实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
实验氨基酸分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离,学习纸 层析法的基本原理及操作技 术.
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法.利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分 配系数不同而得到分离.
展层剂由有机溶剂与水组成.在纸上,水被吸附 在纤维素的纤维之间形成固定相,当有机相沿纸流 动经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和 水相之间进行分配.当有机相不断流动时,溶质就沿 着有机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组 分的分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开.
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后分层
排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂.
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml.
五、操作
1、取层析滤纸一张,在纸的一端距边缘23cm处用铅笔画一条直线,在此线上每间 隔2cm作一记号〔即原点〕如图.
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况,其极性的大小主要取 决于物质所具有的极性基团的性质和数 量,在极性基团不改变情况下,非极性基团 成分越多,则分子极性越低等.
展层方式
上行法 下行法 环形法 <辐射法〕
三、器材
层析缸、毛细管〔用钢笔代 替〕、喷雾器、培养皿、层 析滤纸〔新华一号〕
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液,干燥.
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓,并 计算各氨基酸的Rf 值.
图谱示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应,挥发 性小,易于去除,含水量少.
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告：纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。
实验原理纸层析法是一种简单的分离技术，它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。
氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类，它们在纸层析上的运移速度不同，可以通过将样品施加到起始线处，用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸，从而鉴定氨基酸的类型和浓度。
实验步骤1.准备好样品；2.准备纸层析板和移层溶剂；3.在纸层析板上留下起始线处，将样品点于起始线上；4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中，注意不要使样品触及移层溶剂；5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干；6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。
实验结果经过实验，分离出了6种氨基酸，它们是： 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术，适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。
通过本次实验，我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律，并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。
实验分析在实验中，我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。
纸层析法是一种简便易行的分离方法，常用于生物学和化学研究中。
它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分，从而实现混合物分离和提纯的过程。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其种类丰富，具有重要的生物学和化学意义。
氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。
在实验中，我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。
由于氨基酸的不同极性和分子大小不同，它们在纸层析中的运移速度存在较大差异，可以通过纸层析进行分离。
在实验中，我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处，并将其浸泡于移层溶剂中，利用溶剂的上升，将氨基酸分离开来。
实验不足与改进在实验过程中，我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸，但存在一定的不足。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
生物化学实验
3、显色剂50～100mL
1.1％水合茚三酮正丁醇溶液。
五、操作
1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2.取层析滤纸(长22cm、宽14 cm)一张。在纸的—端距边缘2～3cm处用用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号如图。
5.显色用喷雾器均匀喷上O.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6.计算各种氨基酸的只Rf值。
思考题
1、何谓纸层析法?
2、何谓片Rf值?影响Rf值的主要因素是什么?
3、怎样制备扩展剂?
4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么？
实验二小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
一、目的
通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：
…
在一定的条件下某种物质的只Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数增加而增加。
本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。
三、器材
1.25mL刻度试管 2. 吸管
3.离心管 4.乳钵
5.分光光度计 6.恒温水浴
7.离心机
四、试剂和材料
1、小麦种子
2、o.1％标准麦芽糖溶液
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
1纸层析法分离鉴定氨基酸
2. 器材：
层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管;喷雾器； 电吹风；直尺；铅笔；针、线；一次性手套 。
试剂配制：
（10mg/mL）
(1) 甘氨酸溶液 50mg甘氨酸溶于5mL水中。
原点到层析点中心的距离 X Rf 原点到溶剂前沿的距离 Y
在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常 数，因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本 实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、操作
1. 在层析缸中装入展层剂，其高度约1.5～2cm。 2. 准备滤纸: 戴上手套，在长约22 cm、宽约14 cm 滤纸上，距长边3cm处，用铅笔画一条直线，在此 直线上，从距纸的短边4cm处开始，每隔2cm作一 记号，为点样位置（即原点），如图。注意事项： 手不能直接接触滤纸；直线与底边平行。 3. 点样：在原点上，用毛细管依次分别点上Gly(甘) 、 Met(蛋)、Leu (亮)和混合氨基酸溶液。点样点干后 可重复点加1～2次。注意：每一点在滤纸上扩散的 直径，最大应不超过3mm。
(2) 蛋氨酸溶液 50mg蛋氨酸溶于5mL水中。
(3) 亮氨酸溶液 50mg亮氨酸溶于5mL水中。
(4) 氨基酸混合液
甘氨酸50mg，亮氨酸50mg，
蛋氨酸50mg共溶于5mL水中。 （5）展层剂：将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分 液漏斗中，与3体积水混合，充分振荡，静置后分层， 弃去下层水层，备用。
（6）显色剂：0.1％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。
2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。
二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。
当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。
由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。
Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
混合氨基酸溶液。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。
显色剂：025%茚三酮溶液。
2、实验仪器层析缸。
毛细管。
喷雾器。
烘箱。
直尺。
四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。
2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。
3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。
当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。
4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。
五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。
2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。
六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。
1 氨基酸的分离---纸层析法
【实验步骤】
1、配扩展剂： 正丁醇：冰醋酸：水= 20ml ：5ml ：15ml 顺序：正丁醇→冰醋酸→水，放入分液漏 斗中，充分混匀。静置约10min后分层，放 出下层水层，其余的倒入培养皿中。
2. 准备滤纸
取一张层析滤纸，距纸底边2cm处用 铅笔划一横线，沿线每隔2.5cm作一记 号为点样处，点样处也不要太靠近两侧 边（约距1.5cm），会产生边缘效应。
3.点样
用毛细管依次吸取标准品氨基酸和 混合样，吸管与滤纸垂直，轻轻接触纸 面，样品扩散直径小于3mm。一滴滴完 后用冷风吹干，再点第二次，共点三 次。
4.扩展
将点完样的滤纸两侧面对齐， 用针线缝合，纸的两边不能接触。 将点样后的滤纸直立于培养皿的
扩展剂中，（点样的一端在下， 扩展剂的液面需低于点样线1 cm ） 当溶剂展层至滤纸上沿2-3cm处 展层结束，取出滤纸。用铅笔画
【结果分析与讨论】 【思考题】
通过本次实验，讨论下列问题： （1）简述纸层析的原理。 （2）判断氨基酸极性大小顺序，讨论AA极 性与Rf的关系？ （3）什么是Rf值？影响的主要因素是什么？
下周实验：脂质的薄层层析 （405实验室） 每组清洗一块玻璃板，置于烘箱中备用。
6、缝合时，滤纸的两个纸边不能相互接触并 且底边应对齐，点样线一面滤纸朝外。 7、点样时，样品扩散圈不能过大，直径小于 3mm。 8、使用移液管时应右手拿管，左手拿吸耳球 并用食指堵管口。 9、使用移液管时，应先看清管的最大刻度， 每一格代表多少后再量取。
10、 15ml水是用蒸馏水，在水槽边的大玻璃瓶中。 11、 实验结束请清洗实验玻仪，但不要清洗展层缸 及其中的培养皿。 12、有机废液倒入右侧实验台上的“废液收集有机 溶剂”大试剂瓶中。 13、 实验结束, 回收竹夹子、A4复印纸、电吹风。 14、实验报告要写同组同学号数、名字，层析滤纸 贴在其中一位同学的实验报告上。 15、坐椅推入实验台下，空出过道。
实验一氨基酸纸层析分离鉴定
实验一、氨基酸纸层析分离鉴定实验一氨基酸的分离鉴定――――纸层析法一预习思考题1.本实中滤纸的作用是什么？2.实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？3.Rf值的含义。
影响因素？4.两Rf值之差为多少范围内可以确定为同一物质？5.层析滤纸和普通滤纸有什么区别？6.为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？7.用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？ 8.缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？9.为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？10.标记滤纸不能使用油性笔，为什么？ 11.查阅资料，解释纸层析分离氨基酸原理。
1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相。
2.以水相为固定相，展开的溶剂作流动相。
3.溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：展开斑点中心与原点之间的距离/溶剂前某种沿与原点之间的距离影响因素：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构性质，溶剂系统，层析滤纸的质量，温度，样品溶液中的杂质等因素有关。
4.样品分离各组分一般Rf值在05~0.85之间，彼此间差值不应0.05，样品与标准差值<0.05基本确认为同一物质。
5.层析滤纸，组成该滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。
纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。
对于复杂的混合物，可做双向层析。
普通滤纸，由棉质纤维组成，按不同的用途而使用不同的方法制作。
由于其材质是纤维制成品，因此它的表面有无数小孔可供液体粒子通过，而体积较大的固体粒子则不能通过。
这种性质容许混合在一起的液态及固态物质分离。
6.使分离物质在溶剂中的分配较恒定，得到的斑点较圆整。
7.因为人的皮肤表面也有氨基酸，如果直接接触，会干扰实验。
8.两边缘相靠导致滤纸的厚度不均，溶剂在滤纸上的移动速度不一致，影响实验结果。
氨基酸的分离鉴定—纸层析法
2)、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各配置5mL。
3)、显色剂50～100mL 0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
（2）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约5mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20min。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。
⑸.如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的Rf值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
实验报告
实验报告是学生实验研究结果的记录和总结，同时也是评价 学生实验课成绩的重要依据。
实验报告的格式： 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验方法与步骤 五、实验结果与分析 六、讨论、心得
注意 讨论部分不是对结果的重述，而是实验结果、实验方
法和实验异常结果的分析和讨论，以及对实验设计的认识、体 会及建议。
7
基础生物化学实验课评分标准
实验课中迟到或早退者其实验过程成绩须扣分。 无故不做实验的学生其实验项目成绩评为零分。 实验课缺勤超过1/3的学生其实验总成绩评为不及 格。 在规定的时间内不能按时交实验报告的学生其实 验报告成绩须扣分。 实验成绩占基础生物化学考试成绩的20℅。
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实验一 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）
【实验目的】
通过实验，掌握纸层析法的一般原理和操作技术。 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的一般过程。
9
【实验原理】
层析技术 是一种物理的分离方法，利用混合物中各 组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度 分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此 相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而 达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷
12名称操作方式固定相流动相分离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体溶解度离子交换层析离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体液体气体吸附力亲合层析酶与底物抗原与抗体固体液体配体专一性凝胶层析凝胶过滤固体液体分子大小实验原理实验原理层析的分类层析的分类13分配层析分配层析是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术
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【仪器和试剂】
实验仪器
1.电热鼓风干燥箱 2.培养皿、青霉素小瓶、毛细管、小型喷雾器 3.层析滤纸、滤纸芯
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告实验目的：掌握氨基酸纸层析技术，通过纸层析分离和定性鉴定氨基酸。
实验原理：氨基酸的纸层析是利用氨基酸对不同的升华剂的选择性吸附而实现分离的一种分析方法。
纸层析方法较简便、快速，并能够同时分离、定量、定性分子。
这使它在生物化学、蛋白质化学、微量分析等领域中得到了广泛应用。
实验过程：1.准备氨基酸标准溶液：取苯丙氨酸、天门冬酰胺酸、色氨酸、赖氨酸、小麦谷氨酸和组氨酸各10毫克，加入10毫升0.02mol/L HCl和1滴10%酚酞指示剂，用水定容至100毫升。
2.制备氨基酸样品：取10毫升氢氧化钠溶液和0.3克氨基酸溶液混合，使其溶解并加热至沸腾，将样品冷却到室温，并加入1毫升0.02mol/L盐酸。
3.准备纸层析板：将富马酸纸(6cm*0.8cm)沿宽度中心折叠，使其成为4cm*0.8cm的大小；将纸上端用20毫升1-丙醇-甲醛-草酸钾(6:0.4:4)振荡2次，再用烘箱烘干，使其完全干燥。
4.纸层析：将样品以细滴的形式滴在纸层析板下端处，将纸放入深度为2-3厘米的玻璃瓶中，瓶底加入1毫升0.2mol/L HCl溶液，并将其密封。
板上的液相在升华过程中被移动，当溶剂距离顶端紫色标记线1厘米时把纸层析取出，用乙醇-水(1:1)固定，并在水龙头下冲洗。
5.涂上氨基酸显色剂：将纸层析用10%磷酸液浸泡5-10分钟，使显色剂透彻纸层析板。
6.观察分析：根据分离的结果和标准溶液进行比较，以鉴定和定量分析被检测的氨基酸。
实验结果：在纸层析板上，分离了7种氨基酸。
在试验中，我们发现沿着纸层析板距离最短的氨基酸为小麦谷氨酸，距离最远的是组氨酸。
结果与标准溶液分析结果相符，可以证明该方法可以用于氨基酸的分离和定性鉴定。
实验结论：该实验使用氨基酸纸层析技术，成功地将氨基酸分离并鉴定。
该方法应用广泛，简便易行，能够分离、定性、定量不同的化合物。
种类繁多、方法不断丰富，成为分析化学领域中重要的分析手段。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
三、操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2、取层析滤纸（长18—20厘米，宽14厘米）一张。在垂直 于纸的纹路一端距边缘2—3厘米处用铅笔划一条直线，在此 直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置，并用铅笔在点 样点下端写出所点氨基酸的名称。 3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，干 后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径，最大不超 过3mm。 4、扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不 能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速 置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿 中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点 样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出 滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用 吹风机热风吹干。
5、显色 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置 烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点 6、用铅笔轻轻描出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中 心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸 的Rf值，将各显色斑点的Rf 值与标准氨基酸的Rf 值比较，可 得知该斑点的准确成分。 四、结果与讨论： 1．计算出各种氨基酸的Rf值， 并根据Rf值鉴定出混合氨基酸 中的各组分，在层析图谱上标 出各氨基酸名称。 2．对氨基酸移动快慢的原因 给予简要分析。
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法
一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法 在一定的条件下，一个物质在某溶剂系统中的分配系数， 在一定的温度下是一个常数。纸层析是以滤纸作为惰性支持 物的分配层析，滤纸纤维上的-OH基具有亲水性，因此能吸附 一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶 剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行 层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质 在两相之间不断分配而得到分离。
1+氨基酸的分离鉴定——纸层析法+Microsoft+Word+文档
氨基酸的分离鉴定——纸层析法实验目的：1、学习纸层析法的基本原理；2、掌握纸层析法分离氨基酸的操作技术。
实验原理：纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
分配层析的原理可用一个模式解释（英国Martin等）：把滤纸看成是一个层析柱，可以分成若干层板，设层板的物质为A、B；且A 和B的分配系数（α）分别为1和1/3；又设固定相为S，流动相为L，两相互相接触但不相混溶。
当第一层流动相中加入一定量的A、B两项物质后，溶质根据各自的分配系数在第一层的两相中分配，流动相继续在流动，此时第一层固定相与新流到的流动相之间以及原来第一层流动相与第二层固定相之间进行第二次分配，以此类推三次分配即可看出A与B最浓部分以分开，A在第二层最浓，B在第三层最浓，如果继续抽提下去，经过若干此后，A、B两物质便可完全分开。
显然，分配系数越大的物质就越容易分开。
模式图如下所示：S（固定相）L（流动相）第一次分配第二次分配第三次分配第一次分配第二次分配第三次分配0层A1 B11层A1/2B1/4A1/4B1/16A1/8B1/64A1/2B3/4A1/4B3/16A1/8B3/642层A1/4B3/16A1/8+ A1/8B3/64＋B3/64A1/4B9/16A1/8+ A1/8B9/64＋B9/643层A1/8B9/64A1/8B27/64 图中的第二层流动相中的溶质A为1/2，B为27/32；第三层流动相中的溶质A为1/8，B为27/64；第三层抽提一定时间后，溶剂流到接近滤液前沿1～2cm时。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
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实验原理
纸层析法的原理
纸层析法是一种基于物质在固定相和 流动相之间分配系数的差异进行分离 的方法。在纸层析中，固定相是纸纤 维上的水分子，而流动相是溶剂。当 流动相通过固定相时，物质在两相之 间的分配系数不同，导致它们在固定 相和流动相之间的移动速度不同，从 而实现分离。
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改进实验操作流程
进一步规范实验操作步骤， 提高实验效率。
优化实验条件
尝试不同的实验条件，如 温度、湿度、展开剂等， 以提高实验结果的准确性 和可靠性。
引入先进技术
考虑引入高效液相色谱等 技术手段进行氨基酸的分 离鉴定，以提高分离效果 和鉴定精度。
THANKS
感谢观看
通过纸层析法，可以根据氨基酸的极性大小将其分离成不同的组分。
影响氨基酸分离的因素
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流动相的组成
流动相的组成对氨基酸的分离效果有显著影响。改变流动相的组成可以 调整氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数，从而改变它们的移动速 度。
固定相的性质
固定相的粒径、吸附能力等性质也会影响氨基酸的分离效果。选择合适 的固定相可以提高分离效果和分辨率。
准备实验材料
选择适当的滤纸、展开剂、氨 基酸样品等。
展开
将滤纸悬挂在展开剂中，控制 展开剂的流速和高度，确保展 开充分。
观察和记录
观察各氨基酸在滤纸上的位置， 记录各组分的Rf值（相对迁移 率）。
了解氨基酸的理化性质和分离鉴定方法
氨基酸的理化性质包括极性、溶解度、酸碱性、光学活性等。这些性质决定了氨 基酸在纸层析法中的分离效果。
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溶剂前沿与原点之间的距离
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影响Rf值的因素（多种）
物质结构与极性 物质的极性大小决定了物质在水
和有机溶剂之间的分配情况。
pH值 展层剂的pH影响被分离物质的极性基 团的解离形式。
操作方式
纸层析 薄层层析
固定相 液体
离子交换柱层析 固体
吸附薄层层析 气体吸附层析
固体
酶与底物 抗原与抗体
固体
凝胶过滤 可编辑ppt 固体
流动相 液体
液体 液体 气体 液体 液体
分离依据 溶解度 带电性 静电引力 吸附力
配体专一性 分子大小 4
分配层析：是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中 的分配系数不同而达到分离的一种技术。
3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液
及它们的混合液
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【四、实验步骤】
1、层析滤纸准备：取层析滤纸(长20 cm、宽15 cm)一张。
在纸的一端距边缘2～3 cm处用铅笔划一条直线，在此直线 上每间隔2cm作一记号。
2、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，
溶质在固定相的溶解度 分配系数 =
溶质在流动相的溶解度
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纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层 析：纸纤维上的 –OH 基具有亲水性，所以 能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶 剂作为流动相。流动相流经支持物时与固定 相间连续抽提，使物质在两相间不断地分配 而得到分离。
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❖ 溶质在滤纸上的移动速率用Ｒf（比移）值来 表示：
层析滤纸的质量 层析用滤纸要质地均匀，紧密，
有一定的机械强度，并含杂质少。国产新华滤纸可
用于一般的纸层析。可编辑ppt
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【三、器材与试剂】
器材：
1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号)
试剂：
1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1）
2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。
缬氨酸
半胱氨酸
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❖ 这就是纸色谱法。
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❖ 对照上图，可知道1-4号的各
代表什么氨基酸。
❖ 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的 氨基酸组成的重要工具。
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纸色谱可小编辑实pp验t 动画演示
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可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动
的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。 固定相被看成是样品移动的阻力。
流动相 在层析过程因其本身流动而推动样品移动
的物质。
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层析的分类
名称 分配层析 离子交换层析 吸附层析 亲和层析 凝胶层析
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】 通过实验，掌握纸层析的基本操作技能。 加深对分配层析原理的理解。
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【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质
的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中 一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使 各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。
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小实验
❖ 当滤纸接触到溶剂时，溶液将上 升。
❖ 滤纸上的小圆点是4种不同的氨 基酸的混合物。
❖ 看看接下来会发生什么事情…
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❖ 可以看出1号氨基酸上升的最
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高，在滤纸上跑得最快。
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❖ 而4号氨基酸与滤纸的结合最
紧，因此跑的速度比其他的
氨基酸慢。
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甘氨酸
组氨酸
干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm。
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3、扩展 ：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将滤
纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于
点样线1 cm）。待溶剂上升约15 cm时即取出滤纸，铅笔描 出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
4、显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，
然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析 斑点。
5、计算Rf值
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【五、实验结果与分析】 【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 可编辑ppt 日