蝴蝶兰组织培养技术研究
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种广受欢迎的花卉，其美丽的花朵和特殊的香气吸引了许多人的喜爱。
在现代花卉产业中，蝴蝶兰的组织培养技术已经得到了广泛的应用，成为了繁育和生产优质蝴蝶兰的重要手段。
本文将探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术，包括材料准备、消毒与无菌技术、培养基配方、激素处理、光照和温度控制等方面，旨在为蝴蝶兰组织培养提供更多的经验和技术指导。
一、材料准备蝴蝶兰组织培养的材料准备包括培养基、植物组织和器皿等。
培养基的配制是组织培养的关键，通常包括基本培养基、植物生长调节剂、维生素和其他添加剂。
基本培养基可以选择MS培养基、WPM培养基等，其中MS培养基是最为常用的一种。
植物生长调节剂一般包括生长素、细胞分裂素等，可以促进植物幼芽的生长和分化。
在材料准备阶段，需要严格按照配方比例进行称量和混合，确保培养基的质量和稳定性。
植物组织的准备是指从蝴蝶兰植株中获取适宜的组织，并进行无菌处理。
通常可以选择茎尖、叶片或花序等组织作为培养材料，要求组织样品新鲜健康、无病虫害，并在无菌条件下进行操作。
器皿的准备包括试管、培养瓶、培养皿等，需要进行高压蒸汽消毒和紫外线照射，以确保器皿内部的无菌环境。
二、消毒与无菌技术消毒与无菌技术是蝴蝶兰组织培养过程中至关重要的一环。
在培养基、植物组织和器皿的准备过程中，必须保持严格的无菌操作，以避免外源微生物的污染。
常用的消毒方法包括高压蒸汽消毒、紫外线照射和化学消毒剂处理等。
高压蒸汽消毒是最常用的无菌处理方法，通过高温高压的蒸汽可以有效杀灭器皿表面的微生物。
紫外线照射则是利用紫外线的杀菌作用来对器皿和工作台面进行消毒处理。
化学消毒剂主要包括过氧化氢、乙醇、漂白粉等，它们可以在无菌条件下对实验器皿和操作场所进行处理，消灭潜在的细菌和真菌。
还需要配备无菌工作台、无菌手套、口罩和无菌操作衣等个人防护装备，确保操作人员和操作环境的无菌状态。
三、培养基配方培养基中还需要添加维生素、氨基酸、糖类和微量元素等，以提供植物生长和代谢所需的营养物质。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
蝴蝶兰组织培养研究
蝴蝶兰组织培养研究本文以蝴蝶兰满天红品种为研究材料,以花梗和叶片为外植体,通过对消毒方法、培养基种类、激素浓度、褐化现象等的研究,建立了一套通过蝴蝶兰组织培养快速繁殖的有效途径。
主要结论如下：(1)蝴蝶兰花梗灭菌的最佳处理方法为用0.1%升汞消毒13分钟或15分钟,成功率达到85%以上；叶片最佳消毒处理的方法为：预处理后0.1%升汞灭菌13分钟,灭菌成功率达97.7%。
(2)采用正交试验设计,结果表明最适宜蝴蝶兰花梗诱导的培养基配方为MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA(3.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+PH(5.6)；叶片诱导的最佳组合为：MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA (5.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+pH(5.0)。
(3)植物激素对蝴蝶兰类原球茎的实验研究表明,诱导蝴蝶兰原球茎的最佳激素组合为：6-BA(3.0mg·L-1)、NAA(0.5mg·L-1)和pH=5.4或6-BA(3.0mg·L-1)、 NAA(1.0mg·L-1)和pH=5.6.(4)植物激素组合对蝴蝶兰生根率的影响较小,差异性不显著(P>0.05)但不同激素组合对促进蝴蝶兰生根数及根长影响较大,更有利于生根,经方差分析,差异性均达到显著性水平(P<0.05)。
适宜蝴蝶兰根培养的培养基最佳配方为：1/2MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0-1.5 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7.5g·L-1,pH=5.4-5.6。
(5)本实验采用的蝴蝶兰满天红品种,发现在蝴蝶兰花梗芽诱导的较优基本培养基为：MS基本培养基,诱导率为77.8%,高于1/2MS基本培养基(77.3%)；叶片诱导的培养基为MS和1/2MS,考虑到苗的后续生长状况以及MS培养基的褐化现象较严重,而且1/2MS培养基更能节约成本,故选择1/2MS培养基为叶片萌发的培养基。
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰，兰科蝴蝶兰属植物，属热带、亚热带气生兰。
原产于菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚和我国台湾等地，其株型美观、花形奇特似蝶、枝叶繁茂，花朵硕大、花色鲜艳、花期持久，观赏价值极高，在热带兰中素有“兰花皇后”的美誉，有较高的观赏和经济价值，深受国内外花卉市场的欢迎。
但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖。
其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。
而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。
蝴蝶兰快速繁殖的途径主要是利用无菌播种和利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分化丛生芽。
蝴蝶兰组培快繁的影响因素1.无菌播种途径蝴蝶兰种子的胚发育不完全，不易发芽，用人工合成的培养基促使种子无菌萌发，可以得到较高发芽率。
种子培养过程中使用的培养基有KC、MS、花宝等，其中改良KC 培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基。
对不同无菌播种方法包括撒播法、涂布法、稀释法进行了比较，结果表明稀释法较好，种子分布均匀，利用率高，明显减少转接次数，且原球茎发育健壮整齐【1】。
果龄采收期也影响着无菌播种效果。
也可采用无菌播种途径快繁蝴蝶兰，能够在短期内获得大量幼小植株，且技术简单、成本较低，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗的重要途径【2】。
但由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系，因此后代变异率高，除了少数自花系列较稳定以外，难以形成品质均一的大规模栽培品种。
因此，在采用无菌播种进行蝴蝶兰种苗生产时，要对父母本进行严格的选择，以确保后代性状的尽可能一致。
2.类原球茎途径原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象，通过离体器官诱导原球茎快繁法获得试管苗基本一致，增殖系数较高，变异性较少，适合大规模繁殖，是兰花组培快繁的一个主要形式。
蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究
Ａｂ ｔａ ｔ Ｆｏ ｒ ｅｕ ｃｅ ｆ ｈｌｅ ｏ ｓ ｍａ ｉｓ Ｌ） ．．ｌｍｅｗｅｅｃ ｌ ｒｄｔ ｉｄ ｃ ｅ ｌ ｇ ｎｍｅ ｉｍ ， ｅ ｏ ｔｗｅｅｃ ｌ ｒｄａ ｓｒｃ ｌ ｄ ｎｌｓ Ｐ ａａｎ ｐｉ ａ ｂｌ （ ．ＣＬＢｕ ｒ ｕｔ ｅ ｕ ｅｓ ｄｉ ｓｏ ｄｕ ｔ ｎｓ ｏｓ ｒ ｕｔ ｅ ｓ ｗｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｕ ｏｎ ｅ ｎ ｈ ｈ ｕ
林 业 科学
现 代农 业科技
２１ 年第 ２ ０１ ３期
蝴蝶兰组织培 养与快速繁殖技术研 究
张雅 晨 姜亚博 周烽明 顾 季春 顾福 根
（ 外ｆ 学 医 学 部 ． 苏苏 帅『２ ５ ２ ） 苏 大 江 １ １３
摘 要 以残败 花梗 为 外植 体进 行组 织培 养 ， 立 了蝴蝶 兰的 无 茵繁 殖体 系， 究 了培 养基 中不 同种 类植 物 生 长调 节物 质 及其 浓 度 比 建 研 例对休 眠芽 的萌发 、 生芽 的诱 导 以及 试管 苗生根 的影 响 ， 筛选 出 了最佳培 养基 组成 ； 究 了活性 炭 、Ｖ 、 研 Ｐ Ｐ 温度 、 暗培 养对培 养基 褐化 的影 响 。 果表 明 ： １ Ｍ ＋ － Ａ３ ｍ ／＋ Ａ ．ｍ ／＋Ｏ 结 在 ／ ｓ ６ Ｂ ． ｇ Ｎ Ａ０ ｇ ｌ％香蕉汁＋％蔗 糖＋ 琼 脂的培养基 上休眠 芽的诱导 效果 最好 ， 导率 可迭 ８． ： ２ ０ Ｌ ２ Ｌ ３ ０ 诱 ７５ ％ 在 １ ＭＳ ６Ｂ ０ ｇ ＋ Ａ ．ｍ ／＋ ０ ， ＋ 一 Ａ６ ｍ ／ Ｎ Ａ０ ｇ １％香 蕉 汁＋ ％蔗 糖＋ ． ２ ． Ｌ １ Ｌ ３ ０ ％琼脂 的培 养基 上丛 生芽 的诱导 效果 最好 ， ６ 增殖 系数 可达 ３１ ： １ Ｍ ＋ ． 在 ， Ｓ ５ ２ Ｎ Ａ０５ ｇ ＋ Ａ ． ｍ ／ 活性 炭 ｌ ０ ｇ ＋ ％蔗糖 ＋ ． Ｌ ０ｍ ／ ３ ０ Ｌ ０ ％琼 脂的 培养 基 上生根 效 果最好 ， ６ 生根 率 可达 ９ ％ ， 均每 株生 根 ３１ 条 左 右 ． ５ 平 ． １ 炼苗 后移 植
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种重要的观赏兰花，由于其美丽的花朵和长时间的观赏期，受到了广大植物爱好者的热爱。
蝴蝶兰的培养对于保证其优质的品种和良好的观赏效果至关重要。
为了探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术，本文将从组织培养的基本原理、组织培养的步骤和关键技术三个方面进行讨论。
了解蝴蝶兰组织培养的基本原理对于掌握关键技术非常重要。
组织培养是指将植物体的一部分组织或细胞分离出来，在无菌条件下进行培养和生长。
组织培养的基本原理是通过培养基提供合适的营养条件，使组织或细胞继续生长，从而实现组织增殖、植株再生或种间杂交等目标。
蝴蝶兰的组织培养主要是通过离体培养技术，即将花茎的组织或顶端的芽分离出来单独培养。
蝴蝶兰组织培养的步骤包括材料准备、组织分离、组织培养和生根移栽等。
要选择健康的母株作为材料，并在采集组织前进行杀菌处理，确保无菌条件。
然后，分离出芽和花茎，并通过酶解法或机械分离法得到单个的芽或花茎组织。
接下来，将组织放置在适宜的培养基上进行培养，培养基中应含有适宜的植物激素和营养物质。
在生根培养基上进行生根并移栽到土壤中继续生长。
蝴蝶兰组织培养的关键技术包括材料选择、无菌技术、培养基的配方和光照控制等。
材料的选择非常重要，应选择健康的母株作为材料，并确保无病虫害。
无菌技术是蝴蝶兰组织培养成功的基础，需要在无菌操作台上进行并进行严格的无菌操作，避免外部微生物对培养物的污染。
培养基的配方也是关键，需要根据不同的培养目标调整植物激素和营养物质的浓度，以促进组织增殖或植株再生。
适当的光照控制也是蝴蝶兰组织培养的关键，适宜的光照可以促进植物的绿色素合成和光合作用，有利于组织的生长和发育。
蝴蝶兰组织培养是一项繁琐的工作，需要熟练的无菌技术和合理的培养基配方。
只有掌握了基本原理和关键技术，才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
通过不断的探索和实践，相信蝴蝶兰组织培养技术会得到进一步的发展和完善。
蝴蝶兰组织培养技术研究进展
蝴蝶兰组织培养技术研究进展摘要：蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，本文综述了蝴蝶兰的原球茎诱导增殖培养，并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。
关键词：蝴蝶兰;原球茎;组织培养蝴蝶兰是兰科蝶属植物，花形奇特，色彩艳丽，花期持久，一般2～3个月，最长可达半年，适于家庭摆设或作切花用于花篮、花束等。
但蝴蝶兰很难用传统的方式进行无性繁殖。
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。
原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象。
原球茎的发生途径可以由花梗节段、幼叶、根段、茎尖等部位直接产生，也可以通过诱导愈伤组织，再从愈伤组织诱导原球茎产生。
不同外植体原球茎的诱导，其特点及培养基的选择也不同。
本文就蝴蝶兰原球茎诱导增殖培养的研究现状进行综述。
1 外植体的选择外植体的来源是决定外植体能否培养成功的重要因素，不同品种、不同器官之间的分化程度和能力存在差别，因此，在进行组织培养时必须选择合适的外植体进行无菌操作才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
常用于蝴蝶兰组织培养的外植体有茎尖、根、叶片和花梗芽。
1.1 茎尖茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体，较容易诱导培养，是成功率较高的部位。
利用蝴蝶兰的茎尖诱导出类原球茎，再由类原球茎分化成苗。
这种培养的突出问题在于蝴蝶兰为单茎性植株，剥取茎尖就损坏了母株本身，而蝴蝶兰茎极短，操作困难，易污染。
但茎尖培养的优点是比较容易获取类原球茎或愈伤组织，因为茎尖分生组织细胞的生理年龄小，易于脱分化和分化，同时，操作细致还能达到脱毒效果，获得无病毒苗。
1.2 根尖蝴蝶兰根为外植体诱导原球茎的诱导率相对较低。
以蝴蝶兰新发生的根尖段切成0.5～0.8 cm接种到培养基上，遮光处理4～5 d，14d后可形成愈伤组织。
将蝴蝶兰根平放在培养基上经过约50 d的培养后，根尖顶端可长出原球茎，其诱导率在75％左右，而根尖分生区以外的根段上却诱导不出原球茎。
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨首先是无菌培养技术。
无菌培养是蝴蝶兰组织培养的基础步骤，能够有效控制外界的微生物对植物的污染。
在无菌环境中进行组织培养必须具备一定的操作技巧和设备。
在培养基制备过程中，需要对培养基进行高压蒸汽消毒或滤过过滤，以确保培养基的无菌性。
在组织培养过程中还需采取一系列无菌操作，如组织的消毒处理、转移时避免接触空气等。
其次是组织愈伤与再生技术。
组织愈伤是指植物组织在应激或外界刺激作用下出现非正常的增殖现象。
对于蝴蝶兰来说，组织愈伤与再生是进行组织培养的关键步骤。
在组织愈伤培养中，可以通过调节培养基中的激素类型与浓度，促使愈伤组织的形成。
而后续的再生过程则需要恰当的培养基配方和培养条件来促进愈伤组织进一步分化为叶片、茎或芽等。
激素配方也是蝴蝶兰组织培养中的一个重要环节。
激素是促使组织发生增殖与分化的关键因子，合理配方的激素能够提高培养效果。
在蝴蝶兰组织培养中，通常会使用生长素（如NAA、IAA等）和细胞分裂素（如BA、KT等）来促进愈伤组织的生长和分化。
但需要注意的是，过量使用激素会导致愈伤组织过度生长、变异等问题，因此需要根据实际情况进行激素配方，以达到最佳效果。
最后是质壁分离技术。
质壁分离技术是蝴蝶兰组织培养中分离不同种类细胞的重要手段。
通过质壁分离可以获得纯种植物的组织或细胞，进行遗传改良和基因工程研究。
在蝴蝶兰的质壁分离过程中，需要先进行组织消毒处理，然后通过特定的酶解剂或物理方法分离细胞的质壁。
质壁分离技术的成功与否直接影响到培养后续的成活率和生长发育情况。
蝴蝶兰组织培养的关键技术包括无菌培养、组织愈伤与再生、激素配方以及质壁分离等。
这些关键技术的掌握对于蝴蝶兰的高效培养和研究具有重要意义。
未来的研究需要进一步深入探讨和改进这些技术，以促进蝴蝶兰组织培养技术的发展与应用。
蝴蝶兰组培快繁技术研究
Ｌ 上培养 ｌ ５ ｄ 后产 生幼 芽； 丛 生芽增殖的最佳培 养基为 Ｍ Ｓ ＋ Ｂ Ａ ５ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ／ Ｌ ， 增 殖率为 ２ ． ０ ７ ％； 生根诱 导最佳
培养基 为 １ ／ ２ ＭＳ ＋ Ｎ Ａ Ａ１ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｉ Ｂ Ａｌ ｍ ｇ ／ Ｌ ， 生根率可达 １ ０ ０ ％。
然诱导率稍低 ， 但大 大降低 了污染率 。
大量研 究表 明 ， 在蝴 蝶兰进行组 织培养过 程 中， 选取 的
外植 体不 同 ， 原球茎 的诱 导率也 有很 大差异 ， 其 中幼叶 、 茎 根
尖进行茎尖培养 ， 可得到大量 的原球茎状体 。由于茎 尖作外
植体诱 导原球茎诱 导率高 ， 但损 伤母株 ， 而且还 会有不 同程 度 的污染率 ， 故利用 腋芽萌发 的不定芽 的幼叶为外植 体 ， 虽
台湾和泰 国 、 菲律宾 、 马来 西亚 、 印度尼西 亚等地都 有分布 ，
其 中以台湾 出产最 多 ， 因花形似 蝶而得名 。其株 型美观 、 枝 叶繁茂 ， 花 朵硕 大 、 花色鲜 艳 ， 而且 花期 特别长 ， 一 般为 ２ ～ ３ 个月 ， 最长可达半 年 ， 适 于家庭摆设 或作切花用于花篮 、 花束 等， 在热 带兰 中素有 “ 兰花皇后 ” 的美 誉 ， 有较 高的观赏和 经 济价 值 ， 深受 国内外花卉 市场的欢迎 。但是 ， 由于蝴蝶兰 是 单茎 性气 生兰 ， 植 株很少 发育侧枝 ， 很难 采用常 规分株方 式
安徽农学通报 ， Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ａｇ ｒ ｉ ． Ｓ ｃ ｉ ． Ｂ ｕ ｌ １ ． ２ ０ １ ３ ， １ ９ （ １ ２ ）
蝴蝶 兰组培快 繁技术 研究
许 忠秋
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰作为国内外都有很高价值的花卉，其优异的品质和高雅的花姿得到了众多花卉爱好者的青睐。
但蝴蝶兰的生长发育周期长、繁殖率低、易受环境影响等问题，严重制约了其产业化发展。
随着现代生物技术的不断发展，蝴蝶兰的组织培养技术逐渐成为越来越多国内外学者的研究热点，也成为推动蝴蝶兰产业化发展的关键技术之一。
蝴蝶兰的组织培养包括离体培养、组织培养、植株再生等过程，其成功与否一方面取决于外界环境的调节，另一方面取决于培养基、生长调节物、愈伤组织的筛选等多方面因素。
因此，本文将从以下几个方面来探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术。
一、离体培养关键技术离体培养是蝴蝶兰组织培养的前期环节，也是非常关键的环节。
其目的是将完整的干净的蝴蝶兰带根茎或叶片切分成适宜的组织，然后在无菌环境下培养。
蝴蝶兰离体培养的主要技术包括杀菌、切割技术和营养培养基的配置等方面。
杀菌是离体培养的前提，确保无菌状态对保证离体培养的成功非常重要。
因为蝴蝶兰生长的环境多数为阳光充足的阳台和露天，这就存在着大量的细菌和真菌。
在离体培养前必须进行培养器皿、器械、培养基、试管内表面和蝴蝶兰材料的表面进行杀菌，并且还必须随时维持无菌的环境。
切割技术是离体培养中的一项重要技术，通过采取正确的方法切割出可用的带根茎或叶片，不仅保证了切割的成功率，更重要的是为后续愈伤组织的诱导、分化和增殖打下了良好的基础。
营养培养基的配制也是离体培养中的关键环节，它直接关系到蝴蝶兰的生长和发育。
配制营养培养基要根据具体的物种选用不同的培养基，还需要配合不同的生长调节物以控制生长和发育。
在培养基配制的过程中，必须注意选择高质量的物质，控制配比及PH值等因素，尽可能地模拟自然环境，为组织培养提供更为优质的基质。
二、愈伤组织的诱导和分化技术愈伤组织是组织培养中繁殖途径中的主要过渡阶段，其形成与后续植株再生及生长发育息息相关。
所以，在组织培养过程中愈伤组织的诱导和分化成为非常重要的关键技术。
蝴蝶兰的组织培养研究
第２０卷第３期生物学杂志Ｖ０１．２０Ｈｏ．３：２２：芏！星巴旦坚坐！竺呈磐：翌坚．．！，』望垒；ｉ；一文章编号：１００８—９６３２（２００３）０３一争ｉｉ一吲羹霆羹嚣萋冀雾蓁羹雾爹錾；墓囊薹；≯耋鏊｜耋冀囊薹蠢嚣薹妻差：棼鞋］ｎｌ≤鞲｝ｉ蠹备；妻妻蕈薹攀墓妻冀蒋耗嗣塞誊蒌毒ｉ玎榭Ｈ垂｝塾辜叫誊ｊ兰妻毫嚣鳟蚕羹霎喜蝎誊莲薹雾：霎ｊ￡擎垂ｌ。
耋Ｈ囊的蠡窜ｇ霉燕耋斥，不仅培养了学生学习植物形态解剖学的兴趣，而且全面提高了学生读片识图能力、动手能力、分析问题和解决问题能力，促进了教学质量的全面提高（表１）。
表ｌ应用电视一丑徽成像系统前后成绩对比１９昕年２Ｄｏｌ嬲粼勰鬻蝴粼勰裂”・３７０７∞２１３４８０５８】９９３９３５由表ｌ可以看出，在期末考试中结构模式图的得分率由１９９７年的６９．２％上升到２００１年的９３．９％，理论部分的得分率由７０．７％上升到８１．９％，课程总成绩由均分的７０．３分上升到８０．５分，不及格率由原来的１３．４％下降到３．５％。
总之，将电视一显微成像系统单独或与其它仪器组合后应用于实际教学，既可以丰富植物形态解剖学实验教学内容，同时也创造了生动、活泼的课堂气氛，明显地提高了实验教学效果。
参考文献：［１］张彪，淮虎银．崔月花，等．植物彤态解剖学实验课程改革［Ｊ］，实验宣研究与探索，２００２，２ｌ（３）：４３～４５．［２］张彪．金银根，淮虎捧．植物形态解剖学实瞳［Ｍ］，东南大学出版社．２００１．［３］张彪，宋晓森，淮虎银，等．植物形态解训学试验考试的改革［Ｊ］．生物学杂志，２００２，１９（４），４７—４８．［４］朱值义，柬＊武，何晓燕，彩色电视机连续变倍体视显微键在植物学实验教学中的应用［Ｊ］，实验室研究与探索，１９９８，１７（１）；２４—２６．Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉ彻ｏｆｖｊｄｅｏ－ｍｊｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓｙｓｔ咖ｉｎｐｌａｎｔａｎａｔ伽呵ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｔｅａｃｈｉｎｇＺＨＡＮＧＢｉａｏ１喁ｒＡＮＧＡｉ—ＱｉｎＷＡＮＧＨｏｒ培一ＨｌｅｉＤＵＫｕｎ（ｃ０ＨｅｇｅｏｆＢｊｏｌ０盯Ｓｃｊ∞ｃｅＢ１１ｄＢｉｏｔｅ曲ｎｏｌｏ斟，Ｙａ“ｇｄｌｏＬｌＵ正ｖｅ巧ｉ哆，Ｙａｎ酣删，２２５００９，Ｑｄ衄）Ａｋ由氍ｔ：Ｔｈｅａｐｐｕｃａｔｉｏｎ０ｆｖｉｄｅｏ－诚ｃ砌０ｌ罐乒ａｐｈｙｇｙｓｔ咖ｉ“ｐｌａｎｔａｎａｂ∞１ｙ唧ｅｄｒｎ朗ｔａＩｔｅａｄｌｉｌ堰ｈ蚰ｂｅｅｒｌｉ１１删ｕｃｅｄＴｈｒｏＬｌ曲叫。
蝴蝶兰组织培养技术
蝴蝶兰组织培养技术蝴蝶兰，又称为薄荷兰、曼陀罗兰，是兰科植物中比较常见的一种。
蝴蝶兰的外观美丽、姿态优雅，深受人们的喜爱，因此也是珍贵的观赏花卉。
在蝴蝶兰的种植过程中，组织培养技术可以大大提高其生产效益。
本文就蝴蝶兰组织培养技术进行详细介绍。
一、基本概念1. 组织培养组织培养是指将母体植物的组织细胞分离出来，于无菌条件下经过一定的处理，使其继续生长和增殖的技术。
这种技术可以大大提高母体植物繁殖的效率，同时也可以利用组织培养技术进行新品种的选育和研究。
2. 蝴蝶兰蝴蝶兰是兰科植物中的一种，具有外观美丽、色彩鲜艳的特点。
它是重要的观赏花卉，深受人们的喜爱。
培养基是组织培养的基本要素之一，它是一种含有营养物质、激素和维生素的液体、半固体或固体介质，为植物细胞的生长、增殖和分化提供必要的营养和环境因素。
二、组织培养实验步骤1. 材料和设备准备所需材料和设备有：蝴蝶兰植株、无菌工作室、植物生长调节剂、无菌试管、酒精灯、无菌玻璃器皿、无菌手套等。
2. 组织取样选取蝴蝶兰叶片、根及茎等组织，将其切成约0.5cm³的小块。
3. 去污染、消毒将取样后的组织小块经过去污染处理，并将其放入含有乳糖、酵母利菌剂、柠檬酸钠和氯化钠等消毒剂的无菌紫外灯下进行消毒处理。
4. 培养基的制作选择适合蝴蝶兰生长的培养基，加入所需的营养物质和植物生长调节剂。
5. 组织接种将经过处理的组织小块接种到培养基上，并放置在含有适宜温度和光照条件的培养箱中进行生长和增殖。
三、操作注意事项组织培养技术是一项精细、复杂的过程，其中一个关键环节就是去除污染。
在操作过程中，一定要保持无菌环境，避免细菌、真菌等微生物的污染。
2. 适宜的光照和温度蝴蝶兰在生长过程中需要充足的光照和适宜的温度，培养箱的参数设置需要按照蝴蝶兰的生长要求进行调整。
蝴蝶兰的组织培养需要适宜的培养基，根据不同的生长阶段需要选择不同的培养基。
4. 含量的调整培养基中激素、维生素等物质含量需要按照蝴蝶兰组织的生长特点进行适当的调整。
蝴蝶兰的组织培养技术
外植体接种
将消毒好的外植体切取一定大小的部分，接种到准备好的培养基上，并注意避免 污染。
培养条件
温度控制
蝴蝶兰组织培养的温度应控制 在25℃左右，并保持恒温培 养。
光照条件
培养过程中需要提供适宜的光照 ，一般使用日光灯进行补光，并 控制光照时间和强度。
接种方式
接种方式包括斜面接种和平面接种等，不同的接种方式对蝴 蝶兰组织培养的效果也有所不同。接种时需要注意外植体的 位置、大小、深度等因素，以促进蝴蝶兰组织的生长发育。
04
蝴蝶兰组织培养的应用前景
快速繁殖蝴蝶兰
繁殖速度快
通过组织培养技术，可以快速 繁殖大量的蝴蝶兰，并且可以 保证每一株蝴蝶兰的品质和性
通过组织培养技术，可以大量繁殖蝴蝶兰苗木，降低生产成本，提高种植效率， 同时保护自然生态环境。
研究蝴蝶兰的组织培养技术，对于保护和开发利用蝴蝶兰资源，丰富我国花卉品 种，提高花卉产业的经济效益和生态效益都具有重要的意义。
02
蝴蝶兰组织培养的基本流程
材料的选取和准备
适宜外植体选择
应选取健康无病害的蝴蝶兰植株作为外植体，并尽量选取其 中幼嫩的部位如茎尖、侧芽等。
细胞培养
通过组织培养技术，可以建立蝴蝶兰的细胞培养体系，进而实现大规模的细 胞培养生产，为提取细胞产物提供充足的原材料。
05
结论
研究总结
成功建立了蝴蝶兰组织培养技术体系，确定了合 适的培养基配方、消毒处理和继代培养条件，实 现了植株快速繁殖和种质保存。
通过研究不同来源和不同成熟度种子的胚培养， 建立了高效胚培养体系，为蝴蝶兰种质创新和新 品种培育提供了新的途径。
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨植物组织培养技术在近几十年中得到了广泛应用。
它可以被用来繁殖新的植株、提取次生代谢产物、进行基因转化等。
在这些应用中，蝴蝶兰也是一个极具潜力的实验对象。
蝴蝶兰作为世界上最具代表性和最广泛应用的兰花之一，在组织培养中也有着重要的地位。
但是，由于蝴蝶兰组织培养的复杂性，使得研究人员需要更深入的了解这个体系才能更好地应用。
蝴蝶兰种植材料的选择选择合适的种植材料是组织培养的第一个步骤。
在蝴蝶兰中，筒状茎是最常用的组织培养种植材料。
它们是由花茎和叶子部分加厚而成的。
筒状茎可以容易地被分离成许多芽体和芽触须，因此只需要少量的筒状茎就能开展大规模地组织培养介质的配置蝴蝶兰不同发育阶段对培养基成分的要求也不同。
早期的幼苗需要较多的氮源和较低的磷酸盐浓度，以促进株高生长，而成熟后的植物则需要较少的氮源，较多的磷酸盐，以便生成较多的花茎和花蕾。
不同类型的蝴蝶兰组织在培养基配方上也存在差异。
对于直立型蝴蝶兰，培养基中磷酸盐的浓度可以略高，可增加花序的分化，而对于地生型蝴蝶兰，氮源的含量应该增加以增进它们的生长和发展。
植物生长调节剂的添加植物生长调节剂可以增进不同种类的蝴蝶兰的生长和分化。
常用的生长调节剂包括IAA、IBA、NAA、BA、KT、ZN、GA3、2、4-D 等，而它们的作用机制也不尽相同。
对于蝴蝶兰来说，BA 往往是组织培养中最重要的激素，它能促进幼苗生长和芽体分化。
KT 可以促进花序分化，GA3和2、4-D 对于不同种类蝴蝶兰都可以促进植株延长生长和徒长。
因此，在不同的生长阶段和应用场景中，需要选用不同的生长调节剂组合。
温度、湿度和光照等培养条件适宜的温度、湿度和光照都是组织培养中非常关键的因素。
温度以25℃ ~ 28℃ 为宜，湿度以 80% ~ 90% 为宜，植株和试管应避免暴露在直接阳光下。
在实际应用中，还需要针对不同的种类和品种，进行合理的调整和修正，以达到最优的生长效果。
蝴蝶兰组织培养及体胚发生技术研究的开题报告
蝴蝶兰组织培养及体胚发生技术研究的开题报告一、选题背景和意义蝴蝶兰属于兰科植物中的高档花卉，在国内和国际市场上具有广泛的市场需求和经济价值。
由于野生种类的环境受到破坏，采摘野生种类已经受到限制，培育高品质蝴蝶兰成为了重要的发展方向。
组织培养技术是目前蝴蝶兰种质创新和繁殖方式的关键技术之一，对于快速繁殖优质、高产、抗病虫害的蝴蝶兰品种具有至关重要的作用。
二、研究目的和内容本研究的目的是探究蝴蝶兰的组织培养技术和体胚发生技术，以实现对蝴蝶兰生长发育过程的控制和调节，进而能够用于高品质蝴蝶兰的繁殖和遗传育种。
具体的研究内容包括：1. 蝴蝶兰花器官培养技术研究：通过对花茎、花粉、花柱等试管内培养的组织细胞进行生长观察和培养条件优化，实现各花器官的快速繁殖。
2. 蝴蝶兰体胚发生技术研究：通过优化外植体处理、植物生长调节物质的添加和培养基成分的调整等手段，实现蝴蝶兰体胚形成和发育，以及体胚转化和培养。
3. 蝴蝶兰品种优化和选育研究：在蝴蝶兰组织培养和繁殖技术的基础上，对蝴蝶兰种质资源进行繁育，筛选并鉴定具有优良性状的优良品种。
三、研究方法和步骤1. 蝴蝶兰花器官培养技术研究：（1）准备组织培养器材和培养基，包括培养瓶、试管等。
（2）剥离蝴蝶兰的各个器官组织。
（3）优化培养条件，包括培养基的配方、光照强度、温度、湿度等。
（4）对各器官组织的培养和生长情况进行观察和记录。
2. 蝴蝶兰体胚发生技术研究：（1）收集蝴蝶兰的植物外植体，处理后进行培养。
（2）筛选适合的培养基配方，添加生长激素、维生素和糖类等营养物质。
（3）调节培养条件，加强光照和通气。
（4）观察育苗的生长状况，测量外植体的发育情况和体胚的数量和质量指标。
3. 蝴蝶兰品种优化和选育研究：（1）选取具有潜在育种价值的蝴蝶兰品种。
（2）对外植体进行组织培养和体胚发生培养，育成大量的蝴蝶兰无性系。
（3）评价优良品种的性状，进行品种鉴定。
（4）推广优良品种，用于实际生产和市场需求。
蝴蝶兰的组织培养技术
01
技术要求高
组织培养技术需要专业的知识和 技能，操作过程复杂，成本较高 。
变异风险
02
03
培养条件严格
长期进行组织培养可能导致基因 突变和变异，影响植物的遗传稳 定性。
组织培养需要在特定的温度、湿 度、光照等条件下进行，对设施 要求较高。
对未来研究的展望
优化培养条件
进一步研究蝴蝶兰组织培养的最优条件，提高培 养效率和成功率。
定期观察记录培养情况，及 时调整培养条件，促进蝴蝶 兰的生长和发育。
03
蝴蝶兰组织培养的关键技术
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的蝴蝶兰植株作 为外植体来源，通常使用花梗、叶片 、根等部位。
外植ห้องสมุดไป่ตู้的处理
对外植体进行消毒处理，去除表面微 生物，保证无菌条件，为后续培养打 下基础。
培养条件与环境控制
温度控制
适宜的温度是蝴蝶兰组织培养的重要条件，通常控制在25℃左右 ，以促进细胞分裂与增殖。
光照调节
适当的光照强度和时间对蝴蝶兰组织培养至关重要，通常使用散射 光或弱光，避免阳光直射。
湿度控制
保持培养环境相对湿度在70%-80%之间，以防止培养基过度干燥 或湿度过高。
细胞分裂与增殖
细胞分裂
在外植体上诱导细胞分裂，形成愈伤组织，进而分化出新的 植株。
组织培养技术在植物繁殖、种质资源 保存、基因工程和细胞工程等领域具 有广泛的应用价值。
02
蝴蝶兰组织培养的基本步骤
材料的选取与处理
选取健康、无病虫害的蝴蝶兰 植株作为材料来源。
对选取的材料进行清洗，去除 泥土和残叶。
将材料切割成适当大小的小块 ，一般以2-3厘米长的茎段为宜 。
蝴蝶兰组织培养技术研究进展以及应用分析
蝴蝶兰组织培养技术研究进展以及应用分析关键词：蝴蝶兰；组织培养；研究进展；应用摘要：蝴蝶兰作为美丽的花卉植物，极具市场价值及广阔的应用前景。
从外植体的选择、常见的三种培养方式（原球茎的诱导和增殖、丛生芽的诱导、无菌播种）等方面概述了蝴蝶兰组织培养技术的研究进展。
并对我国蝴蝶兰的研究与开发前景进行展望。
蝴蝶兰是兰科蝴蝶兰属植物，因花型奇特、色彩艳丽、花期长久而享有“洋兰皇后”的美誉。
蝴蝶兰原产于缅甸、菲律宾、台湾、马来西亚、印度尼西亚等热带亚洲地区，具有极高的观赏和经济价值，是国际上最具商业价值的四大观赏热带兰之一。
蝴蝶兰属单茎性附生兰，再生能力强，很难进行分株繁殖，且种子无胚乳，自然条件下难以萌发，增殖系数低，难以满足日益增长的市场需求。
应用植物组织培养技术进行蝴蝶兰快速增殖可以缩短繁育周期，获得大量成株，并可保持优良性状，维护种质资源，是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径。
1949年Rotor利用无菌技术成功在试管中培养出蝴蝶兰的花梗苗，此后，国内外学者纷纷对蝴蝶兰的组织培养技术进行了研究。
1974年，Intuwong等利用蝴蝶兰茎间诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化得到完整的蝴蝶兰植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础[1]。
原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以之中器官发育、增殖和分化。
目前，蝴蝶兰的组织培养方式只要有3种：1、利用离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎增殖，得到大量蝴蝶兰幼苗；2、利用各种外植体直接诱导出丛生芽3、利用种子无菌播种得到实生苗[2]。
蝴蝶兰组织培养的程序一般为：选取外植体（叶片、根尖、茎尖、花梗等）—诱导形成原球茎（PLB）—原球茎大量增殖—分化出小植株—生根壮苗培养—温室移栽[3]。
笔者对蝴蝶兰组织培养的研究进展进行阐述。
1从离体器官诱导产生原球茎进行繁殖1.1原球茎的诱导（1）外植体的选择常见外植体外植体优缺点叶片对母株伤害小，不受季节所限。
成熟叶片对诱导反应弱，多选用试管苗生长旺盛的肥厚幼叶基部，切取0.5-1.0cm叶片作为外植体，平放于培养基上诱导最佳。
蝴蝶兰组织培养快繁技术研究
１ 材 料与方 法
１１ 试 验 材 料 ．
供试材料为红 花系蝴 蝶兰 ， 用 ２种花 梗 ， 选 已开 花
重复 ，０ｄ后统计各处理的萌芽率 。 ３ １２４ 继代增殖 ．． 选取长 为 ｌｃ ｍ左右 ， 生长状 况一致
花梗 （ 下端带有休 眠芽 ） 和花蕊 尚未 长 出但 已完全抽 出
ＮＡＡ ． ／ ０ ５ｍＬ Ｌ生根 效 果 最好 。
关键词 ： 蝴蝶兰 ； 花梗 Ｉ 夕 源激素 ； 组织培养
中 图分 类 号 ： ８．０． ６ 文 献 标 识码 ： 文 章 编 号 ：０１ ０ ０ ｛００ ０ －０２ －０ Ｓ６２３ １３ Ａ １０ － ０ ９２１ ）８ １２ ３ 蝴 蝶 兰 （ ｈ ｌｅｏ ｓ ｙ ｒ ． 为 兰科 （ ｒ ｉ ｃａ） Ｐ ａａｎｐｉｈ ｂｉ ） ｓ ｄ Ｏ ｃ ｄ ｅｅ ｈ ａ
流水中冲洗 ３ ｎ并不断搅动 。将冲洗后 的花梗用滤 ０ｍｉ，
第一 作者 简介 ： 颖（ ９ ０） 女 ， 张 １ ８ － ， 黑龙 江人 ， 究 方 向为 植 物 组 织 研 培养 。Ｅ ｍａ ： ｎ ８ ７ １ ＠ １３ ｃ ｍ。 － ｉ ｙ ｇ０８２ ６．ｏ ｌｉ
的花梗 。
１ ２ 试 验 方 法 ．
的单芽作为接种材料进行继代培 养。每处理 １ ， 次 ｏ株 ３
重 复 。生 长 素 选用 Ｎ Ａ ， 度 分 别 设 为 ： 、． 、． 、． Ａ 浓 Ｏ０ ５ １０ １５
１２１ 外植体 的选择 ．．
选用 ２ 花梗 ， 种 已开花花梗 （ 下
ｍｇ Ｉ 细胞 分 裂 素 选 用 ６Ｂ 浓 度设 为 ：、、、 ／ 。 ／ ； － Ａ， ０ ５７９ｍｇ Ｌ
外植体按照花 梗 自然 生长方 向插入 下面 配方 的培 养基 中， 配方为 ＭＳ 基本培养基 ， 蔗糖 ３ ／ ， ０ｇ Ｌ 琼脂 ６ｇ Ｌ 附 ／ ， 加 ３个 浓 度 的 ６Ｂ ３ ５ ７ ｍ ／ ， Ａ 的 浓 度 为 － Ａ： 、 、 ｇ Ｌ Ｎ Ａ
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种在国际上广泛栽培的兰花种类，因其独特的花型和丰富的花色而备受人们喜爱。
蝴蝶兰的组织培养技术是一种重要的繁殖方法，可以保留蝴蝶兰的优良特性，并且能够大量繁殖蝴蝶兰的种苗。
本文将探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术，包括组织培养的基本原理、组织培养培养基的配方和制备、蝴蝶兰离体培养的步骤和注意事项、以及蝴蝶兰组织培养中可能遇到的问题及解决方法。
一、蝴蝶兰组织培养的基本原理蝴蝶兰组织培养是利用植物细胞的分裂和分化能力，在无菌条件下将植物组织培养在含有营养物质的培养基上，通过控制植物激素的添加和培养条件，促使植物组织细胞进行分裂和分化，最终形成植物器官或整株植株。
蝴蝶兰组织培养的基本原理是通过组织培养培养基中添加适当的植物激素，促使蝴蝶兰离体组织细胞分化成茎、叶、根等植物器官，然后将这些器官再次培养成完整的植株。
二、组织培养培养基的配方和制备1. 组织培养培养基的配方组织培养培养基通常由水、糖、无机盐和植物激素等组成。
对于蝴蝶兰来说，组织培养培养基的配方需要根据其生长需要进行调整，一般来说，培养基中的糖和无机盐的含量要根据蝴蝶兰的生长习性和需求来确定，植物激素的添加种类和浓度也需要根据不同的培养目的来确定。
2. 组织培养培养基的制备将配好的组织培养培养基加入适量的琼脂，煮沸后分装到无菌的培养瓶中，再将培养瓶加压灭菌，待培养基冷却凝固后，就可以用于蝴蝶兰组织培养的实验中了。
三、蝴蝶兰离体培养的步骤和注意事项1. 材料的准备蝴蝶兰幼嫩的茎、叶和根都可以用来进行组织培养，首先需要选择健康无病的植株，并进行表面消毒处理，将植株放入含有适量植物激素的培养基中，进行悬浮培养或固体培养。
2. 组织的分化将经过表面消毒处理的蝴蝶兰茎、叶或根培养于含有适量植物激素的培养基中，在适宜的温度和光照条件下进行培养，通常情况下，几个星期后就能看到茎、叶和根等植物器官的分化。
3. 培养条件的控制在进行离体培养的过程中，需要严格控制温度、光照和湿度等培养条件，以保证蝴蝶兰组织培养的顺利进行。
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种十分美丽的兰花，因其独特的翅膀形状和迷人的色彩而备受欢迎。
为了满足市场需求，蝴蝶兰的培养与繁殖技术也越来越受关注。
本文将探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术。
组织培养是一种无菌技术，可以在无菌环境中培养植物组织。
在蝴蝶兰组织培养中，最重要的是获取一个无菌的种子库。
蝴蝶兰的种子通常较小，容易受到细菌和真菌的污染。
在进行组织培养之前，必须对种子进行消毒处理。
一种常用的方法是使用含有消毒剂的溶液进行浸泡。
消毒剂可以杀死种子表面的细菌和真菌，在一定程度上保证种子的无菌性。
蝴蝶兰的组织培养需要一个适宜的培养基。
培养基是供给植物生长所需的营养物质的介质。
对于蝴蝶兰来说，常用的培养基是MS培养基，其中含有适宜的无机盐、维生素和植物生长调节剂。
在组织培养的过程中，可以通过调整培养基的配方来促进植物生长和分化。
在增殖阶段，可以添加植物生长素来促进茎的增长。
而在分化阶段，可以添加植物激素来促进花器官的分化。
除了消毒和培养基，蝴蝶兰的组织培养还需要优化培养条件。
首先是温度。
蝴蝶兰是热带植物，其生长温度通常在20-30摄氏度之间。
温度过高或过低都会对植物的生长产生不良影响。
其次是光照。
蝴蝶兰是光合植物，需要足够的光照进行光合作用。
在组织培养过程中，可以使用光培养箱来提供适宜的光照条件。
最后是湿度。
蝴蝶兰喜欢湿润的环境，在培养过程中要保持适宜的湿度，可以通过喷水、遮荫等方法来调节。
蝴蝶兰的组织培养还需要注意无菌操作。
无菌操作是组织培养中最关键的一步，任何一点不慎都可能导致细菌或真菌的污染。
在进行组织培养的过程中，必须严格遵守无菌操作的要求，包括灭菌操作、佩戴无菌手套、使用无菌器械等。
只有做到严格的无菌操作，才能确保蝴蝶兰组织培养的成功。
蝴蝶兰的组织培养是一项关键的技术，需要注意消毒、培养基的选择、优化培养条件和无菌操作等方面。
只有掌握了这些技术，并进行合理的调试和优化，才能成功地培养出健康的蝴蝶兰植株。
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蝴蝶兰组织培养技术研究一、实验目的1.能够正确选取外植体，并最其进行前处理2.能够有效防止外植体褐变的发生。
3.能够正确进行继代培养与壮苗正根培养。
4.能够利用无菌播种方式进行种子繁殖。
5.培养团队精神、责任心和科学的思维能力。
二、实验原理随着植物组织培养技术在植物快繁上的应用，近年来，对蝴蝶兰组织培养研究较多的是用胚、幼叶、茎尖和根尖、花梗腋芽等多种器官为外植体进行组织培养研究，由于所选外植体材料各异，难度也有高低，虽然有些技术已经用于大规模工厂化生产，但仍面临一些困难，有待于进一步探索和完善。
根据目前蝴蝶兰的发展状况，本文将在以花梗侧芽、茎尖、叶片为外植体材料进行组织快繁技术上作深入的探讨和研究。
三、实验仪器及试剂花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/L + KT1.0 mg/L + NAA0.5 mg/L + 椰乳10 %。
生根培养基为1/ 2MS + BA1. 5 mg/L +NAA0. 3 mg/L + 80 g/L 香蕉泥诱导培养基为1/3MS+NAA0.5~1.0毫克/升+6-BA3.0~5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖30克/升+琼脂6克/升，或KC+NAA1.0毫克/升+6-BA5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖20克/升+琼脂6克/升柠檬酸300毫克/升以上培养基p H 均为5.6四、实验步骤与方法（一）花梗腋芽和顶芽组织培养快速繁殖技术蝴蝶兰为总状花序，通常由花梗基部算起在第4或至第7节才会分化花朵。
除最基部一节外，剥开位于该节位以上各节的苞片都可看到腋芽，近顶端的节含有未完全分化的花原始体，花轴基部的芽往往为休眠芽，常具有苞片覆盖，连同花序的顶端，都是花梗腋芽组织培养的好材料。
1．花梗腋芽的培养途径对花梗腋芽有两条培养途径，一是切取带腋芽的花梗茎段培养；二是不带花梗组织剥取茎尖生长点培养。
其中采用腋芽茎段培养，促使休眠芽启动向营养芽转化，尔后采用丛生芽方式直接增殖，从而不通过脱分化形成原球茎阶段，可以减少变异，保持母株优良特性，但增殖速度相对后者较慢。
2.外植体取材、消毒和接种2.1 操作程序2.1.1 从蝴蝶兰出现花梗到花朵凋谢，在花梗尚未枯黄前，都可用来作为外植体。
剪下来的花梗，用75%乙醇的棉化球将花梗外表的灰尘、杂物等擦拭干净，然后以节为单位切成段，含芽的花梗时上下留不同长度，置于超净工作台上，准备消毒。
2.1.2 将花梗腋芽上的的苞叶去除，并用解剖刀把节与芽相接处清除干净。
另外，若在花梗表面有病斑或焦枯的部分，应以解剖刀削去。
2.1.3 一般花朵盛开或已凋谢的成熟花梗，在0.1%HgCl2-吐温80溶液中消毒10~15分；如果是较嫩的组织，消毒时间缩短为8~10分钟。
2.1.4 消毒时间到时，材料取出置于盛有无菌水烧杯中，无菌水荡洗3~5次。
2.1.5 将冲洗后的外植体置于无菌的培养皿中，用锐利的解剖刀截去两端与消毒液接触部分，取出中间部分插入诱导培养基中。
花梗初次接种于诱导培养基上，附加不同浓度的BA、NAA、胰蛋白胨或椰乳能提高诱导率。
另外添加柠檬酸300毫克/升防止褐变，调节PH至5.6，通常可以获得满意效果。
诱导蝴蝶兰侧芽萌动的影响因素，主要集中在培养温度，腋芽节位和激素浓度等方面。
蝴蝶兰花梗诱导培养操作时，培养室温度为25±1℃，光照强度1500勒，每天光照10~16个小时。
通常花梗侧芽在适当培养基上培养7~10天后，腋芽突出肥大，经过15天后，腋芽萌发，可达1厘米以上不定芽。
细胞分裂素BA有利于营养芽萌发，在28℃培养条件下，诱导率随BA浓度升高而提高，其中添加5毫克/升BA，花梗各部位的腋芽绝大多数发育为营养芽。
此外，生长素的存在对腋芽诱导也有显著促进作用。
蝴蝶兰花梗腋芽诱导丛生芽的较好培养条件是在25℃~28℃进行光照培养，光照度为1500勒左右，培养基中添加1~3毫克/升BA和1.0毫克/升的NAA。
一般接种7天后，外植体萌动、膨大并向外伸长，30天后长出小叶，50天左右可长出4~5片叶。
而花序顶端小芽的启动较慢，40~50天后才见小叶萌发伸展。
当在试管内长成无菌植株，便于进一步利用，如取无菌试管苗的叶片、茎尖或根尖进行培养，建立无性繁殖体系。
4．继代培养将诱导产生的芽或芽丛从花梗上切离，转入继代增殖培养基上培养，一般每瓶接种6~10株无根苗。
培养条件与诱导相同，也可以将激素浓度和配比稍做调整，主要取决于不同品种而已。
一般可以适当调高细胞分裂素的浓度，降低或不用生长素，如仅添加6~BA3~5毫克/升。
影响蝴蝶兰丛生芽继代培养效果的条件和因素主要是生长调节剂种类和浓度、有机物添加种类等。
细胞分裂素有利于芽的增殖，在BA浓度1~20毫克/升范围内增殖率随BA浓度上升而增加，但是BA浓度过高会使芽的生长减弱。
另外，培养基中添加椰乳能明显提高蝴蝶兰丛生芽的增殖率，且长势较好，而其他有机物如水解乳蛋白（LH）、水解酪蛋白（CH）和酵母汁（YE）等有机添加物不能促进丛生芽增殖，反而有轻微抑制作用。
丛生芽增殖方式有两种：一种是将小芽切离花梗茎段，并横切为上下两段，分别接种培养，诱导丛生芽增殖；另一种是将芽切离茎段，作为种苗接种培养，30天左右在基部可萌发新的芽丛，40天后可分割丛生芽，按照苗的大小分级移植，由此通过不断分苗，不断获得种苗和丛生苗，达到扩大繁殖的目的。
丛生芽增殖周期较长，需要添加椰乳、水解胰蛋白等适宜的有机物。
5．壮苗和生根培养蝴蝶兰壮苗与生根一般同时进行，其基本培养基成分与继代所需相同，主要是对激素浓度和配比作些调整。
试验证明，同时降低BA和NAA浓度，可明显促进植株生长，但浓度过低又不利于生长，最佳浓度为BA1.0毫克/升、NAA0.1毫克/升，此时植株生长健壮，叶数可达3~4片，根长且粗壮。
在促进根系生长方面，适当提高光照浓度可明显促进植株生长健壮，其中以3000勒光强最好，表现出叶色浓绿、叶片肥厚、植株健壮；而在1000勒时，叶色浅绿、叶片瘦长、植株较弱。
在培养基中添加香蕉泥和马铃薯泥，可以明显促进根系生长，生根数量较多。
6．试管苗移栽和养护从瓶中取出试管苗，洗净根部琼脂，消毒后移植于温室塑料筛筐中培养。
培育基质以水苔为主，另加少量陶粒、蛭石，碎砖和树皮等颗粒硬材料。
2周后可使用花宝1号等优质花肥叶面喷施和灌根。
（二) 茎尖组织培养快繁技术1．茎尖获取与消毒接种1.1盆栽兰苗茎尖获取：由于蝴蝶兰的茎尖深藏于叶片夹缝中，分离和消毒很困难,因而直接从盆栽兰苗采取外植体进行培养的难度相对较高，成功率低，但这是为获得保留母株优良性状的组培苗时必需的。
成株蝴蝶兰从茎中部切断，剥除叶片。
用水冲洗，去掉顶部嫩叶。
在浓洗衣粉液中，用毛刷刷洗茎顶部叶片夹缝处，用自来水冲洗20分钟。
用刀修整茎尖后浸染入0.1%HgCl2-吐温80 溶液消毒5分钟,无菌水冲洗3次。
超净工作台上，于解剖显微镜下剥离不大于5立方毫米的茎尖，再次浸入含有效氯0.5%84消毒液中灭菌5~10分钟,无菌水冲洗3次,无菌滤纸吸干水分, 茎尖接种到诱导培养基上。
1.2 试管苗茎尖培养：蝴蝶兰茎尖培养常用的外植体是利用花梗腋芽萌发或种子发芽的无菌实生苗，切取其茎尖进行培养，诱导原球茎，其目的是通过原球茎方式能够快速的繁殖试管苗。
取茎尖的方法相似，一般需借助解剖镜，在无菌条件下，用手术刀切去试管苗的根、叶，小心剥取0.3~1.0毫米大小的茎尖，接种于诱导发生原球茎的培养基上。
2．茎尖诱导原球茎初代培养原球茎诱导成功与否受诸多因素影响，最主要的是培养基的种类、生长调节剂种类及浓度配比。
诱导培养基通常采用MS、VW和KC附加15%椰乳的固体培养基，添加BA5.0毫克/升或2，4-D0.1毫克/升。
附加活性炭0.25%常可提高诱导率。
在实际生产操作中，茎尖诱导培养基常需要依据不同品种而作调整，因为基本培养基、激素浓度及配比对不同的蝴蝶兰品种而言有所差异。
海南蝴蝶兰在KC培养基诱导的效果比较好，但不使用外源激素不能诱导茎尖产生原球茎；单独使用生长素NAA也不能产生原球茎；单独使用0.5~2.0毫克/升范围内的BA可诱导茎尖产生原球茎，但诱导率低；BA浓度达到5.0毫克/升或以上时，20天后茎尖开始褐化坏死，这可能是高浓度BA刺激多酚氧化酶活性提高，对培养物产生毒害作用。
NAA与BA配合使用诱导效果较好，以BA2.0毫克/升+NAA0.5毫克/升和BA4.0毫克/升+NAA0.5毫克/升配比最好，原球茎诱导率高。
茎尖接种到诱导培养基上，25℃恒温培养，1500~2000勒光照强度每天光照16~24小时。
2周后外植体膨大，少数较大的茎尖切块长出侧芽继而形成小叶片，随后在叶片上长出颗粒状的原球茎，另一部分体积较小的茎尖膨大后直接从周围长出原球茎。
可见大小适中的茎尖诱导形成的原球茎的速度较快。
3个月后，长成桑果状原球茎状体，组织块直径约6毫米，类似于愈伤组织，只是表面上布满了圆球状颗粒，用于继代培养。
3.继代增殖及生根壮苗培养参照原球茎继代增殖和生根壮苗的部分。
（三）叶片组织培养快速繁殖技术取叶片培养对蝴蝶兰母株伤害不大，也不受植株开花与否的限制，是较适合的培养途径。
与茎尖培养一样，蝴蝶兰的叶片培养也是通过诱导原球茎增殖方式实现快速繁殖的。
由花梗芽或由原球茎分化形成的叶片，或试管实生幼苗叶片不要经过表面消毒，诱导率很高，实际工作中多采用。
1．外植体的准备、接种兰株采用试管苗，最好以液体培养使叶片肥厚，然后切取叶片基部0.5~1.0厘米培养。
将切取的部位上表面朝上平放于培养基上，初期的一个月左右采用暗培养效果较好。
诱导形成愈伤组织状的原球茎状体，在固体培养基中增殖，或在液体培养基中增殖。
2．诱导培养我国也有许多学者对蝴蝶兰叶片组织培养进行了研究，各种培养基皆能成功，但诱导叶片产生原球茎的诱导率都不理想，一般低于20%。
影响叶片外植体诱导成功率的因素主要有叶片取材部位、培养基成分、激素种类和浓度、有机添加物和活性炭等。
2.1 培养基：最常用的是MS培养基。
虽然一些试验表明这些基本培养基的培养效果有一定的差异，但不是决定因素，主要表现出诱导率高低不同，而不是能不能成功。
2.2 激素种类和浓度：这是叶片原球茎诱导的关键影响因素，其中细胞分裂素BA是决定蝴蝶兰原球茎能否产生的重要因素。
杨美纯等研究发现在所有未添加BA的培养基上，不管添加何种果汁，均未能诱导出原球茎，而只有在添加了BA的培养基上才能形成原球茎，其中以MS附加5毫克/升BA的组合能获得较高的原球茎诱导率，又能使原球茎进一步生长发育正常。
同时还发现，加入果汁能明显提高原球茎诱导率，以在MS+BA5.0毫克/升培养基中加入椰乳的诱导率最高，达到42%~43%，而不加果汁的诱导率仅18%，而且每个外植体叶块上产生的原球茎颗粒既多又健壮。