PCR实验室规范操作及日常管理
pcr实验室的操作流程及注意事项
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pcr实验室规章制度
pcr实验室规章制度PCR 实验室规章制度一、PCR 实验室的设置和布局PCR 实验室应当分为试剂准备区、样本制备区、扩增区和产物分析区。
各区之间应当有严格的物理分隔,以防止交叉污染。
每个区域应当有明确的标识和功能说明。
试剂准备区:主要用于配制和储存PCR 反应所需的试剂,如引物、dNTPs、缓冲液等。
该区域应当保持清洁、干燥,避免灰尘和微生物的污染。
样本制备区:用于处理和提取样本中的核酸。
在此区域内,应当配备生物安全柜、离心机、移液器等设备,以确保样本处理的安全性和准确性。
扩增区:进行 PCR 扩增反应的区域。
此区应配备 PCR 仪、恒温设备等。
产物分析区:用于对PCR 产物进行检测和分析,如电泳、测序等。
二、人员管理1、所有进入 PCR 实验室的人员必须经过专门的培训,熟悉实验室的工作流程、操作规程和安全注意事项。
2、实验人员应当穿戴适当的个人防护装备,如工作服、手套、口罩、护目镜等。
3、严格限制非实验人员进入实验室,如有必要,需经过批准并在实验人员的陪同下进入。
三、试剂和耗材管理1、试剂的采购应当选择有资质的供应商,并确保试剂的质量和稳定性。
2、试剂在使用前应当进行检查和验证,确保其符合实验要求。
3、耗材应当定期检查,如有损坏或过期应及时更换。
4、试剂和耗材的储存应当按照规定的条件进行,避免受到污染和变质。
四、仪器设备管理1、实验室中的仪器设备应当定期进行维护和校准,确保其性能稳定和准确性。
2、建立仪器设备的使用记录,包括使用时间、使用者、维护情况等。
3、对于故障的仪器设备,应当及时维修,并在维修后进行验证和校准。
五、样本管理1、样本的采集、运输和保存应当符合相关的规范和标准。
2、样本应当有明确的标识和记录,包括样本编号、来源、采集时间、保存条件等。
3、样本在处理和检测过程中应当防止交叉污染和混淆。
六、实验操作规范1、在实验开始前,应当对实验区域进行清洁和消毒。
2、实验操作过程中应当严格遵守操作规程,避免操作失误和污染。
PCR实验室要求
PCR实验室要求PCR(聚合酶链式反应)是一种广泛应用于分子生物学研究中的技术,它能够扩增目标DNA序列。
为了确保实验室的安全性、准确性和效率,PCR实验室需要满足一系列的要求。
本文将从实验室环境、仪器设备、操作规范和个人防护等方面进行论述。
一、实验室环境要求PCR实验室应设置在一个静止无风的环境中,避免任何可能带入外部污染源的因素。
实验室内部应维持适当的温度和湿度,通风良好,并定期消毒以保持实验室的清洁。
此外,实验室应与其他实验室区隔开来,以减少交叉污染的风险。
二、仪器设备要求PCR实验室应配备一台高质量、可靠的PCR仪,确保温度控制和样品循环的准确性。
仪器应进行定期校准和维护,以保持其正常运行。
此外,实验室还应配备有紫外线可视化系统,用于检测PCR扩增产物。
所有使用的试剂和耗材必须符合实验要求,并保持干燥和密封。
三、操作规范要求1. 试剂准备与储存:所有试剂应按照使用说明书准备,并储存在适当的温度和湿度下。
首次使用前,试剂应进行质量控制,以确保其可靠性和准确性。
2. 样品处理与提取:在进行PCR反应前,样品应经过适当的处理和提取步骤,以获得可靠的DNA模板。
对于不同来源的样品,应采用相应的提取方法,并确保样品纯度和完整性。
3. PCR反应设置:根据实验需求和扩增模板的特征,合理选择PCR 反应体系和条件。
正确计算和配制反应体系中的各种试剂和成分,确保反应的准确性和一致性。
同时,应根据目标模板的大小和复杂性,确定适当的扩增循环数目。
4. PCR反应操作:严格控制PCR反应的各项操作条件,包括温度、时间和缓冲液的浓度。
操作前,应彻底清洁和消毒操作台、仪器和耗材,避免任何可能的外源性污染。
在操作中,仪器的盖子应保持关闭,以避免样品蒸发和污染。
四、个人防护要求进行PCR实验时,实验人员应提前完成相关的个人防护培训,并穿戴适当的实验室防护用品。
穿戴实验室大衣、手套、口罩和安全镜等,以保护个人安全和减少实验操作对身体的影响。
pcr 操作中最应该注意的事项
pcr 操作中最应该注意的事项PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种常用的分子生物学技术,用于扩增DNA片段。
在进行PCR操作时,有一些非常重要的事项需要特别注意,以确保实验的准确性和可靠性。
以下是在PCR操作中最应该注意的事项:1. 实验室操作规范:在进行PCR操作之前,需要做好实验室操作规范的准备工作,包括戴好实验手套、穿好实验服、清洁操作台面等。
避免在实验室中进食、饮水或使用手机等。
2. 检查实验仪器和试剂:在开始PCR实验之前,需要确保PCR仪器的正常运转和试剂的完整性。
检查PCR仪器的温控系统、离心机的转速、试剂的保质期等,确保实验条件的准确性。
3. 建立阳性和阴性对照:在每次PCR实验中,都要包括阳性对照和阴性对照,以验证实验的准确性。
阳性对照应包括已知的阳性样品,而阴性对照则应该是未添加DNA模板的反应混合物。
4. 采用单独的PCR实验室:为了避免PCR实验中的污染,最好在专门的PCR实验室中进行实验,避免与其他实验室中的DNA样品混合。
5. 严格控制实验条件:在PCR实验中,需要严格控制实验条件,包括温度、时间、试剂比例等。
确保PCR反应体系的均匀混合、温度梯度的准确性和反应时间的精确控制。
6. 避免污染:PCR实验非常容易受到外源DNA的污染,因此需要避免在实验室中的DNA样品和PCR产物的交叉污染。
实验中应该使用滤器枪头、一次性试剂盒等措施,避免污染的发生。
7. 定期维护PCR仪器:PCR仪器的维护对实验的准确性非常重要。
定期清洁PCR仪器的加热盖、检查温度控制系统的准确性、更换磁力搅拌器的磁子等,确保PCR仪器的正常运转。
8. 标记实验样品:在进行PCR实验时,需要对实验样品进行正确的标记,包括样品的编号、实验日期、PCR程序名称等。
避免实验样品的混淆和实验结果的不准确。
9. 注意PCR产物的保存和处理:PCR产物的保存和处理对实验结果的可靠性有着重要的影响。
PCR实验操作注意事项及PCR实验室试剂配制要求
PCR实验操作注意事项及PCR实验室试剂配制要求PCR实验操作注意事项如果操作不规范,样品间的交叉污染是很容易出现的,从而产生假阳性问题。
因此,不仅要在进行扩增反应时要谨慎对待,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应谨慎操作,一般需做到以下几点:1、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班,并持证上岗。
PCR实验室通过验收,实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。
2、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,应立即更换手套,避免反应液飞溅,若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;3、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件,构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
4、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免空气中气溶胶的污染;5、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后再分装,这样既可以减少操作次数,避免污染,又可以增加反应的度;6、加入反应模板,加入后盖紧反应管;7、操作时设立空白对照和阴阳性对照,既可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;8、由于实际操作时加样器很容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,所以操作者好使用高压处理过的或可替换的加样器。
假如没有这种特殊的加样器,至少在PCR操作过程中加样器应该专用,严禁交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个相邻区域使用;9、重复实验,验证结果,慎下结论。
PCR实验室试剂配制要求:PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的负压工作台或超净工作台进行配制和分装,所有的吸头和加样器都需固定放于其中,吸头不能用来吸取扩增后的DNA和其它来源DNA:1、PCR用水应为高压的双蒸水;2、引物和d-NTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;3、引物和d-NTP应分装储存,分装时应标明分装时间,以备发生污染时及时查找原因和追溯污染源头;。
pcr实验室规章制度
pcr实验室规章制度一、实验室概述PCR实验室是一个专门用于进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)的实验室。
为确保实验室操作的安全性和实验结果的准确性,特制定以下规章制度。
二、实验室入口与出口管理1. 进入实验室前,必须穿戴好实验室服,并配戴好实验室必备的个人防护装备,例如手套、口罩和护目镜等。
2. 离开实验室时,必须彻底洗净双手,并更换一次性手套。
三、实验室操作规范1. 所有实验操作必须按照正确的步骤进行,严禁随意改变实验方案或方法。
2. 实验过程中应当保持实验台面整洁,杂物和废弃物必须及时清理。
3. 每次操作使用完的实验器具和试剂必须在实验结束后进行消毒或丢弃处理。
4. 禁止在实验室内饮食、吸烟和储存食品。
5. 实验室内禁止随意移动或调整实验设备和仪器,如需调整需事先征得实验室负责人的批准。
四、PCR反应体系准备1. 每次开始新一轮PCR实验前,必须按照操作指南准确配制PCR 反应体系,确保反应液的准确性与一致性。
2. 所使用的试剂必须检查标签清晰、有效期内,并在使用前进行检验。
3. 反应液配制完毕后,应严密封闭,避免污染和蒸发。
五、实验室垃圾管理1. 实验室内产生的生物垃圾、化学垃圾和一次性塑料制品等废弃物必须正确分类,并放置于相应的垃圾桶中。
2. 实验室内的废弃物应当定期正确清运,确保实验环境的整洁与卫生。
3. 实验室内严禁将废弃物随意堆放于通道或实验台面上,以免影响实验操作和日常工作。
六、设备使用与维护1. 在使用实验设备前,必须仔细阅读设备说明书和操作手册,了解设备的正确使用方法与安全注意事项。
2. 使用完毕后,应按要求对设备进行定期清洁与维护,保持设备状态良好。
3. 发现设备故障或异常情况时,应及时向实验室负责人报告,并采取适当措施进行紧急维修或更换设备。
七、应急措施与安全防护1. 在实验室进行PCR时,应注意防止试剂的沾染和飞溅,做好个人防护。
PCR室的各项规章制度
PCR室的各项规章制度第一章总则第一条为规范PCR室的管理,维护实验室的秩序和安全,保障实验室内人员的健康与生命安全,特制定本规章制度。
第二条PCR室的管理遵循科学、公正、合理、规范的原则,听从实验室主任的领导,服从安全员和教练的管理,保证实验室工作的正常进行。
第三条PCR室所有人员都应当严格遵守本规章制度,严禁违反任何规定。
第四条制度的解释权属PCR室管理人员。
第二章实验室安全管理第五条PCR室内禁止吸烟,禁止在实验室内随意放置易燃、易爆物品,保持环境整洁,不得私自进行实验室改造。
第六条使用实验室设备、仪器需经过指导并取得合格证,不得擅自使用。
第七条使用化学试剂时必须佩戴防护眼镜、口罩、手套等安全设备,严格按照操作规程操作,注意防范可能产生的危险。
第八条实验室内有紧急事故发生时,立即向安全员或主任报告,并采取应急措施。
第九条实验室内有异物或有害物质泄漏时,需迅速通知安全员,按规定程序处理。
第十条实验室的安全员具备紧急处理能力和知识,负责协调应急处理工作。
第三章实验室学术规范第十一条实验室内的学术研究必须严格遵循学术规范,不得抄袭他人作品、篡改数据,不得伪造研究结果。
第十二条实验室内的研究成果归实验室所有,不得私自外传,需经过实验室主任批准后方可公开发表。
第十三条实验室内成员之间要和睦相处,互相合作,不得互相攻击、侮辱他人,保持团结、和谐。
第十四条实验室内严禁进行危害学术声誉的行为,如造谣、散布谣言等。
第四章实验室设备使用第十五条实验室内设备使用前必须进行检查,确保设备完好无损。
第十六条实验室设备使用完毕后,必须归还到指定地点,不得私自擅自乱放。
第十七条实验室设备出现故障或损坏时,需及时向设备管理员报告,由专业人员进行维修。
第十八条实验室设备的使用费用由实验室统一管理,不得私自收取或使用。
第五章实验室卫生管理第十九条实验室内需要定期进行清洁,保持环境整洁卫生。
第二十条实验室内垃圾需要分类投放,有害垃圾需按规定程序进行处理。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR实验室的设置及管理i•目的:建立实验室的合理设置和科学管理,防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2•适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3•负责人:4.细则:4. 1流感实验室为急传所的专业实验室,从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4. 2本实验室采用实时荧光定量(定性)PCR技术作为病毒基因诊断的主要手段,实验室分为三个区:试剂准备区(第一区)、标本处理区(第二区)、扩增分析区(第三区)。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4. 3各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。
4. 4各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4. 5严格遵守从“试剂准备区T标本处理区T扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4. 6非本实验室工作人员,未经许可不得入内;进修、实习或其他科室人员因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增分析区)需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4. 7实验完毕后做好清洁消毒工作。
1、PCR实验室工作制度1.目的:保持良好的工作环境,以确保检测结果的可靠性,防止交叉污染,防止差错、事故及纠纷的发生。
2.适用范围:所有本实验室人员。
3.负责人:4.细则:4. 1本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4. 2各区的用品不得混用。
4. 3在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子,严格按照操作规程。
4. 4试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作(见相关SOP文件)。
4. 5标本处理区只能进行临床标本的保存,核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成(见相关SOP文件)。
PCR室的工作制度
PCR室工作制度一、总则为了确保PCR实验室的正常运行,保证检测结果的准确性和可靠性,维护实验室的安全和卫生,根据国家相关法律法规和实验室管理制度,制定本工作制度。
本制度适用于PCR实验室全体工作人员,包括实验室管理人员、技术人员和实验员。
二、工作准备1. 实验室环境(1)PCR实验室应保持清洁、卫生,室内温度控制在18-22℃,相对湿度控制在40%-60%。
(2)实验室应配备必要的实验设备,如PCR仪器、核酸提取仪器、生物安全柜、冰箱、离心机等。
(3)实验室应具备良好的通风设施,确保实验室内空气新鲜。
2. 实验材料和试剂(1)实验材料应来源可靠,符合国家相关标准。
(2)试剂应储存于适当的容器中,标签清晰,存放整齐。
(3)实验材料和试剂应定期检查,确保其质量和有效性。
三、工作流程1. 样本接收(1)接收样本时,应核对样本信息,确保样本来源合法、完整。
(2)对样本进行编号,做好记录,便于后续实验操作。
2. 样本处理(1)按照预定的实验方案,进行样本的核酸提取、扩增等操作。
(2)操作过程中,应遵循无菌操作原则,避免交叉污染。
(3)对实验过程进行详细记录,便于后期分析和追踪。
3. 结果分析与报告(1)实验结束后,对结果进行分析,判断是否符合预期。
(2)如有异常情况,应立即报告上级,并采取相应措施。
(3)按照相关规定,出具检测报告,并保证报告的真实性和准确性。
四、实验室安全管理1. 生物安全(1)实验室工作人员应具备生物安全知识,遵守生物安全操作规程。
(2)实验过程中,应采取有效措施,防止病原体泄露和交叉污染。
(3)实验废弃物应按照相关规定进行无害化处理。
2. 化学安全(1)实验室工作人员应熟悉化学试剂的性质、用途和危害。
(2)合理储存化学试剂,标签清晰,存放整齐。
(3)使用化学试剂时,应采取必要的安全措施,如佩戴防护用品等。
3. 仪器设备管理(1)实验室仪器设备应定期进行检查、维护,确保其正常运行。
(2)实验室工作人员应熟悉仪器设备的操作规程,正确使用。
PCR实验室管理制度
PCR实验室管理制度第一章总则第一条为了规范PCR实验室的管理,确保实验室的安全与稳定运行,提高实验效率,减少实验失误,制定本管理制度。
第二条本管理制度适用于PCR实验室的所有人员,包括实验员、技术人员、管理人员等。
第三条PCR实验室的管理遵循“安全为主、规范操作、质量第一”的原则。
第四条PCR实验室应当建立健全实验室安全管理制度、质量管理制度和文件管理制度,并定期进行审核和更新。
第五条PCR实验室应当配备必要的安全设施和消防设备,定期进行检查和维护,确保实验室的安全运行。
第二章实验室人员管理第六条实验室的人员应当经过严格的培训,熟悉PCR实验的原理、操作步骤和相关安全知识,且定期进行培训和考核。
第七条实验室人员应当穿着符合要求的实验服,并佩戴好帽子、口罩和手套,以防止实验物品的污染和交叉感染。
第八条实验室人员在实验过程中应当保持良好的操作习惯,注意实验仪器的正确使用和保养,确保实验室的设备正常运行。
第九条实验室人员在实验结束后应当及时清理实验台面、设备和试剂,保持实验室的卫生和整洁。
第三章实验物品和试剂管理第十条实验物品和试剂应当分类存放,定期进行检查和清点,且符合相关安全规定。
第十一条实验物品和试剂的采购应当按照质量要求进行,保证其适用于PCR实验的需要。
第十二条实验物品和试剂使用完后应当及时归还或妥善处理,不得随意丢弃或私自带离实验室。
第十三条实验物品和试剂的储存应当符合相关规定,防止火灾、爆炸等事故的发生。
第四章实验室设备管理第十四条实验室设备应当按照规定使用和维护,不得随意更改设备的设置和参数。
第十五条实验室设备的日常维护工作应由专人负责,定期进行检查和保养,保证设备的正常运行。
第十七条实验室设备的购置和更新应当根据实验需要进行,经过科学评估和论证。
第五章实验室安全管理第十八条实验室应当建立健全安全管理制度,明确实验室内的安全责任和安全措施,并定期演练和评估。
第十九条实验室应当制定应急预案,明确各类事故的处理方式和责任人,并定期进行演练和培训。
PCR实验室管理制度
人生的磨难是很多的,所以我们不可对于每一件轻微的伤害都过于敏感。
在生活磨难面前,精神上的坚强和无动于衷是我们抵抗罪恶和人生意外的最好武器。
1PCR实验室管理制度1.0目的建立PCR实验室的工作规范,确保分子诊断室正常工作。
2.0范围PCR实验室,包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。
3.0职责PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。
4.0内容4.1在进入实验室前,在隔离台戴好头套口罩,穿上鞋套与实验服。
4.2试剂准备间4.2.1配电房先打开风机(先开送风机,再开排风机),再把空调系统打开。
关闭时的顺序相反。
4.2.2其它室的用品不得带入本室。
4.2.3从PCR实验室1号入口门进入实验室,到达试剂准备间的缓冲间,脱下白色工作服,挂在缓冲间的左侧,在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服(蓝色),进入试剂准备间,实验中须戴一次性手套,手套常更换。
4.2.4打开已灭菌的超净台,通风一段时间,排走臭氧。
取出当次实验需配制和使用的试剂,其余试剂要立即收好放回冰箱内。
4.2.5操作应在冰上进行。
Taq酶尽量在配液的最后一步加入。
应减少dNTP反复冻融的次数。
每次实验后将枪调至最大量程。
加模板前打开废液缸盖,加完模板后务必盖上废液缸的盖子。
4.2.6实验作业完成时,应及时清理工作台,做好实验登记,应使用本室专用的记录本和笔,打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。
使用过的离心管、吸头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。
4.2.7打开传递窗门,垫上一次性手套,将配好的试剂放到传递窗里,关上传递窗门。
4.2.8在试剂缓冲间脱下工作服,穿上白色工作服。
4.3标本制备间4.3.1在标本制备间的缓冲间,脱下白色工作服,换上标本制备间专用的工作服(粉红色),进入标本制备间。
4.3.2打开传递窗的门,取出配好的试剂,使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。
4.3.3实验作业完成时,应及时清理工作台,使用过的离心管、带滤芯枪头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。
PCR实验室管理制度
PCR实验室管理制度一、实验室基本情况PCR实验室位于实验楼3层,面积200平方米,配备了PCR仪器、离心机、电动移液器、反应仪等设备,可同时进行多个PCR实验。
实验室共有两名实验员,分别负责实验室管理和实验操作,实验室主任负责监督和协调实验工作。
二、实验室安全管理1.实验室进入和离开(1)实验人员必须佩戴好实验室专用的实验服和实验手套,并戴好安全护目镜进入实验室。
(2)离开实验室时,实验人员必须对实验台面进行清洁,并将实验室专用的实验服、手套和护目镜存放在指定位置。
2.实验室卫生(1)每天上班前,实验室负责人负责检查实验室的卫生情况,并进行打扫和消毒。
(2)实验人员每天结束实验后,对实验台面和设备进行清洁和消毒,保持实验室的整洁和干净。
3.实验室设备管理(1)使用设备前,实验人员必须检查设备是否正常,如有异常情况应及时报告实验室负责人进行维修或更换。
(2)实验人员必须按照设备使用说明书进行操作,严禁私自调整和更改设备参数。
4.实验室药品和试剂管理(1)试剂必须存放在干燥、阴凉和通风良好的地方,避免阳光直射和高温。
(3)试剂的取用必须按照所需量,避免过量和浪费。
5.废弃物处理(1)废弃物必须分类投放,包括玻璃制品、塑料制品、纸张等。
(2)有害废弃物必须单独收集和处理,禁止随意丢弃到一般垃圾桶。
三、实验室操作规范1.实验前准备(1)实验员必须按照规定的实验操作流程进行实验前的准备工作,包括准备实验材料、安装试剂和设备,并对实验仪器进行校准。
(2)实验员必须检查实验操作区域的洁净度、实验台面的消毒情况,确保实验操作的环境符合要求。
2.实验操作(1)实验员必须按照操作规范进行实验操作,并记录实验过程中的关键数据和观察结果。
(2)实验员必须严格遵守实验操作区域的防护要求,避免污染实验材料和设备,确保实验的有效性和准确性。
3.实验后处理(1)实验员必须及时清洁实验台面和设备,清除实验废液和废物。
(2)实验员必须整理实验数据和实验记录,并提交实验报告。
PCR实验室的清洁消毒操作规程及日常消毒指引
PCR实验室的清洁消毒操作规程1.目的:为有效避免污染出现,制定防污染的措施,预防污染的发生。
2.范围:主要用于防止实验室扩增前、后的产物造成的污染。
3.职责:实验室操作人员负责实验室的清洁消毒。
4.程序:4.1实验前,打开紫外灯内照射30分钟,如有需要可延长照射时间。
各实验区物品必须在使用前高温高压灭菌,不能受高温高压的用弱酸弱碱浸泡。
4.2实验后,由相关人员分别在试剂准备区、标本处理区、扩增区用各区专用工具以10%次氯酸钠擦洗地面和工作台面及加样枪.每区均有专用拖把和抹布。
实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。
地板:第一遍由外往里拖,第二遍由里往外拖, 用拖把浸泡10%次氯酸钠溶液后将各工作区域拖擦干净。
特殊处理:若某区域被明显污染如标本打翻、泼溅于表面,应立即用10%次氯酸钠溶液浸过污染物表面,消毒1小时后,再擦干净。
4.3将废液缸内倒入10%次氯酸钠,待实验结束后将浸泡在废液缸内的离心管、吸头放入专用黄色塑料袋,统一交公司废物处理车间统一处理。
5.相关文件:无。
6 .相关记录:洁净区清洁消毒记录清洁剂、消毒剂配制记录PCR实验室日常消毒指引1、每日工作前后,对工作区域表面、地面进行清洁并消毒, 使用含氯消毒液擦拭。
清洁采用湿式、不扬尘的方式进行。
2、物品防尘存放。
墙面定期清洁,有可见污染及时进行清洁消毒。
3、配备移动紫外线消毒装置进行空气和物表的消毒。
4、生物安全柜的消毒:a、每天工作前:对生物安全柜的内表面进行消毒,包括工作台面和内壁使用消毒剂擦拭。
b、工作结束:柜内物品全部消毒后移出。
消毒剂擦拭台面四周、以及玻璃内侧灯部位。
c、消毒剂应选择能够杀死生物安全柜里可能发生的任何微生物(70%乙醇、含氯消毒剂)。
在使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后,还应用无菌水再次进行擦拭。
d、停用生物安全柜前,运行5min以净化内部空气。
e、终末消毒:需要进行终末消毒的时机:生物安全。
pcr实验室管理制度
pcr实验室管理制度第一章总则第一条为规范PCR实验室管理,确保实验室内实验人员和实验材料的安全,提高实验室工作效率和科研成果质量,特制定本管理制度。
第二条 PCR实验室是指专门从事聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)以及PCR相关实验的实验室。
第三条 PCR实验室的管理遵循“安全第一,规范操作,科学管理,诚信服务”的原则。
第四条 PCR实验室管理制度适用于PCR实验室内所有的实验人员和管理人员。
第五条 PCR实验室管理制度的内容包括实验室的基本管理、安全管理、质量管理、人员管理等方面。
第二章实验室的基本管理第六条实验室的日常管理由实验室主任负责,实验室主任由上级主管部门指定或聘任。
第七条实验室主任应具备相关的专业知识和管理经验,负责整个实验室的管理工作。
第八条实验室主任应当定期组织实验室工作人员进行技术培训和安全教育,提高实验人员的技能水平和安全意识。
第九条实验室主任应当制定实验室的年度工作计划,并根据实验室的实际情况及时调整和完善。
第十条实验室应当配备完善的实验设备和仪器,实验设备和仪器应当定期进行检测和维护,确保设备的正常运转。
第十一条实验室内的实验材料应当定期清点和管理,材料使用情况应当及时登记和记录。
第十二条实验室必须有清洁、整洁的工作环境,对实验室的日常卫生保洁应当定期进行检查和整改。
第三章安全管理第十三条 PCR实验室的安全管理应当符合国家安全管理相关法律法规的规定,并结合PCR实验室的实际情况,制定相关的安全管理制度。
第十四条实验室内的实验人员应当定期进行相关的安全培训,了解PCR实验室的安全操作规程和相关的应急措施。
第十五条实验室内的实验人员在进行PCR实验时应当穿戴相关的实验服、手套、口罩等个人防护用品,严格遵守实验操作规程。
第十六条实验室内的实验人员应当做好实验材料的分类和标识工作,严禁混合使用,杜绝交叉污染的发生。
第十七条实验室内的实验人员在操作实验设备和仪器时应当严格遵守操作规程,保证实验设备和仪器的正常使用和安全运行。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准,严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制,所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件,并在工作中执行这些政策和程序,真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨,严格保护客户的机密和所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案,并通过日常检测的监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性和有效性。
修订页目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (4)一、工作制度 (5)PCR实验室的设置及管理规程 (5)PCR实验室内务管理规程 (6)PCR实验室人员的配置及管理规程 (7)PCR实验室管理规程 (10)PCR实验室生物安全防护措施 (14)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (16)PCR实验室清洁消毒管理规程 (17)PCR实验室仪器设备的管理规程 (18)试剂管理规程 (20)清洁剂、消毒剂管理规程 (21)异常情况应急处理管理规程 (22)采购管理规程 (25)仓库管理制度 (28)临床标本的管理规程 (31)PCR实验室记录管理规程 (32)检验报告单发放、保密管理规程 (33)PCR实验室岗位责任制 (34)二、操作指导书 (36)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (36)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (37)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (38)洁净工作台使用操作规程 (40)洁净工作台维护、清洁操作规程 (41)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (43)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (44)高速冷冻离心机使用标准操作规程 (45)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (46)生物安全柜使用操作规程 (47)生物安全柜的维护保养操作规程 (49)加样器的使用操作规程 (50)加样器的维护保养操作规程 (51)干式恒温箱的使用操作规程 (52)干式恒温箱的维护保养操作规程 (53)紫外灯的使用操作规程 (54)紫外灯的维护保养操作规程 (55)温湿度计自行检定操作规程 (56)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (57)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (58)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (59)临床标本的保存操作规程 (61)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (62)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (64)室内质量控制标准操作程序 (66)室间质评操作规程 (69)三、引用图表 (70)实验室负责人简历 (70)实验室工作人员一览表 (72)拟开展的临床基因扩增检验项目 (75)实验室质量管理程序文件和作业指导书(SOP)目录 (76)北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (78)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成:管理性程序;仪器设备标准操作程序、维护保养程序;检测项目操作程序;相关图表;相关复印件2.现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致;3.文件管理:现有的文件由公司行政办公室负责管理;实验室主任保存全套文件一份;各工作区保存该区使用的文件,以方便工作人员随时使用。
(完整版)PCR实验室管理制度-PCR实验室检查指南合规版
1.目的:建立PCR实验室分区管理规定,保证检验结果的真实性.2.范围:适用于PCR实验室管理。
3.职责:质量部。
4. 工作流程:4.1 实验室按照功能分以下区域:4.1.1试剂准备区(体系室):为PCR体系配制区域。
4.1.2标本制备区(模板室):为模板DNA制备、扩增体系模板添加的区域。
4。
1。
3扩增区(扩增室):为PCR模板进行扩增区域。
4.1.4扩增产物分析区(产物分析室):为PCR模板进行扩增、电泳检测或扩增产物分析的区域。
本区域为PCR产物污染区。
4。
2实验室要求:4。
2.1实验室着装要求4。
2。
1.1试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区,四个区域配备有不同颜色的防静电实验服和专用鞋套。
进入实验室区域后,需更换对应区域的实验服及鞋套.4。
2。
1.2各区域工作服及鞋套不能混穿。
4。
2.1.3离开当前实验区域时,应在黄色警戒线内脱掉该区实验服和鞋套,再进入其他区域,更换相应区域的工作服和鞋套.4.2.2各实验室内试验仪器、耗材、移液器使用规则:4。
2。
2.1在各操作间配有专用仪器、耗材、移液器,绝不能混用以避免污染.4.2。
2.2每个房间都有功能标识,根据房间功能进行实验,不能混用.如试剂准备区不能用于模板DNA制备。
4。
3 日常清洁要求:4.3.1 各个实验室应配备专用的清洁设施,不得混用。
4。
3.2 实验员每月用1mol/L盐酸(50ml 12mol/L盐酸(即浓盐酸)和550ml纯化水混合)擦拭操作台、门把手及移液器、离心机等设备外表面,30分钟后用清水擦拭。
注意金属表面不能用本试剂进行擦拭,可用水代替反复擦洗。
4。
3.3每个房间实验服在相应房间洗手盆中清洁,在相应房间自然晾干。
各区域服装不能混洗,洗涤时以单件形式进行洗涤。
4。
3。
4 实验室紫外消毒要求:实验室使用频率大于1次/月,则每周用屋顶紫外灯过夜照射1次,照射时间一般在15~16小时;如实验室使用频率小于1次/月,可在使用前再进行此操作。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1.目的:建立实验室的合理设置和科学管理,防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2.适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3.负责人:4.细则:4.1流感实验室为急传所的专业实验室,从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4.2 本实验室采用实时荧光定量(定性)PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段,实验室分为三个区:试剂准备区(第一区)、标本处理区(第二区)、扩增分析区(第三区)。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4.3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。
4.4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4.5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4.6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内;进修、实习或其他科室人员因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增分析区)需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4.7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1.目的:保持良好的工作环境,以确保检测结果的可靠性,防止交叉污染,防止差错、事故及纠纷的发生。
2.适用范围:所有本实验室人员。
3.负责人:4.细则:4.1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4.2 各区的用品不得混用。
4.3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子,严格按照操作规程。
4.4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作(见相关SOP 文件)。
4.5 标本处理区只能进行临床标本的保存,核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成(见相关SOP 文件)。
pcr实验室规章制度
pcr实验室规章制度PCR技术是分子生物学中常用的实验技术之一。
PCR实验室作为一个特殊的实验室,因为实验物质的特殊性和实验流程的细致性,要求严格管控。
为了确保实验室的安全性和实验的准确性,制定实验室规章制度是非常必要的。
下面介绍PCR实验室规章制度。
1. 实验室的管理PCR实验室应该由经验丰富的实验师负责管理。
实验室的管理员应该负责规划实验室的使用和管理实验室所需的设备和材料。
实验室管理员应该制定适当的标准操作程序(SOP),并且确保实验室中的所有人员都有充分的培训,知道如何正确地操作PCR仪器。
2. 实验室环境的要求PCR实验室应该有恰当的环境来保证实验的准确性,包括温度、湿度等。
实验室应该保持整洁,且要定期进行消毒,确保实验室中没有任何污染源。
实验室中应该有足够的插座,以确保仪器和设备能够正常工作。
实验室内应该每个PCR台应该配备紫外线灯,以便于观察PCR反应结果。
3. 实验室人员的要求PCR实验室中的每个人员都应该遵守特定的卫生和安全要求。
实验室中的人员应该穿戴实验室服,并戴手套,以预防可能导致污染的任何物质。
所有人员都应该知道如何正确地丢弃实验废弃物,并且遵守洗手和消毒程序。
此外,实验室还应该实行定期的健康筛查,以确保实验室人员不会传染疾病。
4. 实验材料和试剂的要求PCR实验室中的材料和试剂应该购买于可靠的供应商,并符合国际标准,以实现结果的准确性和一致性。
所有的检测所需的试剂应该储存在恰当的位置,并且要明确标记。
所有储存情况应该记录在每个试剂的标签上。
5. 实验操作的要求所有的实验操作应该按照特定的操作程序来进行,并应该由经验丰富的实验师或培训良好的实验人员进行操作。
在实验的过程中,操作者应该戴上实验室服和手套,并且使用消毒剂消毒实验台和实验器材。
所有PCR反应都应该被记录,并且应该在反应期间进行密切观察。
反应过程中如有异常情况,应及时处理。
6. 实验室书写和打印PCR实验室中的所有文档和数据都应该存储在计算机数据库中。
pcr实验室规章制度
pcr实验室规章制度PCR 实验室规章制度一、PCR 实验室人员准入制度1、本实验室仅限经过专门培训并获得授权的人员进入。
2、进入实验室前,人员必须熟悉实验室的安全操作规程和应急预案。
3、严禁未经许可的人员擅自进入实验室,外来参观人员需经实验室负责人批准,并由专人陪同方可进入。
二、PCR 实验室人员培训制度1、所有实验室人员必须定期参加 PCR 技术及相关安全知识的培训。
2、新入职人员在独立操作前,必须经过严格的培训和考核,合格后方可上岗。
3、培训内容包括但不限于:PCR 原理、实验操作流程、质量控制、仪器设备使用、生物安全防护等。
三、PCR 实验室设备管理制度1、实验室设备应定期进行维护、保养和校准,确保其性能稳定、准确可靠。
2、建立设备档案,详细记录设备的名称、型号、购买日期、使用情况、维护保养记录等信息。
3、仪器设备的使用必须严格按照操作规程进行,严禁违规操作。
4、当设备出现故障时,应及时停止使用,并联系专业人员进行维修。
维修后需进行性能验证,合格后方可继续使用。
四、PCR 实验室试剂管理制度1、试剂的采购应选择有资质、信誉良好的供应商,并确保试剂的质量符合要求。
2、试剂应按照规定的条件进行储存,定期检查试剂的有效期和储存条件。
3、试剂的使用应遵循“先进先出”的原则,避免浪费和过期使用。
4、对新购入的试剂,应进行质量检测和验证,合格后方可投入使用。
五、PCR 实验室样品管理制度1、样品的采集、运输和保存应符合相关标准和规范,确保样品的质量和完整性。
2、样品应进行唯一性标识,记录样品的来源、编号、采集时间、检测项目等信息。
3、样品的接收和登记应由专人负责,对不符合要求的样品应及时退回。
4、实验过程中,应严格遵守样品处理的操作规程,防止交叉污染。
六、PCR 实验室质量控制制度1、建立完善的质量控制体系,包括室内质量控制和室间质量评价。
2、定期对实验过程进行质量监控,如对试剂、仪器设备、操作流程等进行检查和评估。
PCR实验室使用注意事项
PCR实验室使用注意事项
DNA加样室使用注意事项
1.进入需要更换鞋套或者拖鞋。
2.吸取含有DNA试剂的枪头需要打入加了水的垃圾盒里,或者一
次性手套里,完成加样步骤之后需要及时处理垃圾盒。
3.仪器使用之后需要登记到仪器使用记录册上,需要登记的仪器有:数字PCR仪;荧光PCR仪
4.实验操作者完成实验后要整理桌面卫生,用10%次氯酸钠溶液擦拭桌面,保持桌面整洁。
5.通风扇需要一直保持工作状态,请勿关闭。
PCR MIX配置室使用注意事项
1.门需要随开随关,防止DNA进入而产生污染。
2.不能携带含有DNA的试剂进入。
3.通风扇需要一直保持工作状态,请勿关闭。
4.实验操作者完成实验后要整理桌面卫生,保持桌面干净。
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二、PCR技术的基本原理
PCR反应体系
③ ⑤
①
④
②
二、PCR技术的基本原理
PCR反应程序
• 94~96℃ • 94℃ • 50-60℃ • 72℃ • 72℃ • 4-10℃
30’’-3’ 30’’ 30’’-1’ n’ 3-7’ 保存
预变性(使模板DNA充分变性) 变性 复性(使引物与模板充分退火) 延伸(按1’扩增1kb计算) 总的延伸(使产物延伸完整)
二、PCR技术的基本原理
PCR反应条件
• 变性温度与时间 • 退火温度与时间 • 延伸温度与时间 • 循环次数
二、PCR技术的基本原理
PCR技术特点
• 高灵敏度
PCR产物每轮循环增加一倍 30轮循环
扩增量达230个拷贝(109拷贝)
二、PCR技术的基本原理
• 高特异性
引物
引物
引物的序列及其与模板结合的特异性是决定PCR反应结果 的关键。
二、PCR技术的基本原理 逆转录PCR(RT-PCR)
RNA 模板
DNA-RNA 杂化双链
单链 DNA 双链 DNA
是以细胞内总RNA或 mRNA为材料,在逆转录酶 的作用下生成cDNA,然后 再以cDNA作为模板进行PCR 扩增,得到所需要的目的 基因片段。是将RNA逆转录 反应和PCR反应联合应用的 一种技术。
Ct值与模板初始浓度关系 模板DNA量越多,荧光达到阈值的循环数越少,即Ct值越小。
Log模板起始浓度与Ct值呈线性关系。
二、PCR技术的基本原理
二、PCR技术的基本原理 常用荧光标记方式
内掺式染料
特异性探针标记
二、PCR技术的基本原理
SYBR Green I染料法——原理
SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟 区域的具有绿色激发波长的染料。
SYBR Green I
二、PCR技术的基本原理
SYBR Green I染料法——问题点与关键点
问题点: SYBR Green I与双链DNA进行结合后散发荧光,因此如果反
应体系中有非特异性扩增或引物二聚体的产生,也将同时被检 测,从而可能导致检测结果不准确。 关键点:
二、PCR技术的基本原理
实时定量PCR(real time PCR)技术
也被称为荧光定量PCR (FQ-PCR)技术,是通过荧光 染料或荧光标记的特异性的探 针,对PCR产物进行标 记跟踪, 实时在线监控反应过程,结合 相应的软件可以对结果进行分 析,计算待测样品的初始模板 量。
二、PCR技术的基本原理 常见名词术语
• 但由于当时很难进行测序和合成引物,且 70年代Smith等使体外克隆和扩增基因成 为可能,所以,Khorana等的早期设想被 人们遗忘。
一、PCR技术的发展历程
• 1985年,Cetus公司Mullis等人发明了PCR • 最初采用E-coli DNA聚合酶,由于该酶不耐
热,导致耗时又费力,且易出错,未能推广 • 1988 年 Saiki 等 人 从 嗜 热 杆 菌 (thermus
二、PCR技术的基本原理
• 操作简便易行
①整个扩增在一个小的离心管中完成,过 程也只是简单的温度变化,耐高温TaqDNA 聚合酶的应用,避免了聚合酶的反复加入
②整个扩增反应可在2—4小时完成
二、PCR技术的基本原理
PCR为基础的相关技术
• 逆转录PCR(RT-PCR) • 实时定量PCR • 巢式PCR • 多重PCR • 定量PCR • 单细胞PCR • 原位PCR • 数字实时荧光PCR • ······
二、PCR技术的基本原理
循环阈值(Ct)
即PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时所 经历的扩增循环数。
二、PCR技术的基本原理 Ct值的重现性
Ct值的特点: 相同模板进行96次扩增,终点 处产物量不恒定; Ct值极具重现性
相同模板在同一台PCR仪上重复进行96次扩增曲线图
二、PCR技术的基本原理
扩增曲线 荧光阈值 循环阈值(Ct)
二、PCR技术的基本原理 扩增曲线
二、PCR技术的基本原理
荧光阈值及本底信号
• 高于荧光阈值的信号被认为是 真实信号
• 可手动设置:大于荧光背景值 和阴性对照的荧光最高值;进 入指数期的最初阶段
• 实际工作中要结合扩增效率、 线性回归系数等参数综合考虑
二、PCR技术的基本原理 荧光阈值的缺省设置
• 基本过程类似于DNA的天然复制
二、PCR技术的基本原理
基本反应过程
模板 引物 聚合酶
三个步骤为一个循环, 每次循环产物作为下 一轮模板进入下一轮 循环
dNTP 缓冲液
此温度下DNA聚 合酶以dNTP 为底 物催化DNA链的 延长
延伸
72˚C
变性
95˚C
使模板DNA完全变性成 单链。同时引物自身和引 物之间存在的局部双链得 以消除
aquaticus)中提出TaqDNA聚合酶,使得PCR 技术得以广泛应用 • 1993年,Mullis也因发明PCR技术获诺贝奖
二、PCR技术的基本原理
• PCR(聚合酶链式反应)概念:是利用DNA 在体外高温(95℃左右)时变性成单链, 低温退火(经常是60℃左右)时引物与 单链按碱基互补配对原则结合,再调温 度 至 DNA 聚 合 酶 最 适 反 应 温 度 ( 72℃ 左 右 ) , DNA 聚 合 酶 沿 着 磷 酸 到 五 碳 糖 (5’—3’)的方向延伸合成互补链
使引物和模板DNA 退火结合
循环
25~30 次
退火
Tm-5˚C
二、PCR技术的基本原理
循环1
Taqห้องสมุดไป่ตู้Taq
循环2
Taq Taq
Taq Taq
二、PCR技术的基本原理
循环n
PCR反应动力学
理论值 Yn=X·2n
Yn:n个循环后DNA片段终产物拷贝数 n:扩增循环次数
实际值 Yn=X·(1+E)n
E:平均扩增效率,理论值为100%, 即为1,实际约为0.85 n:扩增循环次数
PCR实验室规范操作 及日常管理
孙文鲜
目录
一、PCR技术的发展历程 二、PCR技术的基本原理 三、PCR实验室的操作 四、PCR实验室的日常管理 五、PCR实验室的质量保证 六、PCR实验室生物安全处理
一、PCR技术的发展历程
• 1971年,科学家及其同事Khorana提出: “经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA 聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可 克隆tRNA基因。”