微生物学检验--操作流程与评分标准

显微镜的使用操作流程及评分标准

项目内容分值扣分标准扣分目的掌握显微镜的使用方法及注意事项

用物光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂

准备

素质让学生能够熟练使用显微镜

要求

1.安放：把显微镜放在自己前面略偏左的桌面上，这样便于

用左眼观察物像，用右眼看着画图。安放时镜筒向前，镜臂

向后。

2.对光：转动转换器，使低倍物镜正对通光孔，并使物镜前

端与载物台有两厘米左右的距离。然后把反光镜对着光源，

但是反光镜不能直接对着太阳。只要视野的光亮程度合适，

光就对好了。

3.观察：对好光后，把显微镜玻片标本放在载物台上，并使

操

玻片上的标本对着通光孔的中心，再用压片夹夹住。然后慢

慢地转动调焦螺旋，直到接近玻片为止。接着，用左眼向目

镜内注视，同时反方向转动调焦螺旋，直到看清物像为止。

作

4. 再放大：选好一个放大目标，再把要放大的部分移到视野

正中心，如果物像不清楚，再转动调焦螺旋。如果还观察不

清楚，就必须换用高倍物镜。用高倍物镜观察时，高倍物镜

步

顶端离玻片很近，稍不小心，镜头就会压到玻片，所以要特

别小心。

5. 在显微镜里看到的物像是倒像，因此，要使物像向上移动，

骤

就要向下移动玻片；要使物像向左移动，就要向右移动玻

片。

1.先用低倍镜观察，用低倍镜能看清的，就不再用高倍镜。

2.必须保护好镜头。

注

3.载物台要保持清洁干燥。

意

4.转动调焦螺旋不要用力过猛，以防损伤机件。

事

5. 取用显微镜要轻拿轻放，要用右手握镜臂，左手托镜座。

项

6.使用完毕，要把显微镜外表擦干净，并把镜筒旋下至最低

处。最后把显微镜放入镜箱，送回原处保存。

细菌的形态学检验操作流程及评分标准

项目目的

用物准备素质要求

操

内容分值扣分标准扣分掌握革兰染色的基本原理和操作方法

革兰染色液、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、

香柏油、蜡笔、擦镜纸、脱油剂

能够熟练对细菌标本进行染色，观察结果，对细菌进行分类

（1）涂片：取清洁无油迹的载玻片 1 张，用蜡笔划线将其分

成左右两格。用接种环先挑取生理盐水1~2 环于载玻片每格

中央，再分别挑取大肠杆菌和葡萄球菌少许菌落与生理盐水

研匀，涂成直径约 1.5cm 的菌膜。

（2）干燥：让涂片自然干燥，也可在酒精灯火焰较远处微微

加热烘干，但切勿靠近火焰。

（3）固定：干燥后的标本片在酒精灯火焰上来回通过 3 次（以

钟摆的速度），冷却后染色。固定的目的在于杀死细菌，并使

菌膜与玻片牢固粘附，避免染色过程中被水冲洗掉，通过固定

还可凝固细胞质，改变细菌对染料的通透性，使细菌易与染料

结合而着色。

（4）染色：结晶紫 --- 卢戈碘液 ---95 ％乙醇 ---- 稀释石炭酸

作

复红 --- 待干、镜检（初染） ---- （媒染） ---- （脱色） ----

（复染）

步

骤

1. 革兰氏染色成败的关键是酒精脱色时间。

注 2. 染色过程中勿使染色液干涸。

意 3. 选用幼龄的细菌。G+菌培养 12h-16h ，E.coli培养24h。事

项

基础培养基的制备与灭菌操作流程及评分标准

项目内容分值扣分标准扣分目的掌握基础基础培养基的配制流程、灭菌的方法及注意事项

用物牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、 1mol/L NaOH、1mol/LHCl

准备试管、吸管、平皿、锥形瓶、量筒、吸管、精密PH 试纸、

天平、滤纸

素质要求熟练操作培养基的配制和灭菌

要求

一、培养基的配制

1.配制溶液

2.调节 pH 值

3.过滤

4.分装

二、培养基的灭菌

操 1. 开盖

2.通电

3.加水

作 4. 放样

5. 设定温度和时间

步

骤

1．调节 PH值时，要边滴氢氧化钠边搅拌，不能一次加太多

2．加热时间控制好，否则培养基会煮糊。

注3．灭菌是要注意将灭菌锅里的空气排干净。

意4．注意灭菌的时间和温度的控制。

事

项

细菌的接种培养法操作流程及评分标准

项目目的

用物准备素质要求

操作

内容分值扣分标准扣分掌握细菌的接种方法及操作流程

温箱、酒精灯、接种环、接种针、L 形玻棒、打火机、记号笔

能够熟练操作各种接种方法

（一）平板划线接种法（又称分离培养法）

烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷，从薄膜处取菌作连

续平行划线，约占平板表面 1/5 左右，再次烧灼接种环，等三

次平行划线⋯⋯以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表

面划完。划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或

腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置 37℃孵育培养 24 小时

后观察结果。

（二）斜面培养基接种法

试管口部于火焰上往返通过 2~3 次灭菌，将灭菌白金环伸入有

菌试管中，取少量细菌，然后移至准备接种的试管中。

接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可

自管底上划一粗直线即可。

取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环

灭菌后放回原处。

（三）半固体培养基穿刺培养法

步

灭菌穿刺针沾取细菌后，垂直刺入半固体培养基中央直达近管

底处，再沿原穿刺线抽出即可。

骤

1．选择适合其生长需要的培养基

注2．防止污染。培养基和一切用具必须彻底灭菌；操作时必须意靠近火焰；操作完毕后，禁止再让培养基接触外界空气。

事3．防止接种器械过热，很容易杀死分离培养的细菌。

项