微生物实习报告

实习报告

实习名称食品微生物检验实习系别生物与化学工程系

年级专业

学生姓名

指导老师王瑶琼、吴菲菲、黄大川

邵阳学院

2013年12月10日

一、实验时间与地点

时间： 2013年下学期第13--15周

地点：邵阳学院李子园校区生物与化学工程系微生物实验室

二、实习过程概述

11.18下午在2栋教学楼204室举行动员大会

11.18至12.19查找资料并设计实验方案。

11.20上午提交实验方案并通过了，下午再去领实验器材，清洗实验器材，烘干，包扎。

11.21 配制牛肉膏蛋白胨培养基，做无菌检查

11.22 样品中细菌的检测进行十倍稀释、接种

11.23 细菌菌落的观察及计数

11.24 配制察氏培养基，做无菌检查

11.25 样品中酵母菌的检测进行十倍稀释、接种

11.26—11.28 观察酵母菌落及计数

11.29 配制察氏培养基，做无菌检查

11.30样品中霉菌的检测进行十倍稀释、接种

12.01--12.05观察霉菌菌落及计数

12.06 配制乳糖发酵培养基，做产气实验

12.07 观察产气情况

12.08—12.10数据的处理分析，完成实习报告。

三、实习内容

（一）香干中细菌含量的测定：

Ⅰ、实验材料

（1）、实验器材及试剂

设备:电热恒温培养箱37℃±1℃、电磁炉、电子天平、PH试纸、吸管1ml、10ml 6个、烧杯（1000ml）一个、三角瓶（500ml、250ml）各一个、培养皿（直径90mm）9个、试管9个、试管架、酒精灯、研钵、剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、量筒（500ml）、玻棒、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布试剂：75%乙醇、生理盐水、1mol/L氢氧化钠溶液

（2）、牛肉膏蛋白胨培养基

配方：牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、 NaCl 5g、琼脂 15—20g、无菌水 1000ml、pH 7.4—7.6

配置步骤：

①称量

②溶化

③调pH

④分装

⑤加塞

⑥包扎

⑦灭菌

⑧倒平板

（3）、检样稀释及培养

①以无菌操作，将检样豆干25g剪碎、研磨以后，放于盛有225ml无菌水的三角瓶内，并在三角瓶中放入玻璃珠，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。

②用1ml无菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁缓慢注入含有9ml无菌水的无菌试管内，振摇试管混合均匀，做成1：100的匀液。

③另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

④根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移0.3ml稀释液于无菌培养皿内，每个稀释度作三个培养皿。同时做好空白对照组。

⑤稀释液移入培养皿后，应及时用涂布器在培养基表面将样品均匀涂布。

⑥等琼脂凝固后，翻转培养皿，置（36±1）℃恒温箱内培养24h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g样品所含菌落总数。

Ⅱ、菌落计算方法

（1）菌落计数方法

做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

（2）菌落计数的报告

①平板菌落数的选择

选取菌落数在30～100之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用三个平板，应采用三个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。

②稀释度的选择

应选择平均菌落数在30～100之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度平均菌落数均大于100，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均不在30～100之间，其中一部分大于100或小于30时，则以最接近30或100的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

（3）

（4）、下表为实验时记录的豆干中细菌的含量数据：

样品中细菌的含量

稀释度 10-4 10-5 10-6

平板一 196 127 38

平板二 181 135 45

平板三 203 114 47

平均菌数（个/g）

注：每个平板加入0.3ml的稀释液

其中，细菌菌落全为白色。

（二）豆干中酵母菌含量检测

Ⅰ、实验材料

（1）、实验器材及试剂

设备：恒温培养箱、电子天平、锥形瓶容量（ 500 mL、250 mL ）各一个、无菌

吸管1 mL、10 mL 6个、无菌培养皿9个、无菌试管20个、试管架、酒精灯、研钵、

剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、牛皮纸袋、塑料

试剂：蔗糖3g、NaN03 0.3g、 K2HP04 0.1g、KCl 0.05g、MgSO4·7H2O 0.05 g、

FeS04 0.001 g、琼脂1.5-2g、无菌水1000ml

（2）察氏培养基

配方：蔗糖30g、NaN03 3g、 K2HP04 0.1g、KCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5 g、FeS04

0.01 g、琼脂15-20g、无菌水1000ml、自然pH

配制步骤：

①称量及溶化量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO3 、

K2HP04 、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1％

的FeS04溶液。

②定容待药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。

③加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。

④分装、加塞、包扎。

⑤高压蒸汽灭菌 0.103 MPa，121°C灭菌20 min。

⑥倒平板

Ⅱ、操作步骤

（1）、样品的稀释

①样品预处理：以无菌操作，将检样香干25g剪碎、研磨以后，放于盛有225ml

无菌水的三角瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。