基因工程的主要操作原理
基因工程的原理与应用例题和知识点总结
基因工程的原理与应用例题和知识点总结基因工程,这个听起来充满科技感的词汇,其实已经在我们的生活中发挥着越来越重要的作用。
它就像是一把神奇的钥匙,打开了生命奥秘的大门,让我们有能力对生物的基因进行改造和重组,从而实现各种奇妙的目标。
接下来,让我们一起深入了解基因工程的原理,并通过一些例题来巩固知识,同时总结其广泛的应用。
一、基因工程的原理基因工程,简单来说,就是在分子水平上对基因进行操作的技术。
它基于几个关键的原理:首先是“中心法则”。
我们知道,遗传信息从 DNA 传递到 RNA,再从 RNA 翻译成蛋白质,这是生命遗传信息传递的基本规律。
基因工程就是要在这个过程中进行干预。
其次,基因是具有特定碱基序列的 DNA 片段。
通过特定的工具,我们能够识别、切割和连接这些片段。
再者,不同生物的基因具有相同的化学本质,这意味着我们可以将一种生物的基因转移到另一种生物中,并使其发挥作用。
而实现基因工程操作的关键工具包括限制酶、DNA 连接酶和载体。
限制酶能够识别特定的碱基序列,并在特定的位点切割 DNA 分子;DNA 连接酶则负责将切割后的 DNA 片段连接起来;载体,如质粒、噬菌体等,能够将目的基因运送到受体细胞中。
二、基因工程的例题为了更好地理解基因工程的原理,让我们来看几个例题。
例 1:假设我们要从一种细菌中获取一个具有抗药性的基因,并将其转移到一种植物细胞中,使其获得抗药性。
首先,我们需要使用特定的限制酶来切割含有抗药基因的细菌 DNA 和植物细胞的 DNA。
然后,用 DNA 连接酶将抗药基因与植物细胞的 DNA 连接起来。
最后,通过适当的方法将重组后的 DNA 导入植物细胞。
例 2:给定一段 DNA 序列,要求找出可能的限制酶切割位点。
这就需要我们熟悉常见限制酶的识别序列,并运用相关知识进行分析。
三、基因工程的应用基因工程的应用范围极其广泛,给人类带来了诸多的好处。
在农业领域,基因工程使得我们能够培育出具有优良性状的农作物。
基因工程的原理和技术
基因工程的基本原理:
让人们感兴趣的基因(即目的基因)在宿主细 胞中稳定和高效的表达。根据不同的实验目的,目 的基因可以有很多种,如抗虫基因、抗病基因、抗 除草剂基因、人胰岛素基因和人干扰素基因等。因 此表达的产物各不相同。通过基因工程的基本操作 ,就能实现目标。
二、基因操作的基本步骤
第三步:将目的基因导入受体细胞
选择的关键是分析基因工程的最终目的,按转基因的目的来选择:
基因工程的 最终目的
得到大量特 殊蛋白质
得到转基因动物 得到转基因植物
常用的受 体细胞
大肠杆菌 等微生物
受精卵 植物体细胞
导入的方法
Ca2+处理法 显微注射法 农杆菌转化法
将目的基因导入微生物细胞
常选细菌 作受体细胞的原因:它 们繁殖力极强,生长速 度很快,短期内就会产 生大量后代,所以把目 的基因转入这些细菌, 就能在短时间内得到大 量的目的基因产物。
细菌的检测:
将每个受体细胞单独培养形成菌落,检测菌落中 是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的 菌落,保留有表达产物的进一步培养、研究。
无表达产物
无表达产物
有表达产物
无表达产物
多细胞生物的检测: 将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体, 检测这些个体是否表现出相应的性状。
例:抗虫棉检测
用棉铃饲喂棉铃虫,如虫吃后不 出现中毒症状,说明未摄入目的基 因或摄入目的基因未表达。
例:下列有关基因表达载体的构建说法正确的是( C ) A.限制性核酸内切酶的功能是切割各种DNA分子 B.基因工程中经常用到的酶只有DNA连接酶和限制性 核酸内切酶 C.将目的基因与载体结合的过程,实际上就是不同来 源的DNA重新组合的过程 D.具有粘性末端的目的基因片段插入质粒的切口处, 先形成磷酸二酯键,再形成氢键
基因工程技术与应用知识点
基因工程技术与应用知识点
1.基因工程技术的原理
基因克隆是指将感兴趣的基因从一个物种中剪切并插入到另一个物种
的DNA中。
首先,需要获得目标基因的DNA序列,然后通过PCR扩增得到
足够多的目标基因的DNA片段。
接下来,将目标基因的DNA片段与质粒进
行连接,形成重组质粒。
最后,将重组质粒导入宿主细胞中,使其进行复
制和表达。
这样,目标基因就被克隆到宿主细胞的基因组中。
转基因是指利用基因工程技术将外源基因导入目标细胞中,使其产生
新的功能或性状。
转基因主要通过两种方法实现:直接注射外源基因或利
用载体导入外源基因。
直接注射外源基因常用于转基因动物的制作,而利
用载体导入外源基因则常用于转基因植物的制作。
通过转基因技术,可以
实现农作物的抗虫、抗病、抗逆性增强,以及工业酶的大规模生产等。
2.基因工程技术的应用
农业领域:基因工程技术可以用于农作物的抗虫、抗病和抗逆性提高
等方面。
通过转基因技术,可以使植物表达抗虫蛋白,减少对农药的依赖;也可以导入外源基因,增强植物的抗逆性,使其在恶劣环境下仍能正常生长。
工业领域:基因工程技术可以用于工业酶的生产,如乳酸菌发酵生产
乳酸。
此外,基因工程还可以用于生物燃料的生产,如利用转基因酵母生
产乙醇。
基因工程的基本原理
基因工程的基本原理基因工程的基本原理是在分子水平上直接操作遗传物质,通过改变生物体的基因组成,以获得人们所需的新性状或新产品。
这一技术的核心是DNA重组技术,即将所需的目的基因从供体生物的基因组中分离出来,经过必要的加工和处理后,与载体DNA连接,形成重组DNA分子。
然后将重组DNA分子引入受体细胞,通过筛选和鉴定,获得稳定表达目的基因的重组体克隆。
最后,通过对目的基因的表达和产物的纯化,获得所需的新产品或新性状。
基因工程的基本原理可以概括为以下几个步骤:获得目的基因:这是基因工程的第一步,需要从供体生物的基因组中分离出所需的目的基因。
常用的方法包括化学合成法、PCR扩增法、基因文库筛选法等。
构建重组DNA分子:将目的基因与载体DNA连接,形成重组DNA分子。
载体通常是一种能够自主复制的DNA分子,如质粒、病毒等。
连接过程需要用到限制性内切酶和DNA连接酶等工具酶。
引入受体细胞:将重组DNA分子引入受体细胞,常用的方法包括转化、转染、感染等。
受体细胞可以是原核生物、真核生物或细胞系等。
筛选与鉴定重组体克隆:通过选择性培养基或分子生物学方法,筛选出含有重组DNA 分子的细胞克隆,并进行鉴定。
鉴定方法包括PCR、测序、Southern杂交等。
目的基因的表达与产物纯化:在鉴定出正确的重组体克隆后,需要通过诱导表达或组成型表达等方式,使目的基因在受体细胞中表达。
然后通过对表达产物的分离纯化,获得所需的新产品或新性状。
总之,基因工程是一种在分子水平上直接改造遗传物质的技术,通过改变生物体的基因组成,实现对其性状和功能的定向改造和优化。
这一技术在医学、农业、工业等领域都有广泛的应用前景。
基因工程的原理流程及应用
基因工程的原理流程及应用引言基因工程是一门将基因科学与工程技术相结合的学科,通过技术手段对生物体的基因进行改造和调控,以实现特定的生物功能。
本文将介绍基因工程的原理流程及其在科学研究、农业、医药等领域中的应用。
基本原理基因工程的基本原理是通过对DNA分子进行操作,以改变生物体的遗传信息。
DNA分子是构成生物遗传信息的基本单位,包含了生物体的所有遗传信息。
基因工程主要通过以下几个步骤实现:DNA提取与克隆1.提取源:根据需要研究或改造的生物体,选择相应的组织或细胞作为DNA的来源。
2.细胞破碎:采用物理或化学方法破坏细胞膜,释放DNA分子。
3.分离纯化:通过离心、渗析、电泳等技术,将目标DNA从其他细胞成分中分离出来。
4.克隆:将目标DNA片段插入载体DNA中,形成重组DNA。
常用的载体包括质粒、噬菌体等。
5.转化:将重组DNA转入宿主细胞中,使其成为表达所需基因的工具。
基因编辑与改造1.基因识别:通过生物信息学方法,识别目标基因的DNA序列。
2.基因编辑:利用CRISPR/Cas9等工具,精确地编辑目标基因的DNA序列。
可以实现基因剪接、替换或插入等操作。
3.基因表达:通过基因转录和翻译过程,将编辑后的基因表达为蛋白质,实现特定功能。
应用领域基因工程在科学研究、农业、医药等领域有着广泛的应用。
以下是几个主要应用领域的列举:科学研究1.基因功能研究:通过基因敲除、过表达、静默等方法,揭示基因在生物体发育、代谢、免疫等方面的功能。
2.基因调控研究:通过改变特定基因的表达水平,探索基因调控网络和信号传递机制。
农业1.作物改良:通过导入耐逆性、抗病性、高产性等基因,提高作物品质和产量。
2.遗传改良:通过基因编辑技术,快速培育出更好的品种,提高农作物的抗虫、抗逆性。
医药1.药物研发:利用基因工程技术生产重组蛋白质,用于药物的研发和生产。
2.基因治疗:通过基因编辑和基因传递技术,矫正遗传性疾病、癌症等疾病相关基因的异常。
基因工程的原理和技术
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第一章 第二节
学习要求
基本要求
1.概述述基因工程的原理2.概述基因工程基本操作的几个步骤
发展要求
举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理
说明
“课外读:聚合酶链式反应(PCR)”、“小资料:基因工程的受体细胞”只作为背景材料阅读,不要求记忆或掌握具体的内容。
PCR技术
延伸
单,导入到受体菌的群体中,各个受内全部DNA
许多DNA片段
受体菌群体
限制性核酸内切酶
与载体连接 导入
某种生物某个时期的mRNA
cDNA
反转录
受体菌群体
与载体连接 导入
三、目的基因导入受体细胞
常用的受体细胞: 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。
将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
三、目的基因导入受体细胞
例如,用质粒作为载体,宿主细胞应该选择大肠杆菌。
将细菌用CaCl2处理,以增大细菌细胞壁的通透性。 使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 目的基因在受体细胞内,随其繁殖而复制,由于细菌繁殖的速度非常快,在很短的时间内就能获得大量的目的基因。基因组部分基因 (cDNA)
二、形成重组DNA分子
添加标题
用一定的限制性核酸内切酶切割质粒,使其出现一个切口,露出粘性末端。
添加标题
用同一种限制性核酸内切酶切断目的基因,使其产生相同的粘性末端。
添加标题
用DNA连接酶将切下的目的基因片段和载体DNA形成了一个重组DNA分子(重组质粒)
基因工程的基本操作步骤
获取目的基因 形成重组DNA分子 将重组DNA分子导入受体细胞 筛选含有目的基因的受体细胞 目的基因的表达
吴乃虎《基因工程原理》4-6知识点总结
第4章基因操作的主要技术原理基因操作的方法包括:大分子DNA的提取、DNA分子的切割和连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、DNA序列分析、基因的人工合成、基因定点突变、PCR扩增等。
DNA分子的切割和连接是基因操作的核心技术。
一、核酸的分离和纯化技术核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中它们都是以与蛋白质结合的状态存在。
DNA:真核生物染色体DNA——双链线性;真核生物的细胞器DNA——双链环状;原核生物的核区DNA、质粒——双链环状。
RNA:RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子。
一般生物体基因组DNA大小为107-8bp。
DNA提取的目的(1)可用PCR从基因组中扩增基因;(2)作RAPD分析,区别两种物种之间的亲缘关系;(3)作Southern分析,检测是否转入基因;探测同源的基因;(4)作酶切图谱,用于DNA测序。
(一)总DNA的提取DNA在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在0。
14 mol/L的氯化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。
总DNA:一般来说是指基因组DNA ,即细胞核内的染色体DNA分子。
核DNA分子呈极不对称的线性结构,一条染色体为一个DNA分子。
其长度与直径的比例极不对称性,使其对极械力十分敏感。
分离纯化中DNA分子的断裂是很难避免的。
尽可能保持DNA分子的完整性是DNA分离技术的关键。
(1)有效制备大分子DNA的方法主要考虑两个原则:①防止和抑制内源DNase对DNA的降解;DNase 以Mg2+、Mn2+为辅助因子,只要加入一定的螯合剂,如EDTA(乙二胺四乙酸钠)、柠檬酸便可。
②尽量减少对溶液中DNA的机械剪切力。
动作轻柔、减少涡旋、使用大口吸管。
(2)DNA提取的主要操作过程(3)DNA提取的主要问题及解决方法:①DNA沉淀呈棕色,很难酶切或扩增;多酚、单宁、色素等氧化所致。
基因工程的原理和应用
基因工程的原理和应用基因工程是指通过对DNA分子进行操作,对一个细胞或一个生物进行改良或修饰的技术。
科学家们可以通过添加、删除或改变DNA分子的序列,进而实现对生物形态、生理和功能的改良和控制。
基因工程的原理基因工程的原理基于DNA结构与功能的深入研究和调控。
DNA分子由四种碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鳞状细胞素)组成,这些碱基按照特定的顺序排列组成一段DNA序列,而每段DNA序列实际上指定了一个特定的蛋白质。
在细胞周期中,一个DNA分子会复制成两个相同的DNA分子,这个过程称为DNA复制。
细胞将一段特定的DNA序列转录成RNA分子,RNA分子再被翻译成对应的蛋白质。
这个过程称为基因表达。
基因工程的目标是改变细胞或生物的基因组,从而控制或增强目标特征。
基因工程可以通过三个基本步骤实现:1)研究和识别特定DNA序列, 2)设计和构建DNA分子, 3)将新DNA分子导入到细胞或生物中。
研究和识别特定DNA序列通过DNA测序和比对实现;设计和构建DNA分子则需要利用DNA合成和修饰技术;将新DNA分子导入到细胞或生物中可以通过细胞培养、转染或注射等技术完成。
基因工程的应用基因工程技术的应用范围非常广泛,可以应用于医学、农业、工业、环境等各个领域。
以下是基因工程的几个主要应用:1. 生物制药在生物制药领域,基因工程技术可以用来生产各种人类蛋白质激素、酶、抗体等生物大分子药物。
例如,糖尿病患者需要注射胰岛素来控制血糖水平,而基因工程技术可以用重组DNA技术生产大量高纯度的胰岛素。
2. 农业改良基因工程技术可以用于改良作物,让植物能够在恶劣环境中生存并提高产量和品质。
例如,科学家可以用基因工程技术来加强作物抗病,提高耐旱性和耐盐碱性,并增加营养价值。
3. 生物检测基因工程技术可以研制出高灵敏度、高特异性的生物检测方法。
例如,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术可以检测和定量特定的核酸序列,因此被广泛应用于生物标记检测、药物筛选和疾病诊断等方面。
高中生物选修三基因工程知识点总结
高中生物选修三基因工程知识点总结基因工程是生物选修三课本的内容,也是高中生要掌握的重要知识点。
下面店铺为大家整理高中生物选修三基因工程知识点,希望对大家有所帮助!高中生物选修三基因工程知识点一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA 重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。
二、基因工程的原理及技术原理:基因重组技术基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端.2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶(E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:①.相同点:都缝合磷酸二酯键。
②.区别:E•coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒:它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
(3)其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1.目的基因是指:编码蛋白质的结构基因。
基因工程核心操作
基因工程核心操作基因工程,是指将不同的基因进行改造或插入,使得植物、动物或微生物的特征改变的科学技术。
基因工程核心操作包括用于改造、插入或培育生物体的基因材料的获取、分离、定位与连接等多个技术手段。
首先,基因工程核心操作需要从植物、动物或有机物中获取目标基因材料。
原理上,可以采用克隆技术对目标基因材料进行定向拆分,以获得需要的细节。
一般情况,常用的克隆技术包括接合酶切割法、聚合酶链式反应法(PCR)、遗传因子融合技术(GEFs)等。
其次,获取完目标基因材料后,需要对它进行定位和连接操作。
通常,采用合成技术来拼接源基因和目标基因,让合成基因座和细胞进行转录-转译反应以生成活性体,被称之为“基因装置”。
在合成技术中,常用的技术有DNA合成技术、核酸重组技术、多元性突变技术、RAPD技术等。
此外,需要将获取的基因材料插入或者改造目标生物体,使之发生变异。
这就要求对插入的基因片段稳定地定点定段,以令基因产生有用的功能。
常用的改造技术有质粒载体法、定点突变法、镶嵌序列合成法、非编码信使RNA靶向改造法等。
最后,还需要培育目标生物体,以使真正的变异表型发生。
培育技术是基因工程的核心操作,生物实验室对植物、动物或微生物的变异培育离不开它。
常用的培育技术,有在体培养法、外源梯度法、等离子体融合技术、原核宿主系统技术和细胞病毒宿主系统技术等等。
总之,从获取、定位、连接、改造以及培育等多个技术手段来看,基因工程核心操作包含以下几个主要步骤:获取目标基因材料,定位和连接基因片段,改造或插入基因片段,最后培育生物体以实现功能的变异。
基因工程主要操作流程及图解
基因功能研究
通过动物模型研究基因在生物体内的功能及 其调控机制,揭示生命活动的本质。
动物模型构建方法和注意事项
构建方法:包括自然 突变筛选、化学诱变、 物理诱变和基因编辑 技术等。其中,基因 编辑技术如CRISPRCas9等已成为主流方 法。
注意事项
选择合适的动物种类 和品系,确保实验结 果的准确性和可重复 性。
基因工程主要操作流程及图解
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目 录
• 基因工程概述 • 基因工程基本操作流程 • 基因表达调控技术 • 蛋白质纯化与功能分析技术 • 细胞培养、转染和稳定株构建技
术 • 动物模型在基因工程中应用 • 总结与展望
01
基因工程概述
定义与发展历程
定义
基因工程是通过改变生物体的遗传物 质,来实现对生物性状和功能的定向 改造的一门技术。
通过基因编辑技术(如CRISPR-Cas9)或基因重组技术将目的基因整合到细胞基因组中,实现稳定表达。
筛选方法
利用抗生素抗性基因或荧光标记基因进行初步筛选,再通过qPCR、Western blot等方法对稳定株进 行鉴定和验证。
06
动物模型在基因工程中应用
常见动物模型类型及其特点
小鼠模型
繁殖周期短,基因型确定,适合大规模遗传研 究。
转化细胞筛选与鉴定
01
02
03
抗性筛选
报告基因检测
PCR或测序鉴定
利用选择性培养基筛选转化细胞, 如抗生素或营养缺陷型培养基。
通过检测报告基因的表达情况, 间接判断目标基因是否整合到受 体细胞基因组中。
利用PCR或测序技术直接检测目 标基因在转化细胞中的存在和表 达情况。
03
基因表达调控技术
基因工程的操作步骤
质粒载体的扩 增:通过PCR 技术对质粒载 体进行扩增得 到足够数量的
质粒载体
质粒载体的纯 化:通过电泳、 离心等方法对 质粒载体进行 纯化得到纯化
的质粒载体
选择合适的病毒载体:如腺病毒、慢病毒、逆转录病毒等 设计目的基因:根据实验需求设计目的基因序列 构建重组质粒:将目的基因插入到病毒载体中形成重组质粒 包装病毒:将重组质粒转染到包装细胞中包装成病毒颗粒 纯化病毒:通过离心、过滤等方法纯化病毒颗粒 鉴定病毒:通过PCR、Western blot等方法鉴定病毒颗粒中的
基因工程的操作步骤
汇报人:
目录
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基因工程简介
目的基因的获取
基因克隆载体构建
目的基因与载体连 接
将目的基因导入受 体细胞
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基因工程简介
基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质以实现特定目的的技术。 基因工程包括基因克隆、基因表达、基因沉默等操作。 基因工程可以应用于医学、农业、环境等领域。 基因工程可以改变生物体的性状提高生物体的抗病性、抗虫性等。
转化:细菌、酵母、真、动物细胞 等真核细胞
转化:将目的基因直接导入受 体细胞使其表达
转导:将目的基因通过载体导 入受体细胞使其表达
转化方法:电穿孔法、化学转 化法、生物转化法等
转导方法:病毒转导、细菌转 导、植物转导等
转化效率:取决于目的基因的性质、受体细胞的类型和培养条件
转化:将连接好的目的基因 和载体导入受体细胞
筛选:通过抗性基因筛选出 含有目的基因的受体细胞
限制性内切酶:切割目的基 因和载体形成粘性末端
鉴定:通过PCR、测序等方法 鉴定目的基因是否成功插入到
载体中
检测目的基因是否成功插入载体 鉴定目的基因是否正确表达 检测目的基因是否具有功能 鉴定目的基因是否稳定遗传
基因工程操作原理
基因工程操作原理基因工程啊,就像是在微观世界里当一个超级小的建筑师,但这个建筑师摆弄的不是砖头水泥,而是比它们小无数倍的基因呢。
你可以把基因想象成是一本本超级小的秘籍,每本秘籍里都写着生物的一些小秘密,比如说这个生物会长成啥样,是高是矮,是绿是蓝(当然啦,蓝的生物比较少见哈),这些可都写在基因这个小秘籍里呢。
那基因工程操作的第一步就像是去寻找宝藏秘籍。
科学家们得先找到他们想要的基因。
这可不是在大森林里找宝藏,而是在各种各样的生物细胞里找。
比如说,科学家想要一个能让植物特别抗虫的基因,他们可能就会跑到那些从来都不被虫子咬的植物细胞里去找。
这就好比你知道有个小朋友从来都不生病,你就想去看看他是不是有啥特别的秘密,基因的寻找也是这个理儿。
找到这个基因之后呢,就像你拿到了一本超级珍贵的武功秘籍。
拿到基因之后可不能就这么干放着呀,得把它取出来。
这取基因的过程就像是小心翼翼地从一本超级古老的书里撕下一页纸,还不能把纸弄坏了。
科学家们会用一些特殊的小剪刀,这些剪刀可神奇了,它们能够精准地在基因这个长长的链条上找到合适的位置,然后“咔嚓”一下,就把想要的那段基因给剪下来了。
这就像是从一串超级长的珍珠项链里取下一颗特别的珍珠,其他珍珠还都好好地待在项链上呢。
有了这个取出来的基因,接下来就是要把它送到一个新的地方,就像给这个基因找个新的家。
这个新家可能是另一种植物或者动物的细胞。
但是这个细胞可不是随随便便就会接受这个外来基因的。
就像你突然到一个新的家庭里,人家可能还不欢迎你呢。
所以科学家们就得想办法让这个细胞打开大门欢迎这个新基因。
他们会用一些小载体,这些小载体就像是一个个友好的小使者。
比如说有一种小载体叫质粒,它就像是一个小小的快递员,把基因这个包裹安全地送到细胞这个收件人手里。
基因到了新的细胞里之后,也不是就直接开始工作了。
细胞里就像一个小工厂,里面有各种各样的小机器和小工人。
这个新基因得先和这些小机器小工人熟悉熟悉,然后才能被这个小工厂接纳,开始按照新的指令来工作。
什么是基因工程
什么是基因工程基因工程(Genetic Engineering),也称为基因改造、基因操作或遗传改良,是指人工干预生物体的遗传物质,以改变其基因组和基因表达方式的技术。
通过基因工程,科学家可以对生物体的基因进行删减、组合和重新排列,以实现特定的目标,包括改良农作物、生产药物、治疗疾病等。
基因工程的基本原理是利用DNA分子的特性进行操作。
DNA是生物体内携带遗传信息的分子,由一系列碱基序列组成。
基因工程的过程主要涉及到以下几个步骤:1. 基因分离:科学家首先需要从生物体中选择目标基因,对其进行分离和纯化。
一般通过PCR技术、限制酶切剪和电泳等方法,将目标基因从整个基因组中提取出来。
2. 基因复制:接下来,将分离得到的目标基因进行复制,使其得到足够数量的拷贝。
这一步骤可以通过PCR技术或者克隆等方法进行。
3. 基因修饰:为了使目标基因在新的宿主生物体中能够正常表达,科学家可能需要对其进行一些修饰。
这包括在基因中插入特定的启动子和终止子,以及进行DNA序列的修饰和优化。
4. 基因导入:经过修饰后的目标基因需要被导入到宿主生物体中。
这可以通过多种方法实现,例如基因枪、化学转化、电穿孔和冷冻法等。
5. 基因表达:一旦目标基因成功导入宿主生物体,科学家会利用生物体的代谢和复制系统,使其在宿主中得以表达。
不同的宿主生物体有不同的表达方式,例如细菌可通过表达蛋白来生产药物,植物可以通过表达特定基因来改良农作物。
基因工程技术的应用非常广泛。
在农业领域,基因工程可以用于改良作物的抗病性、耐旱性和营养价值,提高农作物产量和品质。
在医学领域,基因工程技术已经应用于制造重组蛋白药物,例如重组人胰岛素和重组人生长激素。
此外,基因工程还被用于研究基因功能、揭示疾病的发生机制,以及开发新的治疗方法。
尽管基因工程技术在农业、医学和科学研究中具有广阔的前景,但其也存在一些伦理和安全问题。
例如,基因工程可能导致基因污染和生物多样性的减少;基因改良农作物可能引发环境问题;基因编辑技术可能涉及到人类胚胎的修改,引发伦理问题。
基因工程实验原理
基因工程实验原理
基因工程实验的原理是基于对生物体基因组的修改和重组,旨在增加或改变生物体的特性。
下面将介绍几种常见的基因工程实验原理:
1. 基因克隆:该实验原理是将所需基因从一个生物体中剪切并插入到另一个生物体的染色体上,使目标基因能够在新宿主中表达。
2. 限制性内切酶消化:该实验原理是利用限制性内切酶切割目标DNA,创建具有粘性末端的DNA片段。
然后,可以通过连接这些片段来构建重组DNA。
3. 反转录和cDNA合成:这个实验原理是利用逆转录酶将RNA转录成DNA,即cDNA(互补DNA),然后将其克隆到表达载体中。
4. 基因敲入和敲除:该实验原理是通过CRISPR/Cas9系统或其他方法,有针对性地切割或改写目标基因,从而敲除或敲入特定的DNA片段。
5. 转基因技术:这是将外源基因导入到目标生物体中,使其表达或增强特定的功能。
转基因技术的原理可以是通过基因枪、农杆菌介导的转化等手段。
这些实验原理是基因工程研究中常用的方法,可以用于改良农
作物、生产药物、开发生物燃料等领域。
在实验过程中,研究人员需要仔细设计实验方案,并根据具体需求选择适当的方法。
高中生物基因工程的原理与操作步骤
高中生物基因工程的原理与操作步骤高中的同学们,咱们今天来聊聊基因工程这个神奇又有点复杂的家伙!话说我之前有次参加一个生物科普活动,遇到了一个特别有趣的事儿。
当时有个小朋友拿着一片叶子问我:“这叶子能变成金子不?”我笑着回答他:“小朋友,叶子变金子可不行,但通过基因工程,咱们能让植物变得更厉害哟!”这就引出了咱们今天的主题——基因工程。
基因工程啊,简单来说,就是在分子水平上对基因进行操作,就好像是给基因这个“小零件”做精细的改造和组装。
那它的原理是啥呢?其实就是利用了基因重组。
咱们都知道,不同的基因组合能产生不同的性状。
基因工程就是人为地把一些有用的基因组合在一起,创造出咱们想要的生物特性。
就好比搭积木,咱们把不同形状、颜色的积木挑出来,按照自己的想法重新搭建成一个新的造型。
基因工程也是这样,把不同生物的基因挑出来,重新组合,创造出全新的生物特性。
那基因工程具体咋操作呢?这可得一步步来。
第一步,得获取目的基因。
这目的基因就像是咱们盖房子需要的关键材料。
比如说,咱们想要让一种植物具有抗虫的特性,那就要先找到能够控制抗虫的那段基因。
这获取的方法有好几种。
可以从基因文库里找,这基因文库就像是个超级大仓库,里面堆满了各种各样的基因。
咱们得根据特定的标记或者序列,像在大海里捞针一样把咱们需要的基因捞出来。
还可以通过 PCR 技术来扩增目的基因,这就像是复制粘贴,把需要的基因大量复制出来。
第二步是基因表达载体的构建。
这一步就像是给咱们好不容易找到的目的基因搭个“车”,让它能顺利地到达目的地。
这个“车”可讲究了,得有启动子、终止子、标记基因等等。
启动子就像是发动机,能让基因开始工作;终止子就像是刹车,告诉基因什么时候该停止;标记基因呢,就像是个小旗子,能让咱们知道基因是不是成功地进入了细胞。
第三步是将目的基因导入受体细胞。
这就像是把咱们精心准备的“礼物”送进人家的“家门”。
导入的方法也有不少,比如农杆菌转化法,这农杆菌就像是个送货员,能把基因送到植物细胞里;还有基因枪法,这就像是用枪把基因“打”进细胞里;还有显微注射法,这可是个精细活儿,得用特别细的针把基因注射到动物细胞里。
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结基因工程技术,作为现代生物技术的核心领域之一,正以惊人的速度改变着我们的生活和未来。
它就像是一把神奇的钥匙,打开了生命奥秘的大门,让我们能够对生物的基因进行精确的操作和改造。
接下来,让我们一起深入探索基因工程技术的原理、应用例题,并对重要的知识点进行总结。
一、基因工程技术的原理基因工程技术的核心原理基于对DNA 分子结构和功能的深入理解。
我们知道,DNA 是由四种碱基(腺嘌呤 A、胸腺嘧啶 T、鸟嘌呤 G、胞嘧啶 C)组成的双螺旋结构,这些碱基的排列顺序决定了基因所携带的遗传信息。
基因工程的第一步是获取目的基因。
这可以通过从生物体的基因组中直接分离,或者利用反转录法从 mRNA 合成 cDNA 来实现。
例如,如果我们想要获取胰岛素基因,就可以从胰岛细胞中提取 mRNA,然后通过反转录酶合成 cDNA。
获得目的基因后,需要将其与合适的载体(如质粒、噬菌体等)进行连接,构建重组 DNA 分子。
这个过程就像是给目的基因找了一辆“车”,以便将其运输到目标细胞中。
在连接过程中,需要使用特定的限制酶和 DNA 连接酶。
限制酶能够识别特定的碱基序列,并在该位置切割 DNA 分子,产生粘性末端或平末端;DNA 连接酶则能够将具有相同末端的 DNA 片段连接起来。
接下来,将重组 DNA 分子导入受体细胞。
常用的导入方法包括转化(对于细菌等原核生物)、转染(对于动物细胞)和农杆菌介导法(对于植物细胞)等。
一旦重组 DNA 分子成功进入受体细胞,它就可以随着细胞的分裂和遗传进行复制和表达。
最后,通过筛选和鉴定,选出含有目的基因并且能够正确表达的受体细胞。
这可以通过抗性标记、分子杂交等技术来实现。
二、基因工程技术的应用例题(一)生产药物胰岛素是治疗糖尿病的重要药物。
过去,胰岛素主要从动物的胰腺中提取,不仅产量低,而且成本高。
通过基因工程技术,我们可以将人的胰岛素基因导入大肠杆菌或酵母细胞中,使其大量表达胰岛素。
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高盐提取---低盐沉淀---高盐溶解 ---乙醇沉淀
2011-9-24
基因工程基本操作
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资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
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第一节 DNA提取
(一)总DNA的提取
大肠杆菌总DNA提取 植物总DNA提取 动物总DNA提取 质粒DNA提取 噬菌体DNA提取
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基因工程基本操作
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资料仅供参考,不当之处,请联系RFLP):50kb PCR分离基因等:50kb
基因工程基本操作
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操作步骤
100 mL 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。 加9.5 mL TE悬浮沉淀, 并加0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或
1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。 加1.5 mL 5mol/L NaCl, 混匀。 加1.5 mL CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将
倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。 加1 mL 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。 加50 µl或1mg 蛋白酶 K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全
解体。 加1 mL 5 mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。 取上清液于新离心管,用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)
如何区分细菌染色体DNA和质粒DNA? 二者的分子构型不同。 大肠杆菌染色体DNA构型:线性的或开环的
DNA分子 质粒:共价闭合环状的DNA(cccDNA)分子
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基因工程基本操作
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3.动物细胞总DNA提取
取材 液氮研磨 裂解:SDS和蛋白酶K 去蛋白和细胞物 浓缩
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操作步骤
切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入 研钵(越细越好)。
上清液移至干净离心管。
用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟,沉淀DNA。 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃
保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。
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基因工程基本操作
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(2)SDS法
利用高浓度的SDS,在较高温度(55~65℃)条件下裂解细 胞,使染色体离析,蛋白质变性,释放出核酸,然后采用提 高盐浓度及降低温度的作法使蛋白质及多糖杂质沉淀(最常 用的是加入5mol/L的KAc于冰上保温,在低温条件下KAC 与蛋白质及多糖结合成不溶物),离心除去沉淀后,上清液 中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的 DNA。
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基因工程基本操作
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2.植物细胞总DNA提取
总原则:
取材 液氮研磨 裂解 去蛋白和细胞物 浓缩
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基因工程基本操作
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(1)CTAB法
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CTAB(cetyltriethylammoniumbromide) (十六烷基三乙基溴化铵)
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基因工程基本操作
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在DNA提取过程中应做到 因“材”施提 根据不同研究需要,保证结构的相应完整
性 尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、
多糖及RNA等) 保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有
机溶剂及高浓度的金属离子
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基因工程基本操作
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基因工程基本操作
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SDS 法的优缺点
优点:SDS法操作简单、温和,也可提取到分 子量较高的DNA。
缺点:产物含糖类杂质较多。 该方法所得的DNA样品也可直接用于Southern
杂交,但在限制性内切酶消化时需加大酶用量, 并适当延长反应时间。
抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。
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基因工程基本操作
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取上清加1/10 体积3 mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠 倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟,DNA沉淀形成 白色絮状物。
用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干, 溶解于1ml TE中,-20℃保存。
经典的CTAB法使用两种缓冲液
高盐提取缓冲液:1%(冷冻干燥材料)或2%CTAB(新 鲜材料)、0.7 mol/L或1.4 mol/L NaCl
沉淀缓冲液:1%CTAB,不含Nacl
CTAB法的优点
能很好地去除糖类杂质对于含糖较高的材料可优先使用
在提取前能同时得到高质量的DNA及RNA。可根据需要 分别进行纯化,如只需要DNA,则可用RNase(核糖核 酸系改正。
1.大肠杆菌总DNA提取
机械裂解 化学裂解:溶菌酶 or EDTA or both, SDS
去蛋白:酚/氯仿抽提 浓缩:乙醇,加单价阳离子,如Na+ 储存:-20℃放置
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基因工程基本操作
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如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000 rpm短暂离心,取 上清; 如要除去其中的RNA,可加5 µl RNaseA(10 µg/µl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤8-9重沉淀DNA。
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基因工程基本操作
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(二)质粒DNA提取