血液学检验-第六章-造血干细胞移植相关检验技术
《造血干细胞移植》课件
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造血干细胞移植概 述
造血干细胞移植的 过程
造血干细胞移植的 疗效和风险
造血干细胞移植的 未来发展
结论
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造血干细胞移植概 述
造血干细胞移植是一种医疗技术,用于治疗某些血液疾病和免疫系统疾病。
造血干细胞移植包括骨髓移植、外周血干细胞移植和脐带血干细胞移植等。
供体筛选:通过血液检测、体检等确定 供体
供体准备:进行健康教育、心理辅导等
供体采集:进行骨髓或外周血干细胞采 集
供体干细胞处理:进行干细胞分离、纯 化、冷冻等
供体干细胞运输:确保干细胞在运输过 程中的质量和安全
体检:进行全面的身体检查,确保身体状况适合移植 药物治疗:使用免疫抑制剂、抗感染药物等,降低移植后并发症的风险 饮食调整:保持营养均衡,提高免疫力 心理准备:了解移植过程和可能出现的并发症,做好心理准备
造血干细胞的采集:通过骨髓穿刺或外周血采集 造血干细胞的处理:分离、纯化、保存 造血干细胞的输注:通过静脉输注到患者体内 输注后的观察和护理:监测患者反应,预防并发症
定期复查:监测血常规、骨髓象等指标 药物治疗:根据病情需要,使用抗感染、抗排异等药物 生活管理:注意饮食、休息、运动等生活习惯 心理支持:提供心理辅导,帮助患者适应移植后的生活
造血干细胞移植的 未来发展
基因编辑技术: CRISPR-Cas9等基因 编辑技术在造血干细 胞移植中的应用
细胞治疗技术:CART细胞治疗等细胞治 疗技术在造血干细胞 移植中的应用
免疫调节技术:免疫 检查点抑制剂等免疫 调节技术在造血干细 胞移植中的应用
3D打印技术:3D 打印技术在造血干 细胞移植中的应用, 如打印人造器官等
造血干细胞移植 ppt课件
• BMT的意义 • BMT每个入无菌层流室的护理
–无菌层流室的准备:
• 100级空气层流洁净室 • 严格的清洁、消毒和灭菌 • 空气细菌学检测达标
ppt课件
12
护理
• 病人入无菌层流室的护理
–病人的准备
–轻度GVHD:无病生存率 –重度GVHD:无病生存率
• 病人年龄及一般情况
–年龄欲小,疗效愈好
• 预处理方案
ppt课件
6
方法
• 供体的选择
–人白细胞抗原(HLA)配型相和程度 –血缘关系:同基因、异基因 –非血缘关系:HLA相和个数;年轻、男性、 ABO血型相和、CMV阴性
• 供者的准备:
–采集量、采集方法留观 or 住院
• 心理准备
–评估 –帮助提前熟悉环境 –提供相应指导
• 身体准备
–相关检查:组织配型、ABO血型、脏器功能、巨细胞病毒等 –清除潜在感染灶:皮肤粘膜、口腔、五官、肺部等 –肠道和皮肤准备:入室前3天-口服肠道抗生素;入室前1天 -修建指(趾)头、毛发、肚脐;入室当天洗必泰沐浴,穿 无菌衣裤,皮肤细菌培养 –灭菌饮食
造血干细胞移植 (HSCT)
ppt课件
1
教学目标
• 掌握
– – 造血干细胞移植的义 造血干细胞移植后的并发症预防和应对 造血干细胞移植的分类 造血干细胞移植的准备,无菌层流室的护理,输 注的护理 造血干细胞移植的适应症 造血干细胞移植的方法 ppt课件
•
熟悉
– –
•
了解
– –
2
定义
• 造血干细胞移植:hematopoietic stem cell transplantation, HSCT • 通过对受体进行预处理(照射、化疗、 免疫抑制剂),将正常供体或自体造血 干细胞经血管输注给受体,使之重建正 常的造血和免疫功能
检测造血干细胞的功能方法
检测造血干细胞的功能方法
检测造血干细胞功能的方法通常包括以下几个方面的考察:
1.造血干细胞数量检测:通过血液、骨髓或者外周血中的造血干细胞数量来评估造血功能。
这可以通过流式细胞术等技术进行。
2.骨髓活检:通过从骨髓中获取样本进行检查,可以更详细地了解骨髓内的造血情况。
这样的活检通常通过穿刺抽取骨髓样本,然后在实验室中进行分析。
3.造血功能评估:
集落形成单元(CFU)分析:通过培养分离的骨髓或外周血细胞,观察和计数形成的集落单位,评估造血干细胞的增殖和分化能力。
长期培养:将骨髓细胞或外周血细胞进行长期培养,观察干细胞的增殖、分化和自我更新能力。
4.造血功能相关标志物检测:通过检测与造血过程相关的标志物,如造血生长因子、细胞因子等,来评估造血功能状态。
5.基因和染色体分析:检测造血干细胞的基因组和染色体结构,排除或发现可能影响造血功能的遗传因素。
6.移植后追踪:对于进行造血干细胞移植的个体,通过追踪移植后的细胞、观察血细胞再生情况,来评估造血功能的恢复。
这些方法可以单独或者组合使用,根据具体的研究或诊断目的选择相应的检测方法。
检测造血干细胞功能对于了解造血系统的健康状况、诊断相关疾病以及制定治疗方案都具有重要的意义。
造血干细胞移植ppt课件
>1%或CD34+ 计数20×106--40×106开始
29
造血干细胞动员采集
• ㈡外周血造血干细胞采集
• ⒈采集前自体备血800-1000ml 采集时回输 异体血需辐 照加过滤
• 淋巴瘤 HD主张复发或难治者,NHL 中至 重度恶性者,但死亡率偏高。疗效与自体 等同。
16
造血干细胞移植适应证
• 毛细胞白血病 恶组 MM.。 • 地中海贫血 镰状细胞贫血 • PV PNH 主张除非存在严重影响生存质量
的情况下才采取移植,疗效70%。 • 实体瘤。自体较多。
17
造血干细胞移植适应证
23
造血干细胞移植适应证
• 大剂量化疗后和烷化剂治疗者外周动员效 果差
• 小儿肿瘤 由于儿童采髓危险高于成人,更 适合周血采集,但小儿采集后有较长时间 WBC减少。
24
造血干细胞移植适应证
• 特点
• 采集方便,无需麻醉。 • 可以周身各处造血组织采集,因此对骨髓有浸
润或接受放射线照射不能采髓者亦可实行。 • 重建免疫早,植入率高。 • 造血恢复快,wbc>1.0×109/L,plt>20×109/L约
• 1.患者选择 • ①年龄:异体移植50岁以下;自体移植
小于60岁,非清髓性可放宽至65-70岁。 ②对化疗敏感。 • ③心肝肺肾等主要器官功能正常。注:乙 肝非移植禁忌症,但移植前应抗病毒治疗 (贺普汀),糖尿病患者移植需慎重。
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造血干细胞移植适应证
2.供者选择 * HLA相匹配(HLA A、B、DR) * 无传染性疾病 * 年龄无限制,通常<60岁
造血干细胞移植
HSCT或DLI后 症状出现时间
aGVHD 特征
≤ 100天
有
持续性、复发性或迟发性aGVHD
> 100天
有
cGVHD 典型cGVHD 重叠综合征
无时间限制
无
无时间限制
有
cGVHD 特征
无 无
有 有
八、并发症——GVHD
主要影响因素 供受体间组织相容性抗原配型; GVHD预防方案; 预处理方式; 移植物特性; 供受体年龄、性别等; 移植后感染。
肝
血总胆红素 μmol/L(mg/dl)
34~51(2~3)
++
斑丘疹占25~50%体表面积
51~103(3~6)
消化道 (成人每天腹泻量ml)
500~1000 1000~1500
+++ ++++
全身红皮病 水疱和皮肤剥脱
103~257(6~15)
>1500
>257(>15)
严重腹痛和(或)肠梗 阻
谢谢观看!
八、并发症——GVHD
诊断 临床表现:Ⅱ度以上疑似病人应立即干预,不能因等待辅助检查延迟治疗。 病理:特征性的表现主要为细胞凋亡、淋巴细胞浸润、细胞变性。
aGVHD
八、并发症——GVHD
急性移植物抗宿主病时组织器官的受累程度
受累程度 +
皮肤
(体表面积计算按烧伤面积表计 算)
斑丘疹<25%体表面积
二、造血干细胞移植的分类
预处理 免疫抑制
供体 动员,采集
预处理
病人
回输
异体移植
肿瘤细胞
自体移植
三、人白细胞抗原(HLA)配型 4 Mb HLA-A
临床血液学检验技术知到章节答案智慧树2023年山西医科大学汾阳学院
临床血液学检验技术知到章节测试答案智慧树2023年最新山西医科大学汾阳学院绪论单元测试1.首次提出干细胞概念的是细胞生物学家()。
参考答案:Wilson2.血细胞的认识是经过一定的发展历程,从发现的先后顺序为()。
参考答案:红细胞——白细胞——血小板3.以下属于血液学的研究范畴的是()。
参考答案:血细胞形态学;血液免疫学;血细胞生理学;血液遗传学4.临床血液学检验技术是以临床血液病为研究对象。
()参考答案:对5.随着分子生物学技术的发展和在血液学检验的应用,血液系统疾病的诊断及预防由分子水平上升到细胞水平。
()参考答案:错第一章测试1.人类最初的造血中心是()。
参考答案:卵黄囊2.血细胞在胚胎期形成的先后顺序为()。
参考答案:红细胞——粒细胞——巨核细胞——淋巴细胞——单核细胞3.胚胎3-6月体内主要的造血场所是()。
参考答案:肝脏4.出生后正常情况下能唯一产生红系、粒系、巨核系的造血场所是()。
参考答案:骨髓5.T淋巴和B淋巴细胞分化成熟的主要场所是()。
参考答案:脾脏6.脾脏的主要功能是()。
参考答案:滤血;免疫反应;造血;储血7.中枢淋巴器官指的是()。
参考答案:胸腺;骨髓8.黄骨髓是没有造血潜能的。
()参考答案:错9.髓外造血是在病理情况下才会发生。
()参考答案:对10.血细胞发育演变过程中说法正确的是()。
参考答案:核仁由有到无11.使细胞数量显著发生变化的发育阶段是()。
参考答案:增殖12.所有血细胞的来源最早是()。
参考答案:造血干细胞13.下列细胞中属于多倍体细胞的是()。
参考答案:单核细胞14.具有分裂能力的细胞是()。
参考答案:原始粒细胞15.幼稚阶段被划分为早幼、中幼、晚幼三个阶段的细胞是()。
参考答案:粒细胞系;红细胞系16.血细胞分裂的主要形式是有丝分裂。
()参考答案:对17.不属于原癌基因的是()。
参考答案:P5318.原癌基因的主要作用是()。
参考答案:促进细胞增殖19.抑癌基因的主要作用是()。
造血干细胞移植-精品医学课件
异基因HSCT是指供体与受者基因 型不完全相同的HSCT,主要适用 于急性白血病、恶性淋巴瘤、多发 性骨髓瘤等。
移植的适应症与分类
适应症
HSC移植可用于治疗多种血液系统疾病,如恶性血液病、遗 传性疾病、自身免疫性疾病等。其中,恶性血液病是最常见 的适应症之一。
分类
根据供体与受者的关系,HSC移植可分为自体HSCT、同基因 HSCT和异基因HSCT。其中,自体HSCT具有操作简单、免疫 排斥反应低等优点,已成为临床常用的一种移植方式。
基因治疗
针对遗传性疾病和恶性肿瘤的基因缺陷,通过基因编辑技术对HSC进行基因治疗 ,以达到根治疾病的目的。
HSC在再生医学和其他领域的应用前景
再生医学
HSC具有多向分化潜能,可分化为多种细胞类型,为再生医学中组织损伤修复和器官再造等研究领域提供了新的思路。
肿瘤免疫治疗
通过HSC负载肿瘤抗原,刺激免疫反应,提高肿瘤免疫治疗的疗效和降低免疫排斥反应。
02
HSC移植的基本原理和技术
HSC的分离和采集
分离方法
密度梯度离心法、免疫磁珠法、流式细胞术等,根据不同的采集部位和患者 情况选择合适的方法。
采集部位
一般为髂后或髂前上棘,也可以采集外周血。
预处理和照射
预处理
清除患者的免疫细胞,为植入的HSC创造更好的生长环境,常用药物有环磷酰胺 、ATG等。
04
HSC移植的疗效和风险
疗效的评价指标和影响因素
评价指标
主要包括生存率、复发率、移植相关死亡率、移植后并发症 发生率等。
影响因素
主要包括患者的年龄、性别、疾病类型和分期、供者的选择 、HSC来源、预处理方案、GVHD预防和治疗等。
血液学和造血干细胞移植
造血干细胞的存储:在低温下保存,以保持其活性和功能
造血干细胞的分离:使用细胞分离技术,如磁珠分离法或流式细胞术
造血干细胞的采集:通过骨髓穿刺或外周血采集
受体的准备和移植过程
受体的准备:包括体检、心理准备、饮食调整等
移植过程:包括干细胞采集、分离、冷冻、运输等
移植后的护理:包括监测体温、血压、血常规等指标,预防感染等
血液学和造血干细胞移植
汇报人:XX
目录
01
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02
血液学基础
03
造血干细胞移植概述
04
造血干细胞移植的过程
05
造血干细胞移植的效果和影响
06
血液学和造血干细胞移植的未来发展
添加章节标题
PART 01
血液学基础
PART 02
血液组成和功能
血液由血浆、红细胞、白细胞和血小板组成
血浆负责运输营养物质和代谢废物
医疗资源分配:造血干细胞移植需要专业的医疗团队和设备,对医疗资源的分配提出了挑战。
03
04
社会关注度:造血干细胞移植的成功案例引起了社会的广泛关注,提高了公众对血液学和造血干细胞移植的认识。
血液学和造血干细胞移植的未来发展
PART 06
新技术和新方法的研发和应用
01
干细胞治疗:通过干细胞移植治疗血液疾病
移植后的康复:包括饮食调整、心理辅导、康复训练等
移植后的监测和护理
监测:定期检查血常规、生化指标、骨髓穿刺等
心理支持:提供心理辅导,帮助患者适应新环境
药物治疗:根据病情需要,使用抗感染、抗排斥等药物
护理:保持清洁卫生,避免感染,注意饮食营养,适当运动
复查:定期复查,评估移植效果,调整治疗方案
关于造血干细胞的几个概念和常用检测方法
关于造血干细胞的几个概念和常用检测方法造血干细胞的检测方法:由于具有自我更新和多向分化这两个基本特点,所以在判定时必须同时满足这两个条件,需要所用的方法能够同时反映这两个指标。
体内长期多系重建造血研究噬判断造血干细胞最直接、最可靠的方法,对动物较为方便,而对人造血干细胞的研究则在很大程度上需要通过体外测试间接反映。
目前主要通过功能实验来检测造血干细胞。
脾结节形成单位(CFU-S)测定法只适用于啮齿类动物。
是检测小鼠造血干细胞的经典方法。
其测定小鼠造血干细胞在脾脏定居和形成集落的能力。
给受致死剂量照射的小鼠输入同种骨髓细胞,在第8天和第14天计数小鼠脾脏表面的集落。
每一个集落均是由一个造血干细胞增殖分化来的,而且输入的骨髓细胞数与生成的脾结节具有良好的线性关系。
通常第14天的CFU-S比第8天更原始。
长期重建实验和骨髓再植测试长期重建实验(long-term trpopulating/reconstituting assay,LTRA)和骨髓再植测试(marrow repopulating assay,MRA)是将造血干细胞输注给受致死剂量照射的小鼠或SCID小鼠,观察各系的长期造血重建或骨髓再植重建髓系造血的情况。
具有长期多系造血重建能力的细胞成为长期重建细胞LTRC,而具有定居于受照小鼠骨髓并重建髓系造血能力的细胞称为骨髓再植能力细胞,其比LTRC 成熟但早于12天的CFU-S。
有实验证实,LTRC是一种比CFU-S更早的造血干细胞。
由于人的造血干细胞可植入SCID小鼠,所以用SCID小鼠移植通常用来检测人的造血干细胞。
但其对检测人的造血干细胞活性存在一些限制,因这些小鼠在12个月内死亡而是长期观察及次级移植实验有一定难度。
另外,其淋巴器官缺陷,在SCID小鼠体内人造血细胞向淋巴系分化受到影响。
由于这些限制,确切地将这种细胞称为SCID小鼠再植细胞(SCID repopulating cell,SRC)。
造血干细胞移植PPT课件
1965年
有记载的首例骨髓移植成功
1968年
首例儿童严重联合免疫缺陷病移植成功
Wiskott-Aldhch 综合征骨髓移植治疗成功
1969~75年 同卵双生和HLA相合同胞为供体的移植 部分受体长期无病存活
1975年~至今 接受移植的病人增多,移植中心数目增加
自体移植和外周血干细胞移植迅速发展
移植的作用机理
卡氮芥+CY+ VP16 对自体移植有效
BEAM
用于淋巴瘤
非骨髓清除性造血干细胞移植 (NST)
预处理方案 1
Fludara 30mg/m2.d-1 × 6 d BU 4mg/kg. d-1 × 2 d ATG 15mg/kg . d-1 × 4 d 预处理方案 2
TBI 200 cGy + Fludara 30mg/m2. d-1 × 3 d
血缘关系: 血缘性
非血缘性 HLA配型: 全相合移植
半相合移植
组织相容系统
人白细胞抗原系统(HLA)
HLAⅠ
HLA Ⅱ
HLA Ⅲ
HLA — A 、B 、C
HLA—DR、DQ、 DO、DN、DP
HLA Ⅰ和HLA—DR 与移植相关性较大
以糖蛋白形式存在于 所有有核细胞表面
仅存在部分细胞上 主要是抗原递呈细 胞如B细胞、DC等
它主要通过采集经过动员后的外周血中 的造血干/祖细胞作为移植物移植给受者, 使其建立起正常的造血与免疫功能,与 骨髓一样,采集到的外周血中的血细胞 成分包括各类造血祖细胞、各个分化阶 段的血细胞及成熟的血细胞。
外周血造血干细胞的动员
在稳定的造血情况下,人外周血中仅有 少量造血干/祖细胞存在,不能满足 PBSCT的需要,因此,如何增加外周血 造血干/祖细胞数量,即动员出足够数量的 造 血 干 / 祖 细 胞 , 保 证 PBSCT 成 功 、 是 PBSCT技术中的重要环节,也是PBSCT 有别于骨髓移植之处。
临床检验技师-临床血液学检验(2018)讲义第六章血细胞染色体检查的临床应用
第六章血细胞染色体检查的临床应用染色体的基本概念染色体的基本概念1.染色体命名人的体细胞有46条染色体,其中常染色体22对(44条),性染色体1对(XY),男性为46,XY;女性为46,XX。
根据人类细胞遗传学命名的国际体制(SICH),人类46条染色体按其长短和着丝粒的位置编为A~G7组,包括1~22号,以及X和Y染色体;根据显带技术在各号染色体上所显现的带分布特点,将各号染色体划区分布,一般4个符号代表某一特定区带,例如“2p35”则表示2号染色体短臂3区5带。
2.染色体的基本特征染色体是组成细胞核的基本物质。
染色体是生物遗传的物质,是基因的载体,其基本物质是DNA和蛋白质。
在细胞间期核中,它以分子状态的DNA双螺旋散布在细胞核内,在进行有丝分裂和减数分裂的细胞中,形成在光学显微镜下能清楚辨认的染色体。
人类染色体在有丝分裂中期,其基本特征表现得最典型、清晰,因此一般细胞培养观察染色体,皆以分裂中期染色体为准。
3.染色体的结构每条染色体由两条染色单体通过着丝粒相连,从着丝粒到染色体两端之间的部分称为染色体臂。
由于着丝粒的位置不同,分为长臂和短臂,在臂的末端还有端粒,臂上还有次缢痕。
Telomere端粒Centromere着丝粒Region区Band带第 1 页共2 页p短臂q长臂4.核型染色体分析中有个专有名词即核型,核型是指用显微摄影的方法得到的单个细胞中所有染色体的形态特点和数目,它代表该个体的一切细胞的染色体组成。
人类染色体的正常核型中共有23对染色体,其中22对染色体是男女共有的,叫常染色体,另一对染色体因男女性别而异,叫性染色体,女性为XX,男性为XY。
女性的核型为46,XX,男性的核型为46,XY。
5.核型书写核型书写有统一格式,其书写顺序为染色体数目、性染色体、各确定的染色体异常。
各项之间以逗号隔开,性染色体以大写的X与Y表示,各具体的染色体变异以小写字母表示,如t表示易位;inv表示倒位;iso表示等臂染色体;ins表示插入;-表示丢失;+表示增加等。
血液学课件 干细胞移植
移植分为:器官移植和造血干细胞移植
造血干细胞移植的基本原理
造血干细胞移植(Hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是从供者体内取出一定的HSC 作为移植物,用预处理方案清除受者有病的造血和免疫 系统,然后将供者的HSC移植到受者体内,重建受者的造 血和免疫系统的一种方法。
B5
B7 B8
CW1 CW2 CW3
A1
A2 A3
分布在B细胞.Mφ等 抗原提呈细胞表面
分布在有核细胞表面
人类主要组织相容性抗原的多态性
图中数字为等位 基因数
72
71
51
41
27
20 7 10
1
B C A
DPβ DPα DQβ DQα DRβ DRα
MHC Class II
MHC Class I
相关定义:
部分配合
a
c
造血干细胞移植的分类
骨髓移植
一、按造血干细胞来源 外周血造血干细胞移植 胎肝细胞移植
脐带血移植。 二、按造血干细胞供体与宿主的关系 自体造血干细胞移植 同胞或亲属间的造血干细胞移植。 异体造血干细胞移植 无关(无缘)供体的造血干细胞移植 三、按供受体间HLA相关性 HLA全相合 HLA不相合
脐带血采集
脐带血分离
脐带血红细胞 去除 脐带血程序 冻存 HLA配型
造血干细胞移植的分类
骨髓移植
一、按造血干细胞来源 外周血造血干细胞移植 胎肝细胞移植
脐带血移植 二、按造血干细胞供体与宿主的关系 自体造血干细胞移植 同胞或亲属间 异体造血干细胞移植 无关(无缘)供体 三、按供受体间HLA相关性 HLA全相合 HLA不相合, HLA单倍型相合
临床血液学检验-1-7-造血检验基本方法4其它检验技术
8
【问题】
1.
为什么要分离出单个核细胞
造血祖细胞是单个核细胞,形似淋巴细胞
2.
怎样分离单个核细胞
细胞分离技术:单个核细胞分离技术
3.
细胞培养体系应含有哪些基本成份
支持物质、营养物质、造血生长因子
4.
各系祖细胞培养主要需要哪些造血生成因子
9
单个核细胞(MNC)
EPO(红细胞生成素) GM-CSF(粒单核细胞集落刺激因子) 体外 红系祖细胞 (BFU-E、CFU-E)
5
红系祖细胞培养
红系祖细胞培养包括早期红 系祖细胞(BFU-E)和晚期红 系祖细胞(CFU-E)。在培养 体系中以甲基纤维素为支持 物,在适量HGFs刺激下,使 骨髓中造血干/祖细胞形成 BFU-E 和CFU-E,CFU-E的集落 培养所用HGFs主要为EPO, BFU-E的集落培养主要联合应 用EPO、IL-3。
15
图 细胞分裂周期示意图
16
分裂前期
分裂中期
分裂中期
分裂后期
分裂末期
分裂末期
17
图 有丝分裂中期细胞
18
19
图 中期染色体
20
图 染色体的分组示意图
21
2.
染色体显带技术
显带染色体:染色体经过某种特殊处理后,其上可显 示出一系列连续的明暗条纹,称显带染色体 喹吖因染色法(Q带)
Giemsa法(G带)
3.
造血系统其他疾病的研究:PNH、血小板疾病等
13
六、血细胞染色体检验(细胞遗传学检验)
(一)常用染色体检验技术
1.
染色体标本制备
①
②
直接法
培养法:短期培养法
1327.3干细胞移植临床免疫学检验技术
造血干细胞
标记:CD34+ 多能造血干细胞:CD34+CD38 定向干细胞:CD34+CD38+
造血干细胞分布
骨髓:1%-4% 外周血:0.01%-0.1% 脐血:免疫原性弱,来源广泛,易制备
中国脐血库分布
脐血库(Cord Blood Bank)、脐血银行、生命银行
脐带血造血干细胞库的简称 用来保存新生儿的脐带血 主要是保存其中丰富的造血干细胞,可为需要造血干细胞移植的
定义
干细胞移植就是把健康的干细胞移植到患者体 内,以达到修复或替换受损细胞或组织,从而 达到治愈的目的。
骨髓移植
本质是造血干细胞移植 分类:
自体骨髓移植 同基因骨髓移植 同种异基因骨髓移植
骨髓移植相关检测
移植前 红细胞血型的配型 HLA配型
移植后 皮疹活检 血清总胆红素测定 判断是否有移植物抗宿主反应发生 直接胆红素测定 腹泻症状 血常规:判定患者造血功能是否恢复,以此来推 断移植是否成功。
患者储
ABO血型配型 HLA血型配型 血常规和骨髓检验 性染色体测定 造血干细胞鉴定 移植物抗宿主反应征象追踪,等。
造血干细胞移植
供→受者移植模式包括:B→A 和 A→B
ABO血型不合造血干细胞移植(HSCT)的分类
血型不合类型 主侧不合
受者血型 O
供者血型 A/B/AB
次侧不合
主次侧均不合
A B A B AB A B
AB AB O O A/B/O B A
ABO血型不合造血干细胞移植(HSCT)中存在的潜在问题
ABO不相合的类 型 供者 ABO主侧不合 A
举例 受者 O
潜在的问题
受者体内存在针对供者红细 胞抗原的抗-A,使来源于供 者干细胞中的红细胞溶血 供者体内存在针对受者红细 胞抗原的抗-A,因而供者骨 髓中或移植后产生的抗-A导 致受者红细胞溶血
ABO次侧不合
O
A
六、ABO血型不合造血干细胞移 植的输血治疗
由于供者血清中具有与受者红细胞起反应的抗体
移植期宜选择与供者血型相同的洗涤红细胞输注, 选择与受者ABO血型相同的血浆和单采血小板输注 移植后输注红细胞宜选择供者血型或O型红细胞,输 注血小板宜选择受者血型或AB型血小板,直到受者
血型红细胞不能测出为止
主、次侧血型均不合HSCT输血治疗的血型选择
• 准备HSCT患者,移植前尽量避免输血,输血经辐照、白细
胞过滤
五、ABO血型不合造血干细胞移植(HSCT)
供受者之间HLA配型要求严格,HLA相合者ABO血
型不一定相合
HLA基因与血型基因属于独立遗传基因
- HLA基因位于6号染色体
- ABO血型基因位于9号染色体
红细胞血型不合不是造血干细胞移植(HSCT)的
造血干细胞移植(HSCT)
造血干细胞移植(HSCT)患者在造血功能恢复
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二、嵌合体检验
3. 高效液相色谱(high performance liquidchromatography,HPLC)
是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交 换过程,它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附能力、 离子交换或分子大小不同引起的排阻作用的差别使不同溶质 进行分离。HPLC对PCR产物的定量检测具有高敏感性、高准 确性、高重复性以及快速、无污染的优势,与STR技术的结 合势必为移植后植入证据的检测开辟一个新的领域。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
一、植入状态的检验
3. 血清免疫球蛋白谱 由于免疫球蛋白多肽链上氨基酸的 不同,各类及各型Ig表现出不同的抗原特异性。Ig的抗原决 定簇是由遗传决定的,表现出同种异型,具有遗传多态性。 Ig重链同种异型表现在IgG、IgA和IgE 3类免疫球蛋白上, 轻链的同种异型表现在J链上。为了排除由于输血带来的外 源性Ig的影响,对免疫球蛋白的同种异型分析通常在最近一 次输血100天后进行。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
一、植入状态的检验
4.性染色体核型分析 人类体细胞第23对染色体(性染色 体)在女性为XX,男性为XY,利用这一差别可区分当供、 受者性别不同时HSC植入状态。用常规染色体核型分析检测 受者的骨髓或外周血的有核细胞时,若发现女性受者的性 染色体核型变为XY或男性受者的性染色体核型变为XX,则 表明供者的HSC已植入。但该方法的敏感性较低,大约为1% ~10%。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
第一节 造血干细胞的采集与计数
第 第一 六章 章 造 造血血及干造细血胞调移控植 相关检验技术
第一节 造血器官与造血微环境 第二节 造血干细胞植入效果的检验
新乡医学院 牛新清
目录
一、植入状态的检验 二、嵌合体检验
一、植入状态的检验
1. 红细胞血型 用该方法判断植入是否成功的原理是在红 细胞血型系统中,供者与受者的血型不同。移植后若受者 表现为供者的血型,与供者的交叉配血实验无反应,则表 明allo-HSC已植入。常用的血型系统为ABO血型系统,但也 可以利用其他血型系统来识别供、受者间的差异。该方法 是一种定性方法,移植后入状况检测。
临床血液学检验技术
第 第一 六章 章 造 造血血及干造细血胞调移控植 相关检验技术
第第一一节节造造血血干器细官胞与的造采血集微与环计境数
新乡医学院 牛新清
目录
一、外周血造血干细胞动员与采集 二、造血干细胞计数
第一节 造血干细胞的采集与计数
概述
造血干细胞移植(hemapoietic stem cell transplantation, HSCT)就是将供者的造血干细胞取 出体外作为移植物(graft),然后回输移植给经过预处 理的受者,重建受者造血和免疫系统的过程。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
一、植入状态的检验
5.HLA抗原 HLA遗传区域是人体的主要组织相容性复合 体(major histocompatibility complex,MHC),它位 于人类第6号染色体短臂上,包含着已发现的HLA-A、B、 C、D、DR、DQ和DP等7个座位,可产生上亿种表型。移植 后如果受者在移植前与供者不相同的某一HLA位点转换为 与供者相同,则表明成功植入。
按供受者之间人类白细胞抗原(HLA)相配程度又可分为: HLA相配移植(HLA-matched transplantation) HLA半相合移(haploidentical Transplantation) HLA不配移植(HLA-mismatched transplantation)
第一节 造血干细胞的采集与计数
(3)它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附能力、离子 交换或分子大小不同引起的排阻作用的差别使不同溶质进 行分离。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
二、嵌合体检验
2. VNTR、STR和VNTR/STR-PCR (1)在检测嵌合体的各种方法中可变数目串联重复(variable number tandem repeats,VNTR)尤其适用于早期检测,其变 化所致的DNA多态性可用人工合成的寡核苷酸探针检测。当结 合Southern印迹分析时,即使目标DNA仅占DNA总量的1%~2% 时,寡核苷酸探针仍可检测出混合嵌合体。
第一节 造血干细胞的采集与计数
二、造血干细胞计数
如果需要计数CD34+细胞的绝对数量,只需要在标本中加入已知 数量的荧光微球,按照公式计算CD34+细胞的绝对数 (获取CD34+细胞数/获取微球数)×(每管内微球数/标本体积)。
第一节 造血干细胞的采集与计数
第一节 造血干细胞的采集与计数
临床血液学检验技术
(1)RFLP是一种非常有效的区别供者和受者DNA多态性的方法。 RFLP可通过失去或获得限制酶作用位点,或通过在限制部位插 入或造成DNA的缺失而产生,前者通常为2个等位基因的多态性,
而后者则为多个等位基因多态性。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
二、嵌合体检验
(2)用特异探针区别供者和受者独特的等位基因,经 Southern杂交显示出DNA“指纹图谱”,利用供、受者之 间指纹图谱的差异判断是否植入。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
二、嵌合体检验
在造血干细胞移植中,造血嵌合体是指供体来源的造 血细胞部分或完全植入到受体体内形成的两种不同来源的 细胞混合物。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
二、嵌合体检验
1.限制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)
第一节 造血干细胞的采集与计数
二、造血干细胞计数
目前,常用国际血液治疗与移植工程学会 (International Society of Hematotherapy and Graft Engineering,ISHAGE)方案计数CD34+细胞百分率。 ISHAGE方案主要内容包括: (1)使用4个参数:CD34-PE(HPCA-2-PE)、CD45-FITC、SSC\FSC; (2)采用一套累积设门法分析CD34+细胞; (3)获取至少75000个CD45+细胞及100个CD34+细胞; (4)以CD45+白细胞为分母计数CD34+细胞百分率。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
一、植入状态的检验
2.红细胞同工酶谱 红细胞同工酶有遗传多态性,可以用于区分 供者和受者的造血干细胞移植状态。应用前提为供、受者红细胞 同工酶的表型不同。该技术的基本原理是将电泳技术与酶显色方 法结合起来,根据酶蛋白分子的大小和所带电荷的不同,通过电 泳使之分离。然后利用酶的特异催化活性,作用于底物而显色。 根据各种同工酶特有的谱型(谱带的位置、数目、泳动速度、活 性强弱等)可判别同工酶的型别。该方法敏感性较红细胞血型法 高,但仍只能分析红细胞系统的植入状态,常需分析多个同工酶 谱以找到供受者间差异。该方法易受输血情况影响。
一、外周血造血干细胞动员与采集
1.造血干细胞动员 造血干细胞动员是指将造血干/祖细胞从骨髓中动员到外 周血的过程。动员方法包括应用造血生长因子、骨髓抑制性 化疗,以及骨髓抑制性化疗加造血生长因子。
第一节 造血干细胞的采集与计数
一、外周血造血干细胞动员与采集
2.外周血干细胞的采集和保存 (1) PBSC采集:采用全自动血细胞分离机连续分离外周血中单 个核细胞。成人PBSC单采时血液流速一般为50~70ml/min,循 环总量为10~15L(2~3倍自身血液容量)。 (2)PBSC处理:每次采集PBSC的总体积为150~400ml,循环血 量15L时采集的有核细胞数约为(10~80)×109个,其中90% 以上为单个核细胞,CD34+细胞占0.1%~5.0%,还有少量分叶 核细胞、红细胞,红细胞含量一般不超过15ml;肿瘤患者的自 体PBSC中,还可能混有少量肿瘤细胞。
根据造血干细胞来源的组织和器官不同,HSCT可分为: 脐血移植 (CBT) 骨髓移植(BMT) 外周造血干细胞移植(PBSC)。
第一节 造血干细胞的采集与计数
概述
根据造血干细胞的供体,HSCT 可分为: 自体(Auto-)移植 同种同基因(Syn-)移植 同种异基因(Allo)移植: 血缘供者(sibling donor)移植 非血缘供者(unrelated donor)移植
第二节 造血干细胞植入效果的检验
本章小结
造血干细胞移植植入证据的检测已经成为移植后常规检查 项目。植入证据的检测方法多种多样,不同检测方法各有其特 点。红细胞血型,性染色体核型分析因其简便可靠将仍具有独 特的应用价值;VNTR和STR因其呈高度多态性,可提供信息量大 ,已成为目前广泛应用的移植后植入证据的检测方法;DNA定量 分析鉴定嵌合体对于一些具有探索性的新移植技术,如去除T细 胞的移植、非清髓性干细胞移植等具有特别重要的作用。
第二节 造血干细胞植入效果的检验
二、嵌合体检验
(2)短片段串联重复(short tandem repeats,STR),也 称微卫星标记,具有高度多态性及个体特异性。STR基因分 型技术已广泛应用于人类学、遗传学、亲子鉴定和法医个 体识别等研究领域,可准确判定性别、血型、HLA全相合时 的异基因造血干细胞移植是否存活。