水处理微生物学实验指导书
给水排水系水处理微生物学-实验大纲
《水处理微生物学》实验教学大纲实验课程名称：水处理微生物学实验英文名称：Experiments of Microbiology for Water and Wastewater Treatment实验课程性质：非独立设课应开实验学期：第5学期课程编码：0802019 实验学时数：6适用专业：给水排水工程一、实验教学目的和要求通过实验，加深理解课堂教学的内容，训练学生熟练使用光学显微镜观察各种微生物包括活性污泥生物相形态，掌握培养基的制备及无菌操作技术、微生物的纯种分离、培养及接种技术。
通过实验要求学生掌握实验原理，要求学生实事求是，树立严肃认真的科学态度，实验前必须进行充分预习，实验时必须当时做实验记录，实验结束后，应以实事求是的科学态度及时整理报告内容。
二、主要仪器设备光学显微镜、高压蒸气灭菌锅、无菌操作台、恒温箱(培养箱)、接种环、酒精灯等四、实验课考核方式1.实验报告：要求学生在报告里包括如下内容（1）实验名称、学生姓名、学号、班号和实验日期；（2）实验目的和要求；（3）实验仪器、设备与材料；（4）实验原理；（5）实验步骤；（6）实验原始记录；（7）实验数据计算结果；（8）实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思考题，写出心得与体会。
2.考核方式2.1.实验课的考核方式；实验课的出勤及实验态度，实验报告。
2.2实验课考核成绩确定，实验课成绩占课程总成绩的比例等。
实验课的出勤及实验态度占50%，实验报告占50%；实验课成绩占课程总成绩的10% 五、实验指导书及主要参考书实验指导书：自编实验指导书主要参考书1．顾夏声等编，《水处理生物学》（第四版），中国建筑工业出版社，20072．沈萍，范秀容，李广武主编，《微生物学实验》（第三版），高等教育出版社，1999。
水微生物学实验指导书
水微生物学实验指导书武汉科技大学城市建设学院给排水工程系2007.12目录页实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察活性污泥生物相的观察实验二培养基的制备及灭菌微生物的纯种分离及计数实验三微生物生理生化特性实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的1.了解普通光学显微镜的构造，学习显微镜的使用方法和保养方法。
2.观察蓝细菌、霉菌、酵母菌、放线菌的个体形态，学会生物图的绘制。
二. 实验内容1．显微镜的使用方法和保养方法2．微生物形态的观察三、实验仪器、设备及材料1.光学显微镜、载玻片、盖玻片等2.示范片：颤藻、曲霉、青霉、酵母菌、放线菌。
四、实验原理显微镜的结构和各部分的作用图1是微生物实验常用的双目电光源生物显微镜，其构造分机械和光学两部分：机械部分主要包括：1．镜筒镜筒是双筒，两筒间距离可调，长度一般是160mm。
它的上端装有接目镜，下端有回转板。
回转板上一般装有3个接物镜。
2．载物台载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。
两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。
有的载物台上装有自动推物器。
3．调节器镜臂旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降载物台，调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。
光学部分主要包括：1．接目镜一股使用的显微镜具有2—3种放大倍数的接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”等数字及符号。
意即使用时可放大5倍、10倍或16倍。
观察微生物时常用放大10倍或16倍的接目镜。
2．接物镜接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40 (45)、100。
通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。
例如：用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400。
如果用放大100倍的接物镜则放大倍数为100×10＝1000。
水处理微生物实验报告
水处理微生物实验报告实验目的：通过研究水处理微生物的作用，了解微生物在水处理中的应用和重要性。
实验材料和方法：材料：自来水、废水、细菌培养基、平板、试管、显微镜等。
方法：1. 取自来水和废水样品，分别装入试管中。
2. 对试管中的样品进行稀释，得到不同浓度的样品。
3. 用吸管吸取一定量的稀释后的样品，均匀涂抹在细菌培养基平板上。
4. 将涂抹后的平板放入培养箱中，25培养24小时。
5. 取出培养好的平板，观察菌落的形态和数量。
6. 用显微镜观察菌落中的微生物，记录种类和数量。
实验结果：经过观察，可以发现自来水样品在平板上的菌落数量相对较少，且菌落颜色较浅。
而废水样品在平板上的菌落数量较多，菌落颜色较深。
通过显微镜观察，可以看到菌落中存在大量不同形态的微生物。
实验讨论：1. 自来水中的微生物数量较少，这是因为自来水经过消毒处理，微生物已经被杀灭或大量减少。
2. 废水中的微生物数量较多，这是因为废水中存在大量有机物质，为微生物提供了生存和繁殖的条件。
3. 废水中的微生物种类较多，包括细菌、真菌、藻类等。
这些微生物具有不同的代谢特点，对水中有机物质进行分解和降解，从而净化水体。
4. 废水处理中常使用微生物处理技术，利用微生物的降解能力进行废水处理。
通过培养和筛选适宜的微生物，可以提高废水处理效果，达到净化水体的目的。
实验结论：水处理微生物在废水处理中发挥着重要的作用。
通过研究微生物的生长和降解特性，可以优化水处理工艺，提高废水的处理效果。
同时，对自来水中的微生物进行研究也有助于了解水质的健康和安全情况。
因此，对水处理微生物的研究具有重要的意义。
完美详细实验报告 水处理生物学 实验七 培养基的配制和灭菌 水处理微生物学标准实验报告7 老师的内部资料
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验七培养基的配制和灭菌一、实验目的：1 、学习玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作；2、了解配制微生物培养基的基本原理，本实验通过学习常用细菌培养基的配制来了解并掌握常规培养基配制和无菌水的制备方法；3、学习各类物品的包装及灭菌技术；二、实验基本原理：培养基是应科研、生产需要，根据微生物对营养的需求按一定比例人工配置的适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合营养物，任何培养基都应具备微生物生长所需要的六大类营养要素。
培养基配制好后应立即灭菌后备用。
由于微生物的种类及代谢的多样性，因而培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法也各有差异，除一些特殊培养基外，一般培养基的配制过程大致相同。
一款成熟的培养基配方都会在其配方后面附上配制方法及pH值、灭菌温度等其他配制要求。
三、主要仪器设备及耗材：1、药品及试剂：可溶性淀粉、营养琼脂（或牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、10%NaOH，10%HCl）2 、仪器及其它高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、pH试纸(1-14)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、培养皿、吸管、玻璃珠等四、实验步骤：（一）培养基的制备与分装1 称量：按培养基配方比例依次准确地称取药品。
（可溶性淀粉先用少量冷水溶化后再加入）2 熔化：在沸水浴锅中加热熔化。
3 调pH：10%NaOH，10%HCl调pH至7.4-7.6。
4 过滤：趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤）5 分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，装量不超过试管的1/4，注意管口不要沾上培养基。
6 加塞：试管应先捆成一捆，然后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。
（二）无菌水的制备用量筒量取150ml自来水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。
（三）器皿的准备1、培养皿的包装每6～10个一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里加盖扣严）。
水处理微生物实验大纲
《水处理微生物学》实验教学大纲课程名称：水处理微生物学课程编号：课程性质：必修课程总学时：36实验学时：6总学分：2学分实验周学时：适用专业：2007给排水工程一、实验课的性质与任务《水处理微生物学》实验教学是附属于《水处理微生物学》课程的实验教学，其任务是为配合课堂理论教学，培养学生的基本实验能力，加深对理论知识的理解，对水处理微生物的基本类型、结构、营养和生长情况有一个更全面、更系统的认识、了解和掌握。
为今后给排水工程规划、设计、及运行管理中水处理微生物方面的应用打下坚实的基础知识。
二、实验目的与要求1、目的通过实验课的学习，培养学生的动手能力，在掌握实验技能方面：要求同学通过实验课掌握光学显微镜的结构、光学原理及操作与使用方法。
通过实验课教学，同学们应掌握水体中主要微生物的检验技能，如培养基的制备方法、微生物的接种和分离技术，掌握控制水体微生物生长的方法，以确定水和废水的生物学性质。
了解主要的水处理微生物的个体形态和结构特征，掌握从水体中分离和培养微生物的方法和技能。
2、要求能较熟练地利用光学显微镜检验水处理主要微生物的类型和基本结构。
掌握水体中主要微生物的基本检验技能。
熟练制备培养微生物所需要的培养基的方法、水处理微生物的接种和分离技术，掌握控制水体微生物生长的方法，四、实验内容安排实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察1．目的要求1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作使用方法和保养。
2、结合生物滤池的生物膜，观察各种水处理微生物（原生动物、菌胶团等）的个体形态，学会生物图的绘制。
并学习测量微生物大小的方法。
2．实验内容掌握显微镜的结构和各部分的作用，显微镜使用和保护的方法。
观察活性污泥、生物膜的结构；观察和掌握菌胶团的形状；掌握观察和辨认活性污泥与生物膜的组成之一——原生动物的形态特征和运动方式等方面的基本内容。
3．主要实验仪器设备1、生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。
水处理微生物学标准实验报告2
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验三微生物细胞大小的测定一、实验目的：1 学习掌握用测微尺测量微生物细胞大小的方法；2 进一步掌握光学显微镜的使用方法；二、实验基本原理：在一定条件下，各种微生物细胞的大小，是微生物形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于微生物细胞很小，只能在显微镜下测量，一般采用显微测微尺来测量。
显微测微尺用由镜台测微尺和目镜测微尺组成。
镜台测微尺是特制的载玻片，其中央有一全长1mm的刻度标尺，等分成100小格，每格长度为10um，可用它来校正目镜测微尺每小格的长度。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形薄片，其中央刻有50或100等分的小格，每小格的所代表的实际长度随目镜物镜放大倍数的大小而变动，在测量微生物菌体的大小之前，应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大倍数物镜下目镜测微尺每小格所代表的实际长度，再以它作为测量微生物细胞的尺度。
标定：目镜测微尺每格所代表的实际长度（μm）=（两条重合线间镜台测微尺的格数／两条重合线间目镜测微尺的格数）×10μm。
测定：微生物的大小（μm）=目镜测微尺的格数×目镜测微尺每格所代表的实际长度（μm）。
实验时应注意几个原则：1、整数格原则：即标定时应取目测微尺和镜台测微尺的重合线，不能估读。
2、边对齐原则：随着物镜放大倍数的增大，物镜测微尺刻度线变粗，标定时取重合线时应以目测微尺和镜台测微尺刻度线的左边或右边对齐为标准。
3、最远重合线原则：在一个视野下，可能有几对重合线，标定时应取最远重合线。
4、用目测微尺实际测定微生物大小时，应估读一位即小数点后保留一位有效数字。
三、主要仪器设备及耗材：显微镜；细菌三形涂片、放线菌、曲霉、青霉等教学示范片；目镜测微尺、镜台测微尺；香柏油、二甲苯、擦镜纸等；四、实验步骤：1 目镜测微尺的校正（1）目镜测微尺装入目镜的隔板上，刻度朝下，将镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。
武理工水处理生物学实验指导02活性污泥生物相的观察
实验二 活性污泥生物相的观察一. 目的1.学习测量微生物大小。
2.学习用压滴法制作标本片。
3.观察几种原、后生动物，菌胶团及藻类个体形态二. 实验器材1. 活性污泥混合液。
2. 单胞藻、新月藻、星藻、草履虫等示范片。
3. 显微镜、载玻片、盖玻片。
4. 目测微尺、物测微尺。
三. 实验方法及内容1.目测微尺和物测微尺及其使用的方法目测微尺 目测微尺是一圆形玻片，其中央刻有精确的刻度(图3)，等分为100格或更多格。
标尺刻度的大小，随使用的接目镜和接物镜放大倍数以及镜筒的长度而改变。
使用前，应先利用物测微尺进行标定。
物测微尺 物测微尺是一厚玻片，中央有一微小圆圈，圆圈里有100等分刻度标尺，每等分的长度为1／100mm ，即10μm ／格。
使用时，先将目测微尺装入接目镜的隔板上，使刻度朝下；把物测微尺放在载物台上，使刻度朝上，用平常观察标本的方法，先用低倍镜找到物测微尺的刻度，再移动物测微尺与目测微尺使两者的第一线相合，然后计算物测微尺的每一小格内有目测微尺的小格若干个，换算成后者刻度所表示的长度。
如：物测微尺的一小格相当于5个目测微尺的小格，则目测微尺在此种条件下，其每格的长度即等于2μm 。
如在同样条件下测量物体，而物体之长度为目测微尺的两小格，宽为半小格，则可知此物体的大小为1μm ×4μm 。
换成高倍镜，用同样方法标定出高倍镜下目测微尺每格的长度。
2．活性污泥标本的制备1)取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片的中央(如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀污泥一小滴于载破片上；如混合液中污泥较多．则应稀释后进行观察)。
2)小心地用洗净的盖玻片覆盖。
这样，就制成了活性污泥的标本。
加盖玻片时应使其中央已接触到水滴后才放下，否则会在片内形成气泡而影响观察。
3．显微镜观察活性污泥标本(1)低倍镜观察1)在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺一格的长度(单位以μm 计)。
2)观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、菌胶团等微生物的形态物测微尺目镜测微尺图3草图。
《水处理实验技术》实验指导书
《水处理实验技术》实验指导书一、实验教学的目的和任务1.水处理方法与原理包括废水处理方法分类、废水处理方法与原理简介、给水处理方法及原理等。
2.水处理实验（1）实验前应预习与实验有关的教材内容和实验指导书，搞清本次实验目的、实验原理和实验要求，以及本次实验与生产实践的相互关系，做到心中有数。
（2）在实验室要首先弄清实验装置的构造和尺寸，了解有关仪器的特点、性能和使用方法，使用贵重仪器时需得到教师许可，才能动用。
（3）实验时需严肃认真，一丝不苟。
细致地观察实验中的各种现象，并作好记录，通过实验，训练基本操作技能和培养科学的工作作风。
（4）实验结束时，学生先自行检查全部实验记录，再经指导老师审阅后，方可结束实验。
（5）学生做完实验后，应将所用玻璃器皿和设备等擦洗干净，如不慎损坏实验室物品，应向教师报告并登记，酌情处理。
（6）按规定格式认真填写实验报告，并按期交出。
二、实验项目及学时分配序号实验项目名称实验学时实验类型开出要求1混凝实验3综合必做2絮凝沉淀实验3综合必做3滤料筛分析实验2综合必做4过滤与反冲洗实验2综合必做5清水充氧实验3综合必做6混凝剂的配制、投加3综合必做和混凝效果检测综合性实验合计16三、每项实验的内容和要求（一）混凝实验1、内容和要求：学习混凝工艺基本理论知识，掌握混凝实验基本操作方法，掌握浊度的测定方法。
要求熟悉掌握混凝搅拌机的操作，学会选择适当的混合搅拌转速，掌握光电浊度仪测定浊度的方法。
2、实验所用的主要仪器设备，实验所需主要耗材的品种及数量：定时变速搅拌机，光电浊度仪，秒表，1000毫升烧杯，125毫升水样瓶，10毫升、1毫升移液管，0—50℃温度计，50毫升、100毫升量筒，浓度为1% 和10%的硫酸铝溶液或三氯化铁溶液或浓度为0.5%聚合氯化铝溶液，浓度为10%的化学纯盐酸，浓度为10%的化学纯氢氧化钠（二）絮凝沉淀实验1、内容和要求：学习沉淀工艺基本理论知识，掌握絮凝实验基本操作方法，掌握浊度的测定方法。
水处理生物学实验指导02微型动物的计数
实验二微型动物的计数一、目的显微镜观察活性污泥样品中微型动物的种类、数量及状态。
二、实验器材1．活性污泥法曝气池混合液。
2．显微镜、小量筒、滴管等。
3．计数板如果没有微型动物计数的计数板(微型动物，即使是原生动物，也比细菌大得多，—般的细菌或血球计数板都不适用)，则可按照上海织袜四厂和上海师范大学生物系所介绍的微型动物计数板制作方法制备如下：采用厚质玻璃割成9cm长，4cm宽的长方块，玻璃厚度以0.3一0.4cm为宜。
利用氢氟酸腐蚀法，使玻板中央刻上10×l0＝100个小方格，小方格的大小没有严格规定，只要一片大号盖玻片能盖满格子有余和便于在显微镜下计数就可以了。
用大号盖玻片切成宽约0.7cm的玻条，用阿拉伯树胶粘在计数用的小方格的四周，使呈一圈凸起的边框。
这样，就制成了一块微型动物计数板，如图8—5所示。
关于氢氟酸腐蚀法划方格的方法是先将玻璃表面涂一层薄面均匀的石蜡，然后用尖针在石蜡层上刻出所要求的方格，再以氢氟酸蒸汽进行重蒸。
三、计数方法及步骤1．将活性污泥法曝气池混合液轻轻搅拌均匀；如混合液较浓，则可稀释成1：1的液体(稀释方法：取l0mL量筒一个，加混合液5mL再加蒸馏水5mL，轻轻搅拌均匀，即成1：1稀释液)。
2．取洗净的滴管一支(滴管每滴水的体积应预先标定，一般每一滴水的体积约为l／20mL)，吸取摇匀的混合液或己稀释的混合液加一滴到计数板的中央方格内，然后加上一块洁净的大号盖玻片，使玻片的四周正好搁在计数板四周凸起的边框上，侧视如图8—6所示。
3．用低倍显微镜进行计数注意所滴加的液体不一定布满整个l00格小方格，在显微镜下计数时只要把充有液体的小方格，挨着次序一行行的计算即可。
同时记录各种动物的活动能力、形态结构等。
原生动物中有不少种类是群体，须将群体和群体上的个体分别计数。
4．计算设在一滴水中测得钟虫30只，则每mL混合液中含有钟虫30×2×20＝1200只，如测得轮虫10只，则每毫升混合液含轮虫10×2×20＝400只(如滴管每一摘体积为1／20mL，所观察的液体是1：l稀释的曝气池混合液)。
《水处理实验技术》指导书
《水处理实验技术》指导书实验一 颗粒自由沉淀实验一、颗粒自由沉淀实验颗粒自由沉淀实验是研究浓度较稀时的单颗颗粒的沉淀规律。
一般是通过沉淀柱静沉实验，获取颗粒沉淀曲线。
它不仅具有理论指导意义，而且也是给水排水处理工程中，某些构筑物如给水与污水的沉砂池设计的重要依据。
目的1．加深对自由沉淀特点、基本概念及沉淀规律的理解。
2．掌握颗粒自由沉淀实验的方法，并能对实验数据进行分析、整理、计算和绘制颗粒自由沉淀曲线。
原理浓度较稀的、粒状颗粒的沉淀属于自由沉淀，其特点是静沉过程中颗粒互不干扰、等速下沉，其沉速在层流区符合Stokes （斯笃克斯）公式。
但是由于水中颗粒的复杂性，颗粒粒径、颗粒比重很难或无法准确地测定，因而沉淀效果、特性无法通过公式求得而是通过静沉实验确定。
由于自由沉淀时颗粒是等速下沉，下沉速度与沉淀高度无关，因而自由沉淀可在一般沉淀柱内进行，但其直径应足够大，一般应使D ≥100mm 以免颗粒沉淀受柱壁干扰。
具有大小不同颗粒的悬浮物静沉总去除率与截留速度U 。
、颗粒重量百分率的关系如下：⎰+-=00)1(P SdP u u P E (3-1) 此种计算方法也称为悬浮物去除率的累积曲线计算法。
设在一水深为H 的沉淀柱内进行自由沉淀实验，如图3一且示。
实验开始，沉淀时间为0，此时沉淀柱内悬浮物分布是均匀的，即每个断面上颗粒的数量与粒径的组成相同，悬浮物浓度为C 0（mg ／L ），此时去除率E ＝0。
实验开始后，不同沉淀时间I ；，颗粒最小沉淀速度U ；相应为 ii t HU =(3-2) 此即为t i ,时间内从水面下沉到池底（此处为取样点）的最小颗粒d i 所具有的沉速。
此时取 样点处水样悬浮物浓度为C i ，而000011E P C CC C C i i i =-=-=- (3-3) 此时去除率E 0，表示具有沉速u ≥u i (粒径d ≥d i )的颗粒去除率，而 0C C P ii =(3-4) 则反映了t i 时，未被去除之颗粒即d<d i 的颗粒所占的百分比。
水处理生物学-实验指导
二．仪器与材料
1．斜面培养基、分离的菌种
2．接种环、酒精灯、培养箱等
三．实验方法
斜面接种
四
显微镜的使用与微生物染色
一．实验目的
1．学习显微镜的使用 2．学习微生物的染色原理，染色基本操作， 从而掌握细菌染色的一般方法与Gram染色法
二．实验原理
1．为什么染色
2．Gram染色原理
三．仪器与材料
1 显微镜、接种环、酒精灯、 香柏油、擦镜纸、载玻片
2 草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、 蕃红染液 3 菌种
四．实验内容 1．准备
(1) 涂片 (2)干燥 (3) 固定
2．染色
(1) 初染： 草酸铵结晶紫，染色1 min，水洗 (2) 媒染： 碘液冲去残水，并覆盖1 min，水洗 (3) 脱色：95%乙醇， 滴加20~30s 静置35~40s养 皿 的 包 扎
移液管的包扎
(3)试管及锥形瓶的棉塞
(二)培养基的制备
1．配制溶液 ─────── 2．调节pH值 7.4~7.6
3．分装
4．包扎、灭菌
牛肉膏 0.75 g
蛋白胨 2.5 g
NaCl 1.25 g
琼脂 5 g 蒸馏水 250 ml
棉塞的制法
(4) 复染：蕃红染液，染色1 min，水洗
3．镜检
吸掉水份，干燥，置于油镜下观察。 G+：紫色
G-：红色
培养与观察稀释平板分离法倒平板方法倒平板方法几种画线方式几种画线方式平板划线分离法与稀释平板分离法平板划线分离法与稀释平板分离法24h24h培养后培养后四
一
培养基的制备与灭菌
一．实验目的
1．熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作 2．掌握培养基的制备方法 3．掌握高压蒸气灭菌技术
水处理微生物学实验
水处理微生物学实验2022年-5-202022年．10．27 水10―1、2班水处理微生物学实验实验时间安排星期六（2022年、10、27）水1班上午8：30---12：00、水2班下午2：30---6：00. 每班又分为7小组，由班长把名单发到我的邮箱里__）四个实验一起做，动手能力强的可能3个小时就够了，动手弱的要5个多小时或更长，所以选着小组时搭配起来比较好，5人的合作很重要，做完一个实验就要交上实验报告，提前复习填好内容，实验后把图或数字填上才能进行下个实验。
）实验一、普通光学显微镜的使用标本图片、结果：(1)绘图说明你所观察到的菌片的形态特征。
讲解：显微镜的使用。
低倍镜的使用、高倍镜的使用。
实验二、酵母菌的形态观察自制观察标本图片、结果：（1）酵母菌死活细胞的检查讲解：压滴法制片问题：在酵母菌死、活细胞的观察中，使用美蓝染液有何作用？酵母菌和细菌细胞在形态、结构上有何区别？实验三、微生物细胞个数的直接计数法讲解：酵母菌悬液制作方法，血球计数板的使用与清洗，显微镜计数方法、实验报告：（取液5个中方格共有80小方格）。
计数室第一室第二室各中方格中微生物数目1 2 3 4 5 微生物个数/ml 二室平均值实验四、综合实验（无菌材料的灭菌前的准备与包扎、灭菌锅的消毒、样品的稀释液的制备、细菌的革兰氏染色）标本：大肠杆菌涂片→干燥→固定→染色（初染→媒染→脱色→复染）→镜检问题：哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？12022年-5-20水处理微生物学实验-能源与环境学院实验一: 普通光学显微镜的使用方法实验目的：1熟悉光学显微镜基本结构和用途；2掌握低倍镜、高倍镜使用方法;3掌握使用显微镜观察微生物的形态；实验内容：1.光学显微镜的构造（1）、机械系统部分。
（2）、光学系统部分。
（3）、照明系统部分。
2.光学显微镜的使用取镜放镜对光放片调焦(粗调焦和细调焦)。
3.实验器材：1显微镜、2玻片标本、3酵母菌、4．载玻片、盖玻片、擦镜纸、5香柏油、二甲苯、低倍镜的使用：先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
水处理微生物学第六章 废水生物处理中的微生物及水体污染的指示生物-文档资料
4、参与的微生物
细菌 食酚假单胞菌、解酚假单胞菌 甲苯杆菌 放线菌 诺卡氏菌属
五、烃类化合物的分解
1、来源:石油废水
2、分解：好氧 1）烷烃 2）烯烃
六、蛋白质的转化
1、氨化作用
1）蛋白质水解 蛋白质 蛋白酶 肽 肽酶 氨基酸
H2O H2O
2）氨基酸的脱氨基作用
3）产甲烷阶段 两种主要途径 乙酸 H2+ CO2 CH4+ CO2 （72%） CH4+H2O （28%）
参与细菌：产甲烷细菌 （严格厌氧，生长缓慢，对温度和pH值 敏感）
4）同型产乙酸阶段
H2+ CO2
乙酸
参与细菌：同型产乙酸细菌
2、处理构筑物
消化池、上流式厌氧污泥床反应器、厌 氧生物滤池等
3、活性污泥运行中微生物造成的问题
1）不凝聚
2）微小絮体 3）起泡 丝状菌过量生长或反硝化引起
4）丝状菌污泥膨胀及控制
正常污泥：菌胶团细菌和丝状菌，保 持平衡。
丝状菌污泥膨胀：由于丝状微生物过 量生长造成的活性污泥沉降速度慢和结合 不紧的现象。
控制：
a、溶解氧的控制 菌胶团细菌：绝大多数严格好氧。 丝状微生物：微好氧条件也可生长。 所以要保持较高溶解氧，以防丝状菌过量生 长。 b、污泥负荷率的控制 应保持在正常运行范围，过高会带来溶解 氧减少，丝状菌大量繁殖。
自 行 分 解 2NH +CO +H O 3 2 2
参与细菌：总称尿素细菌
第四节 无机元素的转化
一、硫的转化
1、硫化作用
H2S
S
SO42-
参与细菌：硫磺细菌、硫化细菌
2、反硫化作用
水处理微生物学实验讲义(2015)
水处理微生物学实验讲义环境微生物学实验室规则环境微生物学实验的对象大多是微生物，因此必须严格贯彻“无菌观念”，防止实验中自身感染和环境污染是微生物学实验室的最重要原则。
一、每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
二、在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。
三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及身体其他暴露部位。
四、实验时小心仔细，全部操作应严格按照操作规程进行。
如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情况，应立即报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。
五、实验过程中，切勿将乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。
如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。
必要时使用灭火器。
六、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后立即投入已准备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。
七、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。
如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。
八、认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。
九、每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入实验报告，力求简明准确，认真回答思考题，及时上交教师批改。
十、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。
实验一、微生物培养基的制备一、目的要求1、明确培养基的配置原理。
2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。
水处理生物学实验
liuq1217@
实验三
• 实验内容和方法
低倍镜观察：画出微生物形态草图； 低倍镜观察：画出微生物形态草图； 高倍镜观察：画出微生物草图； 高倍镜观察：画出微生物草图； 低倍镜和高倍镜观察时均要记录接目镜和接物 镜放大倍数，并计算显微镜放大倍数。 镜放大倍数，并计算显微镜放大倍数。
liuq1217@
liuq1217@
实验四
• 实验内容和方法
玻璃器皿的洗刷与包装
• •
洗刷 包装（课本P343、344） 包装（课本 、 ）
培养基的制备
liuq1217@
包装
棉塞制作方法
liuq1217@
培养基成分
• • • • •
蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 蒸馏水
2.5g 0.75g 1.25g 2.5~5g 250ml
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草履虫 酵母菌 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌
轮虫
放线菌
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霉菌
钟虫
实验三、池塘水、活性污泥中微生物相观察 实验三、池塘水、 • 实验目的
进一步熟悉和掌握显微镜的使用方法 观察池塘水及活性污泥混合液中不同微生物的 形态，掌握微生物图的绘制方法 形态， 学习压滴法制片技术
• 实验器材
显微镜、擦镜纸、吸水纸、小烧杯、 显微镜、擦镜纸、吸水纸、小烧杯、滴管等 少量池塘水、 少量池塘水、活性污泥混合液
liuq1217@
实验三
• 实验内容和方法
标本的制备（压滴法）：用滴管取池塘水或活性污泥混 标本的制备（压滴法）：用滴管取池塘水或活性污泥混 ）： 合液一小滴，滴在洁净的载玻片中央； 合液一小滴，滴在洁净的载玻片中央；小心地用洗净的 盖玻片覆盖，使其一边先接触试液， 盖玻片覆盖，使其一边先接触试液，然后将整个盖玻片 慢慢放下，注意不要产生气泡。如试液过多， 慢慢放下，注意不要产生气泡。如试液过多，可用吸水 纸适当吸去一部分。 纸适当吸去一部分。
水处理微生物学实验讲义终
实验一水中细菌的分离、培养、鉴定及菌落总数的测定1 培养基的配制及灭菌【目的要求】1．了解培养基的概念、种类及用途2．了解培养基的配制原理及其常规配制程序3．学习和掌握细菌培养基的配制方法。
【基本原理】培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。
不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。
【材料与用品】1．材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl、NaOH溶液（1mol/L）、pH试纸。
一、肉膏蛋白胨培养基的配制1．培养基成分牛肉膏0. 3g蛋白胨1gNaCl 0.5g琼脂 1.5g水100mLpH 7.2~7.42．配制方法（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。
然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。
（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。
（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2~7.4。
（5）分装、加塞、包扎。
（6）高压蒸汽灭菌20分钟。
待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。
【思考题】1.制作平板培养基的注意事项是什么？2.培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌？如不能及时灭菌时，应将培养基暂时放置何处？3.如何检查灭菌后的培养基是否无菌？2 细菌的分离和培养【目的要求】1．掌握细菌稀释分离技术。
水处理微生物学标准实验报告1
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的：1了解光学显微镜的结构、各部分的功能；2掌握光学显微镜的使用、了解油镜的工作原理，并学习其使用、保养方法；3 观察微生物的形态，学会生物图的绘制，养成正确的观察习惯；二、实验基本原理：微生物都很小，须用显微镜放大后才能看到。
观察微生物的一般形态，以普通光学显微镜（常简称为显微镜）最为常用。
普通光学显微镜最大能够将物体放大2000倍左右，通常观察霉菌和酵母菌时，采用100～400倍的放大率，而观察原核微生物，如细菌、放线菌等往往需要放大到900～1500倍左右。
普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分，机械部分包括：镜座（Base）、镜臂（Arm）、镜筒（Tube长度一般为160mm）、镜头转换器（Nosepiece）、载物台（Stage）、粗调焦钮(Coarse adjustment knob)和细调焦钮(Fine adjustment knob)等；光学系统包括采光系统、聚光镜（Condenser）、虹彩光圈（Iris diapHragm附在聚光器上）、接物镜（Objective lens）、接目镜（Eyepiece lens）等。
接物镜常称为镜头，简称物镜，是显微镜中最重要的部分，一般显微镜有3~4和物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。
干燥系物镜包括低倍物镜（4~10x ）和高倍物镜（40~45x ），使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90~100x ）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质。
衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分辨率，显微镜的分辨率（Resolving power ）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力，即分辨出标本上相互接近的两点间的最小距离的能力。
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水处理微生物学实验指导书班级姓名学号市政与环境工程学院年月目录实验一显微镜、测微尺的使用及生物相的观察实验二革兰氏染色技术实验三培养基的配制和灭菌实验四水中细菌总数的测定实验一显微镜、测微尺的使用及生物相的观察一、实验目的与要求（1）了解普通光学显微镜的构造与功能，学习与掌握显微镜观察微生物的方法。
（2）观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会绘制微生物的形态结构图。
二、显微镜的基本结构和功能普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。
（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。
（7）微动螺旋用粗动螺旋只可以粗放的调节焦距，要得到最清晰的物象，需要用微动螺旋做进一步调节。
微动螺旋每转一圈镜筒移动0.1毫米（100微米）。
新近出产的较高档次的显微镜的粗动螺旋和微动螺旋是共轴的。
2、显微镜的光学系统显微镜的光学系统由反光镜，聚光器，接物镜，接目镜等组成，光学系统使物体放大，形成物体放大像。
（1）反光镜较早的普通光学显微镜是用自然光检视物体，在镜座上装有反光镜。
反光镜是由一平面和另一凹面的镜子组成，可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，照明标本。
不用聚光器时用凹面镜，凹面镜能起会聚光线的作用。
用聚光器时，一般都用平面镜。
新近出产的较高档次的显微镜镜座上装有光源，并有电流调节螺旋，可通过调节电流大小调节光照强度。
（2）聚光器聚光器在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。
聚光器可分为明视场聚光器和暗视场聚光器。
普通光学显微镜配置的都是明视场聚光器，明视场聚光器有阿贝聚光器、齐明聚光器和摇出聚光器。
阿贝聚光器在物镜数值孔径高于0.6时会显示出色差和球差。
齐明聚光器对色差、球差和慧差的校正程度很高，是明视场镜检中质量最好的聚光器，但它不适于4倍以下的物镜。
摇出聚光器能将聚光器上透镜从光路中摇出满足低倍物镜（4×）大视场照明的需要。
聚光器安装在载物台下，其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上，以得到最强的照明，使物象获得明亮清晰的效果。
聚光器的高低可以调节，使焦点落在被检物体上，以得到最大亮度。
一般聚光器的焦点在其上方1.25mm处，而其上升限度为载物台平面下方0.1mm。
因此，要求使用的载玻片厚度应在0.8—1.2mm之间，否则被检样品不在焦点上，影响镜检效果。
聚光器前透镜组前面还装有虹彩光圈，它可以开大和缩小，影响着成像的分辨力和反差，若将虹彩光圈开放过大，超过物镜的数值孔径时，便产生光斑；若收缩虹彩光圈过小，分辨力下降，反差增大。
因此，在观察时，通过虹彩光圈的调节再把视场光阑（带有视场光阑的显微镜）开启到视场周缘的外切处，使不在视场内的物体得不到任何光线的照明，以避免散射光的干扰。
（3）物镜安装在镜筒前端转换器上的接物透镜利用光线使被检物体第一次造像，物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影响。
物镜的性能取决于物镜的数值孔径（numerical apeature简写为NA），每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性能越好。
物镜的种类很多，可从不同角度来分类：根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同，可分为：①干燥系物镜以空气为介质，如常用的40×以下的物镜，数值孔径均小于1。
②油浸系物镜常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90×—100×，数值孔值大于1。
根据物镜放大率的高低，可分为：①低倍物镜指1×—6×，NA值为0.04—0.15；②中倍物镜指6×—25×，NA值为0.15— 0.40；③高倍物镜指25×—63×，NA值为0.35—0.95；④油浸物镜指90×—100×，NA值为1.25—1.40。
根据物镜像差校正的程度来分类可分为：①消色差物镜是最常用的物镜，外壳上标有“Ach”字样，该物镜可以除红光和青光形成的色差。
镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。
②复消色差物镜物镜外壳上标有“Apo”字样，除能校正红、蓝、绿三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配合使用。
③特种物镜在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的物镜。
如：带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等。
目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（FL），平场物镜(Plan)，平场复消色差物镜（Plan Apo）,超平场物镜（Splan，超平场复消色差物镜（Splan Apo）等。
（4）目镜目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像映入观察者的眼中。
目镜的结构较物镜简单，普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成，上端的一块透镜称“接目镜”，下端的透镜称“场镜”。
上下透镜之间或在两个透镜的下方，装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”，物镜放大后的中间像就落在视场光阑平面处，所以其上可安置目镜测微尺。
普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜（Huygens eyepiece），如要进行研究用时，一般选用性能更好的目镜，如补偿目镜（K）、平场目镜（P）、广视场目镜（WF）。
照相时选用照相目镜（NFK）。
（二）光学显微镜的成像原理显微镜的放大是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差，影响像质。
由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好。
（三）显微镜的性能显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。
被观察的物体必须放大率高，而且清晰，物体放大后，能否呈现清晰的细微结构，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。
1、数值孔径也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A，在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。
数值孔径和显微镜的各种性能有密切的关系，它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，与镜象亮度的平方根成正比。
数值孔径可用下式表示：式中：n—物镜与标本之间的介质析射率α—物镜的镜口角所谓镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度。
镜口角α总是小于180°。
因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05—0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。
虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。
通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。
几种物质的介质的折射率如下：空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。
2、分辨力D可用下式表示：D=λ/2N.A.可见光的波长为0.4—0.7微米，平均波长为0.55微米。
若用数值孔为0.65的物镜，则D=0.55微米/2×0.65=0.42微米。
这表示被检物体在0.42微米以上时可被观察到，若小于0.42微米就不能视见。
如果使用数值孔径为1.25的物镜，则D=2.20微米。
凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。
由此可见，D值愈小，分辨力愈高，物象愈清楚。
根据上式，可通过：（1）减低波长；（2）增大折射率；（3）加大镜口角来提高分辨力。
紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。
物镜分辨力的高低与造象是否清楚有密切的关系。
目镜没有这种性能。
目镜只放大物镜所造的象。
3、放大率：显微镜放大物体，首先经过物镜第一次放大造象，目镜在明视距离造成第二次放大象。
放大率就是最后的象和原物体两者体积大小之比例。
因此，显微镜的放大率（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积，即：V=V1×V2F1=接物镜焦距，F2=接目镜焦距△=光学筒长，D=明视距离（=250毫米）124、焦深：在显微镜下观察一个标本时，焦点对在某一象面时，物象最清晰，这象面为目的面。
在视野内除目的面外，还能在目的面的上面和下面看见模糊的物象，这两个面之间的距离称为焦深。
物镜的焦深和数值孔径及放大率成反比：即数值孔径和放大率愈大，焦深愈小。
因此调节油镜比调节低倍镜要更加仔细，否则容易使物象滑过而找不到。
三、实验器材1.显微镜、擦镜纸等2.标本片3.香柏油、二甲苯四、显微镜的使用操作及注意事项显微镜结构精密，使用时必须细心，要按下述操作步骤进行。
（一）观察前的准备1、显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。
2、将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。
3、调节光照不带光源的显微镜，可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照，但不能用直射阳光，直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。
将10×物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止。