反义寡核苷酸药物临床前安全性评价考虑要点
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部分 凝血活酶 时间 （ Ｆ ｒ、 血 酶原时 间 （ ） 纤维 蛋 白 Ａ Ｆ ）凝 和
１ 临床观察和生理测量 ：大动物每天观察临床表征应包 ． １ 括： 一般形态 、 为 、 死率 、 行 病 饲料 和饮 水消耗 、 吸频 率 、 呼 听 力、 尿频律 、 在给药前 ７ｄ和 ３ｄ以及研究期间和结束 时的体 质量等 。小动物应记录临床表征和死亡数 。 １ ‘心血管指标 ： ． ２ 国外用动脉 内的滞 留导管 （ 直径 ０４ ｍ， ． ｍ ５ 长 ４ ｍ，与压力换能器相 连接来记 录右侧股动脉的收缩压 ５ｅ 和舒 张压。记 录标准肢体导联 Ｉ， 和 Ⅲ以及 ａ Ｒ，Ｖ Ⅱ， Ｖ ａ Ｌ和 ａ Ｆ导联心 电图。评价指标 ： Ｖ 心率 （ Ｒ）次／ ｉ）Ｑ Ｓ波群 ， Ｈ （ ｒｎ ，Ｒ ａ Ｑ和Ｐ Ｔ Ｑ间期 和 Ｐ波 （ ｍ 计 ） 以 ｓ 。 １ 血液学指标 ： ． ３ 在试验前 ， １ 以及最后 １ 第 次 次给药后 ４ｈ 收集血液 ，每个取样时问从右侧股动脉取大概 ３ｍ 全血 ， ｌ 获
中国药物与ｆ ００ ｌ 月第 ｌ卷第 ｌ 期 Ｃ ｉ ｓ Ｒ ｍ ｄ ｓ ｌｉ ，ｃ ｂｒ ００ ｏ１，ｏ ０ 插床２ １ 年 ｏ ｏ ０ ｈｎ ｅ ｅ ｅｉ ＆Ｃｉｃ Ｏｔ ｅ２ １， １０ ． ｅ ｅ ｎｓ ｏ Ｖ ． Ｎ １
反 义 寡 核 苷 酸 药 物 临 床 前 安 全 性 评 价 考 虑 要 点
红素 、 潜血 和显微镜检查 。
１ 组 织 病 理观 察 ： ． ６ 动物 深 度 麻 醉后 放 血 处 死 。 质量 ． 面 称 全
解 剖。主要脏器称质量 ， 完整 的组织用 甲醛 固定 ， 石蜡包埋 ， 切片 ， 苏木素一 伊红 （ Ｅ 染色 ， Ｈ ） 光学 显微镜检查。 在给药后 ２ ６ ３ ， ，０ｈ肉眼检查给药局部 。 首次给药后 ６和
３ ，每 组 每性 别 杀 检 １ ０ｈ 只动 物 ，在 注 射 位 点 周 围 的组 织 取
材。组织 样本（ 厚度 约为 ５ｍ 用 １ ％的甲醛 液固定 ， ｍ） ０ 切片
（— ｍ） Ｈ ３５ 后 Ｅ染 色 ， 病理 学 检 查 。
２ 凝 集 与 补体 测 定
人体中观察到的相似。也正因为如此 ， 早期 Ａ Ｄ ＳＯ Ｎ的开发
７４冲洗 ３次后 （０ ｉ） ． ３ ０ｇ３ｍｎ ，在 １ ｌ ５ｍ 巴比妥缓 冲液 中重 悬 。绵羊红细胞悬液 （０ １与 ９ ０ 的 ０１ Ｎ ２Ｏ 溶液 １０ ） ０ ｌ ． ％ ａＣ ３ （ ｖ 混合以裂解细胞。 １ ｍ读取吸光度值 ） 悬液用 巴 ｗ／ ） ４ ５ｎ 。
ｍｍｏ／ Ｃ１ ０．５ ｌＬ Ｎａ ， １ ｍｍｏ／ Ｃａ ２０． ｍｍｏ１ Ｍ ｇ Ｏ４ ｐ ７． ｌＬ Ｃ１， ５ ］ Ｌ Ｓ ， Ｈ ２～
用标准的快速染色方法进行血细胞计数。全血分析红细胞数
（ Ｂ ） 白细胞 数 和 分 类 （ ｃ ， 红 蛋 白 ， 细胞 压 积 ， 均 ＲＣ， ｗＢ ）血 红 平
成本非常高 。下 面就反义寡核苷 酸药物 临床前安全性评 价 （ 包括啮齿类 ， 和猴 ） 犬 需要考虑的一些要点作一综述 。
１ 常 规观 察
２１ 凝集和补体反应 ： ． 在给药前 ， １ 以及 最后 １ 第 次 次给药
完毕后 ４ｈ收集血液 ， 评价血凝指标： 收集大约 ０ ｌ ． ｍ 的血到 ９ 含有枸橼 酸钠抗凝剂 的管 中。血经离心获得血浆 ， 分析活化
得 至 少 １ 乙二 胺 四 乙酸 （ Ｄ Ａ） 和 １ 枸 橼 酸抗 凝 血 。 ｍｌ ＥＴ 血 ｍｌ
原 。纤维蛋 白原测定仅在第 １ 天给药前 和最后 １ 给药后 次
２ 收 集 血液 ４ｈ 评 价 补体 指标 ：收集 约 ０７ ｌ ．５ｍ 的血 液 至 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ抗 凝 管
比妥 缓 冲液 稀 释 至 Ａ 为 ６ ０ ７０获 得 大 约 １ Ｅ ０～０ ％的红 细 胞 悬
血红 蛋 白（ Ｈ）红细胞平 均容积 （ Ｃ ） 红细胞平 均血红 ＭＣ ， Ｍ Ｖ， 蛋 白含量 （ Ｃ Ｃ ， Ｍ Ｈ ）血小板计数 和血 细胞形态 。另外 ， 在第 １
次 给药 （ 线值 ） 基 和最 后 １ 给药 后 ２ 次 ４ｈ网织 红 细胞 计 数 。 用
韩 俊 伟
目前 ， 有关反义寡脱 氧核苷酸 （ ＳＯ Ｎ Ａ Ｄ ）药物在啮齿类 和非人 灵长类的安全性 和药 代动力学 特征 的文献报 道越来 越多。其 中选择最多 的是灵 长类 ， 一方 面是因为其体积适中 ； 另～方 面因为其系统发育与人类相关 。 ＳＯ Ｎ序列 通常是 Ａ Ｄ 从那些种属间不 是很保守 的基 因组 区域 中选 出来 的。因此 ， 在非灵 长类 中可 能不会观察 到 Ａ Ｄ ＳＯ Ｎ直接 抑制人 ｍ Ｎ Ｒ Ａ 序列那样 的活性 ； 在一方 面 ， 猴作为试验 材料可 以最 大限 用 度地观察到一些不 良反应 ， 这些不 良反应在质上和量上与在
液 。绵羊红细胞用 如下溶液致敏 ：５ｒ 巴 比妥缓冲液与 ０１ ｌ Ｊ ｎ ． ｍ 兔抗羊溶血血清和 １ 的 ｌ ｌ ５ｍｌ ％绵羊血红细胞 （ Ｂ ｓ 。 Ｒ Ｃ ） 上 清在 ３ ７℃孵育 １ ｉ，４ｈ内使用。 ７℃孵育 ３ ｉ ， ５ｍｎ ２ ３ ０ｍｎ后 将 ５ ｌ 敏后的绵羊红细胞悬液与 １ ～ ０ ｌ ０ 致 ０ １０ 的新 鲜或保存 的血 清在 总体积 为 １ｍｌ 巴比妥缓 冲液 中混合 ，以测 定 的 Ｃ ５ Ｈ ０值。反应管放置在冰上 ，加入 ７ ０ 巴比妥钠缓 冲液 ５ ｌ 后， 上清 ４℃ ２ ０ｇ离心 １ ｉ。５ ０ｉ 上清转 移到 １， 比 ０ ０ｍ ｎ ０ ｌ ｘ ｎ ｌ 色杯中 ，１ ｍ读出 Ａ值 。用专用于测定人血清的放射免疫 ４５ｎ
中，离心获得血浆 以供测定补体分裂产物 （ ｂ 。另外收集 Ｂ） ０ ５ｍ 到无抗凝剂的管中 ， ． ｌ ７ 离心收集血清分析总血清溶血补 体 （ Ｈ ０ 。血浆和血清按如上方法收集 ，冷冻储存。测定 Ｃ ５）
Ａ Ｔ 活 性 ＰＦ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
２ 补体激 活（ Ｈ ０和 Ｃ ａ ： ． ２ Ｃ ５ ５ ） 用包被兔抗 的绵羊红细胞来 测定 Ｃ ５ Ｈ ０补体的滴度 。 了用抗体标化绵羊红 细胞 ， ｍｌ 为 １ 的 绵 羊 红 细胞 悬液 用 巴比妥 缓 冲液 （ ｍ ｌ ５ｍ ｏ Ｌ巴 比妥 ，４ ／ １１
１ 临床观察和生理测量 ：大动物每天观察临床表征应包 ． １ 括： 一般形态 、 为 、 死率 、 行 病 饲料 和饮 水消耗 、 吸频 率 、 呼 听 力、 尿频律 、 在给药前 ７ｄ和 ３ｄ以及研究期间和结束 时的体 质量等 。小动物应记录临床表征和死亡数 。 １ ‘心血管指标 ： ． ２ 国外用动脉 内的滞 留导管 （ 直径 ０４ ｍ， ． ｍ ５ 长 ４ ｍ，与压力换能器相 连接来记 录右侧股动脉的收缩压 ５ｅ 和舒 张压。记 录标准肢体导联 Ｉ， 和 Ⅲ以及 ａ Ｒ，Ｖ Ⅱ， Ｖ ａ Ｌ和 ａ Ｆ导联心 电图。评价指标 ： Ｖ 心率 （ Ｒ）次／ ｉ）Ｑ Ｓ波群 ， Ｈ （ ｒｎ ，Ｒ ａ Ｑ和Ｐ Ｔ Ｑ间期 和 Ｐ波 （ ｍ 计 ） 以 ｓ 。 １ 血液学指标 ： ． ３ 在试验前 ， １ 以及最后 １ 第 次 次给药后 ４ｈ 收集血液 ，每个取样时问从右侧股动脉取大概 ３ｍ 全血 ， ｌ 获
中国药物与ｆ ００ ｌ 月第 ｌ卷第 ｌ 期 Ｃ ｉ ｓ Ｒ ｍ ｄ ｓ ｌｉ ，ｃ ｂｒ ００ ｏ１，ｏ ０ 插床２ １ 年 ｏ ｏ ０ ｈｎ ｅ ｅ ｅｉ ＆Ｃｉｃ Ｏｔ ｅ２ １， １０ ． ｅ ｅ ｎｓ ｏ Ｖ ． Ｎ １
反 义 寡 核 苷 酸 药 物 临 床 前 安 全 性 评 价 考 虑 要 点
红素 、 潜血 和显微镜检查 。
１ 组 织 病 理观 察 ： ． ６ 动物 深 度 麻 醉后 放 血 处 死 。 质量 ． 面 称 全
解 剖。主要脏器称质量 ， 完整 的组织用 甲醛 固定 ， 石蜡包埋 ， 切片 ， 苏木素一 伊红 （ Ｅ 染色 ， Ｈ ） 光学 显微镜检查。 在给药后 ２ ６ ３ ， ，０ｈ肉眼检查给药局部 。 首次给药后 ６和
３ ，每 组 每性 别 杀 检 １ ０ｈ 只动 物 ，在 注 射 位 点 周 围 的组 织 取
材。组织 样本（ 厚度 约为 ５ｍ 用 １ ％的甲醛 液固定 ， ｍ） ０ 切片
（— ｍ） Ｈ ３５ 后 Ｅ染 色 ， 病理 学 检 查 。
２ 凝 集 与 补体 测 定
人体中观察到的相似。也正因为如此 ， 早期 Ａ Ｄ ＳＯ Ｎ的开发
７４冲洗 ３次后 （０ ｉ） ． ３ ０ｇ３ｍｎ ，在 １ ｌ ５ｍ 巴比妥缓 冲液 中重 悬 。绵羊红细胞悬液 （０ １与 ９ ０ 的 ０１ Ｎ ２Ｏ 溶液 １０ ） ０ ｌ ． ％ ａＣ ３ （ ｖ 混合以裂解细胞。 １ ｍ读取吸光度值 ） 悬液用 巴 ｗ／ ） ４ ５ｎ 。
ｍｍｏ／ Ｃ１ ０．５ ｌＬ Ｎａ ， １ ｍｍｏ／ Ｃａ ２０． ｍｍｏ１ Ｍ ｇ Ｏ４ ｐ ７． ｌＬ Ｃ１， ５ ］ Ｌ Ｓ ， Ｈ ２～
用标准的快速染色方法进行血细胞计数。全血分析红细胞数
（ Ｂ ） 白细胞 数 和 分 类 （ ｃ ， 红 蛋 白 ， 细胞 压 积 ， 均 ＲＣ， ｗＢ ）血 红 平
成本非常高 。下 面就反义寡核苷 酸药物 临床前安全性评 价 （ 包括啮齿类 ， 和猴 ） 犬 需要考虑的一些要点作一综述 。
１ 常 规观 察
２１ 凝集和补体反应 ： ． 在给药前 ， １ 以及 最后 １ 第 次 次给药
完毕后 ４ｈ收集血液 ， 评价血凝指标： 收集大约 ０ ｌ ． ｍ 的血到 ９ 含有枸橼 酸钠抗凝剂 的管 中。血经离心获得血浆 ， 分析活化
得 至 少 １ 乙二 胺 四 乙酸 （ Ｄ Ａ） 和 １ 枸 橼 酸抗 凝 血 。 ｍｌ ＥＴ 血 ｍｌ
原 。纤维蛋 白原测定仅在第 １ 天给药前 和最后 １ 给药后 次
２ 收 集 血液 ４ｈ 评 价 补体 指标 ：收集 约 ０７ ｌ ．５ｍ 的血 液 至 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ抗 凝 管
比妥 缓 冲液 稀 释 至 Ａ 为 ６ ０ ７０获 得 大 约 １ Ｅ ０～０ ％的红 细 胞 悬
血红 蛋 白（ Ｈ）红细胞平 均容积 （ Ｃ ） 红细胞平 均血红 ＭＣ ， Ｍ Ｖ， 蛋 白含量 （ Ｃ Ｃ ， Ｍ Ｈ ）血小板计数 和血 细胞形态 。另外 ， 在第 １
次 给药 （ 线值 ） 基 和最 后 １ 给药 后 ２ 次 ４ｈ网织 红 细胞 计 数 。 用
韩 俊 伟
目前 ， 有关反义寡脱 氧核苷酸 （ ＳＯ Ｎ Ａ Ｄ ）药物在啮齿类 和非人 灵长类的安全性 和药 代动力学 特征 的文献报 道越来 越多。其 中选择最多 的是灵 长类 ， 一方 面是因为其体积适中 ； 另～方 面因为其系统发育与人类相关 。 ＳＯ Ｎ序列 通常是 Ａ Ｄ 从那些种属间不 是很保守 的基 因组 区域 中选 出来 的。因此 ， 在非灵 长类 中可 能不会观察 到 Ａ Ｄ ＳＯ Ｎ直接 抑制人 ｍ Ｎ Ｒ Ａ 序列那样 的活性 ； 在一方 面 ， 猴作为试验 材料可 以最 大限 用 度地观察到一些不 良反应 ， 这些不 良反应在质上和量上与在
液 。绵羊红细胞用 如下溶液致敏 ：５ｒ 巴 比妥缓冲液与 ０１ ｌ Ｊ ｎ ． ｍ 兔抗羊溶血血清和 １ 的 ｌ ｌ ５ｍｌ ％绵羊血红细胞 （ Ｂ ｓ 。 Ｒ Ｃ ） 上 清在 ３ ７℃孵育 １ ｉ，４ｈ内使用。 ７℃孵育 ３ ｉ ， ５ｍｎ ２ ３ ０ｍｎ后 将 ５ ｌ 敏后的绵羊红细胞悬液与 １ ～ ０ ｌ ０ 致 ０ １０ 的新 鲜或保存 的血 清在 总体积 为 １ｍｌ 巴比妥缓 冲液 中混合 ，以测 定 的 Ｃ ５ Ｈ ０值。反应管放置在冰上 ，加入 ７ ０ 巴比妥钠缓 冲液 ５ ｌ 后， 上清 ４℃ ２ ０ｇ离心 １ ｉ。５ ０ｉ 上清转 移到 １， 比 ０ ０ｍ ｎ ０ ｌ ｘ ｎ ｌ 色杯中 ，１ ｍ读出 Ａ值 。用专用于测定人血清的放射免疫 ４５ｎ
中，离心获得血浆 以供测定补体分裂产物 （ ｂ 。另外收集 Ｂ） ０ ５ｍ 到无抗凝剂的管中 ， ． ｌ ７ 离心收集血清分析总血清溶血补 体 （ Ｈ ０ 。血浆和血清按如上方法收集 ，冷冻储存。测定 Ｃ ５）
Ａ Ｔ 活 性 ＰＦ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
２ 补体激 活（ Ｈ ０和 Ｃ ａ ： ． ２ Ｃ ５ ５ ） 用包被兔抗 的绵羊红细胞来 测定 Ｃ ５ Ｈ ０补体的滴度 。 了用抗体标化绵羊红 细胞 ， ｍｌ 为 １ 的 绵 羊 红 细胞 悬液 用 巴比妥 缓 冲液 （ ｍ ｌ ５ｍ ｏ Ｌ巴 比妥 ，４ ／ １１