高效液相色谱法测定乳酸菌中的_氨基丁酸
γ-氨基丁酸的高效液相色谱测定法
二、γ-氨基丁酸的高效液相色谱测定法本方法适用于保健食品中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid）的测定。
本方法γ-氨基丁酸的检出限为10ng。
1.方法提要γ-氨基丁酸用异硫氰酸苯酯柱前衍生，衍生物采用氨基酸分析柱分离，二元流动相梯度洗脱，248nm波长下紫外检测器检测，以保留时间定性，以峰面积外标法定量。
2.仪器（1）高效液相色谱仪，配紫外检测器。
（2）旋涡混合器3.试剂本方法除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
（1）乙腈：色谱纯。
（2）异硫氰酸苯酯乙腈溶液：吸取0.5mL异硫氰酸苯酯，加入40mL乙腈溶解。
（3）盐酸溶液（0.1mol/L）：取分析纯浓盐酸8.3mL，加水稀释至1L。
（4）三乙胺-乙腈溶液：15mL三乙胺与85mL乙腈混合而成。
（5）γ-氨基丁酸标准品：纯度99.9%，Sigma公司。
（6）γ-氨基丁酸标准溶液：精确称取γ-氨基丁酸10mg，置于10mL容量瓶中，加0.1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为1mg/mL的标准储备溶液。
将此标准储备液用0.1mol/L盐酸溶液稀释成浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL的标准溶液系列。
（7）醋酸钠溶液：0.05mol/L，用作流动相A。
（8）乙腈-水溶液：乙腈-水（80+20），用作流动相B。
（9）正己烷。
4．测定步骤（1）供试样品溶液的制备1）提取：称取适量样品(相当于γ-氨基丁酸4mg，精密至0.001g)，置于100mL三角烧瓶中，加入盐酸溶液(0.1mol/L)适量，40℃超声提取20min，冷却，转移至100mL容量瓶，加盐酸溶液(0.1mol/L)至刻度，摇匀，静置，取适量过滤，得样品提取液。
2）衍生化：取样品提取液0.2mL，置于5mL具塞试管中，加异硫氰酸苯酯-乙腈溶液0.4mL，再加三乙胺-乙腈溶液1.4mL，摇匀，放置1小时，然后加入正己烷2mL，漩涡混合1min，静置，取下层液体作为待测溶液。
2.γ-氨基丁酸(GABA)的分布及测定方法
γ-氨基丁酸（GABA）的分布及测定方法周青生物化工2110805057一、分布：γ-氨基丁酸在动、植物体内都有分布，在动物体内，GABA主要分布于神经组织中，在哺乳动物的脑组织内分布最为集中，其含量是单胺类含量的1000倍，而在外围器官中含量很少。
在植物体内，GABA是细胞自由氨基酸库的重要组分，胞液中有几种构型，可形成类似脯氨酸的环状结构。
高等植物组织中GABA含量通常在0.3～32.5μmol／g之间，超过许多蛋白质类氨基酸的含量。
在一些与根瘤菌共生固氮植物的根瘤中，GABA以结合态形式存在，苜蓿中结合态形式的GABA高达干重的6.6%[1]。
除此之外，GABA还存在于以下植物中，见表一。
①薄层色谱：原理：用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测其浓度。
方法：展开剂是正丁醇：醋酸：水=4：1：1。
分别吸取5μl γ-氨基丁酸标准品溶液和样品洗脱液，点于自制的硅胶薄层板上，以正丁醇：醋酸：水体积比为4：1：1为展开剂展开，取出晾干，用体积分数0.2％茚三酮乙醇溶液显色，105℃烘数分钟，直至获最大斑点，用Camag TLC scanner 3 扫描仪扫描。
扫描条件为：反射式双波长锯齿扫描,扫描波长λS=515nm,参比波长λR=680nm，狭缝50×0.45 mm。
黄怀生用最小二乘法对标准溶液点样量和色谱峰面积值进行回归分析，其相关系数可达到0.99以上[14]。
黄美娥[15]用此方法测得得蕨菜叶、茎中γ-氨基丁酸的质量分数分别为0.319％、0．141％。
采用双波长扫描法[16]，可以避免分离度不佳的其他氨基酸的相互干扰；二、双波长扫描可以排除背景干扰使基线平直；三、能提高灵敏度。
②纸电泳法：原理：纸上电泳法，以纸为支持剂，使带电的γ-氨基丁酸于纸上在外电场作用下定向移动，从而达到分离目的。
方法：取上清液用于点样于滤纸上，以标准GABA溶液做对照，在电压300V、室温条件下电泳60min，电泳缓冲液为吡啶-冰醋酸混合溶液[吡啶：冰醋酸：蒸馏水(体积比)=2：2：121，pH4.7]。
一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法[发明专利]
![一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/24ebff71a9956bec0975f46527d3240c8447a117.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910835848.9(22)申请日 2019.09.05(71)申请人 广东乐尔康生物科技股份有限公司地址 515342 广东省揭阳市普宁市梅塘镇远光村04610038地号(72)发明人 周银泉 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限公司 44102代理人 林晓霖 陈伟贤(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/36(2006.01)G01N 30/86(2006.01)(54)发明名称一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法(57)摘要本发明公开一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，色谱条件与系统适用性实验如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：0.2-0.5%三乙胺水溶液；检测波长：205-211nm；流动相流速：0.3～0.7mL/min；理论塔板数按γ-氨基丁酸计算不低于5000。
本发明采用高效液相色谱直接进样，紫外检测器检测，不需要柱前衍生，达到快速检测的目的，又能够排除反应液中其它杂质(氨基酸)的干扰，可满足γ-氨基丁酸生产中快速检测的需要。
权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 112444573 A 2021.03.05C N 112444573A1.一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，色谱条件与系统适用性实验如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：0.2-0.5%三乙胺水溶液；检测波长：205-211nm；流动相流速：0.3～0.7mL/min；理论塔板数按γ-氨基丁酸计算不低于5000。
2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述三乙胺水溶液浓度为0.3%。
3.根据权利要求1所述的一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述检测波长为210nm。
产_氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定_李海星
天然产物研究与开发Nat Prod Res D ev 2007,19:455-457,510文章编号:1001-6880(2007)03-0455-04收稿日期:2006-06-20 接受日期:2006-12-15基金项目:江西省教育厅项目(赣教技字[2006]106号)*通讯作者Te:l 86-791-8327754;E-m ai:l yyss ccc @hot m ai .l co m产C - 氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定李海星1,江英英1,曹郁生1,2*1南昌大学中德联合研究院;2食品科学教育部重点实验室,南昌330047摘 要:C -氨基丁酸是哺乳动物体内的一种抑制性神经递质,具有许多重要的生理功能。
利用M RS 培养基从自然生境中分离了1000余株细菌,经纸层析和HPLC 检测,发现其中一株能转化谷氨酸钠生成GABA,产量为4184g /L ;转化产物通过HPLC -M S 得到了证实。
通过形态特征和生化特性鉴定,初步判断该菌为乳酸菌。
关键词:C -氨基丁酸;谷氨酸脱羧酶;乳酸菌;筛选;鉴定中图分类号:Q 939.97文献标识码:AScreeni ng of GABA -produci ng Lactic A ci d Bacteri aand Its Preli m i nary IdentificationLI H a-i x i n g 1,JI ANG Y ing -y i n g 1,CAO Yu -sheng1,2*1J iangx i -OA I Jo int Research Instit ute ;2The K ey Laboratory of Food Science of M OE,N anc hang Universit y,N anchang 330047,Ch i naAbstract :C -Am i nobut y ric ac i d (GABA )is a m a j or i nhi b itory neuro trans m itter i n m a mma ls and has m any physi o log i ca l functi ons .A bou t 1000cultures w ere iso lated and pur ified fro m nat u ra l env iron m ents w ith MR S m edia .Am ong t he m,one stra i n can conv ert g l uta m a te i nto GA BA by screen i ng o f paper ch ro m a t og raphy and HPLC .The product was ver ifi ed by HPLC -M S .T he GABA y i e l d o f the stra i n w as 4.84g /L .T he stra i n w as pre li m i nar illy identifi ed as lactic ac i d bacter i a by m orpho logy and so m e bioche m ica l character istics .K ey word s :C -am inobuty ric acid ;g l uta m ate decarboxy lase ;l actic ac i d bacter i a ;sc reeni ng ;identifi cation谷氨酸脱羧酶(G l u ta m ate decar boxylase ,GAD,EC4.1.1.15)是一种吡哆醛类裂解酶,能专一地催化L-谷氨酸生成C -氨基丁酸(C -Am i n obutyric acid ,GAB A ),同时放出CO 2。
产_氨基丁酸的乳酸菌株筛选及诱变_夏江
文章编号:1000-8551(2006)05-379-04产γ-氨基丁酸的乳酸菌株筛选及诱变夏 江1 梅乐和1 黄 俊1 盛 清2 许 静3 吴 晖3(1.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027;2.浙江理工大学生命科学学院,浙江杭州,310018;3.中美华东制药有限公司,浙江杭州310011)摘 要:γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid ,GABA )是中枢神经系统一种重要的抑制性神经递质。
本研究从鲜奶中分离得到1株高产GAB A 的乳酸菌株hjxj -01,经初步鉴定为短乳杆菌。
实验结果表明,在含5%的L -谷氨酸钠的GYP 培养基中,此乳酸菌产GAB A 最大积累浓度为7g L 。
在此基础上,又先后使用了紫外线和γ射线对出发菌株进行了诱变处理。
以正突变率为标准确定诱变条件。
30W 的紫外灯下,距离45cm 照射及照射时间50s 为紫外线诱变的较佳条件;60Co 射线诱变的适宜剂量为300Gy 。
诱变后得到1株突变菌株hjxj -08119,经连续传代12次,遗传性状稳定,平均GAB A 产量达到17g L ,较出发菌株hjxj -01提高142.9%。
关键词:γ-氨基丁酸;诱变;60Coγ射线;紫外线照射SCREENING AND M UTAG ENESIS OF Lactobacillus brevis FORBIOSYNTHESIS OF γ-AMINOBUTYRIC ACIDXIA Jiang 1 MEI Le -He 1 HUANG Jun 1 SHENG Qing 2 XU Jing 3 W U Hui3(1.De partment of Chemical and Bioc he mical Enginee ring ,Zhejiang Univ ersity ,Hangzhou ,Zhejiang 310027;2.Coll ege of Life Science ,Zhe jiang Sci &Tec h Unive rsit y ,Hangzhou ,Zhejiang 310018;3.East -China Pharmac eutical Company ,Hangzhou ,Zhejiang 310011)A bstract :γ-a minobutyric acid (GAB A )is a major inhibitor y neurotransmitter in the central ner vous system .In this study ,a GABA -producing strain ,hjxj -01,was isolated from the milk sa mples and identified as Lactobacillus brevis .In the GYP medium containing sodium glutamate ,the highest GABA concentration accumulated by Lactobacillus brevis hjxj -01is 7g L .The strain was treated with UV and 60Co γ-rays .Based on high positive mutation rate ,the final mutagenesis conditions were UV light 30W ,irradiation distance 45cm ,irradiation time 50s ,and 60Co γ-rays irradiation of 500Gy .The mutant strain ,hjxj -08119,was bred by GAB A resistance selection .Cultured for 12generations continually ,the GAB A -producing capacity of hjxj -08119maintained stably .The fermentation results indicate that compared with the origin strain hjxj -01,the average yield of GABA by hjij -08119is 17g L ,which is 142.9%of the origin strain .Key words :γ-aminobutyric acid ;mutagenesis ;60Co γ-irradiation ;UV irradiation 收稿日期:2005-12-19基金项目:国家自然科学基金(30570411)、浙江省科技攻关项目、教育部和浙江省回国人员基金资助项目作者简介:夏江(1980-),男,浙江金华人,硕士,从事生物化工方面研究,Email :wos hixiajiang974@ 。
乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定
102 I FOOD INDUSTRY I 乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定文 陈盛上海必诺检测技术服务有限公司入400mL 4mol 钾/钠醋酸缓冲液混合均匀，定容至1L 储备液待用；最后向溶液中加入还原剂，充入氮气2分钟。
清洗溶液：600mL 异丙醇与400mL 去离子水混合。
1.2标准溶液配制 标准品 ：γ-氨基丁酸标准品，天津埃尔塔公司。
标准储备液：分别称取 0.0100g 标准品（4.3）置于10.0mL 棕色容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，标准储备液浓度为1.0mg/mL ，4ºC 冰箱中保存，有效期3个月。
标准工作液：分别取各标准储备液（4.4.1）1.0mL 至10.0mL 棕色容量瓶中，用水定容至刻度，此标准工作液浓度为100μg/mL ，4ºC 冰箱中保存，有效期1个月。
1.3仪器和设备氨基酸分析仪：赛卡姆（北京）科学仪器有限公司。
电子天平：BP211D ，Sartorius 公司。
漩涡混合器——TALBOYS （上海安谱科学仪器有限公司）；氮吹仪（上海安谱科学仪器有限公司）；鼓风干燥箱（上海安谱科学仪器有限公司）。
1.4分析步骤1.4.1样品前处理称取试样1g （精确到0.0001g ）置于水解瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸溶液（1.2.1），并加入3-4滴苯酚。
将水解瓶放入冰箱冷冻室内，冷冻约3min-5min 后，抽真空后充入氮气（重复抽真空-充入氮气3次），在充氮气状态下拧紧螺丝盖。
将水解瓶置于110℃±1℃的鼓风干燥箱内，水解22hγ-氨基丁酸（γ-a m i n o b u t y r i cacid ，GABA ）是中枢神经系统中非常重要的活性物质，具有多种生理功能。
γ-氨基丁酸是中枢神经系统的一种抑制性神经递质，在调节神经元兴奋度上起着重要作用，具有安神、降血压、改善肝肾功能、促进睡眠、缓解焦虑、抗抑郁等多种生理功效。
现有的食品中，γ-氨基丁酸检测的手段主要有酶法、比色法、液相色谱法及液相色谱-串联质谱法。
_氨基丁酸测定方法的研究
２ 结果与讨论
２．１ ＨＰ ＬＣ 法测定 ＧＡＢＡ
ＧＡＢＡ 的 ＰＩＴＣ 衍生物进行紫外扫描［１２］， 在２５４ｎｍ 处 有 最 大 吸 收 波 长 。ＧＡＢＡ 标 样 和 乳 酸 菌 发 酵 液 经 ＰＩＴＣ 柱前衍生后在 ２５４ｎｍ 的图谱分别见下图 １、图 ２。
３０
２５
２０
１５
１０
５
１０
１５
图 １ ＧＡＢＡ 标样的 ＨＰＬＣ 图
茚三酮浓度（ ％）
Ａ５２０
０．１
０．２４４
０．２
０．２８０
０．３
０．３００
０．４
０．３５８
０．５
０．３６０
０．６
０．３６１
０
５
１０
１５
图 ２ 样品中 ＧＡＢＡ 的 ＨＰＬＣ 图
２３６ ２００７ 年第 ０５ 期
２．２．２ 显色温度和时间的选择 为了定量的准确性和 重现性， 减少操作引起的误差， 应将显色温度和洗脱
近 年 来 ， ＧＡＢＡ 在 食 品 中 的 应 用 研 究 正 在 掀 起 ， 而食品中 ＧＡＢＡ 的测定方法的报道尚不多见。由于 ＧＡＢＡ 对电 化 学 和 紫 外 、可 见 光 的 不 灵 敏 性 ， 导 致 用 直接方法对它进行测定比较困难。关于 ＧＡＢＡ 的测 定 近 年 来 国 内 外 有 氨 基 酸 分 析 仪 测 定 、酶 法［１］、色 质
产_氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化_王兴洁
MＲS 平板， 37 ℃ 培养 48 h。挑选溶钙圈明显的菌落， 多次划 线纯化， 对其进行接触酶试验与革兰氏染色， 将接触酶阴性 且革兰氏阳性的菌株接种于斜面培养后于 4 ℃ 冰箱中保存。 1． 2． 2 高产 GABA 乳酸菌的筛选 于斜面上挑取 2 环菌体 37 ℃ 培养 24 h 进行活化［13］ 。 于 5 mL 液体 MＲS 培养基中， 再按 2 mL /100 mL 接种于 100 mL MＲS 培养基（ Glu 浓度为 10 g / L） ， 30 ℃ 发酵 3 d； 以添加等量无菌生理盐水为空白对 12 000 r / min 离心15 min， 照。取 2． 0 mL 发酵液煮沸 5 min， 取上清液用甲醇定容至 2． 0 mL， 经纸层析定性与高效液相色 谱（ HPLC） 定量测定后选择高产 GABA 的菌株。 1． 2． 3 GABA 定性分析 展开剂组成： 冰醋酸 水 正丁 醇体积比为 1 2 2 ， 并添加 0． 4 g /100 mL 茚三酮。层析纸 经点样后在展开剂中层析 1 h， 层析完成后将层析纸置于 90 ℃ 显色 10 min。以 GABA 和 Glu 标准品以及无菌 MＲS 培养 基作对照， 根据标准品 Ｒf 值来进行定性判断 1． 2． 4 GABA 定量分析
第 32 卷第 7 期 2016 年7 月
DOI： 10． 13652 / j． issn． 1003 － 5788． 2016． 07． 010
Vol ． 32 ， No ． 7 Jul ． 2 0 1 6
产 γ- 氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化
Isolation and identification of lactic acid bacteria producing γ aminobutyric acid and optimization of fermentation conditions 王兴洁
高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸的含量
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｙ ａ ｍｉ ｎ ｏ ｂｕ ｔ ｙｒ ｉ ｃ Ａｃｉ ｄ ｉ ｎ Ｌ ａｃ ｔ ｉ ｃ Ａｃｉ ｄ Ｂａ ｃ ｔ ｅｒ ｉ ａ Ｆｅｒ ｍｅ ｎ ｔ ｅ ｄ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｂ ｙ ＨＰＬ Ｃ
３ ３ ４ ｎ ｍ 的条件 下进 行泱 ｌ 定 。结果表 明 ： 氨基 丁酸在 ５ ０ ￣８ ０ ０￣ ｇ ／ ｍＬ的浓度 范围 内线性关 系 良好 ， 线性 方
程为 ｙ ＝５ ４ ６ ５ ． ９ ｘ 一５ ４ １ １ （ Ｒ ２ ＝Ｏ ． ９ ９ ９ ６ ） ， 检 测限为 ２ ． ６ ７ １ ４￣ ｇ ／ ｍＬ， 平均回收率为９ ８ ． ３ １ ， ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ Ｓ Ｄ＝２ ． ２ ７ 。该 方法操 作 简单 、 快速 ， 分 离度好 ， 精 密度 高 ， 满足痕量分析要求 。 关 键词 ： ＨＰ Ｌ Ｃ； 邻 苯二 甲醛 ； ７ 一 氨基 丁酸 ； 乳酸 菌
ｕ ｍｎ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ １ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ，ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ 一 ａ ｍｉ — ｎ ｏ ｂ ｕ ｔ ｙ ｒ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｓ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｄ ｏ ｕ ｔ ｂ ｙ Ｌ ｕ ｎ ａ － Ｃ１ ８ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ （ ２ ５ ０× ４ ．６ ｍｍ ， ５ ｕ ｍ ）， ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｉ ｓ
ｔ ｈｅ ｃ ｏ ｌ ｕｍ ｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｉ ｓ ３ ０ ℃ 。ｔ ｈｅ Ｕ Ｖ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇｔ ｈ ｉ ｓ ３ ３ ４ ｎｍ ． Ｔｈｅ ｒ ｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈｅ
丁酸含量的检测方法
丁酸含量的检测方法随着生活水平的提高，人们对食品质量的要求也越来越高。
丁酸作为一种常见的有机酸，广泛应用于食品工业中，如果酱、调味品等。
然而，过量的丁酸会对人体健康造成潜在风险，因此需要对丁酸含量进行检测。
本文将介绍丁酸含量的检测方法，为食品安全保驾护航。
一、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的丁酸含量检测方法，其基本原理是利用液相色谱技术分离混合物中的丁酸，并通过检测器检测其浓度。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待检测的食品样品取出，去除杂质并粉碎成细粉。
称量适量的样品，并加入适量的溶剂进行萃取。
2. 色谱条件设置：选择适当的色谱柱和色谱条件，如C18色谱柱，甲醇-水混合溶剂作为流动相，流速为1.0 mL/min。
3. 标准曲线绘制：准备一系列不同浓度的丁酸标准溶液，通过色谱法测定它们的峰面积并绘制标准曲线。
4. 样品检测：将待测样品注入色谱仪，根据标准曲线计算出丁酸含量。
二、气相色谱法气相色谱法（GC）是另一种常用的丁酸含量检测方法，其基本原理是利用气相色谱技术分离混合物中的丁酸，并通过检测器检测其浓度。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待检测的食品样品取出，去除杂质并粉碎成细粉。
称量适量的样品，并加入适量的溶剂进行萃取。
2. 色谱条件设置：选择适当的色谱柱和色谱条件，如毛细管色谱柱，氮气作为载气，流速为1.0 mL/min。
3. 标准曲线绘制：准备一系列不同浓度的丁酸标准溶液，通过色谱法测定它们的峰面积并绘制标准曲线。
4. 样品检测：将待测样品注入色谱仪，根据标准曲线计算出丁酸含量。
光谱法是一种基于丁酸与试剂发生化学反应的检测方法，根据反应产物的光吸收特性来确定丁酸的含量。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待检测的食品样品取出，去除杂质并粉碎成细粉。
称量适量的样品，并加入适量的溶剂进行萃取。
2. 反应条件设置：选择适当的试剂和反应条件，如在硫酸和磷酸的存在下，丁酸与邻苯二甲酸二乙酯反应生成产物，产物在310 nm处有明显的吸收峰。
黄酒浸米液中产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选和鉴定
黄酒浸米液中产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选和鉴定龚金炎;谢湉;楼坚;胡升;梅乐和;谢东芳;黄俊【摘要】从黄酒浸米液中筛选出一株产γ-氨基丁酸的菌株Tpxj-01,采用生理生化实验、形态学观察以及16S rDNA序列分析对Tpxj-01进行鉴定,结果表明该菌株为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum.高效液相色谱分析对Lactobacillus plantarum Tpxj-01发酵产γ-氨基丁酸的能力进行定量测定,发酵液中γ-氨基丁酸浓度为1.02 g/L.筛选获得的乳酸菌Lactobacillus plantarum Tpxj-01 生物安全性高,能应用于食品工业,具有较好的γ-氨基丁酸生产潜力.【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2015(045)006【总页数】6页(P26-31)【关键词】浸米液;γ-氨基丁酸;菌株筛选;16S rDNA;菌种鉴定【作者】龚金炎;谢湉;楼坚;胡升;梅乐和;谢东芳;黄俊【作者单位】浙江科技学院生物与化学工程学院/轻工学院,浙江杭州310023;浙江科技学院生物与化学工程学院/轻工学院,浙江杭州310023;浙江科技学院生物与化学工程学院/轻工学院,浙江杭州310023;浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院,浙江宁波315100;浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院,浙江宁波315100;浙江科技学院生物与化学工程学院/轻工学院,浙江杭州310023;浙江科技学院生物与化学工程学院/轻工学院,浙江杭州310023【正文语种】中文黄酒是我国传统发酵产品的典型代表，富含多种氨基酸、维生素以及许多种人体必需的微量元素，深受消费者的喜爱，享有“国酒”的美誉[1,2]。
浸米是黄酒酿造中的重要环节，其目的是使原料大米充分吸水膨胀便于蒸煮且使米酸化，保障发酵的安全进行。
为了改善黄酒浸米环节的品质，一些研究者采用接种优良乳酸菌实现生物酸化浸米，快速提高米浆水的酸度，缩短浸米时间，并抑制杂菌的生长[3,4]。
_氨基丁酸的生理功效及其在乳品中的强化途径
γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric acide GABA）又称氨酪酸，是一种非蛋白质天然氨基酸，它是中枢神经系统中最重要的抑制性神经递质，具有降低血压，改善脑机能、抗惊厥、预防和治疗癫痫、活化肾肝、促进精子受精等功能[1]。
人体本身对GABA有一自我调节的系统，当缺乏时会产生焦躁、不安、疲劳、忧郁、失眠、等症状。
在人脑中，虽然GABA可由脑部的谷氨酸在脱羧酶的作用下转化而成，但是年龄的增长和精神压力加大使GABA的积累异常困难，而通过日常饮食补充可有效的改善这种状况。
本文从GABA的来源、生理功能、强化方式等方面，系统的总结了最近几年有关GABA的研究成果，特别是乳酸菌利用L-谷氨酸合成GABA方面的工作。
1γ-氨基丁酸的发现早在1950年，Roberts和Frankel在哺乳动物的大脑中首先发现了GABA。
发现GABA是L－谷氨酸经谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)脱羧而成，其代谢途径与三羧酸循环有关。
随后，GABA被证明是中枢神经系统的抑制性神经递质，具有重要的生理功能。
2γ-氨基丁酸生理学功能及作用机制近些年，GABA作为一种新型的功能因子，愈来愈受到人们的关注。
目前，尽管对GABA的功能尚未有完整的了解，但人们相信其有很多的生理功能，包括降低血压，镇静神经，促进精子受精，改善肝肾功能等。
GABA的生产和强化途径正成为医药、食品、农业等领域的一个热点研究内容。
2.1降低血压高血压是现代社会中、老年人常见疾病，能引起严重后果。
治疗高血压的药物较多，但不少药物具有一定程度的副作用，为此，寻找和开发副作用小的纯天然药物己成为技术领域研发工作的发展趋势。
经大量动物实验和临床医学中证明[2-8]，GABA有舒缓血管、降低血压生理功能。
哺乳动物的脑血管中有GABA－能神经支配，并存在相应受体，GABAγ-氨基丁酸的生理功效及其在乳品中的强化途径宋伟1，马霞1，张柏林2（1河北农业大学食品科技学院，河北保定071001；2北京林业大学食品科技系）摘要：综述了γ-氨基丁酸（GABA）在降低血压、改善脑机能、促进精子受精、活化肾肝方面的功能；阐述了γ-氨基丁酸的合成及强化，尤其是微生物中乳酸菌转化L-谷氨酸为GABA的方式和机制；最后比较了常用的γ-氨基丁酸的检测分析方法及其效果。
产_氨基丁酸乳酸菌的分离与鉴定
南京农业大学学报 2009,32(1):121-125Journal of N anjing A gricultural U niversityhtt p://nauxb 1njau 1edu 1cn陆小雪,解春艳,顾振新.产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离与鉴定[J ].南京农业大学学报,2009,32(1):121-125产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离与鉴定陆小雪,解春艳,顾振新3(南京农业大学农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室,江苏南京210095)摘要:从泡菜和酸奶中分离出产γ-氨基丁酸(G ABA )乳酸菌10株,筛选得G ABA 高产菌株B 、BY 和SS 。
3个菌株在含10g ・L -1谷氨酸钠(MSG )的MRS 培养基中培养6d,发酵液中G ABA 含量分别达到31680、31341和21700g ・L -1。
通过16S r DNA 基因鉴定和生理生化鉴定,确定菌株B 和SS 为乳酸乳球菌乳酸亚种(L actococcus lactis subs p 1lactis );菌株BY 为唾液链球菌嗜热亚种(S treptococcus salivarius subs p 1ther m ophilus )。
关键词:γ-氨基丁酸;乳酸菌;分离;鉴定中图分类号:TS20113 文献标志码:A 文章编号:1000-2030(2009)01-0121-05Is olati on and identificati on of lactic acid bacteriapr oducing γ2a minobutyric acidLU Xiao 2xue ,X IE Chun 2yan ,G U Zhen 2xin3(Key Laborat ory of Agricultural and Ani m al Pr oducts Pr ocessing and Quality Contr ol,M inistry of Agriculture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China )Ab s tra c t:Ten lactic acid bacteria (LAB )strains p r oducing γ2a m inobutyric acid (G ABA )in culture mediu m were is olated fr om p ickle and yoghurt .The strain B,BY and SS showed higher G ABA 2p r oducing ability .Screening results revealed that strain B,BY and SS p r oduced G ABA at concentrati ons of 31680,31341and 21700g ・L -1in MRS mediu m containing 10g ・L -1monos odi 2u m gluta mate (M SG )for 6d .I dentificati on tests (i 1e 1,16S r DNA sequencing and physi ol ogical characters )indicated that Band SS bel onged t o L actococcus lactis subs p 1lactis and BY bel onged t o S treptococcus salivarius subs p 1ther m ophilus .Key wo rd s:γ2am inobutyric acid;lactic acid bacteria;is olati on;identificati onγ-氨基丁酸(γ2a m inobutyric acid,G ABA )是一种广泛存在于原核生物和真核生物体中的非蛋白质氨基酸。
γ-氨基丁酸的合成
γ-氨基丁酸的合成王金玲;袁军;刘登才【摘要】以2-吡咯烷酮为起始原料,在碱性条件下发生开环反应,合成了γ-氨基丁酸(GABA).GABA与异硫氰酸苯酯发生衍生化反应后,用带有紫外检测器的高效液相色谱进行检测,其纯度为99%、收率为80%.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)003【总页数】2页(P40-41)【关键词】2-吡咯烷酮;γ-氨基丁酸;衍生化;高效液相色谱【作者】王金玲;袁军;刘登才【作者单位】华中农业大学理学院,湖北,武汉,430070;华中农业大学理学院,湖北,武汉,430070;华中农业大学动物医学院,湖北,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】TQ226.36γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid，GABA)是哺乳动物中枢神经系统的一种重要的抑制性神经递质，不仅具有抗焦虑、抗惊厥及镇痛作用，而且对神经系统的发育及胚胎早期外周腺体和器官的分化具有营养作用，可促进蛋白膜、GABA受体、一些与神经相关的蛋白及酶的合成。
GABA不仅在医药保健品[1～5]方面用于抗溃疡、抗心率不齐、血糖调节、免疫调节，而且在动物饲料中用于促进动物繁殖、提高动物自身免疫力等。
因此，GABA的市场需求量日趋增大。
目前，γ-氨基丁酸的制备主要有两种方法：(1)微生物发酵法[6～10]，即以谷氨酸或其衍生物(谷氨酸钠、富含谷氨酸的物质等)为原料，利用酵母菌、乳酸菌和曲霉菌等食品安全级微生物发酵制得。
此法处理过程复杂，生产效率低，在工业生产中的应用受到限制；(2)化学合成法[11]，即由2-吡咯烷酮经氢氧化钙水解开环制得。
化学反应式如下：作者应用化学法合成GABA，产品衍生化后，再用高效液相色谱进行检测。
此法生产设备及工艺操作简单，原料易得，成本低，产品纯度高，生产效率高，适合工业化生产。
1 实验1.1 试剂及仪器2-吡咯烷酮、氧化钙、碳酸氢铵、异硫氰酸苯酯、三乙胺、醋酸钠、乙腈、乙醇、乙酸、冰醋酸，均为分析纯；γ-氨基丁酸标准品，分析纯。
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2008, Vol. 29, No. 06食品科学※分析检测324高效液相色谱法测定乳酸菌中的γ－氨基丁酸葛菁萍，蔡柏岩，宋明明，凌宏志，宋 刚，平文祥＊（微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 １５００８０）摘 要：建立了邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法。
定量测定短乳杆菌中γ－氨基丁酸的方法，为进一步研究乳酸菌中的γ－氨基丁酸奠定了方法基础。
在对浓缩发酵上清液柱前衍生后，利用Ｎｏｖａ２ｐａｋＣ１８色谱柱，以５０ｍｍｏｌ／Ｌ的乙酸钠（ｐＨ６．８）－甲醇－四氢呋喃（Ａ相，８２：１７：１；Ｂ相，２２：７７：１，Ｖ／Ｖ）为流动相进行梯度洗脱，可以检测到痕量γ－氨基丁酸（２．２ｍｇ／１００ｇ）。
精确度和回收率实验表明，该方法可以用于痕量γ－氨基丁酸的检测。
关键词：高效液相色谱法；邻苯二甲醛；γ－氨基丁酸；乳酸菌Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ γ－Ａｍｉｎｏ Ｂｕｔｙｒｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌｉｑｕｉｄ ｂｙ ＨＰＬＣＧＥ Ｊｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＣＡＩ Ｂａｉ－ｙａｎ，ＳＯＮＧ Ｍｉｎｇ－ｍｉｎｇ，ＬＩＮＧ Ｈｏｎｇ－ｚｈｉ，ＳＯＮＧ Ｇａｎｇ，ＰＩＮＧ Ｗｅｎ－ｘｉａｎｇ＊（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５００８０， Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｏ－ｐｈｔｈａｌｄｉａｌｄｅｌｈｙｄｅ ｐｒｅ－ｃｏｌｏｍｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ γ－ａｍｉｎｏ ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ （ＧＡＢＡ） ｉｎ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ． Ａｆｔｅｒ ｐｒｅ－ｃｏｌｏｍｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ， ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＡＢＡ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ Ｎｏｖａ２ｐａｋＣ１８ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ５０ ｍｍｏｌ／Ｌａｃｅｔａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ （ｐＨ ６．８）， ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ＴＨＦ （ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ａ ８２：１７：１； ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂ ２２：７７：１， Ｖ／Ｖ）． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｎｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｒａｃｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＧＡＢＡ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｏ－ｐｈｔｈａｌｄｉａｌｄｅｌｈｙｄｅ；ＧＡＢＡ；ｌａｃｔｉｄ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ中图分类号：Ｏ６５７．７２；ＴＱ９２２．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）０６－０３２４－０３收稿日期：２００７－０４－０６基金项目：黑龙江省科技攻关重大项目（ＧＢ０５Ｂ４０１）作者简介：葛菁萍（１９７２－），女，教授，博士，研究方向为微生物学。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｅｊｉｎｇｐｉｎｇ５１２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ＊通讯作者：平文祥（１９５９－），男，教授，研究方向为微生物学的研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉａｎｇｐ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎγ－氨基丁酸（γ－ａｍｉｎｏ ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ，简称ＧＡＢＡ，也称氨酪酸）是一种重要的功能性非蛋白质氨基酸，作为中枢神经系统重要的抑制性神经递质，能通过突触后膜超极化、减少离子内流和降低细胞代谢等机制，使得神经元处于保护抑制状态。
大量的研究已经表明，ＧＡＢＡ具有增进脑活力和长期记忆、安神抗抑郁、调节激素分泌、改善脂质代谢、降血压、治疗癫痛和改善更年期综合症等重要的生理功能［１－２］，以ＧＡＢＡ为主要成分的功能性食品和以ＧＡＢＡ为中间体的药物，也相继被开发并得到了广泛的应用。
ＧＡＢＡ存在的范围很广，植物［３］、动物［４］、微生物代谢产物中［４］、均有ＧＡＢＡ的存在、但含量不一。
近年来益生菌乳酸菌发酵液中存在ＧＡＢＡ的报道也屡见不鲜［５］。
目前测定ＧＡＢＡ的方法有［６］：放射受体法、薄层扫描法、高效液相色谱法、氨基酸分析仪和气相色谱－质谱连用法。
其中高效液相色谱法是最常用的方法，但因ＧＡＢＡ直接检测灵敏度低，故常采用衍生后再测定的方法。
本课题组从乳酸酸菜发酵液中分离出一株短乳杆菌，其发酵液经氨基酸分析仪检测，可产生ＧＡＢＡ，但含量较低（２．２ｍｇ／１００ｇ）。
因此，本研究利用ＧＡＢＡ与衍生化试剂邻苯二甲醛（ＯＰＡ）反应生成具有较强荧光活性衍生化产物的原理，采用柱前衍生高效液相色谱法来检测该乳酸菌发酵液中的痕量ＧＡＢＡ，为进一步通过育种来提升该菌产ＧＡＢＡ的能力奠定方法基础。
１材料与方法１．１试剂与仪器γ－氨基丁酸标准品 国药集团化学试剂有限公司；甲醇为色谱纯试剂；邻苯二甲醛（ＯＰＡ）为化学纯；其他试剂均为分析纯；所有用水均为ＭｉｌｌｉｎＱ超纯水。
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（包括ＷＡＴＥＲＳ ５１０ ＨＰＬＣＰＵＭＰ、柱温箱、ＷＡＴＥＲＳ ４７０荧光检测器和数据处理325※分析检测食品科学2008, Vol. 29, No. 06器）、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、旋转蒸发仪及超声波清洗器等。
１．２色谱条件色谱柱为Ｎｏｖａ２ｐａｋＣ１８柱；流动相为５０ｍｍｏｌ／Ｌ的乙酸钠（ｐＨ６．８）－甲醇－四氢呋喃（ＴＨＦ）（Ａ相８２：１７：１；Ｂ相２２：７７：１，Ｖ／Ｖ），使用前超声脱气，各成分均用０．２μｍ滤膜过滤并经脱气处理；柱温：２７℃，流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ，进样量：２０μｌ；荧光检测波长中的激发波长为３３８ｎｍ，发射波长为４２５ｎｍ。
本实验采用的梯度程序见表１。
１．３样品制备１．３．１菌种乳酸菌ＨＤＲＳ８，从酸菜发酵液中自行分离得到，经１６ＳｒＤＮＡ序列分析及ＡＰＩ试剂条（ＡＰＩ５０ＣＨＬ）鉴定为短乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）（数据未给出）。
１．３．２培养基［９］ＭＲＳ培养基（固体培养基中加约２％琼脂）：酪蛋白胨１％、牛肉膏１％、酵母提取物０．５％、葡萄糖０．５％、乙酸钠０．５％、吐温－８０ ０．１％、柠檬酸胺０．２％、磷酸氢二钾０．２％、硫酸镁０．０２％、硫酸锰０．００５％、调ｐＨ６．６～６．８。
用于菌种的培养。
ＴＹＧ液体培养基：胰蛋白胨０．５％、酵母提取物０．５％、葡萄糖１．０％、丁二酸钠０．５％，调ｐＨ６．６～６．８。
用于发酵培养。
１．３．３产γ－氨基丁酸乳酸菌发酵液的制备及处理种子培养液制备：在２５０ｍｌ三角瓶中装入１００ｍｌ ＭＲＳ液体培养基，从活化的ＭＲＳ固体斜面培养基上挑取适量菌株接入ＭＲＳ液体培养基中，３０℃静置培养１６ｈ。
发酵培养液制备：在１００ｍｌ三角瓶中装入５０ｍｌ ＴＹＧ液体培养基（另加１％谷氨酸），按３％接种量接入培养１６ｈ的种子培养液，３０℃静置培养２４ｈ。
备用。
将发酵液离心后取上清液，旋转蒸发将发酵液浓缩２０倍，用０．２μｍ滤膜过滤后进行柱前衍生反应。
１．４标准溶液的配制与曲线绘制用０．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ配制５０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＧＡＢＡ标准贮备液并保存在４℃冰箱内，以０．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ稀释标准贮备液，得到系列浓度标准液，按照样品衍生步骤进行柱前衍生，并用ＨＰＬＣ测定，以峰面积对浓度绘制标准曲线。
１．５样品和标准样柱前衍生反应称取１０ｍｇＯＰＡ，加０．５ｍｌ甲醇溶解后，加入２ｍｌ０．４ｍｏｌ／Ｌ硼酸盐缓冲液（ｐＨ９．４０）和３０μｌ ２－巯基乙醇，此衍生剂溶液可保持２ｄ。
取浓缩的样品或标准溶液１０μｌ，加入上述溶液１００μｌ，混匀，反应１ｍｉｎ后进样。
１．６精密度实验以ＨＤＲＳ８浓缩液进行精密度实验，量取其浓缩液３份，按照上述方法进行柱前衍生并进行ＨＰＬＣ测定，比较同一样品３次测定结果的差别。
１．７回收率实验精确称取ＧＡＢＡ标准品，和ＨＤＲＳ８发酵浓缩液混合后，按照上述方法进行柱前衍生并进行ＨＰＬＣ测定，通过比较样品和标准品的回收情况，确定其回收率。
２结果与分析２．１色谱条件的选择以乙酸钠（ｐＨ６．８）－甲醇－ＴＨＦ为流动相，用Ｎｏｖａ２ｐａｋＣ１８柱可使γ－氨基丁酸得到良好分离。
流动相中ＴＨＦ的浓度对于ＧＡＢＡ的分离特别重要［７］。
当ＴＨＦ低于１％时，ＧＡＢＡ达不到完全分离；而当ＴＨＦ大于１％时，各次分析的保留时间变化较大。
图１是ＧＡＢＡ标准样在所选色谱条件下的色谱图，其在柱上的保留时间为１４．０７５ｍｉｎ。
可见，ＧＡＢＡ与其它物质达到了基线分离，不受其它峰的干扰。
图２为ＨＤＲＳ８发酵浓缩液的色谱图，其中ＧＡＢＡ在柱上的保留时间与标准样品一致，为１４．０７０ｍｉｎ。
２．２测定波长的选择γ－氨基丁酸与ＯＰＡ反应后，接上了荧光基团而产生荧光，其激发波长为３３８ｎｍ，发射波长为４２５ｎｍ时，可以使ＧＡＢＡ得到良好的分离［８］。
２．３标准曲线按照１．４的方法，得到的回归方程为ｙ＝０．８２ｘ＋０．０２，相关系数为０．９８５。
步骤时间（ｍｉｎ） 乙酸钠（ｐＨ６．８）：甲醇：ＴＨＦ（８２：１７：１，Ｖ／Ｖ）（２２：７７：１，Ｖ／Ｖ）１０９５５２６８８１２３１６６６３４４２５３０７０５２９０１００６３２０１００７３５９５５表 １ 分离ＧＡＢＡ梯度洗脱程序Table 1 Gradient program for separation of OPA -GABA deriva-tives图１ ＧＡＢＡ标准品ＨＰＬＣ色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standardGABA１５．００１０．００５．０００．０００．００５．００１０．００１５．００２０．００２５．００３０．００３５．００２．２３４ｍＶ时间（ｍｉｎ）２９．３７１３１．４９２１４．０７５（ＧＡＢＡ）2008, Vol. 29, No. 06食品科学※分析检测326图２ ＨＤＲＳ８发酵浓缩液ＨＰＬＣ色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of HDRS8 concentrated fermentationliquid１６０．００１４０．００１００．００８０．００６０．００４０．００２０．０００．００－２０．００－４０．００１４．００ １５．００１６．００ １７．００１８．００１９．００２０．００ｍＶ时间（ｍｉｎ）１４．０７０（ＧＡＢＡ）１４．７７７１６．８０７１７．７９５２．４精密度实验结果按照１．６的方法，ＧＡＢＡ测定结果的相对标准差小于１．５％。