆盖石蜡油,
!)$ : ; ,,, !$! < ; 次时的效率要较 !$$ : ; ,,,"$! < ; 次和 !%$ : ; ,,,!$! < ; 次时高,可以降低融合后 重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率 # 施加直流电脉冲前先给予 = : 交流电场预处理数秒钟,然 后在电极之间通以两个直流脉冲 (!)$ : ; ,,,!$! 与不用交流电预处理对融合率和 < ; 次,间隔 $ # ! <) 重构胚的发育率无显著差异 # 另外实验比较了甘露醇和山梨醇两种融合液对融合及重构胚发育的 影响,结果表明囊胚发育率差异不显著,但山梨醇较甘露醇融合液更容易操作 # 实验生出的 ) 头克 隆牛存活至今 # 关键词
第 !" 卷
第#期
$%%" 年 # 月
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克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响 !
肤,充分剪碎后按上述方法进行培养传代 $ !#" !#"#! 核移植程序 供体细胞的准备 培养 9 B 4 代的细胞作为
核移植的供体细胞 $ 细胞生长至 &,< B >,< 时,将 培养液换成含 , $ ?< ;!8 的饥饿培养液,血清饥饿 #
[?] B ? F,诱导细胞进入 G, 期 $ 核移植前,用, $ #?<
[%] 液 (6J山梨醇 ,$#? ’(" ) *,醋酸钙 ,$3 ’’(" ) *,醋酸 镁, $ ? ’’(" ) *, /KLK5 , $ ? ’’(" ) *, 78M 3 ’: ) ’*) 或 [#] 甘露 醇 融 合 液 ( 甘 露 醇 , $ #4 ’(" ) *, /KLK5 , $ ? 中平 ’’(" ) *,!.!"# , $ ,? ’’(" ) *,=:812 , $ 3 ’’(" ) *)
克隆牛 核移植 电融合
自“多莉”羊诞生后,体细胞核移植技术成为 了当前生命科学研究领域的一个热门话题 # 但是目 前克隆技术的效率仍然很低 # 融合是由体细胞核移 植生产克隆动物的一个关键步骤,对融合条件进行 优化会提高成功生产克隆牛的效率,同时我们也对 在体外成熟的卵母细胞因电刺激所发生的物理化学 反应有进一步的了解 # 由于电融合对细胞的毒性小,
衡 3 B # ’CD,移入电融合槽中,拨动卵,使体细胞 平行 $ 与卵母细胞的接触面与两电极 (间距 3 ’’) 融合的操作分为以下 2 种方案: ( 3&, N ) ’’, M:在电极之间通以两个直流脉冲 ; 3,! 5 ) 次,间隔 , $ 3 5) ( 3,, N ) ’’, 7:在电极之间通以两个直流脉冲 ; #,! 5 ) 次,间隔 , $ 3 5) ( 32, N ) ’’, !:在电极之间通以两个直流脉冲 ; 3,! 5 ) 次,间隔 , $ 3 5) 6:施加直流电脉冲前先给予 ? N 交流电场预处 理数秒钟,然后在电极之间通以两个直流脉冲 (32, N ) ’’,3,! 5 ) 次,间隔 , $ 3 5) $ 融合操作后的卵子移入 =3>> 中洗 9 遍,置于 覆盖 石 蜡 油 的 =3>> 中, 于 !1# 培 养 箱 中 培 养 $ 9, ’CD后,体视显微镜下检查融合情况 $ ! # " # $ 重构胚的活化 采用化学方法对融合后的重 构胚进行活化 $ 重构胚在 =3>> 中培养 #2 ( A 从 !1!5 放入成熟培养液开始计时) 后开始活化 $ 具体步骤 是:重构胚在含 ?! ’(" ) * M#93&4 的 !O3JMM 培养液 中作用 2 ’CD,用 !O3JMM 培养液洗 9 遍后,移入含 ( !/P)Q 9 ! 3,! : ) ’* 放线菌酮 : ) ’* 细胞松弛素 6 (!6) 的 !O3JMM 培养液中 3 A $ 然后用 !O3JMM 培养 液洗 9 遍,移入含 3,! : ) ’* !/P 的 !O3JMM 培养液 中作用 2 A,取出重构胚,用 !O3JMM 培养液充分清 洗后,于 !O3JMM 培养液中进行体外培养 $ !#$ 重构胚的体外培养 共培养液滴的准备 共 培 养 前 一 天,将
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