微柱凝胶检测技术概述.

广阔应用
红细胞抗原抗体检测 血小板抗原抗体检测
多种病原微生物检测
MGIA
神经内分泌因子检测
肿瘤标志物检测
应用
ABO血型检测； Rh血型抗原检测； 不规则抗体筛检； 交叉配血； HDN检测； 血小板抗体筛检； 血小板交叉配血。
特点及优点
1.简单，不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，解决 了 Coombs试验因为程序复杂费时等原因未能在 临床常规应用问题。 2.使不完全抗体检测理论“金标准”成为临床的“金 标准”。 3.多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检 测。 4.另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时 间长、易于标准化、操作更安全等优点。
特点及优点
结果清晰、易于判读，准确度、敏感性高，标 准化加样、规范化操作，排除了传统方法人 为因素的干扰。
不足
较传统方法成本稍高； 抗体筛查、配血须经孵育过程，耗时较传统方 法稍长，不适用于紧急输血。
二、在血型检测中的应用
ABO、RhD血型定型检测 进行ABO正反定型试验、D抗原检测，包括了临床血型 的常规检测项目，并设有质控孔。
聚凝胺试验
凝聚胺技术在交叉配血中具有快速检出 IgG 抗体能力， 但近年来随着对临床无效输血的深入研究发现，凝聚 胺试剂对弱的、效价低的 Rh 血型系统的抗体有漏检 的情况，且不同厂家、不同批号的凝聚胺试剂在抗体 的检出率均存在一定的差异。
酶介质凝集试验
原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负 电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消 化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电 荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞 之间的距离，使IgG分子能与有相应抗原的 红细胞产生凝集。 常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果 酶。
优点：简便、快捷、直观、成本低。 缺点：
不能发现不完全抗体 人为因素影响大
聚凝胺试验
原理：MPT法是利用阴离子溶液和聚凝胺减少 红细胞表面的阳离子层及Zeta电位，促 进IgG与红细胞的结合，缩短红细胞之间 的距离而使红细胞凝集。
聚凝胺试验
+ + +聚凝胺 + - - - - - 枸橼酸纳- - - - +
酶介质凝集试验
优点
可以增强一些抗原抗体系统的反应活性 Rh和 Kidd系统最明显。
缺点
会破坏一些抗原的结构(M、N、Fya、Fyb) 酶液批次不同，孵育时间均不同 操作复杂 少数人对酶液过敏
Coombs’试验
人红细胞表面抗原与不完全抗体结合（常是 IgG类抗体），不完全抗体致敏红细胞，由 于该不完全抗体分子质量小，而且两个Fab 段扩张角度小，不能使相邻红细胞桥联，红 细胞仍处于分散状态，不出现肉眼可见的红 细胞凝集现象。在反应体系中，加入针对该 抗体的抗体，即抗-抗体，该抗-抗体Fab段 结合相邻红细胞上不完全抗体Fc段，出现肉 眼可见的红细胞凝集现象，该抗-抗体即称 之为抗人球蛋白抗体。
MGIA- Coombs’试验（微柱凝胶）
盐水介质法
是最早最简单的方法。
悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子
结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。
主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。
盐水介质法
盐水介质法
结果分析：先观察有无溶血、再观察有无凝。
要求：细胞浓度2～5%、血清与细胞比例、反应 温度、弱凝集分析
操作简单，结果清晰、 准确，尤其对弱抗原和 亚型的检有传统的方法 无法比拟的敏感性，成 为临床血型检测的常规 方法。
二、在血型检测中的应用
Rh血型抗原检测
进行D、C、c、E、e五种主要抗原检测，达到 最大相容性输血。
二、在血型检测中的应用
注意事项：
要求标准化加样、规范化操作，可排出了传统方法中人 为因素的影响； 按要求准备标本，防止溶血、纤维蛋白等影响结果；
微柱凝胶检测技术在输血前 相容性试验中的应用
主要内容
一、血凝试验技术发展 二、在血型检测中的应用 三、在抗体筛查中的应用 四、在交叉配血中的应用
一、血凝试验技术发展
血凝实验：是指抗体和红细胞在液体介质中 发生的肉眼可见的凝集反应。根据介质的不 同可以分为下列5种
盐水法 凝聚胺法 酶介质凝集试验 试管抗人球蛋白法
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原理
微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验 （Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA）， 在 微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离 心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为 分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。
无凝集
有凝集反应
聚凝胺试验
优点 简便快捷，可用于某些不完全抗体检测。 缺点 它受冷凝集、肝素等因素的影响较大 灵敏度低，对抗-K漏检 人为影响因素大
振摇的力度和解聚的时间需要严格掌握，要求轻轻转动 试管并同时观察结果，观察时间不应超过1 min，弱凝 集用力振摇或放置时间稍长便可能消失。 试验结果需在显微镜下观察，故对操作者的技术要求较 高，也增加了结果判断的不确定性。
Coombs’试验
Coombs’试验
用于检测已粘附在红 细胞表面的不完全抗体 。即将受检红细胞充分 洗涤后，将抗球蛋白试 剂加入已结合有抗体的 受检红细胞悬液中，即 可见细胞凝集。
直接Coombs’试验
用于检测游离在血清中 的不完全抗体。即将待 测血清标本加入具有特 异抗原的红细胞悬液中， 如果抗原抗体相应则发 生结合，再加入抗球蛋 白抗体，则出现红细胞 凝集
间接Coombs’试验
Coombs’试验
Coombs’试验是理论上最明确、最准确的方 法，是国际公认的金标准。但是由于其繁琐 的操作，又不能同时对多份标本检测，只能 将该试验用在少数标本的确定中，很难临床 常规开展。
微柱凝胶检测技术
1990年，法国人Y. Lapierre发表文章介绍了一项免疫学检测新 技术：将抗原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合，即微柱凝胶免疫 实验。该技术的本质是血凝试验，即红细胞抗原抗体在微柱腔内的 凝胶介质中发生肉眼可见的免疫凝集反应。