网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数
网织红细胞计数网织红细胞是未完全成熟的红细胞。
红细胞由骨髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟的红细胞。
将其分为五型：花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。
●仪器型号：Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置●检测原理：一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。
然后将该样品送入流动的池中。
一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。
前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。
光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。
⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。
通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。
与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。
散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。
对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。
⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。
随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。
通过测●试剂：⑴CELLPACK（EPK）⑵RET SEARCHⅡ（RED）●标本吸入量：⑴手工模式130lμ⑵自动进样器模式200lμ●静脉血采血方法：抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24小时室温保存。
●操作步骤：⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。
⑵要在允许空白值内：WBC RBC HGB PLT0.3⨯109/L 0.02⨯1012/L 1g/L 10⨯109/L⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量：手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行数字键输入标本的编号，按吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。
一、网织红细胞(Ret)计数
【临床意义】
（1） 评价骨髓造血功能： ① RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺
盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血 可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑ ；缺 铁和巨贫RET正常或轻度↑ 。
② RET↓表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再
血红蛋白测定
血红蛋白组成 珠蛋白肽链（4条）,每条折叠的珠蛋白肽链结合1个 亚铁血红素，分子量64458（不带O2）。 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素
原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+
血 红 蛋 白
3 1
A
控制Ret计数CV=10% (ICSH推荐)需镜检的RBC数
Ret（%） １～２ ３～５ ６～10 11～25 窥盘小方格内镜检RBC数 1000 500 200 100 相当镜检RBC总数 9000 4500 1800 900
【正常参考值】
方 法 年龄组 相对值（%）
显微镜 计数
成人、儿童 新生儿
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网织红细胞计数法的流程
网织红细胞计数法的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序1.检验目的通过对网织红细胞计数，判断机体造血功能的旺盛程度。
2.检验原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色网状结构。
3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。
4.试剂新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液。
5.操作步骤5.1在小试管中加入染色液2滴；再加入静脉血（或末梢血）2滴，混匀后放置37℃恒温水箱中。
5.2 温育15分钟后取1滴混悬液制成涂片。
5.3在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。
6.结果计算直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/10007.生物学参考区间网织红细胞比例：成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童:0.005~0.015。
8.实验室解释8.1增加表示骨髓造血功能旺盛。
见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B12、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗以及骨髓移植和EPO治疗后骨髓造血功能恢复的指标。
8.2减少常见于骨髓增生受抑抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍。
9.变异的潜在来源标本应在4小时内进行处理。
置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。
新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用瑞士-吉姆萨染液复染后，可使Ret计数结果减少。
10.参考文献10.1尚红、王毓三、申子瑜《全国临床检验操作程序》，第四版，人民卫生出版社。
2018年(三)网织红细胞计数-2019年医学文档资料
目前，FCM检测网织红细胞主要用于 1）预测骨髓移植的效果； 2）解释各种红系增长低下性贫血的 发病原因; 3）评价某些新的重组生物制剂的治 疗效果。
三、操作步骤
1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝 酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用， 取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的 染料上，用推片角混匀后，将两玻片 盖合（玻片法）；试管法取染液2滴入 试管，加血2滴混匀，封闭好，待15 分钟以上时间， 2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的 一端，推制成薄而均匀的血膜，
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和 MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、 化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导 临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。
网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HCT（男 0.45，女0.40） 临床应用： ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；
八、思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数 2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红 细胞计数相对值为35%，如何报告网织 红细胞检测结果？
外周血网织红细胞计数（百分数和绝对 值）是一反映骨髓红系增生活性的常用 指标。许多学者先后提出应用FCM和不 同的RNA特异性荧光染料自动计数网织 红细胞的方法，如派若宁Y、AO、溴化 乙啶、thiazole orange等。 目前最普遍应用的是 thiazoie orange 染色法，这种特异性RNA 的激 发波（488nm）测量的特点，与人工计
Miller窥盘
将Miller窥盘放在显微镜目镜 中,通过窥盘中大小方格间的9 比1比例关系计算RBC数和Ret 数。
网织红细胞
Miller窥盘结构 示意图
ü计算
2．玻片法
ü 加染液：于载玻片的一端滴加10g/L煌焦油蓝乙醇溶液1 滴，自然干燥后备用。
ü 加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角将血滴与 染料混匀，用另一载玻片盖在此载玻片上，使两玻片粘 合。
ü 制备涂片：5～10min后，移开上层玻片，取l小滴推制 成血涂片。
成人、儿童：0. 5℅～1.5℅。 新生儿：2.0℅～6.0℅。 成人绝对值：（24～84）×109/L。
（六）临床意义
网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要 指标。 1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 2．评价疗效 3．放疗和化疗的监测
常见网织红细胞参数及评价
小
网织红细胞活体染料的评价
2. 正确辨认网织红细胞 外周血液网织红细胞 主要为Ⅳ型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须 远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。
红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别
3．网织红细胞计数方法
（1）Miller窥盘法：ICSH及我国卫生部临床检
验中心推荐使用Miller窥盘法（见下图）进行网
五、网织红细胞计数
网织红细胞（Ret，RET）是 介于晚幼红细胞和成熟红细胞之 间的过渡细胞，略大于成熟红细 胞，其胞质中残存的嗜碱性物质 RNA经碱性染料活体染色后，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状 沉淀物。
ICSH将网织红细胞分为4型。
网织红细胞
网织红细胞分形及特征
（一）检测原理
1．普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与 网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的 负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或 网状结构。
2．血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA 结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占 成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含 量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序1 方法试管染色法。
2 原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构。
网织颗粒越多，表示红细胞越未成熟。
3 试剂网织红细胞染色液：3.1品牌：珠海贝索生物技术有限公司（BASO diagnostic, Inc）3.2包装规格：2瓶×100ml3.3主要成份：新亚甲蓝3.4储存条件：室温（15℃～30℃），相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和痛风良好的室内保存。
3.5使用期限：2年（开瓶后效期为6个月）。
3.6注意事项：避免高、低温环境及阳光直射。
4 实验器材显微镜、滴管、载玻片、推片、香柏油、擦镜纸、乳胶手套、试管架、移液器等。
5 标本要求5.1标本必须为末梢血或EDTA-K2抗凝的静脉血。
静脉采血后立即与抗凝剂混匀，放置室温立即送检。
5.2 标本在室温下最多保留4小时。
不能在4小时内检测的标本，放置于冷藏冰箱（2℃~8℃）中保存，8小时内标本有效，使用前从冰箱中取出回复室温后检测。
6 操作步骤6.1于0.5ml 试管内加入20μl网织红细胞染色液。
6.2取血液20μl，加入试管内，混匀，盖紧盖子，并标记相应标本号。
6.3静置20分钟或更久。
6.4推成薄片2张，待干。
6.5在油镜下选择红细胞分布均匀，染色较好部位，每张片子检查1000个红细胞中网织红细胞数，算出百分率，以均值报告。
7 计算网织红细胞数（%）= 1000个红细胞中网织红细胞的数目×1001000如：玻片1：油镜下计数1000个红细胞时见10个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数1（%）=10×100=1.0 % 1000玻片2：油镜下计数1000个红细胞时见12个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数2（%）=12×100=1.2 % 1000最终，网织红细胞数（%）= 1.0% + 1.2%×100=1.0 % 28 参考范围0.5% -1.5%9 临床意义网织红细胞的多少可反映骨髓造血功能的情况。
(三)网织红细胞计数
3
A
四、计算
ler窥盘法：网织红细胞（Retic） 百分率(%)= （大方格内Retic总数） /（小方格内RBC总数×9）×100%
2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百 分率(%)= 多个视野内Retic总数/多 个视野内RBC总数×100%
五、注意事项
1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥 后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动， 使染料和血液混合，防止凝固。
网织红细胞
计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、 载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小 孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
• RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常
人HCT（男0.45，女0.40）
• 临床应用： • ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；
八、思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数 2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红细 胞计数相对值为35%，如何报告网织红 细胞检测结果？
人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数
和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMI）。 RMI是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织 红细胞内RNA含量成正比，RMI可成功地用于评价骨髓 移植的效果。
谢 谢！
网织红细胞计数操作规程
1.目的：规范网织红细胞计数标准操作，保证实验数据的准确性。
2.原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残存物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状和线状及网状结构物。
网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。
3.材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。
4.操作规程：4.1染色液配制：煌焦油蓝0.4g、3.5%枸橼酸钠20ml,研磨溶解后加生理盐水至100ml，过滤备用，室温可保存6个月。
4.2血膜片制备：4.2.1染色：取试管一支，用毛细管或枪头于试管中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。
4.2.2制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。
4.2.3观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。
4.2.4计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。
10计算公式：百分率＝------------------------------1000个红细胞中网织红细胞的数量5.注意事项：5.1载物片用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用；5.2血膜片制备需要反复练习推片，熟练推制血膜片的技巧；5.3血膜片的厚薄要适中，血膜片过厚过薄均无法进行观察；5.4室温低时血液染色时间要适当延长，其细胞着色更充分；5.5血膜片需在3天内检查计数，褪色后其网状结构不清晰。
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序
一.目的：规范网织红细胞计数标准操作
二.适用范围：适用于镜检法网织红细胞计数
三.支持性文件：全国临床检验操作规程第三版
四.原理：煌焦油蓝染色法。
五.仪器：OLYMPUS CX21光学显微镜
六.试剂煌焦油蓝液
七.样本要求：新鲜全血。
八.操作步骤：
1．取小试管一支，滴加40ul网织红细胞染色液。
2．加入末梢血40ul于上述试管中，混匀。
3．静置15～20min后，取用l滴制成薄片。
4．油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
5.计算网织红细胞百分率=所数网织红细胞数*100%/1000
九.参考范围：
成人：0.005-0.015(0.5%-1.5%)
新生儿:0.03-0.06(3%-6%)
十.注意事项：
1．最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。
2．为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。
3．试剂应定期重配，以免变质沉淀。
4．因操作误差大，不宜用玻片直接染色法。
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网织红细胞计数标准操作程序
一.目的：规范网织红细胞计数标准操作
二.适用范围：适用于镜检法网织红细胞计数
三.支持性文件：全国临床检验操作规程第三版
四.原理：煌焦油蓝染色法。
五.仪器：OLYMPUS CX21光学显微镜
六.试剂煌焦油蓝液
七.样本要求：新鲜全血。
八.操作步骤：
1．取小试管一支，滴加40ul网织红细胞染色液。
2．加入末梢血40ul于上述试管中，混匀。
3．静置15～20min后，取用l滴制成薄片。
4．油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
5.计算网织红细胞百分率=所数网织红细胞数*100%/1000
九.参考范围：
成人：0.005-0.015(0.5%-1.5%)
新生儿:0.03-0.06(3%-6%)
十.注意事项：
1．最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。
2．为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。
3．试剂应定期重配，以免变质沉淀。
4．因操作误差大，不宜用玻片直接染色法。