分子诊断学完整终结版

1.分子诊断学:是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子和

2.SNP：单核苷酸多态性，指在基因组上单个核苷酸的变异，形成的遗传标记，其数量很多，多态性丰富。

3．基因(gene)：是有功能的DNA片段，含有合成有功能蛋白质多肽链或RNA所必学的全部核苷酸序列，是遗传的结构和功能单位。分为结构基因和调控基因。

4．结构基因：编码蛋白质或RNA的编码序列调控基因：保证转录功能起调控作用的非编码序列

5．操纵子（operon）操纵基因与其控制下的结构基因共同组成的功能单位

6．断裂基因：指基因的内部存在间隔区，间隔区的DNA序列与该基因所决定的蛋白质没有关系。

间隔区又称为内含子。出现在成熟RNA中的有效区段为外显子。

7.重叠基因：指基因的开放阅读框（ORF）存在一个或多个核苷酸重叠的基因

8.跳跃基因：又称转座子，基因在染色体上的位置不固定，能由一条染色体跳到另一条染色体上。

9.必须基因：生物体中存在的一些维持生物细胞生长所必需的基因，缺少或突变这些基因均能导致生物体死亡

10.基因组（genome）：细胞中一套完整单倍体的遗传物质的总和.

11.基因组结构主要指不同的DNA功能区在DNA分子中的分布和排列

12．多顺反子（polycistron）：操纵子中常常有一至多个功能相关的结构基因串连一起，受同一个调控区调控，转录在同一个mRNA分子中。

13.黏性末端：基因组双链两端具有能够互补的单链DNA部分

14.末端正向重复序列：又称末端冗余，指病毒双链DNA分子两端有一段相同的核苷酸

15.末端反向重复序列（ITR）：指病毒基因组两端的反向互补重复序列

16.重叠基因：指两个或两个以上基因的ORF共有一段DNA序列

17.分段基因：指病毒基因组由几条不同的核酸分子组成，多冗于tDNA病毒，RNA病毒及双链RNA病毒

18.LTR：即长末端重复序列，逆转录病毒逆转录后生产的dsDNA中，两端有LTR结构

19.DNA重组：是指将不同来源的DNA分子通过磷酸二酯键将末端连接形成重组DNA.

20.DNA克隆（分子克隆）：将某一特定DNA片段通过重组DNA技术插入到一个载体（质粒和病毒等）中，然后在宿主细胞中进行自我复制所得到的大量完全相同的该DNA片段的群体。

21..限制性片段长度的多态性（RFLP）：个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性。若因此而改变了限制性内切酶的酶切位点可导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称RFLP。

22..限制性核酸内切酶（RE）:重要的工具酶之一。RE是一类能识别和切割双链DNA特定核苷酸序列的核酸水解酶.(水解磷酸二酯键)

23..DNA聚合酶Ⅰ是从大肠杆菌中发现的第一个DNA聚合酶，分子量为109000.具有５’—3’聚合酶活性、3’—5’核酸外切酶活性、5’-3’核算外切酶活性的工具酶。

24..Klenow片段：用特异性的蛋白酶可将DNA聚合酶Ⅰ裂解为小片段与大片段，大片段即Klenow片段，具有5’--3’聚合酶活性及3’--5’外切酶活性，而失去了5’—3’外切酶活性，是分子生物学研究的常用工具酶

25.TaqDNA聚合酶：一种耐热的依赖DNA的ＤＮＡ聚合酶。具有5’—3’聚合酶活性和依赖于聚合作用的5’—3’外切酶活性。（最佳作用温度是70~80℃，TaqDNA聚合酶可用于DNA测定及通过聚合酶链反应（PCR）对DNA分子的特定序列进行体外扩增）

26.同工异源酶：在DNA上，来源不同但能识别和切割同一位点的酶。

27..逆转录酶：是具有依赖RNA的DNA聚合酶活性、核酸酶H的水解作用、以DNA为模版的DNA聚合酶作用的多功能酶。

28.末端脱氧核糖核苷酰转移酶（简称末端转移酶）TdT：在二价阳离子存在下，催化ｄＮＴＰ转移到单链或双链DNA分子的3'-OH末端的工具酶。

29.ＤＮＡ连接酶：催化双链ＤＮＡ一端的３’－ＯＨ与另一双链ＤＮＡ５'端的磷酸根形成３'，５＇－磷酸二酯键，将具有相同黏性末端或平端的两条双链DNA片段连接起来，实现DNA的体外重组，其催化黏性末端连接效率要比平末端高得多。

30.碱性磷酸酶：用于催化去除DNA、RNA或dNTP上的5'-磷酸基团的工具酶。

31.T4多核苷酸激酶：来源于T4噬菌体感染的大肠杆菌．包括前向反应和交换反应。用于催化ATP上的γ-磷酸

转移到ＤＮＡ链的５＇端上的工具酶．

32.核酸酶Ｓ１：可用于水解双链DNA、ＲＮＡ或DNA－ＲＮＡ杂交分子的单链部分的工具酶．

33.载体（vector）：是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具，本质为DNA。

34.克隆载体：能将目的基因在受体细胞中复制扩增并产生大量目的基因的载体称为克隆载体。

35.分子诊断主要特点：直接以疾病基因为探索对象，属于病因学诊断，对基因的检测结果不仅具有描述性，更具有准确性；可准确诊断疾病的基因型变异，基因表型异常以及由外源性基因侵入引起的疾病；灵敏度高，便于早期诊断及疾病预防；以基因分析为基础，特异性高。

36分子诊断三个阶段:(第一个阶段：准备和酝酿阶段1953年前，蛋白质是生命的物质基础，DNA是遗传物质基础。（三个实验：肺炎双球菌转化实验、体外转化实验、噬菌体转导实验）、第二个阶段：DNA双螺旋结构、中心法则、PCR技术第三个阶段：2001年，首张人类基因组序列图谱及其他物种基因组序列的公布。基因组分、蛋白质组学等方面的巨大技术进步，促进进入第三阶段，即以生物芯片技术为代表的高通量密集型技术。

③主要应用：感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤的分子诊断，个体化医疗，其他如耐药性、疗效监测，多基因疾病

37.四项生物技术：细胞融合技术，分子克隆技术，蛋白工程技术，基因扩增技术

38.C值：基因组的大小，常用碱基数目或碱基对数目来描述①C值是特异的，物种不同，差异极大，真核生物中，一般随着进化，C值增大②C值矛盾：又称C值悖论，生物的进化程度与基因组大小不完全成比例的现象

39.真核生物基因组基本特征：①有细胞核基因组和细胞器基因组之分；②核基因组以线状DNA分子的形式存在于染色质上；③基因多数为断裂基因，有内含子结构和大量重复序列；④单顺反子，基因家族；⑤核基因组由染色体DNA组成，分子量较大，结构复杂，与蛋白质结合。

40.注意点：①染色质的基本组成单位是核小体，由组蛋白核心和周围的DNA组成。组蛋白H2A、H2B、H3和H4各2个分子组成核心即组蛋白八聚体②一个基因有n个内含子，则相应有n+1个外显子③重复序列分为4类：单一序列、轻度重复序列（2—10个拷贝）、中度重复序列（10—12个拷贝）、高度重复序列（1万以上）④多基因家族：一些有编码功能的重复序列，即指起源相同，序列相似，功能相关的的一组基因，分为基因簇（相对集中分布在某一染色体的特定区域）和另一类基因家族成员在整个染色体上散在分布，甚至位于不同染色体⑤超基因家族：由基因家族和单基因组成的较大的基因家族，结构不等的同源性，功能不一定相同⑥假基因：基因家族中有的成员因突变而失活，不能表达出有活性的产物。

41．人类基因组计划（HGP）：旨在测出人类基因组30亿碱基对的核苷酸序列，发现所有人类基因并确定它们在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息，发展基因组学新技术，探讨人类基因组研究的社会法律与伦理等问题的一个国际性研究项目。

1）主要任务：人类的DNA测序，包括序列图谱、遗传图谱、物理图谱、转录图谱等的绘制2）测序策略：经典的逐步克隆法、全基因组鸟枪法3）人类基因组概貌：①GC含量：平均41%（33%—65%）②CpG岛：即二核苷酸CG③染色体的重组率④基因突变率：男性多见⑤重组序列的含量，包括SINE、LINE、LTR、卫星DNA、Tn等⑥单核苷酸多态性（SNP）含量⑦基因数量：2、6万—3、9万个⑧蛋白质数量：选择性剪接较多，使得蛋白质多而复杂⑨疾病基因⑩人基因组序列：99、99%相同4）人类基因组多样性：同一人种或不同人种基因组存在或多或少的差异。通常DNA分子中某一特定位点的变异频率低于1%为基因突变，高于1%为DNA分子多肽。人类DNA分子多肽性的产生有以下几种主要方式：①重复序列单元的拷贝数变异，如微卫星DNA多态性②转座因子导致的分子多肽，如Alu序列多态性③单个核苷酸的变异即SNP

42．原核生物基因组一般特点：①基因组相对较小，通常为一条双链DNA分子②功能相关的基因高度集中，构成操纵子③重复序列少，大多数的蛋白质基因保持单拷贝形式，RNA基因常是多拷贝④没有内含子，基因连续⑤多顺反子，构成转录单位⑥绝大部分DNA都是用于编码蛋白质的，只有很少不编码序列⑦DNA分子中有各种功能区

43、质粒是多数细菌和某些真核生物细胞的染色体外的双链环状DNA分子

44.遗传特性：①双链环状DNA分子，且为共价闭合环状DNA（cccDNA）②质粒复制有赖于宿主细胞的复制，但

其自身基因可控制合成的时限及拷贝数③垂直传递④不影响宿主细胞代谢，但可能

赋予宿主细胞新的表型⑤治理的复制方式为半保留复制。单向/双向，单向，双向。

45.特性：①质粒的不相溶性：两种不同质粒如果利用同一复制和维持机制，会在复制和随后向子代细胞分配的过程中相互竞争，因而不能在同一宿主细胞内稳定存在，其中一种质粒将被丢失的现象。这两种质粒属于同一不相容群（InC）。②质粒的稳定性：质粒在宿主细胞内能稳定存在不被丢失称为质粒的稳定性。③质粒的转移性。④质粒的选择性标记。