粗蛋白测定GB-1

中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准

全氮和粗蛋白测定法

Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87

crude protein

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本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。

1 仪器

a. 分析天平:感量0.1mg;

b. 凯氏烧瓶;

c. 铁架、铁圈、石棉网;

d. 煤气灯(或电炉);

e. 干燥管、抽气管、橡皮管;

f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;

g. 粉碎机等。

2 试剂与溶液

2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂

甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。

2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂

硫酸铜: 硫酸钾= 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。

2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。

2.4 4%硼酸溶液

称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。

2.5 浓硫酸(分析纯)

2.6 40%氢氧化钠溶液

称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。

2.7 0.1N盐酸标准溶液

量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。

2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,

每份重约0.17g,称准至0.0002g。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2 滴,然后用待标定的盐酸

溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。

计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算

G

N = ━━━━━━ (3)

V ×0.05299

式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;

G——无水碳酸钠之重量,g;

V——盐酸溶液之用量,mL;

0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。

2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。记下耗用mL数。

计算:

N NaOH×V NaOH

盐酸当量= ━━━━━━━━ (2)

25

式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;

V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;

25——待标定盐酸吸取量,mL。

2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N,可根据初标定浓

度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。

3 操作方法

3.1 消化

准确吸取原样2mL(或称取固体样品0.5g,称准至0.0002g)。置于干燥的500mL凯氏

烧瓶中,加入硫酸铜—硫酸钾混合试剂5g,浓硫酸8mL,然后放入通风橱内(烧瓶口上放

置小漏斗),加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,消化液呈浅绿色后,再继续加热10min

左右,一般消化时间不超过30min。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵,

借以将腐蚀性气体抽去。

3.2 蒸馏

冷却后,缓慢加入蒸馏水120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶

液35mL及混合指示剂2滴的250mL锥形瓶中的液面下,然后,沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧化钠溶液40mL,玻璃珠4～5粒或锌粒1～2粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。连接

好后,检查是否漏气,缓缓摇匀,接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止

蒸馏。

3.3 滴定

将锥形瓶内接收液用0.1N盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL数。平行试验允许误差为0.2mL。

同时做试剂空白试验。

4 计算

4.1 全氮TN含量计算如下:

(V -Vo)×N×0.014

TN = ━━━━━━━━━━×100 (3)

W

式中:V——样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;

Vo——试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;

N——盐酸标准溶液当量浓度;

0.014——氮的毫克当量;

W——样品mL数或g数;

TN——样品全氮含量,g/100mL或g。

4.2 原料粗蛋白P计算如下:

P =6.25TN (4)

式中:P——原料粗蛋白含量,g/100mL或g;

6.25——蛋白质中含氮系数;

TN——全氮含量,g/100mL或g。

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附加说明:

本标准由商业部副食品局提出。

本标准由上海市酿造科学研究所起草。

本标准主要起草人须凤高。

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中华人民共和国商业部1987-11-20批准1988-07-01实施